石蠟對(duì)病理組織切片的影響

劉毓玲，周 林，許愛(ài)萍

石蠟對(duì)病理組織切片的影響

劉毓玲，周 林，許愛(ài)萍

石蠟切片；石蠟熔點(diǎn)；硬脂酸；蜂蠟

組織石蠟切片技術(shù)是病理科最基本最重要的技術(shù)，從病理科接收到已固定大體標(biāo)本，到一張病理切片制成，其間經(jīng)組織取材固定、脫水、包埋、切片、染色一系列步驟，由于試劑、手工操作、人為主觀性以及個(gè)人經(jīng)驗(yàn)等因素，對(duì)最終的切片質(zhì)量均有直接影響。而組織蠟塊制備的好壞，則直接影響切片質(zhì)量。本文結(jié)合近10年日常工作實(shí)踐，分析探討石蠟對(duì)病理組織切片的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 58～60 ℃切片石蠟、60～62 ℃切片石蠟(上海標(biāo)本模型廠，每盒500 g)；硬脂酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，每瓶500 g)；蜂蠟(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，每瓶500 g)；櫻花VIP5全自動(dòng)組織脫水機(jī)，泰維TB-718D組織包埋機(jī)。

1.2 方法 按照《臨床技術(shù)操作規(guī)范·病理學(xué)分冊(cè)》中《常規(guī)石蠟包埋組織切片(常規(guī)切片)的制備》進(jìn)行組織處理。

2 結(jié)果

夏季使用熔點(diǎn)為60～62 ℃的石蠟，春秋冬季使用熔點(diǎn)為58～60 ℃的石蠟；當(dāng)季節(jié)交替時(shí)，適當(dāng)添加硬脂酸、蜂蠟以調(diào)整石蠟硬度；保證浸蠟時(shí)間為3～5 h；控制浸蠟及包埋溫度比熔點(diǎn)高2 ℃，才能保證蠟塊質(zhì)量，進(jìn)而制得高質(zhì)量切片。

3 討論

石蠟作為組織包埋劑，在組織脫水的浸蠟步驟和組織包埋步驟中被運(yùn)用，是病理切片技術(shù)中最常用的材料之一。組織脫水、透明的處理，都是為了更好地讓石蠟浸入組織塊。石蠟的熔點(diǎn)、添加物、浸蠟時(shí)間以及溫度設(shè)置各條件不同，對(duì)切片質(zhì)量均有不同程度的影響。

3.1 石蠟熔點(diǎn) 石蠟熔點(diǎn)范圍大，可選擇的余地較多。低熔點(diǎn)石蠟適合在室溫偏低時(shí)包埋質(zhì)軟組織，高熔點(diǎn)石蠟與之相反。如若遇到室溫偏高，低熔點(diǎn)石蠟所制蠟塊偏軟，切片時(shí)易發(fā)生卷片、黏連粘刀，無(wú)法連續(xù)切片，展片也很困難，所制切片皺褶多，而且很難制成薄片。如若遇到室溫偏低，高熔點(diǎn)石蠟所制蠟塊偏硬，切片易產(chǎn)生裂隙。包埋骨組織、富含肌纖維的組織，還易發(fā)生組織破碎，造成蠟塊殘缺或者崩裂，所制切片不完整，出現(xiàn)跳片，厚薄不均等現(xiàn)象[1]。因此一年四季溫度變化，對(duì)不同熔點(diǎn)的石蠟使用不能千篇一律，選用不同熔點(diǎn)種類的石蠟，是很有必要的。

3.2 添加物 在日常實(shí)際工作中，有時(shí)即使根據(jù)不同季節(jié)選擇了不同熔點(diǎn)的石蠟，蠟塊質(zhì)地還是達(dá)不到所需要求的，可適當(dāng)添加硬脂酸、蜂蠟等進(jìn)行石蠟軟硬度調(diào)節(jié)。

硬脂酸屬于脂肪族一元羧酸，為白色葉片細(xì)顆粒狀，是動(dòng)植物油脂中一個(gè)重要的飽和脂肪酸，弱酸性，熔點(diǎn)為56～69 ℃?？膳c石蠟液體混合，幫助石蠟滲透到組織內(nèi)。按照硬脂酸 ∶石蠟為1 ∶9的比例混合使用，起到軟化作用?？蓽p小組織收縮，不會(huì)變硬變脆。對(duì)組織切片起到很好的支持作用，易于連續(xù)切片，保證切片完整無(wú)裂隙，厚度均一。且硬脂酸對(duì)組織內(nèi)抗原不產(chǎn)生封閉現(xiàn)象，對(duì)后期的特染和免疫組化標(biāo)記無(wú)影響[2]。

蜂蠟又稱蜜蠟，是由蜜蜂腹部的蠟腺分泌出來(lái)的灰黃色固體，主要是棕櫚酸蜂酯和蠟酸的混合物，熔點(diǎn)為62～66 ℃，可與石蠟液體混合。按照蜂蠟 ∶石蠟為1 ∶9的比例混合使用，起到硬化作用。增加石蠟韌性，提高蠟塊硬度，利于切片平展無(wú)皺褶。當(dāng)有特殊薄切要求時(shí)，添加蜂蠟所制石蠟組織塊，可以制出良好的2 μm厚切片。

3.3 浸蠟時(shí)間 組織脫水機(jī)總的浸蠟時(shí)間應(yīng)控制在3～5 h。時(shí)間太短，浸蠟時(shí)間不夠，組織發(fā)白、發(fā)軟，擠壓有明顯凹陷，切片有明顯空洞。時(shí)間超過(guò)6 h，組織收縮變硬[3]，蠟塊易破碎，切片有粉末。

3.4 溫度設(shè)置 熔蠟的溫度一般設(shè)置為比熔點(diǎn)高2 ℃，使固體石蠟全部液化即可。浸蠟過(guò)程中，溫度過(guò)高，質(zhì)密組織周?chē)冇玻行慕灢患?，所制蠟塊切片難完整。而且由于酶類對(duì)溫度敏感性較強(qiáng)，溫度越高，對(duì)酶活性的破壞就越嚴(yán)重，后期做免疫組化染色抗原易丟失。包埋溫度要與浸蠟溫度相同或接近[4]，否則易造成組織塊與周?chē)灻摿?，無(wú)法制片。

病理蠟塊是病理科HE切片，免疫組化標(biāo)記及分子診斷技術(shù)的原材料，作為病理技術(shù)工作者，必須對(duì)石蠟有一個(gè)全面了解，對(duì)于科室每一批購(gòu)進(jìn)的石蠟，都要根據(jù)其性狀，合理得當(dāng)使用。這樣才能提高病理技術(shù)的穩(wěn)定性，更好地保證切片質(zhì)量。

[1] 劉 亞, 陳 雪, 魏永敬, 等. 石蠟切片常規(guī)制片中預(yù)防“跳片”的體會(huì)[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(4):468.

[2] 胡小安, 盧 靜, 張 潤(rùn), 等. 改良硬脂酸石蠟切片的免疫組化染色效果觀察[J]. 診斷病理學(xué)雜志, 2004,11(6):439.

[3] 趙 兵, 羅 波, 袁靜萍. 影響淋巴結(jié)HE制片因素的探討[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2012,28(2):220-221.

[4] 祁珊珊, 辛 薇, 王永吉. 大鼠皮膚石蠟切片的制作技巧與質(zhì)量控制[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(11):1307-1308.

時(shí)間：2017-4-17 18:19

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170417.1819.029.html

湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院病理科，武漢 430050

劉毓玲，女，主管技師。E-mail: 12412990@qq.com 周 林，男，主治醫(yī)師，通訊作者。E-mail: 16191025@qq.com

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1001-7399(2017)04-0462-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.04.029

接受日期：2016-12-15