肝纖維化新型分子診斷標(biāo)志物

杜靜華， 南月敏

(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合肝病科， 石家莊 050051)

肝纖維化新型分子診斷標(biāo)志物

杜靜華， 南月敏

(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合肝病科， 石家莊 050051)

肝纖維化是各種慢性肝病進(jìn)展為肝硬化的重要病理階段，及時(shí)準(zhǔn)確的評(píng)估肝纖維化程度，對(duì)指導(dǎo)慢性肝病的治療具有重要意義。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及分子診斷技術(shù)在臨床的廣泛應(yīng)用，新型血清分子診斷標(biāo)志物的檢測(cè)將有助于肝纖維化的早期診斷及精準(zhǔn)治療。近年研究發(fā)現(xiàn)并經(jīng)臨床驗(yàn)證有診斷價(jià)值的血清新型分子標(biāo)志物包括成纖維細(xì)胞因子、基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物、細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)標(biāo)志物、非編碼RNA等。此外，基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等分子組學(xué)檢測(cè)亦有診斷意義。

肝硬化； 生物學(xué)標(biāo)記； 診斷

肝纖維化是機(jī)體對(duì)各種病因引起的慢性肝損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，是慢性肝病進(jìn)展為肝硬化的重要病理階段[1]。準(zhǔn)確診斷肝纖維化病期、進(jìn)展情況，選擇有效阻止肝纖維化的治療策略、正確判斷療效是預(yù)防終末期肝病發(fā)生的重要手段。肝纖維化的臨床診斷方法包括肝穿刺活組織檢查、血清分子標(biāo)志物、瞬時(shí)彈性成像及影像學(xué)技術(shù)[2]。肝穿刺活組織檢查是肝纖維化分期診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在有創(chuàng)性、樣本誤差等局限性。瞬時(shí)彈性成像近年應(yīng)用廣泛，但肝臟炎癥、膽汁淤積等均有一定的影響。近年來(lái)血清分子生物學(xué)標(biāo)志物在肝纖維化診斷中的應(yīng)用已成為研究的熱點(diǎn)。理想的肝纖維化分子標(biāo)志物應(yīng)具有肝臟特異性高、能夠反映細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積和降解的動(dòng)態(tài)平衡，有助于肝纖維化早期診斷及監(jiān)測(cè)其進(jìn)程等特點(diǎn)。此外，其檢測(cè)技術(shù)精確、方法簡(jiǎn)便，具有良好的可重復(fù)性。

常用的檢測(cè)肝纖維化的血清標(biāo)志物主要分為直接和間接標(biāo)志物兩大類(lèi)，應(yīng)用較多的直接標(biāo)志物為透明質(zhì)酸、Ⅰ型和Ⅳ型膠原、層黏連蛋白、Ⅲ型前膠原等[3]；間接標(biāo)志物包括血清ALT、AST、凝血功能和血小板計(jì)數(shù)等。上述標(biāo)志物均與肝臟炎癥活動(dòng)、肝臟代謝等狀態(tài)有關(guān)，不能準(zhǔn)確反映肝纖維化程度[4]。隨著分子診斷技術(shù)逐步研發(fā)并應(yīng)用于臨床，新型血清分子標(biāo)志物不斷涌現(xiàn)，主要包括成纖維細(xì)胞因子、基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物、ECM相關(guān)標(biāo)志物、非編碼RNA、分子組學(xué)等。

1 成纖維細(xì)胞因子

肝纖維化的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，受到多種細(xì)胞-細(xì)胞、因子-因子相互制約，構(gòu)成肝纖維化調(diào)節(jié)的一個(gè)龐大網(wǎng)絡(luò)體系。因此，肝纖維化形成和發(fā)展過(guò)程中，關(guān)鍵細(xì)胞因子的活性及表達(dá)水平與肝纖維化的進(jìn)展、病變程度相關(guān)。近年來(lái)，隨著肝纖維化機(jī)制研究的不斷深入，一些新型成纖維細(xì)胞因子逐漸受到關(guān)注。TGFβ、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)為常用的肝纖維化相關(guān)因子。

1.1 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF) CTGF是由TGFβ誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種致纖維化蛋白，具有多種生物學(xué)活性，其作為T(mén)GFβ的下游反應(yīng)元件主要參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增生、分化及ECM的形成。CTGF異常高表達(dá)在肝纖維化病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用，筆者的研究[5]證實(shí)其在非酒精性脂肪性肝纖維化小鼠肝組織中表達(dá)顯著升高。此外，一項(xiàng)納入64例慢性丙型肝炎、22例丙型肝炎肝硬化患者的研究[6]發(fā)現(xiàn)，血清CTGF水平隨肝纖維化病理學(xué)分級(jí)進(jìn)展而遞增，提示血清CTGF水平可反映肝纖維化進(jìn)程。

1.2 白細(xì)胞介素(IL) IL參與肝星狀細(xì)胞增殖、集落因子的趨化等多個(gè)肝纖維化發(fā)生發(fā)展環(huán)節(jié)。已有研究[7]證實(shí)，IL-1、IL-6、IL-8具有促肝纖維化作用，IL-10具有抗肝纖維化作用。近年來(lái)，一些新的IL家族分子在肝纖維化中的作用被廣泛關(guān)注。日本Shoji等[8]研究報(bào)道197例經(jīng)肝穿刺活組織檢查證實(shí)為非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者的血清IL-34水平隨肝纖維化加重而逐漸增高，并進(jìn)一步建立IL-34積分模型[IL-34-FS=(0.038 7×IL-34(pg/ml)+0.362 3×Ⅳ膠原7S(ng/ml)+0.018 4×年齡(歲)-1.185 0)]，經(jīng)對(duì)比分析證實(shí)該模型診斷肝纖維化分級(jí)顯著優(yōu)于其他模型，診斷F4期肝纖維化的特異度及敏感度均達(dá)80%以上，并可作為肝纖維化的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。

1.3 趨化因子 趨化因子在肝纖維化進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，其可能通過(guò)介導(dǎo)粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞聚集參與炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)肝纖維化的進(jìn)展。兩項(xiàng)獨(dú)立隊(duì)列研究[9]納入180例HCV感染者，觀察肝組織及血清CXCL9和CXCL10表達(dá)水平，結(jié)果顯示患者肝組織和血清CXCL9、CXCL10表達(dá)水平均顯著上調(diào)，且與肝纖維化分期呈正相關(guān)。Berres等[10]報(bào)道， 慢性HCV感染者血清CXCL10、CXCL11水平隨肝纖維化程度加重而逐漸升高。另有研究[11]發(fā)現(xiàn)，HBV和HCV相關(guān)重度肝纖維化患者血清CXCL12水平顯著增加，CXCL12對(duì)重度肝纖維化的診斷優(yōu)于輕度肝纖維化。上述研究表明，CXCL9～12可作為肝纖維化進(jìn)展的分子標(biāo)志物。

1.4 高爾基體蛋白73(Golgi protein 73，GP73) GP73是一種新型高爾基蛋白。Wei等[12]在北京地壇醫(yī)院及解放軍三○二醫(yī)院進(jìn)行了2項(xiàng)對(duì)照研究，其中761例HBV感染者行彈性成像檢測(cè)，633例HBV感染者行肝穿刺活組織檢查，對(duì)比分析患者血清GP73水平與肝纖維化程度的相關(guān)性。研究結(jié)果顯示血清GP73水平與肝臟硬度呈正相關(guān)(r=0.601)，診斷顯著肝纖維化(≥F2)的敏感度和特異度分別為62.81%和80.05%(臨界值為76.6 ng/ml)；與肝穿刺病理對(duì)比研究顯示，血清GP73水平與肝纖維化分期顯著相關(guān)，血清GP73濃度85 ng/ml可作為顯著肝纖維化的臨界值。此外，有研究[13]通過(guò)分析148例HBV感染者(輕度纖維化80例，顯著纖維化68例)血清GP73水平與肝組織學(xué)變化的關(guān)系，并與其他肝纖維化模型對(duì)比分析，亦證實(shí)顯著纖維化患者血清GP73水平與肝纖維化程度有較好的相關(guān)性，其敏感度為67.6%，特異度為80%，優(yōu)于FibroTest、ALT與PLT比值指數(shù)(APRI)等評(píng)分；多因素logistic回歸分析顯示構(gòu)建GP73、FibroTest、APRI聯(lián)合預(yù)測(cè)模型診斷率顯著提高。

1.5 血清細(xì)胞角蛋白片段(CK18-M30) CK18-M30是反映肝細(xì)胞凋亡的一種分子標(biāo)志物。一項(xiàng)納入856例NAFLD患者的研究[14]結(jié)果顯示，血清CK-18能夠反映NAFLD患者脂肪變及肝纖維化程度，其敏感度和特異度分別為78%和87%。另一項(xiàng)納入3064例NAFLD患者的Meta分析[15]證實(shí)，血清CK-18水平診斷對(duì)非酒精性脂肪性肝炎相關(guān)F3～F4期肝纖維化具有較高的準(zhǔn)確度[受試者工作特征曲線下面積(AUC)為0.85]，提示CK-18可作為肝纖維化的血清診斷分子標(biāo)志物。

2 基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)及其抑制物

研究[16]發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞膜分泌的MMP和金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMP)是ECM代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶，在肝纖維化形成和降解的動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用，可用于評(píng)估肝纖維化程度。血清TIMP-1預(yù)測(cè)早期肝硬化的敏感度達(dá)100%，特異度為56%～75%[17]。但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，MMP/TIMP比值能更準(zhǔn)確反映肝纖維化程度。Lichtinghagen等[18]通過(guò)對(duì)比分析40例HCV感染者、20例HCV相關(guān)肝硬化患者及20例健康對(duì)照者血清MMP/TIMP比值，發(fā)現(xiàn)MMP-2/TIMP-1比值與肝組織炎癥及纖維化分級(jí)顯著相關(guān)。25例兒童膽道閉鎖分析顯示，血清MMP-7水平與肝組織MMP-7表達(dá)呈一致性上調(diào)[19]，提示MMP-7可作為診斷膽道閉鎖所致肝纖維化的生物學(xué)標(biāo)志物。

3 ECM相關(guān)標(biāo)志物

肝纖維化的本質(zhì)為以膠原為主的ECM合成增多、降解減少，致使過(guò)多ECM沉積形成肝纖維化。ECM合成與降解相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及分泌可標(biāo)志ECM沉積和肝纖維化的程度。

3.1 微纖維相關(guān)蛋白4(microfibrillar associated glycoprotein 4，MFAP-4) MFAP-4由肌成纖維細(xì)胞合成，作為細(xì)胞整合素配體參與細(xì)胞黏附和細(xì)胞間的相互作用，在ECM代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用。李森林等[20]分析了20例HBV相關(guān)肝纖維化患者血清MFAP-4水平及肝組織病理學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)MFAP-4水平與肝臟炎癥活動(dòng)度及纖維化程度呈正相關(guān)，提示血清MFAP-4可鑒別早期肝纖維化、進(jìn)展期肝纖維化及肝硬化。為明確MFAP-4的肝臟特異性，M?lleken等[21]觀察了91例肺纖維化患者血清MFAP-4變化，證實(shí)肺纖維化患者血清MFAP-4與健康對(duì)照組無(wú)明顯差異，提示MFAP-4具有肝臟特異性，有望成為肝纖維化的血清學(xué)標(biāo)志物。

3.2 人軟骨糖蛋白(YKL-40) YKL-40屬于甲殼質(zhì)酶家族，是一種ECM相關(guān)蛋白，與ECM的重構(gòu)和降解密切相關(guān)。研究[22]報(bào)道，酒精性肝纖維化及丙型肝炎肝纖維化患者血清YKL-40水平顯著升高。Rath等[23]對(duì)比分析55例慢性丙型肝炎患者血清YKL-40和瞬時(shí)彈性成像的診斷效果，結(jié)果顯示YKL-40診斷F≥2、F≥3及F=4肝纖維化的AUC分別為0.791、0.914及0.936，血清YKL-40診斷顯著肝纖維化(F≥3)的準(zhǔn)確性明顯高于瞬時(shí)彈性成像，表明血清YKL-40具有良好的臨床診斷價(jià)值。Johansen等[24]觀察129例酒精性肝病患者血清YKL-40水平，證實(shí)YKL-40水平隨肝纖維化程度加重呈遞增趨勢(shì)，輕、中、重度肝纖維化均值依次為 270、466、676 μg/L，敏感度、特異度分別為51%和88%，提示YKL-40為鑒別肝纖維化分期具有良好特異性的血清分子標(biāo)志物。

3.3 糖基化觸珠蛋白(fucosylated haptoglobin，F(xiàn)uc-Hpt)和Mac-2結(jié)合蛋白(Mac-2 binding protein，Mac-2 bp) Fuc-Hpt和Mac-2 bp曾作為腫瘤標(biāo)志物。近年研究發(fā)現(xiàn)二者與非酒精性脂肪性肝纖維化顯著相關(guān)。一項(xiàng)對(duì)126例經(jīng)肝穿刺證實(shí)NAFLD患者的研究[25]顯示，血清Fuc-Hpt水平與肝組織NAS評(píng)分、肝纖維化分級(jí)顯著相關(guān)。Tawara等[26]分析了317例慢性丙型肝炎患者血清Fuc-Hpt、Mac-2 bp水平與肝纖維化的關(guān)系，結(jié)果顯示Fuc-Hpt、Mac-2 bp隨肝纖維化進(jìn)展而呈遞增趨勢(shì)，多變量分析證實(shí)，Mac-2 bp與Fuc-Hpt可分別作為中度(F≥2)及重度(F≥3)肝纖維化的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子及診斷標(biāo)志物，聯(lián)合應(yīng)用Mac-2 bp、Fuc-Hpt及FIB-4、可顯著提高診斷準(zhǔn)確度。

4 非編碼RNA(ncRNA)

ncRNA是一類(lèi)功能性RNA分子，其不編碼蛋白質(zhì)，但能通過(guò)不同機(jī)制調(diào)控編碼蛋白基因的表達(dá)和功能，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化、代謝等重要的生物學(xué)過(guò)程，并且與疾病的發(fā)生發(fā)展、診斷和治療有著密切聯(lián)系。目前，關(guān)于ncRNA的相關(guān)研究主要針對(duì)microRNA(miRNA)和長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)。

4.1 microRNA(miRNA) miRNA在正常機(jī)體循環(huán)中種類(lèi)和豐度處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，而肝臟代謝異常可破壞機(jī)體循環(huán)miRNA穩(wěn)態(tài)，表現(xiàn)為疾病狀態(tài)下miRNA的差異表達(dá)。循環(huán)miRNA具有良好的穩(wěn)定性和表達(dá)的特異性，現(xiàn)已成為疾病診斷和預(yù)后判斷的新型分子標(biāo)志物。El-Ahwany等[27]檢測(cè)68例早期及65例顯著丙型肝炎肝纖維化患者血清miRNA表達(dá)水平，其中miR-138水平明顯增高，診斷早期肝纖維化的敏感度為89.3%，特異度為71.43%，診斷顯著肝纖維化的敏感度為89.3%，特異度為93.2%；miR-143診斷顯著肝纖維化的敏感度及特異度分別為75%及88.4%，表明miR-138可作為早期及顯著肝纖維化的診斷標(biāo)志物，而miR-143可作為顯著肝纖維化的診斷標(biāo)志物。Chen等[28]發(fā)現(xiàn)扶正化瘀治療的HBV患者血清內(nèi)存在112個(gè)差異表達(dá)miRNA，進(jìn)一步通過(guò)miRNA-Target Network評(píng)估扶正化瘀治療HBV療效，建立P=miRNAs診斷模型，發(fā)現(xiàn)miRNA診斷模型特異度及敏感度均高于Child-Pugh分級(jí)。

Cermelli等[29]對(duì)NAFLD患者及正常人的血清miRNA表達(dá)譜進(jìn)行對(duì)比分析，患者血清miR-34a和miR-122表達(dá)水平明顯上調(diào)，且與ALT及AST水平、炎癥分級(jí)、肝纖維化分期呈正相關(guān)，提示miR-34a和miR-122可作為非酒精性脂肪性肝纖維化的診斷標(biāo)志物。Roderburg等[30]對(duì)比分析肝硬化患者(67例)及健康人群(17例)血清miR-29a水平，結(jié)果顯示miR-29a血清水平隨Child-Pugh分級(jí)加重而逐漸降低，而與MELD評(píng)分呈相反趨勢(shì)。Ninomiya等[31]對(duì)比分析原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)(10例)、慢性乙型肝炎(5例)、慢性丙型肝炎(5例)及健康志愿者(5例)血清miRNA表達(dá)譜變化，結(jié)果表明PBC患者血清中hsa-miR-503-3p、197-3p、500a-3p水平顯著低于健康對(duì)照組，hsa-miR-505-3p、139-5p和197-3p水平顯著低于病毒性肝炎肝纖維化患者。上述研究表明，血清miRNA可作為診斷不同病因肝纖維化的指標(biāo)，并可能作為抗肝纖維化治療效果的潛在評(píng)估指標(biāo)。

4.2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA) lncRNA是指長(zhǎng)度超過(guò)200 bp的ncRNA，越來(lái)越多的研究顯示肝纖維化進(jìn)展過(guò)程中多種lncRNA表達(dá)發(fā)生改變。張蕾等[32]比較PBC患者和健康人群外周血單個(gè)核細(xì)胞中l(wèi)ncRNA-AK053349表達(dá)，結(jié)果顯示PBC患者lncRNA-AK053349較健康對(duì)照組明顯增高，并與肝組織學(xué)分期、Mayo風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分密切相關(guān)，表明lncRNA-AK053349可能為判斷PBC肝纖維化及肝損傷程度的潛在標(biāo)志物。

本課題組采用高通量測(cè)序?qū)Ρ缺透窝赘卫w維化患者與健康人群血漿lncRNA差異表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)474個(gè)表達(dá)上調(diào)、293個(gè)表達(dá)下調(diào)；進(jìn)一步觀察輕度肝纖維化(F<2)、顯著肝纖維化(2≤F<4)、健康對(duì)照組血漿中l(wèi)ncRNA-ATB表達(dá)變化，結(jié)果顯示lncRNA-ATB水平與肝纖維化分期顯著相關(guān)[r=0.785，AUC為0.877]，敏感度、特異度分別為78.7%和88%，該指標(biāo)有望作為肝纖維化的分子診斷標(biāo)志物[33]。

ncRNA的研究已經(jīng)取得很大進(jìn)展，并發(fā)現(xiàn)了在肝纖維化中發(fā)揮重要作用的ncRNA，為肝纖維化的早期無(wú)創(chuàng)性診斷、鑒別、發(fā)病機(jī)制的研究及治療提供了新的思路。然而，對(duì)于外周循環(huán)中ncRNA分泌機(jī)制、動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及清除機(jī)制目前尚未完全明確，因此其準(zhǔn)確性及特異性有待進(jìn)一步研究。

5 分子組學(xué)

近十年來(lái)，組學(xué)在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用?；蚪M學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)以及近年迅速發(fā)展起來(lái)的糖組學(xué)均可反映肝臟組織的整體性變化，通過(guò)分析比較，可得到肝纖維化階段差異表達(dá)的基因、蛋白質(zhì)及糖類(lèi)，進(jìn)一步研究其功能作用，尋找特異性強(qiáng)的反映肝纖維化程度的血清學(xué)指標(biāo)。

5.1 基因組學(xué) 基因組學(xué)已從基因序列研究轉(zhuǎn)移到基因功能研究，即為功能基因組學(xué)。單核苷酸多態(tài)性(single-nucleotide polymorphism，SNP)可在多方面影響肝纖維化的發(fā)生及發(fā)展。加利福尼亞大學(xué)一項(xiàng)多中心隊(duì)列研究[34]納入916例慢性丙型肝炎患者進(jìn)行SNP研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1609個(gè)SNP位點(diǎn)與進(jìn)展期肝纖維化相關(guān)，其中DEAD盒多肽5、肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A與嚴(yán)重肝纖維化密切相關(guān)。肝纖維化相關(guān)因子的基因多態(tài)性可能影響肝纖維化的發(fā)生，多個(gè)SNP標(biāo)志物聯(lián)合可預(yù)測(cè)慢性丙型肝炎肝硬化發(fā)生與進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。

5.2 蛋白質(zhì)組學(xué) 蛋白質(zhì)組學(xué)在于大規(guī)模水平研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平、翻譯后修飾及蛋白間相互作用。Xu等[35]通過(guò)對(duì)126例慢性乙型肝炎患者血清二維凝膠電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)鐵蛋白等3個(gè)小分子蛋白，其診斷中度肝纖維化(≥S2)的AUC為0.884～0.996，診斷顯著肝纖維化(≥S3)的AUC為0.785～0.875。Bell等[36]采用LC/MS-MS質(zhì)譜法對(duì)比分析69例NAFLD患者和16例肥胖對(duì)照者血清蛋白，發(fā)現(xiàn)72個(gè)差異顯著的蛋白，其中27個(gè)蛋白任意2組差異>30%，15個(gè)蛋白的差異表達(dá)與F3/F4期肝纖維化程度相關(guān)。

5.3 糖組學(xué) 肝纖維化形成與ECM合成密切相關(guān)，ECM主要為膠原、糖蛋白和蛋白多糖， Callewaert等[37]應(yīng)用糖組學(xué)技術(shù)診斷代償和失代償期肝硬化，應(yīng)用基于DNA序列分析的臨床糖組學(xué)技術(shù)，檢測(cè)患者血清蛋白N-糖苷，可初步診斷肝纖維化，在代償性肝硬化患者中，其診斷敏感度和特異度分別為79%和86%，而在失代償期肝硬化患者中敏感度和特異度均為100%，表明通過(guò)檢測(cè)患者血清糖組學(xué)的差異變化，可區(qū)分不同程度肝纖維化。

5.4 代謝組學(xué) 代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白組學(xué)及糖組學(xué)之后的生物學(xué)新平臺(tái)，能夠定性和定量評(píng)估生物體受到異常刺激后代謝產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化。肝臟是人體最重要的代謝器官，糖類(lèi)、脂類(lèi)及氨基酸3大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝過(guò)程均在肝臟完成，因此，從代謝組學(xué)可對(duì)肝損傷程度、病變性質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)研究。日本學(xué)者Tokushige等[38]對(duì)NFALD和PBC患者進(jìn)行LC/MS-MS質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)包括脫氫異雄酮、還原尿睪酮在內(nèi)的28種代謝產(chǎn)物與肝纖維化相關(guān)。Embade等[39]應(yīng)用核磁共振氫譜(1H-NMR)技術(shù)檢測(cè)丙型肝炎肝纖維化，發(fā)現(xiàn)膽堿、乙酰乙酸鹽、低密度脂蛋白為丙型肝炎肝纖維化患者差異最顯著的代謝物，提示1H-NMR技術(shù)可作為鑒別肝纖維化存在與否、嚴(yán)重程度的診斷方法。

組學(xué)可以在尚未出現(xiàn)肝纖維化之前區(qū)別出差異表達(dá)的基因、蛋白記憶不同的代謝水平，從而達(dá)到早期預(yù)測(cè)的目的。此外，組學(xué)可通過(guò)鑒定疾病進(jìn)展中的基因/蛋白表達(dá)譜，預(yù)測(cè)疾病的轉(zhuǎn)歸及療效。

6 血清生物學(xué)指標(biāo)的特點(diǎn)及存在的問(wèn)題

血清新型分子標(biāo)志物具有無(wú)創(chuàng)性、費(fèi)用較低、利于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)肝纖維化的診斷具有重要價(jià)值。目前，肝纖維化血清分子診斷標(biāo)志物的應(yīng)用尚缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，單一指標(biāo)存在誤差，有時(shí)需多指標(biāo)聯(lián)合診斷，以提高血清學(xué)標(biāo)志物的臨床價(jià)值。

7 展望

肝纖維化是一個(gè)復(fù)雜的病理過(guò)程，其診斷需根據(jù)病原學(xué)、臨床、影像學(xué)、肝組織病理學(xué)及生化學(xué)等多方面聯(lián)合評(píng)估，新型血清分子診斷標(biāo)志物的臨床應(yīng)用將有助于肝纖維化病因分析、纖維化程度鑒別及預(yù)后判斷，為臨床治療策略的制訂及療效判斷提供科學(xué)依據(jù)。

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引證本文：DU JH, NAN YM. Novel molecular diagnostic markers for liver fibrosis[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(3): 445-450. (in Chinese)

杜靜華， 南月敏. 肝纖維化新型分子診斷標(biāo)志物[J]. 臨床肝膽病雜志, 2017, 33(3): 445-450.

(本文編輯：葛 俊)

Novel molecular diagnostic markers for liver fibrosis

DUJinghua,NANYuemin.

(DepartmentofTraditionalandWesternMedicalHepatology,ThirdHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050051,China)

Liver fibrosis is an important pathological stage for the progression of chronic liver diseases to liver cirrhosis. Timely and accurate assessment of fibrosis degree plays an important role in guiding the treatment of chronic liver diseases. With the development of molecular biology techniques and wide application of molecular diagnostic techniques, the measurement of novel serum molecular diagnostic markers may contribute to the early diagnosis and precise treatment of liver fibrosis. A number of novel serum molecular markers with a diagnostic value have been identified, including fibroblast factor, matrix metalloproteinases and their inhibitors, extracellular matrix-related markers, and non-coding RNAs. In addition, genomics, proteomics, and metabolomics also have certain diagnostic values.

liver cirrhosis； biological markers； diagnosis

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.03.009

2016-12-05；

2016-12-05。

杜靜華(1985-)，女，醫(yī)師，博士，主要從事慢性肝病發(fā)病機(jī)制及防治策略的研究。

南月敏，電子信箱：nanyuemin@163.com。

R575.2

A

1001-5256(2017)03-0445-06