蘆黃參花膠囊質(zhì)量標準研究

姚東+包永睿+王帥

[摘要] 目的 建立蘆黃參花膠囊的質(zhì)量標準。 方法 采用薄層色譜法對大黃、黃芪和紅花進行薄層鑒別；采用高效液相色譜法測定樣品中丹酚酸B的含量。 結(jié)果 大黃、黃芪和紅花薄層色譜斑點清晰、分離效果良好、陰性無干擾；含量測定中丹酚酸B在0.10～1.00 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9999），精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗RSD均<3%，平均加樣回收率為98.81%，RSD為0.52%（n=6），三批樣品含量測定結(jié)果分別為0.2221、0.5284、1.7427 mg/g。 結(jié)論 所建立的定性、定量方法準確性和重復(fù)性良好，可作為蘆黃參花膠囊的質(zhì)量控制方法。

[關(guān)鍵詞] 蘆黃參花膠囊；質(zhì)量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法；丹酚酸B

[中圖分類號] R286.0 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）01（a）-0008-04

[Abstract] Objective To establish the quality satandard of Luhuang Shenhua Capsules. Methods The Rhei Radix Et Rhizoma， Astragali Radix and Carthami Flos were identified by TLC. HPLC was conducted for the content of detemination of salvianolic acid B. Results The spots in TLC were clear with good separation and specificity. The linear range of salvianolic acid B was 0.10-1.00 μg（r=0.9999）， RSDs of precision， stablity and reproducibility tests were all lower than 3%. The average recovery was 98.81% （RSD=0.52%， n=6）. The results of the three batches of samples were 0.2221， 0.5284， 1.7427 mg/g. Conclusion The method is simple， specific， accurate and reliable. It can be used in the quality control of Luhuang Shenhua Capsules.

[Key words] Luhuang Shenhua Capsules； Quality standard； TLC； HPLC； Salvianolic acid B

蘆黃參花膠囊是沈陽軍區(qū)總醫(yī)院生產(chǎn)的醫(yī)院制劑，具有消除蛋白尿、血尿，改善水腫及保護腎功能作用。該制劑原有標準偏低，檢查項目不足，檢驗方法落后。為加強該制劑質(zhì)量控制，保障臨床用藥安全、有效，提高產(chǎn)品競爭力[1]，本研究采用薄層色譜法（TLC法）對制劑中大黃、黃芪和紅花3味藥材進行定性鑒別，采用高效液相色譜法測定制劑中丹酚酸B的含量。本研究所建立的質(zhì)量控制方法快速、簡便，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

儀器：高效液相色譜儀（Agilent公司）。

試劑：甲醇（色譜純，天津大茂公司）；乙腈（色譜純，廣東西隴化工有限公司）；甲酸（分析純，天津科密歐公司）。

對照品：丹酚酸B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111562-201313）；大黃對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：0902-9806）；黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：0781-200210）；紅花對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：907-9204）；蘆黃參花膠囊（沈陽軍區(qū)總醫(yī)院，批號：130925、140913、140118）。

2 方法與結(jié)果

2.1 大黃的薄層鑒別

取本品內(nèi)容物1 g，研細，加甲醇20 mL，超聲提取15 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，加鹽酸1 mL，超聲處理20 min，立即冷卻，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液[2-3]。另取大黃對照藥材0.1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜試驗[4]，吸取上述溶液各10 μL，分別點樣同一硅膠G的薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）為展開劑[5-6]，展開，取出，晾干，置于氨蒸氣中熏至斑點顯色清晰。供試品的色譜中，在與對照藥材色譜的相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點，陰性對照不存在干擾。見圖1。

2.2 黃芪的薄層鑒別

取本品內(nèi)容物6 g，研細，加甲醇30 mL，超聲提取3次，每次15 min，放冷，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣中加水20 mL使其溶解，用水飽和正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇溶液，氨試液洗滌3次，每次20 mL，棄去氨試液，正丁醇溶液蒸干，殘渣中加甲醇5 mL使其溶解，作為供試品的溶液[7-8]。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品的溶液。照薄層色譜試驗[4]，吸取上述溶液各10 μL，分別點樣同一硅膠G的薄層板上，二氯甲烷-水-甲醇（30∶1∶10）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至薄層斑點顯色清晰[9-10]。供試品的色譜中，在與對照品的色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點，陰性對照不存在干擾。見圖2。

2.3 紅花薄層鑒別

取本品內(nèi)容物1.5 g，加80%丙酮溶液5 mL，密塞，振搖15 min，靜置，取上清液作為供試品的溶液。另取紅花的對照藥材0.5 g[11-12]，同法制成對照藥材的溶液。照薄層色譜試驗[4]，吸取上述溶液各5 μL，分別點樣同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）為展開劑[13-14]，展開，取出，晾干。供試品的色譜中，與對照藥材的色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的主斑點，陰性對照無干擾。見圖3。

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-1%甲酸水（28∶8∶64）；流速：1 mL/min；檢測波長286 nm；進樣量10 μL[15-16]。上述色譜條件下，供試品色譜圖中丹酚酸B同其他雜質(zhì)峰分離度大于1.5，陰性對照無干擾。見圖4。

2.4.2 對照品溶液制備 取丹酚酸B適量，精密稱定，加入75%甲醇使溶解，制成每1 mL含丹酚酸B 50 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再次稱定，以75%甲醇補足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[17-18]。

2.4.4 陰性樣品溶液的制備 按處方取除丹參的各味藥材制得陰性樣品，按“2.4.3”項下供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。

2.4.5 標準曲線的制備 精密吸取濃度丹酚酸B對照品溶液（50 μg/mL）2.0、6.0、10.0、14.0、16.0、20.0 μL注入液相色譜儀，以對照品含量為橫坐標，峰面積值為縱坐標，求得回歸方程：y=1106x-10.987，r=0.9999。結(jié)果表明丹酚酸B含量在0.10～1.00 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.4.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得峰面積值的RSD為0.85%（n=6），符合要求，儀器精密度效果良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品膠囊內(nèi)容物，研細，取約1 g，精密稱定，制備供試品溶液。分別于0、2、4、6、8、10 h進行測定，測得峰面積值的RSD為1.27%（n=6），說明供試品的溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8 重復(fù)性試驗 取同一批樣品膠囊內(nèi)容物，研細，取約1 g（共6份），精密稱定，制備供試品溶液，測定并計算樣品中丹酚酸B的含量。結(jié)果樣品中丹酚酸B平均含量為1.1194 mg/g，RSD為2.97%（n=6），符合要求。

2.4.9 加樣回收率試驗 取同一批樣品取膠囊內(nèi)容物，研細，取約0.5 g（共6份），精密稱定，分別精密地加入丹酚酸B的對照品溶液（0.5 mg/mL）各1 mL，制成加樣回收率用供試品溶液，測定并計算樣品中丹酚酸B的回收率，結(jié)果表明，該樣品中的丹酚酸B平均加樣回收率為98.81%，RSD為0.52%（n=6），符合要求。

2.4.10 樣品測定 取3個批號的樣品，按照“2.4.3”項下供試品溶液制備操作，制得供試品溶液，按“2.4.1”色譜條件項下色譜條件分析，測定各樣品中丹酚酸B的含量。見表1。

3 討論

3.1 定性鑒別的優(yōu)化

蘆黃參花膠囊由六味中藥組成，為切實保障制劑質(zhì)量，本研究對該制劑中起主要作用的三味藥材進行定性鑒別。由于復(fù)方制劑組成復(fù)雜，單味藥的鑒別方法常存在陰性干擾，不能滿足專屬性要求。因此通過對供試品溶液的制備方法和薄層鑒別條件進行優(yōu)化，所建立的薄層鑒別方法可滿足專屬性要求，且重復(fù)性良好。

3.2 含量測定供試品制備條件選擇

本研究對丹酚酸B的提取方式、提取溶媒、溶媒用量和提取時間進行單因素考察，最終優(yōu)化出含量測定供試品溶液的制備方法為25倍75%甲醇，超聲提取30 min，該供試品溶液制備方法穩(wěn)定易行。

3.3 含量測定色譜條件選擇

本研究對丹酚酸B的色譜條件進行選擇，由于分別考察了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-乙腈-水系統(tǒng)[19-20]，確定甲醇-乙腈-水系統(tǒng)可對丹酚酸B進行良好分離，且專屬性良好。由于丹酚酸B呈酸性，因此在流動相系統(tǒng)中加入1%甲酸，有效改善峰型。

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（收稿日期：2016-09-30 本文編輯：王紅雙）