提高病理組織石蠟切片質(zhì)量的策略研究

韋翠容

（貴港市人民醫(yī)院，廣西 貴港 537100）

提高病理組織石蠟切片質(zhì)量的策略研究

韋翠容

（貴港市人民醫(yī)院，廣西 貴港 537100）

病理組織學(xué)的準(zhǔn)確檢測結(jié)果對于病理診斷具有重要作用，可使得臨床治療得以準(zhǔn)確完成。病理組織石蠟切片質(zhì)量的環(huán)節(jié)主要包括取材、固定、包埋、染色等，對每個制作環(huán)節(jié)予以關(guān)注及改善，可提高病理組織石蠟切片質(zhì)量。

病理組織；石蠟切片；質(zhì)量

病理組織石蠟切片染色應(yīng)用到患者的臨床診斷具有顯著意義。石蠟切片通過難以發(fā)生脫片現(xiàn)象，當(dāng)經(jīng)過染色處理后，能夠進(jìn)行較長時間的保存，如同患者病歷，診斷使用后石蠟切片能夠予以長時間封存，如此對于醫(yī)療事故具有顯著預(yù)防效果，因此在醫(yī)院中具有廣泛使用價(jià)值。對病理切片進(jìn)行常規(guī)制作時，需要對每個操作步驟予以注意。本文對組織固定取材、脫水包埋、染色等各個環(huán)節(jié)進(jìn)行病理石蠟切片制作的探討，解決其中容易產(chǎn)生的問題，采用合理措施提高石蠟切片的質(zhì)量。

1 固 定

自機(jī)體組織切下標(biāo)本后需要及時進(jìn)行固定，通常需在30 min完成，此乃制片是否獲得成功的一個重要環(huán)節(jié)。講10%中性緩沖福爾馬林作為固定液進(jìn)行常規(guī)使用，而且在使用過程中應(yīng)確保其足量，一般按照組織體積的5～10倍進(jìn)行使用，對小標(biāo)本實(shí)施固定處理時，通常持續(xù)4～6 h，對大標(biāo)本進(jìn)行固定時，通常持續(xù)18～24 h或以上。對標(biāo)本予以固定是為了使得組織能夠盡可能的將生前狀態(tài)保存下來，避免組織因?yàn)樗劳龆l(fā)生改變，或是發(fā)生自溶。通過對標(biāo)本的合理固定，在實(shí)施顯微鏡觀察時，切片細(xì)胞中的微細(xì)結(jié)構(gòu)情況可得到較為清楚地檢測。我們在具體工作時，往往會遇到多種標(biāo)本，對其進(jìn)行固定的具體方法并不完全相同，對大標(biāo)本固定時，應(yīng)沿最大剖面予以切開，且需平行進(jìn)行書頁式的多個切面處理，使得固定液可以盡可能擴(kuò)散到組織中；可通過灌注法對空腔臟器予以有效固定，或是將其剪開予以合理固定，注意需詳細(xì)記錄腔內(nèi)容物的具體特性及含量[1]。

2 取 材

依據(jù)臟器具體的取材標(biāo)準(zhǔn)完成每個取材步驟，通常組織塊切片范圍為（1～1.5）cm×（1～1.5）cm×0.3 cm，注意不可過厚，預(yù)防組織無法達(dá)到完全處理；但也不可過太薄，導(dǎo)致處理后組織塊難以保持平整性。在取材時，應(yīng)先完成非瘤性標(biāo)本的采集，然后再對腫瘤性標(biāo)本進(jìn)行采集；在取材時，需注意每例標(biāo)本均需對器械及臺面進(jìn)行流水沖冼，預(yù)防標(biāo)本間受到污染。在取材時所使用的刀應(yīng)保持鋒利性，完成標(biāo)本采集的整個過程，均需注意操作輕柔，不可對組織進(jìn)行來回的重力切割。使用內(nèi)窺鏡等進(jìn)行活檢處理的小標(biāo)本應(yīng)將其整個進(jìn)行取材，且通過濾紙予以有效包裹，避免將其弄丟，如有需要則通過點(diǎn)伊紅對其進(jìn)行合理標(biāo)注。需將組織內(nèi)存在異物進(jìn)行有效清理。對大標(biāo)本取材時應(yīng)注意在多處進(jìn)行采集，特別是病變處出現(xiàn)不同的臨床特征。腫瘤根治術(shù)治療后，應(yīng)注意對病變組織與正常組織交匯之處予以標(biāo)本取材。

3 脫 水

目前通常經(jīng)程序化脫水浸蠟，因此需按照標(biāo)本數(shù)量、具體大小進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)試劑的更換，避免對脫水效果產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致組織與蠟難以有效相溶，使得組織蠟塊制作后不合格。如條件允許則按照組織標(biāo)本具體情況采用適宜的石蠟，當(dāng)組織具有較高韌性時，可應(yīng)用熔點(diǎn)較高的石蠟，當(dāng)組織較軟是，可應(yīng)用熔點(diǎn)較低的石蠟[2]。

4 包 埋

將切片進(jìn)行包埋處理時，需在包埋模底部將切片完全壓平，由此對組織實(shí)施觀察時，預(yù)期切面可處于相同水平面；應(yīng)先往包埋盒內(nèi)滴入少量液體石蠟，確保成型蠟塊底部能夠保持良好的光滑性及平整度，然后在包埋盒底部使得切片觀察面完全壓平，注意將組織的緊湊性，卻需避免其出現(xiàn)重疊情況。包埋組織時所使用的蠟塊應(yīng)迅速凝固，因此需要將已附有液體蠟的包埋盒通過冷凍臺進(jìn)行凝固處理，一般是蠟塊需于蠟的大部分或全部處于凝固狀態(tài)后再將包埋盒移走；如蠟塊凝固不夠充分，將包埋盒移走后，會使得成型蠟塊無法保持良好的底部平整性，若凝固蠟塊無較為平整的底部，極易造成小標(biāo)本修片的浪費(fèi)。

5 切 片

在進(jìn)行切片環(huán)節(jié)時，①若切片存在大量的橫向褶皺，無法成帶，主要是因蠟塊溫度太高；切片刀變鈍；在切片刀邊緣有石蠟的粘附，此時應(yīng)將蠟塊再次通過冰袋或冷凍盒進(jìn)行處理，使得蠟塊溫度能夠下降；將切片刀予以及時更換；將紗布打濕，沿著切片刀的刀口緩慢擦拭。②若切片均在相同部位出現(xiàn)裂縫、裂紋，主要是由于切片刀出現(xiàn)了小缺口；蠟塊中存在一定雜質(zhì)或是有一定硬度的，但體積比較小的似骨（鈣）化性組織；在包埋處理時，蠟塊凝固無較高的均勻性。針對此情況，應(yīng)將切片刀進(jìn)行合理移位或直接換用其他切片刀；通過少量鹽酸將含有的鈣化性組織予以對應(yīng)的軟化處理；再次將蠟塊進(jìn)行包埋處理。③若切片上存在位置不固定的多道小裂縫或裂紋，主要是因?yàn)橄瀴K保持在高溫狀態(tài)；切片刀未保持較高鋒利性。應(yīng)將蠟塊再次置于冰袋或冷凍盒上，促進(jìn)蠟塊穩(wěn)定的下降；更換切片刀位置或直接使用新的切片刀。④蠟條出現(xiàn)往一側(cè)嚴(yán)重彎曲現(xiàn)象，主要是因?yàn)閺澢课坏南瀴K均勻性不高，蠟塊并未得到較為理想的修整，其邊緣具一定的毛糙性等；在彎曲部位所使用的切片刀無較高鋒利性。針對此情況，應(yīng)再次對蠟塊進(jìn)行修整；將切片刀合理移動；對蠟塊實(shí)施冷凍處理，當(dāng)其稍變硬的情況出現(xiàn)后也能夠使之彎曲度減少。⑤切片無較均勻的厚度，或是將幾片進(jìn)行固定后，能夠得到一張比較完整的切片，主要是由于蠟塊具有較高的硬度或是太大；使用的蠟塊夾持器或是切片刀未保持良好的松緊度；切片機(jī)功能異常，使得切片厚度無法保持準(zhǔn)確度。針對上述情況，若組織塊硬度太高則應(yīng)再次進(jìn)行取材包埋處理，當(dāng)蠟塊太大時，可再次進(jìn)行包埋；應(yīng)及時將夾持器進(jìn)行合理調(diào)整，使得刀片保持良好松緊度；應(yīng)注意對機(jī)器的修理維護(hù)。

6 漂 片

在漂片環(huán)節(jié)，溫度在選取時通常比蠟塊熔點(diǎn)低10℃。若溫度太高往往導(dǎo)致蠟條形成一些小氣泡。

7 烤 片

在烤片環(huán)節(jié)，所使用的溫度與時間具有具有廣泛的選擇范圍，在37℃烤箱烘烤干1天，一直到75℃烤箱烘烤20min，其中間穩(wěn)定及時間可合理選取，也應(yīng)按照目的將烤片所需要的時間及溫度進(jìn)行明確，或按照石蠟熔點(diǎn)予以明確，通常將溫度保持在石蠟熔點(diǎn)的10～15℃之上[3]。

8 染 色

染色環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)格按照操作步驟完成。脫蠟處理時應(yīng)確定徹底性脫除，避免組織、細(xì)胞難以被染料充分浸染，不利于著色效果。一個包子各個染色缸具有充足的液體，且保持新鮮，通常新染液可達(dá)到較為理想的著色效果，而且可明顯減少染色時間；不然會明顯延長染色時間。當(dāng)切片保持均勻、透明狀態(tài)，則可開展下一步操作。對二甲苯進(jìn)行清洗時，應(yīng)及時更換100%酒精，預(yù)防其失效導(dǎo)致切片水洗形成乳白色，如此可再次予以脫二甲苯。通過伊紅預(yù)防過染，不然會導(dǎo)致胞核、胞質(zhì)難以進(jìn)行清楚的比較。切片需保持濕性封固狀態(tài)，中性樹膠的濃度及量需保持合理性，不然極易導(dǎo)致外溢或空泡等事件的發(fā)生。最后切片需保持較為鮮艷的著色，其紅、藍(lán)較為分明，可進(jìn)行較為清晰地對比。

9 封 片

切片通過二甲苯透明后，采用中性樹膠進(jìn)行封固。為了提高切片透明度，預(yù)防細(xì)胞出現(xiàn)收縮、龜裂現(xiàn)象或是切片形成黑色結(jié)晶樣小點(diǎn)。因此需對切片予以濕封，避免干燥封片。若處于南方冬春、霉雨季節(jié)，在封片時需避免口鼻呼出的氣體與切片相接觸；若天氣潮濕，不可一次性取出多張切片進(jìn)行待封處理，預(yù)防因“還潮"而導(dǎo)致透明不佳，存在云霧狀水珠。注意脫水劑應(yīng)定時更換。封片樹膠避免過稀[4]。

10 總 結(jié)

總之，病理組織石蠟切片在制作過程中應(yīng)嚴(yán)格規(guī)范操作步驟，找出制作中的問題，且予以及時改善，使得病理組織石蠟切片質(zhì)量越來越高。

[1] 陳俊艷.常規(guī)病理切片制作中常見的問題及處理方法[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2012,19(7):761-762.

[2] 馬恒輝,周曉軍.組織固定處理及包埋常見問題與對策[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2011,27(6):638-641.

[3] 印 敏,徐有坤,李煥萍,等.病理切片制作全程質(zhì)量控制的實(shí)踐[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2011,6(6):231-233.

[4] 張中海.病理切片制作過程中常見問題及原因探析[J].吉林醫(yī)學(xué),2011,32(27):5761.

本文編輯：吳玲麗

R361.2

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ISSN.2095-8242.2017.027.5345.02