• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高危型人乳頭瘤病毒單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響

    2017-03-06 20:03:42張峻霄胡春燕閆坤賈亮劉晨楚光華
    中國醫(yī)藥導報 2016年33期
    關鍵詞:人乳頭瘤病毒增殖凋亡

    張峻霄 胡春燕 閆坤 賈亮 劉晨 楚光華 高巧蓮 劉朝陽

    [摘要] 目的 研究高危型人乳頭瘤病毒(hr-HPV)單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響。 方法 選擇2010年1月~2016年1月在西北婦女兒童醫(yī)院接受手術切除治療的宮頸癌患者118例,收集宮頸癌組織,測定HPV的類型并分為hr-HPV陽性和hr-HPV陰性、hr-HPV多重感染和hr-HPV單一感染。檢測宮頸癌組織中細胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的表達量。 結果 hr-HPV陽性92例、hr-HPV陰性26例,hr-HPV多重感染37例、hr-HPV單一感染55例。hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。 結論 hr-HPV多重感染能夠通過增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的方式來加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡,進而促進癌細胞的增殖。

    [關鍵詞] 宮頸癌;人乳頭瘤病毒;細胞周期;增殖;凋亡

    [中圖分類號] R737.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2016)11(c)-0099-04

    Effect of single type and multiple infection of high risk HPV on the expression of cell cycle protein and anti-apoptotic protein in cervical cancer

    ZHANG Junxiao1 HU Chunyan1 YAN Kun1 JIA Liang1 LIU Chen1 CHU Guanghua1 GAO Qiaolian2 LIU Zhaoyang2

    1.Second Department of Gynaecology, Northwest Women and Children's Hospital, Shaanxi Province, Xi'an 710061, China; 2.Outpatient Service of Department of Gynaecology, Northwest Women and Children's Hospital, Shaanxi Province, Xi′an 710061, China

    [Abstract] Objective To study the effect of single type and multiple infection of high risk human papillomavirus (hr-HPV) on the expression of cell cycle protein and anti-apoptotic protein in cervical cancer. Methods 118 cervical cancer patients received surgical resection in Northwest Women and Children's Hospital during January 2010 to January 2016 were enrolled and cervical cancer tissues were collected. HPV types were determined and divided into hr-HPV positive and hr-HPV negative, hr-HPV multiple infection and hr-HPV single infection. The expressions of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6 and anti apoptotic protein Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in cervical cancer tissues were detected. Results Hr-HPV positive was 92 cases, hr-HPV negative was 26 cases, hr-HPV multiple infection was 37 cases, hr-HPV single infection was 55 cases. The protein contents of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6, Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in hr-HPV positive cervical carcinoma tissues were significantly higher than those in hr-HPV negative cervical carcinoma tissues, the differences were statistically significant (P < 0.05). The protein contents of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6, Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in multiple hr-HPV infection cervical cancer tissues were significantly higher than those in single infection cervical carcinoma, the differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion Multiple infection of hr-HPV can accelerate the progression of cell cycle and inhibit apoptosis of cell through upregulating the expression of cell cycle proteins and anti-apoptosis protein in cervical carcinoma, thereby promoting cancer cell proliferation.

    [Key words] Cervical cancer; Human papilloma virus; Cell cycle; Proliferation; Apoptosis

    宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一,人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是造成宮頸癌及癌前病變最重要的危險因素。目前已知的HPV 160余種,其中近30種HPV能夠感染肛門及生殖器上皮,且14種屬于高危致癌類型[1-2]。高危型HPV(hr-HPV)感染宮頸上皮細胞會造成細胞內多種細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達異常,進而促進細胞增殖并增加癌變風險[3-4]。相關流行病學資料顯示,hr-HPV多重感染患者發(fā)生宮頸癌的風險遠遠超過hr-HPV單一類型感染[5-6]。但是,關于hr-HPV多重感染對宮頸癌病情發(fā)生、發(fā)展過程中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達的影響未見明確報道。本研究主要分析hr-HPV單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2010年1月~2016年1月在西北婦女兒童醫(yī)院接受手術切除治療的宮頸癌患者118例作為研究對象,平均年齡(39.6±5.5)歲,術后收集宮頸癌組織并保存于-80℃冰箱。宮頸癌組織中,hr-HPV陽性92例、hr-HPV陰性26例,hr-HPV多重感染37例、hr-HPV單一感染55例。hr-HPV陽性患者平均年齡(47.5±5.2)歲,中高分化58例、低未分化34例;hr-HPV陰性患者平均年齡(48.2±4.9)歲,中高分化15例、低未分化11例。hr-HPV多重感染患者平均年齡(47.9±5.5)歲,中高分化23例、低未分化14例;hr-HPV單一感染患者平均年齡(47.1±4.9)歲,中高分化35例、低未分化23例。hr-HPV陽性與陰性患者、hr-HPV多重感染與hr-HPV單一感染患者的年齡、分化程度比較,差異無統計學意義(P > 0.05),具有可比性。

    納入標準:①無HPV感染治療病史;②手術切除后經病理檢查明確宮頸癌的診斷;③通過醫(yī)院倫理委員會,納入研究患者具有知情權,并在入組前簽署知情同意書。排除標準:①合并遠處轉移的患者;②未取得知情同意的患者;③近1個月內行婦科相關檢查及治療。

    1.2 試劑與儀器

    HPV檢測試劑盒及DNA提取液購自中山大學達安基因股份有限公司,宮頸管刷、宮頸脫落細胞取樣器購自天津伊諾新康醫(yī)療器械科技有限公司,引物、探針合成由上海生物工程技術有限公司提供,Perfect Real Time試劑購自北京智杰方遠科技有限公司。酶聯免疫吸附試劑盒以及BCA蛋白定量試劑盒購于南京建成生物公司。

    1.3 HPV分型檢測

    取宮頸癌組織,采用PCR-RDB法進行HPV分型檢測,經生物素標記的引物進行靶核酸的擴增,第一步通過莖環(huán)引物來合成互補DNA,再通過RNA的逆轉錄系統對10 ng RNA進行逆轉錄體系進行反應,在PCR管加入10 μL的逆轉錄緩沖液,總的RNA濃度調整到2 ng/μL,最后加入5 μL的逆轉錄引物,在冰上混勻之后反應5 min,接著進行梯度變性反應,溫度時間遞減;第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反應體系,反應體系為2×的 PCR Taqman Universal的混合液以及Taqman RNA的特異性引物,通過逆轉錄體系進行反應,cDNA共5 μL加入到RNA去酶的水中,將體積擴增至20 μL,通過循環(huán)反應94℃、30 s,60℃、30 s,72℃、60 s,72℃、7 min遞減的擴張40個循環(huán)之后,以積分吸光度差值來確定hr-HPV和低危型HPV。

    1.4 蛋白表達量檢測方法

    取宮頸癌組織,加入蛋白裂解液RIPA后充分勻漿,將勻漿液放置在4℃離心機中以12000×g的離心力離心20 min,離心后棄去沉淀、保留上清,而后采用酶聯免疫吸附試劑盒測定上清液中細胞周期蛋白(Cyclin)B1、CyclinD1、細胞周期蛋白相關激酶(CDK)1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的含量,采用BCA試劑盒測定上清液中總蛋白的含量,計算每毫克總蛋白樣本中所含目的蛋白的含量。

    1.5 統計學方法

    采用SPSS 20.0統計軟件對數據進行分析和處理,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,采用t檢驗,以P < 0.05為差異有統計學意義。

    2 結果

    2.1 hr-HPV感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白表達的影響

    hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.2 hr-HPV感染對宮頸癌組織中抗凋亡蛋白表達的影響

    hr-HPV陽性宮頸癌組織中Bcl-2、Bcl-xl、Survivin蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.3 hr-HPV單一和多重感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白表達的影響

    hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.4 hr-HPV單一和多重感染對宮頸癌組織中抗凋亡蛋白表達的影響

    hr-HPV多重感染宮頸癌組織中Bcl-2、Bcl-xl、Survivin蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    3 討論

    HPV易感于黏膜鱗狀上皮及表皮組織,自從1976年發(fā)現HPV可能通過性傳播致癌以來,宮頸癌與HPV之間的相關性研究成為了腫瘤病毒學的熱門課題。低危型HPV通常存在于宮頸良性或低度病變的病灶,而hr-HPV可誘發(fā)全身多部位癌變[7-8]。宮頸癌組織中hr-HPV的感染率顯著高于宮頸良性病變組織[9-11]。在感染HPV初期,宮頸上皮組織未出現增生或異常增生等形態(tài)學的改變[8];病毒的DNA整合進入宿主細胞的基因組可引起多種基因表達,鱗狀上皮細胞逐步出現核增大、核異性、空泡變等改變,進而增加組織異常增生、癌變等的發(fā)生風險[12-14]。

    宮頸組織中hr-HPV的持續(xù)感染會將病毒的遺傳物質整合進入宿主細胞的基因組,進而造成宿主細胞中多種基因表達的改變[15-16]。我們通過分析hr-HPV感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白以及抗凋亡蛋白表達量的影響發(fā)現,hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織。這就說明hr-HPV感染能夠通過增加細胞周期蛋白以及抗凋亡蛋白表達的方式來誘導宮頸癌組織中的細胞增殖,進而促進病情的發(fā)展。

    CyclinB1、CyclinD1分別能夠與CDK1、CDK6形成復合體并縮短細胞周期G2/M期的轉換時間、加速細胞周期進程[17-18];Bcl-2和Bcl-xl能夠調節(jié)線粒體膜上轉換孔的開放和閉合狀態(tài),減少細胞色素C的釋放,進而抑制下游caspase級聯凋亡通路的激活[19];Survivin能夠直接抑制多種caspase分子的激活并拮抗細胞凋亡過程[20]。我們通過分析hr-HPV多重感染和單一類型感染對上述細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響可知,hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織。這就說明hr-HPV多重感染能夠增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的表達量,進而加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡。

    綜上所述,hr-HPV多重感染能夠通過增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的方式來加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡,進而促進癌細胞的增殖。

    [參考文獻]

    [1] Wongsena M,Suebsamran P,Panomket P,et al. Prognostic factors of human papillomavirus genotypes of invasive cervical carcinoma:an analytical cross-sectional study in lower north-east Thailand [J]. J Med Assoc Thai,2014,97(4):12-19.

    [2] 陳銳,趙健,朱麗榮,等.人類乳頭狀瘤病毒分型檢測在宮頸癌篩查中的臨床研究[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2014,28(6):429-432.

    [3] Zouheir Y,Fechtali T,Elgnaoui N. Human papillomavirus genotyping and p16(INK4a) expression in cervical lesions:a combined test to avoid cervical cancer progression [J]. J Cancer Prev,2016,21(2):121-125.

    [4] Zhong P,Li J,Gu Y,et al. P16 and Ki-67 expression improves the diagnostic accuracy of cervical lesions but not predict persistent high risk human papillomavirus infection with CIN1 [J]. Int J Clin Exp Pathol,2015,8(3):2979-2986.

    [5] 張淼,周秀春,張冠群.人乳頭瘤病毒檢測及TCT檢查在宮頸癌篩查中的臨床價值研究[J].現代預防醫(yī)學,2016, 43(5):836-838,918.

    [6] Khan MJ,Castle PE,Lorincz AT,et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with Human Papillomavirus(HPV)type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice [J]. J Natl Cancer Inst,2015,97(14):1072-1079.

    [7] Castellsagué X,Pawlita M,Roura E,et al. Prospective seroepidemiologic study on the role of Human Papillomavirus and other infections in cervical carcinogenesis:evidence from the EPIC cohort [J]. Int J Cancer,2014,135(2):440-452.

    [8] Johnson DC,Bhatta MP,Smith JS,et al. Assessment of high-risk Human Papillomavirus infections using clinician-and self-collected cervical sampling methods in rural women from far western Nepal [J]. PLoS One,2014,9(6):e101255.

    [9] 付敏,楊彪,楊宗橋.人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸病變臨床價值的研究[J].中國婦幼保健,2014,29(18):2875-2877.

    [10] 蘇卿,潘卓,胡嫦娥,等.TCT、HPV和陰道鏡下宮頸組織活檢對宮頸病變的診斷價值[J].中國當代醫(yī)藥,2016, 23(11):84-87.

    [11] Castle PE,Hunt WC,Langsfeld E,et al. Three-year risk of cervical precancer and cancer after the detection of low-risk Human Papillomavirus genotypes targeted by a commercial test [J]. Obstet Gynecol,2014,123(1):49-56.

    [12] Khan MJ,Castle PE,Lorincz AT,et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with Human Papillomavirus(HPV)type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice [J]. J Natl Cancer Inst,2015,97(14):1072-1079.

    [13] 李玉霞,張燕.高危型HPV篩查聯合液基細胞學檢測在宮頸癌篩檢中的應用價值[J].海南醫(yī)學院學報,2014, 20(2):223-225.

    [14] Mure?鬤an D,Rotar IC,Apostol S,et al. HPV immunohistochemical testing and cervical dysplasia [J]. Clujul Med,2016,89(2):236-240.

    [15] Valen?觭a JE,Gon?觭alves AK,Guerreiro da Silva ID,et al. High risk HPV E6/E7 oncoprotein expression in women with high grade squamous intraepithelial lesion [J]. Rev Bras Ginecol Obstet,2016,38(3):154-159.

    [16] 白彩云,王延明.宮頸上皮內瘤變患者高危型HPV感染與潛在惡性生物學行為的關系[J].海南醫(yī)學院學報,2015,21(9):1290-1293.

    [17] Umbreit C,Erben P,Faber A,et al. MMP9,cyclin D1 and β-catenin are useful markers of p16-positive squamous cell carcinoma in therapeutic EGFR inhibition in vitro [J]. Anticancer Res,2015,35(7):3801-3810.

    [18] Wang N,Wei H,Yin D,et al. MicroRNA-195 inhibits proliferation of cervical cancer cells by targeting cyclin D1a [J]. Tumour Biol,2016,37(4):4711-4720.

    [19] Zhou XL,Wang M. Expression levels of survivin,Bcl-2,and KAI1 proteins in cervical cancer and their correlation with metastasis [J]. Genet Mol Res,2015,14(4):17059-17067.

    [20] Gao M,Li Y,Ji X,et al. Disturbance of Bcl-2,Bax,Caspase-3,Ki-67 and C-myc expression in acute and subchronic exposure to benzo(a)pyrene in cervix [J]. Acta Histochem,2016,118(2):63-73.

    (收稿日期:2016-08-16 本文編輯:李亞聰)

    猜你喜歡
    人乳頭瘤病毒增殖凋亡
    ‘金凱特’杏的組織培養(yǎng)與快繁
    子宮頸癌篩查方法的比較研究
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協同吉西他濱的抑瘤作用
    宮頸內人乳頭瘤病毒的研究進展
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關系
    預防性人乳頭瘤病毒疫苗Gardasil和Cervarix的臨床應用
    人乳頭瘤病毒與宮頸癌
    Livin和Survivin在卵巢癌中的表達及相關性研究
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    18禁国产床啪视频网站| 丝袜喷水一区| 在线 av 中文字幕| 老司机福利观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 日本wwww免费看| 美女高潮到喷水免费观看| 精品少妇内射三级| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲少妇的诱惑av| 国产1区2区3区精品| 91国产中文字幕| av视频免费观看在线观看| 国产精品1区2区在线观看. | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一级,二级,三级黄色视频| 在线观看人妻少妇| 国产精品久久久久久精品电影小说| 69精品国产乱码久久久| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品.久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日本a在线网址| 午夜精品国产一区二区电影| 99国产精品99久久久久| 中文欧美无线码| 精品少妇黑人巨大在线播放| 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美激情在线| av一本久久久久| 蜜桃在线观看..| 亚洲一区中文字幕在线| 日韩中文字幕视频在线看片| 最近最新免费中文字幕在线| 久久久国产精品麻豆| 少妇粗大呻吟视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产精品久久久av美女十八| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲人成电影观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲av美国av| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 美女高潮到喷水免费观看| 妹子高潮喷水视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| cao死你这个sao货| 国产成人欧美在线观看 | 中文字幕av电影在线播放| a级毛片在线看网站| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本wwww免费看| 久久久国产精品麻豆| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 考比视频在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 三级毛片av免费| 十八禁网站免费在线| 丝瓜视频免费看黄片| 动漫黄色视频在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久久水蜜桃国产精品网| 男女无遮挡免费网站观看| 蜜桃国产av成人99| 少妇 在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 亚洲av第一区精品v没综合| 五月开心婷婷网| 日韩成人在线观看一区二区三区| 中文字幕色久视频| 又大又爽又粗| 亚洲性夜色夜夜综合| 一个人免费看片子| 9191精品国产免费久久| 欧美日韩视频精品一区| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久久国产一区二区| 91国产中文字幕| 亚洲九九香蕉| 精品少妇黑人巨大在线播放| 精品国产亚洲在线| 一级毛片精品| 国产成人av教育| 日韩视频一区二区在线观看| 日韩视频在线欧美| 99久久人妻综合| 下体分泌物呈黄色| 99久久国产精品久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产日韩欧美视频二区| 日本一区二区免费在线视频| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美日韩精品网址| √禁漫天堂资源中文www| 视频区欧美日本亚洲| 久久久久久人人人人人| 国产老妇伦熟女老妇高清| 一级毛片女人18水好多| av片东京热男人的天堂| 一级,二级,三级黄色视频| 捣出白浆h1v1| 丁香欧美五月| 午夜免费成人在线视频| 男人舔女人的私密视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 老司机影院毛片| 免费少妇av软件| 老司机在亚洲福利影院| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一进一出好大好爽视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲精华国产精华精| h视频一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美软件| 操出白浆在线播放| 国产在线免费精品| 丝袜喷水一区| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲色图综合在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一二三四在线观看免费中文在| 精品高清国产在线一区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲免费av在线视频| 视频区欧美日本亚洲| 免费黄频网站在线观看国产| 少妇 在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 这个男人来自地球电影免费观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产av国产精品国产| av网站在线播放免费| 成年人黄色毛片网站| 性高湖久久久久久久久免费观看| 在线观看人妻少妇| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 高清av免费在线| 免费观看a级毛片全部| 18禁美女被吸乳视频| 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 波多野结衣av一区二区av| 蜜桃国产av成人99| 亚洲熟女毛片儿| 大香蕉久久成人网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产淫语在线视频| 一区福利在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 在线 av 中文字幕| 午夜福利视频精品| 大码成人一级视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品一区二区精品视频观看| 最新美女视频免费是黄的| 91麻豆av在线| 狂野欧美激情性xxxx| 免费不卡黄色视频| 久久这里只有精品19| 99久久精品国产亚洲精品| 国产97色在线日韩免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 操出白浆在线播放| 99香蕉大伊视频| 人成视频在线观看免费观看| 男女之事视频高清在线观看| 久久久国产精品麻豆| 国产av精品麻豆| 大陆偷拍与自拍| 大香蕉久久网| 大型黄色视频在线免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久久久精品国产欧美久久久| av网站在线播放免费| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩欧美免费精品| 国产伦理片在线播放av一区| 国产深夜福利视频在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久 | 99热网站在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 成人特级黄色片久久久久久久 | 欧美国产精品一级二级三级| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产成人精品久久二区二区免费| 咕卡用的链子| 亚洲成人手机| av免费在线观看网站| 成人av一区二区三区在线看| 国产日韩欧美视频二区| 精品第一国产精品| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品在线美女| 美国免费a级毛片| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 人妻一区二区av| 999久久久精品免费观看国产| 动漫黄色视频在线观看| 飞空精品影院首页| 日本五十路高清| 亚洲伊人色综图| 十八禁高潮呻吟视频| 十八禁高潮呻吟视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 自线自在国产av| 啦啦啦免费观看视频1| 久久毛片免费看一区二区三区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 成在线人永久免费视频| 人人妻人人澡人人看| 久久午夜综合久久蜜桃| 久热爱精品视频在线9| 999久久久国产精品视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 青青草视频在线视频观看| 高清欧美精品videossex| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美在线黄色| 99在线人妻在线中文字幕 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲中文字幕日韩| 97在线人人人人妻| 十八禁网站免费在线| 麻豆国产av国片精品| 久久 成人 亚洲| 午夜福利欧美成人| 亚洲精品自拍成人| 久久久精品94久久精品| 又紧又爽又黄一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 性少妇av在线| 精品少妇久久久久久888优播| 麻豆乱淫一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费观看人在逋| 免费不卡黄色视频| 精品国产国语对白av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产一卡二卡三卡精品| 人成视频在线观看免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 成人av一区二区三区在线看| 免费少妇av软件| 国产在线免费精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 中文字幕av电影在线播放| 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利视频在线观看免费| 国产欧美亚洲国产| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 搡老岳熟女国产| 日本五十路高清| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲国产看品久久| 国产成人系列免费观看| 精品视频人人做人人爽| 国产不卡一卡二| avwww免费| 在线永久观看黄色视频| 国产av一区二区精品久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久亚洲精品不卡| 免费看a级黄色片| 涩涩av久久男人的天堂| 自线自在国产av| 十八禁高潮呻吟视频| 国产野战对白在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一区在线观看完整版| 国产人伦9x9x在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲国产欧美一区二区综合| 黑人猛操日本美女一级片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 老司机亚洲免费影院| 国产xxxxx性猛交| 老鸭窝网址在线观看| 青青草视频在线视频观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 视频在线观看一区二区三区| 色播在线永久视频| 精品乱码久久久久久99久播| aaaaa片日本免费| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲色图综合在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美成人午夜精品| 大陆偷拍与自拍| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美日韩精品网址| 啦啦啦 在线观看视频| 成人国产av品久久久| 精品福利永久在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩欧美三级三区| 青草久久国产| 亚洲 欧美一区二区三区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲伊人久久精品综合| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 色在线成人网| 国产在线免费精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 美女国产高潮福利片在线看| 热99久久久久精品小说推荐| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲综合色网址| 黑人操中国人逼视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 老汉色av国产亚洲站长工具| 制服诱惑二区| 国产一区二区 视频在线| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲第一av免费看| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产av影院在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 新久久久久国产一级毛片| 91av网站免费观看| 777米奇影视久久| 一本久久精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 99热国产这里只有精品6| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲成人免费电影在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99香蕉大伊视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产男靠女视频免费网站| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 好男人电影高清在线观看| 国产在线免费精品| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 高清av免费在线| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 少妇 在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产一区二区三区视频了| 999久久久国产精品视频| 午夜免费成人在线视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品视频人人做人人爽| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 视频区欧美日本亚洲| 免费观看人在逋| 这个男人来自地球电影免费观看| 操美女的视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 午夜成年电影在线免费观看| 窝窝影院91人妻| 老熟妇仑乱视频hdxx| 黑丝袜美女国产一区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜91福利影院| 久久久久久久国产电影| 国产精品av久久久久免费| 两人在一起打扑克的视频| 免费日韩欧美在线观看| 精品人妻在线不人妻| 最新的欧美精品一区二区| 成人18禁在线播放| 日本黄色视频三级网站网址 | 激情在线观看视频在线高清 | 国产有黄有色有爽视频| 在线观看免费高清a一片| 十八禁网站网址无遮挡| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 乱人伦中国视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 麻豆乱淫一区二区| 大型av网站在线播放| 国产亚洲精品一区二区www | 老司机影院毛片| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黄色怎么调成土黄色| 国产伦理片在线播放av一区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一区福利在线观看| 人妻久久中文字幕网| 九色亚洲精品在线播放| 91av网站免费观看| 看免费av毛片| 国产91精品成人一区二区三区 | 一边摸一边抽搐一进一出视频| 99国产精品免费福利视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲伊人久久精品综合| 99国产极品粉嫩在线观看| 无人区码免费观看不卡 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲国产av新网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 无人区码免费观看不卡 | 在线观看一区二区三区激情| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99国产极品粉嫩在线观看| 日韩大片免费观看网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一级毛片女人18水好多| 亚洲九九香蕉| 国产精品99久久99久久久不卡| 桃红色精品国产亚洲av| 久久久久久人人人人人| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 波多野结衣av一区二区av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美久久黑人一区二区| 一个人免费在线观看的高清视频| 不卡av一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 视频区图区小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久精品94久久精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲av片天天在线观看| 在线看a的网站| 中文亚洲av片在线观看爽 | 男男h啪啪无遮挡| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜免费成人在线视频| 免费av中文字幕在线| 高清视频免费观看一区二区| 在线观看舔阴道视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 麻豆乱淫一区二区| 久久这里只有精品19| av在线播放免费不卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 午夜福利免费观看在线| 成年版毛片免费区| 91国产中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产av精品麻豆| 成年版毛片免费区| 99精品久久久久人妻精品| 午夜福利视频在线观看免费| av天堂久久9| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 后天国语完整版免费观看| 国产在线一区二区三区精| 国产激情久久老熟女| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲午夜理论影院| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产一区二区三区视频了| 国产区一区二久久| 18禁国产床啪视频网站| 精品高清国产在线一区| 欧美在线一区亚洲| 欧美日韩亚洲高清精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 男女床上黄色一级片免费看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 999精品在线视频| 一本色道久久久久久精品综合| 一区福利在线观看| 国产片内射在线| kizo精华| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 91字幕亚洲| 欧美中文综合在线视频| 女人久久www免费人成看片| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品av麻豆狂野| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩黄片免| 日韩中文字幕视频在线看片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产真人三级小视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 国产成人精品无人区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 美女扒开内裤让男人捅视频| 黄色视频不卡| 美女国产高潮福利片在线看| bbb黄色大片| 午夜福利一区二区在线看| 午夜日韩欧美国产| 男女边摸边吃奶| 亚洲伊人色综图| 久久午夜综合久久蜜桃| 香蕉丝袜av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人啪精品午夜网站| av有码第一页| 久久国产精品影院| 女人精品久久久久毛片| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲专区字幕在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩精品免费视频一区二区三区| 在线观看免费高清a一片| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精品在线观看二区| 久久热在线av| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品 欧美亚洲| 久久久国产精品麻豆| 一二三四在线观看免费中文在| 老司机午夜十八禁免费视频| 1024香蕉在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| avwww免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 一区二区三区精品91| 亚洲第一av免费看| 国产1区2区3区精品| 久久精品成人免费网站| 一个人免费看片子| 国精品久久久久久国模美| 欧美在线一区亚洲| 国产在线一区二区三区精| 黑人欧美特级aaaaaa片| 天堂中文最新版在线下载| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美中文综合在线视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 不卡一级毛片| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 在线永久观看黄色视频| av电影中文网址| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区日韩欧美中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 男人操女人黄网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 9191精品国产免费久久| 后天国语完整版免费观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成年人黄色毛片网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黑人操中国人逼视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| tube8黄色片| 国产av国产精品国产| 最新的欧美精品一区二区| 国产又爽黄色视频| 色播在线永久视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩欧美一区视频在线观看| 一本综合久久免费|