• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高危型人乳頭瘤病毒單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響

    2017-03-06 20:03:42張峻霄胡春燕閆坤賈亮劉晨楚光華
    中國醫(yī)藥導報 2016年33期
    關鍵詞:人乳頭瘤病毒增殖凋亡

    張峻霄 胡春燕 閆坤 賈亮 劉晨 楚光華 高巧蓮 劉朝陽

    [摘要] 目的 研究高危型人乳頭瘤病毒(hr-HPV)單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響。 方法 選擇2010年1月~2016年1月在西北婦女兒童醫(yī)院接受手術切除治療的宮頸癌患者118例,收集宮頸癌組織,測定HPV的類型并分為hr-HPV陽性和hr-HPV陰性、hr-HPV多重感染和hr-HPV單一感染。檢測宮頸癌組織中細胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的表達量。 結果 hr-HPV陽性92例、hr-HPV陰性26例,hr-HPV多重感染37例、hr-HPV單一感染55例。hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。 結論 hr-HPV多重感染能夠通過增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的方式來加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡,進而促進癌細胞的增殖。

    [關鍵詞] 宮頸癌;人乳頭瘤病毒;細胞周期;增殖;凋亡

    [中圖分類號] R737.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2016)11(c)-0099-04

    Effect of single type and multiple infection of high risk HPV on the expression of cell cycle protein and anti-apoptotic protein in cervical cancer

    ZHANG Junxiao1 HU Chunyan1 YAN Kun1 JIA Liang1 LIU Chen1 CHU Guanghua1 GAO Qiaolian2 LIU Zhaoyang2

    1.Second Department of Gynaecology, Northwest Women and Children's Hospital, Shaanxi Province, Xi'an 710061, China; 2.Outpatient Service of Department of Gynaecology, Northwest Women and Children's Hospital, Shaanxi Province, Xi′an 710061, China

    [Abstract] Objective To study the effect of single type and multiple infection of high risk human papillomavirus (hr-HPV) on the expression of cell cycle protein and anti-apoptotic protein in cervical cancer. Methods 118 cervical cancer patients received surgical resection in Northwest Women and Children's Hospital during January 2010 to January 2016 were enrolled and cervical cancer tissues were collected. HPV types were determined and divided into hr-HPV positive and hr-HPV negative, hr-HPV multiple infection and hr-HPV single infection. The expressions of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6 and anti apoptotic protein Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in cervical cancer tissues were detected. Results Hr-HPV positive was 92 cases, hr-HPV negative was 26 cases, hr-HPV multiple infection was 37 cases, hr-HPV single infection was 55 cases. The protein contents of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6, Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in hr-HPV positive cervical carcinoma tissues were significantly higher than those in hr-HPV negative cervical carcinoma tissues, the differences were statistically significant (P < 0.05). The protein contents of CyclinB1, CyclinD1, CDK1, CDK6, Bcl-2, Bcl-xl and Survivin in multiple hr-HPV infection cervical cancer tissues were significantly higher than those in single infection cervical carcinoma, the differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion Multiple infection of hr-HPV can accelerate the progression of cell cycle and inhibit apoptosis of cell through upregulating the expression of cell cycle proteins and anti-apoptosis protein in cervical carcinoma, thereby promoting cancer cell proliferation.

    [Key words] Cervical cancer; Human papilloma virus; Cell cycle; Proliferation; Apoptosis

    宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一,人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是造成宮頸癌及癌前病變最重要的危險因素。目前已知的HPV 160余種,其中近30種HPV能夠感染肛門及生殖器上皮,且14種屬于高危致癌類型[1-2]。高危型HPV(hr-HPV)感染宮頸上皮細胞會造成細胞內多種細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達異常,進而促進細胞增殖并增加癌變風險[3-4]。相關流行病學資料顯示,hr-HPV多重感染患者發(fā)生宮頸癌的風險遠遠超過hr-HPV單一類型感染[5-6]。但是,關于hr-HPV多重感染對宮頸癌病情發(fā)生、發(fā)展過程中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達的影響未見明確報道。本研究主要分析hr-HPV單一類型感染和多重感染對宮頸癌中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2010年1月~2016年1月在西北婦女兒童醫(yī)院接受手術切除治療的宮頸癌患者118例作為研究對象,平均年齡(39.6±5.5)歲,術后收集宮頸癌組織并保存于-80℃冰箱。宮頸癌組織中,hr-HPV陽性92例、hr-HPV陰性26例,hr-HPV多重感染37例、hr-HPV單一感染55例。hr-HPV陽性患者平均年齡(47.5±5.2)歲,中高分化58例、低未分化34例;hr-HPV陰性患者平均年齡(48.2±4.9)歲,中高分化15例、低未分化11例。hr-HPV多重感染患者平均年齡(47.9±5.5)歲,中高分化23例、低未分化14例;hr-HPV單一感染患者平均年齡(47.1±4.9)歲,中高分化35例、低未分化23例。hr-HPV陽性與陰性患者、hr-HPV多重感染與hr-HPV單一感染患者的年齡、分化程度比較,差異無統計學意義(P > 0.05),具有可比性。

    納入標準:①無HPV感染治療病史;②手術切除后經病理檢查明確宮頸癌的診斷;③通過醫(yī)院倫理委員會,納入研究患者具有知情權,并在入組前簽署知情同意書。排除標準:①合并遠處轉移的患者;②未取得知情同意的患者;③近1個月內行婦科相關檢查及治療。

    1.2 試劑與儀器

    HPV檢測試劑盒及DNA提取液購自中山大學達安基因股份有限公司,宮頸管刷、宮頸脫落細胞取樣器購自天津伊諾新康醫(yī)療器械科技有限公司,引物、探針合成由上海生物工程技術有限公司提供,Perfect Real Time試劑購自北京智杰方遠科技有限公司。酶聯免疫吸附試劑盒以及BCA蛋白定量試劑盒購于南京建成生物公司。

    1.3 HPV分型檢測

    取宮頸癌組織,采用PCR-RDB法進行HPV分型檢測,經生物素標記的引物進行靶核酸的擴增,第一步通過莖環(huán)引物來合成互補DNA,再通過RNA的逆轉錄系統對10 ng RNA進行逆轉錄體系進行反應,在PCR管加入10 μL的逆轉錄緩沖液,總的RNA濃度調整到2 ng/μL,最后加入5 μL的逆轉錄引物,在冰上混勻之后反應5 min,接著進行梯度變性反應,溫度時間遞減;第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反應體系,反應體系為2×的 PCR Taqman Universal的混合液以及Taqman RNA的特異性引物,通過逆轉錄體系進行反應,cDNA共5 μL加入到RNA去酶的水中,將體積擴增至20 μL,通過循環(huán)反應94℃、30 s,60℃、30 s,72℃、60 s,72℃、7 min遞減的擴張40個循環(huán)之后,以積分吸光度差值來確定hr-HPV和低危型HPV。

    1.4 蛋白表達量檢測方法

    取宮頸癌組織,加入蛋白裂解液RIPA后充分勻漿,將勻漿液放置在4℃離心機中以12000×g的離心力離心20 min,離心后棄去沉淀、保留上清,而后采用酶聯免疫吸附試劑盒測定上清液中細胞周期蛋白(Cyclin)B1、CyclinD1、細胞周期蛋白相關激酶(CDK)1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的含量,采用BCA試劑盒測定上清液中總蛋白的含量,計算每毫克總蛋白樣本中所含目的蛋白的含量。

    1.5 統計學方法

    采用SPSS 20.0統計軟件對數據進行分析和處理,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,采用t檢驗,以P < 0.05為差異有統計學意義。

    2 結果

    2.1 hr-HPV感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白表達的影響

    hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.2 hr-HPV感染對宮頸癌組織中抗凋亡蛋白表達的影響

    hr-HPV陽性宮頸癌組織中Bcl-2、Bcl-xl、Survivin蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.3 hr-HPV單一和多重感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白表達的影響

    hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    2.4 hr-HPV單一和多重感染對宮頸癌組織中抗凋亡蛋白表達的影響

    hr-HPV多重感染宮頸癌組織中Bcl-2、Bcl-xl、Survivin蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織,差異有統計學意義(P < 0.05)。

    3 討論

    HPV易感于黏膜鱗狀上皮及表皮組織,自從1976年發(fā)現HPV可能通過性傳播致癌以來,宮頸癌與HPV之間的相關性研究成為了腫瘤病毒學的熱門課題。低危型HPV通常存在于宮頸良性或低度病變的病灶,而hr-HPV可誘發(fā)全身多部位癌變[7-8]。宮頸癌組織中hr-HPV的感染率顯著高于宮頸良性病變組織[9-11]。在感染HPV初期,宮頸上皮組織未出現增生或異常增生等形態(tài)學的改變[8];病毒的DNA整合進入宿主細胞的基因組可引起多種基因表達,鱗狀上皮細胞逐步出現核增大、核異性、空泡變等改變,進而增加組織異常增生、癌變等的發(fā)生風險[12-14]。

    宮頸組織中hr-HPV的持續(xù)感染會將病毒的遺傳物質整合進入宿主細胞的基因組,進而造成宿主細胞中多種基因表達的改變[15-16]。我們通過分析hr-HPV感染對宮頸癌組織中細胞周期蛋白以及抗凋亡蛋白表達量的影響發(fā)現,hr-HPV陽性宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV陰性宮頸癌組織。這就說明hr-HPV感染能夠通過增加細胞周期蛋白以及抗凋亡蛋白表達的方式來誘導宮頸癌組織中的細胞增殖,進而促進病情的發(fā)展。

    CyclinB1、CyclinD1分別能夠與CDK1、CDK6形成復合體并縮短細胞周期G2/M期的轉換時間、加速細胞周期進程[17-18];Bcl-2和Bcl-xl能夠調節(jié)線粒體膜上轉換孔的開放和閉合狀態(tài),減少細胞色素C的釋放,進而抑制下游caspase級聯凋亡通路的激活[19];Survivin能夠直接抑制多種caspase分子的激活并拮抗細胞凋亡過程[20]。我們通過分析hr-HPV多重感染和單一類型感染對上述細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的影響可知,hr-HPV多重感染宮頸癌組織中CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6、Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的蛋白含量顯著高于hr-HPV單一感染宮頸癌組織。這就說明hr-HPV多重感染能夠增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK6以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Survivin的表達量,進而加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡。

    綜上所述,hr-HPV多重感染能夠通過增加宮頸癌組織中細胞周期蛋白、抗凋亡蛋白表達量的方式來加速細胞周期進程、抑制細胞凋亡,進而促進癌細胞的增殖。

    [參考文獻]

    [1] Wongsena M,Suebsamran P,Panomket P,et al. Prognostic factors of human papillomavirus genotypes of invasive cervical carcinoma:an analytical cross-sectional study in lower north-east Thailand [J]. J Med Assoc Thai,2014,97(4):12-19.

    [2] 陳銳,趙健,朱麗榮,等.人類乳頭狀瘤病毒分型檢測在宮頸癌篩查中的臨床研究[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2014,28(6):429-432.

    [3] Zouheir Y,Fechtali T,Elgnaoui N. Human papillomavirus genotyping and p16(INK4a) expression in cervical lesions:a combined test to avoid cervical cancer progression [J]. J Cancer Prev,2016,21(2):121-125.

    [4] Zhong P,Li J,Gu Y,et al. P16 and Ki-67 expression improves the diagnostic accuracy of cervical lesions but not predict persistent high risk human papillomavirus infection with CIN1 [J]. Int J Clin Exp Pathol,2015,8(3):2979-2986.

    [5] 張淼,周秀春,張冠群.人乳頭瘤病毒檢測及TCT檢查在宮頸癌篩查中的臨床價值研究[J].現代預防醫(yī)學,2016, 43(5):836-838,918.

    [6] Khan MJ,Castle PE,Lorincz AT,et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with Human Papillomavirus(HPV)type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice [J]. J Natl Cancer Inst,2015,97(14):1072-1079.

    [7] Castellsagué X,Pawlita M,Roura E,et al. Prospective seroepidemiologic study on the role of Human Papillomavirus and other infections in cervical carcinogenesis:evidence from the EPIC cohort [J]. Int J Cancer,2014,135(2):440-452.

    [8] Johnson DC,Bhatta MP,Smith JS,et al. Assessment of high-risk Human Papillomavirus infections using clinician-and self-collected cervical sampling methods in rural women from far western Nepal [J]. PLoS One,2014,9(6):e101255.

    [9] 付敏,楊彪,楊宗橋.人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸病變臨床價值的研究[J].中國婦幼保健,2014,29(18):2875-2877.

    [10] 蘇卿,潘卓,胡嫦娥,等.TCT、HPV和陰道鏡下宮頸組織活檢對宮頸病變的診斷價值[J].中國當代醫(yī)藥,2016, 23(11):84-87.

    [11] Castle PE,Hunt WC,Langsfeld E,et al. Three-year risk of cervical precancer and cancer after the detection of low-risk Human Papillomavirus genotypes targeted by a commercial test [J]. Obstet Gynecol,2014,123(1):49-56.

    [12] Khan MJ,Castle PE,Lorincz AT,et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with Human Papillomavirus(HPV)type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice [J]. J Natl Cancer Inst,2015,97(14):1072-1079.

    [13] 李玉霞,張燕.高危型HPV篩查聯合液基細胞學檢測在宮頸癌篩檢中的應用價值[J].海南醫(yī)學院學報,2014, 20(2):223-225.

    [14] Mure?鬤an D,Rotar IC,Apostol S,et al. HPV immunohistochemical testing and cervical dysplasia [J]. Clujul Med,2016,89(2):236-240.

    [15] Valen?觭a JE,Gon?觭alves AK,Guerreiro da Silva ID,et al. High risk HPV E6/E7 oncoprotein expression in women with high grade squamous intraepithelial lesion [J]. Rev Bras Ginecol Obstet,2016,38(3):154-159.

    [16] 白彩云,王延明.宮頸上皮內瘤變患者高危型HPV感染與潛在惡性生物學行為的關系[J].海南醫(yī)學院學報,2015,21(9):1290-1293.

    [17] Umbreit C,Erben P,Faber A,et al. MMP9,cyclin D1 and β-catenin are useful markers of p16-positive squamous cell carcinoma in therapeutic EGFR inhibition in vitro [J]. Anticancer Res,2015,35(7):3801-3810.

    [18] Wang N,Wei H,Yin D,et al. MicroRNA-195 inhibits proliferation of cervical cancer cells by targeting cyclin D1a [J]. Tumour Biol,2016,37(4):4711-4720.

    [19] Zhou XL,Wang M. Expression levels of survivin,Bcl-2,and KAI1 proteins in cervical cancer and their correlation with metastasis [J]. Genet Mol Res,2015,14(4):17059-17067.

    [20] Gao M,Li Y,Ji X,et al. Disturbance of Bcl-2,Bax,Caspase-3,Ki-67 and C-myc expression in acute and subchronic exposure to benzo(a)pyrene in cervix [J]. Acta Histochem,2016,118(2):63-73.

    (收稿日期:2016-08-16 本文編輯:李亞聰)

    猜你喜歡
    人乳頭瘤病毒增殖凋亡
    ‘金凱特’杏的組織培養(yǎng)與快繁
    子宮頸癌篩查方法的比較研究
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協同吉西他濱的抑瘤作用
    宮頸內人乳頭瘤病毒的研究進展
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關系
    預防性人乳頭瘤病毒疫苗Gardasil和Cervarix的臨床應用
    人乳頭瘤病毒與宮頸癌
    Livin和Survivin在卵巢癌中的表達及相關性研究
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧洲日产国产| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品一区蜜桃| 久久久久久久久久久免费av| 男女下面进入的视频免费午夜| 成人特级av手机在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 国产深夜福利视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看 | 舔av片在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| av黄色大香蕉| 高清午夜精品一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www | 在线 av 中文字幕| tube8黄色片| av福利片在线观看| 国产精品一及| 久久久色成人| 在线观看一区二区三区激情| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久视频综合| 国产片特级美女逼逼视频| 老女人水多毛片| 女性生殖器流出的白浆| 久久99热这里只有精品18| av国产精品久久久久影院| 少妇人妻精品综合一区二区| 欧美变态另类bdsm刘玥| av在线观看视频网站免费| 一级毛片电影观看| 人妻系列 视频| 人妻 亚洲 视频| 亚洲第一区二区三区不卡| www.色视频.com| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 岛国毛片在线播放| 99久久精品热视频| 毛片女人毛片| 联通29元200g的流量卡| 久久热精品热| 亚洲国产精品一区三区| 91精品国产九色| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品,欧美精品| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产在线男女| 国产黄频视频在线观看| 久久6这里有精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 一个人看视频在线观看www免费| av在线观看视频网站免费| 欧美性感艳星| 春色校园在线视频观看| 韩国高清视频一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 妹子高潮喷水视频| 如何舔出高潮| 久久精品国产a三级三级三级| 少妇高潮的动态图| 日韩伦理黄色片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美日本视频| av在线观看视频网站免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产高清不卡午夜福利| 少妇的逼好多水| 日韩亚洲欧美综合| 成年女人在线观看亚洲视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 夫妻午夜视频| 免费看日本二区| 国产在线视频一区二区| 亚洲av男天堂| 乱系列少妇在线播放| 午夜视频国产福利| 少妇人妻一区二区三区视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲精品国产成人久久av| 三级国产精品片| 伦精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 高清av免费在线| 简卡轻食公司| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品一及| 欧美xxxx性猛交bbbb| 蜜桃在线观看..| 久久99精品国语久久久| av国产精品久久久久影院| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费观看av网站的网址| 舔av片在线| 成人二区视频| 国产精品.久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 一区二区三区免费毛片| 午夜免费观看性视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产综合精华液| 18禁动态无遮挡网站| 女人久久www免费人成看片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一本久久精品| 久久婷婷青草| 哪个播放器可以免费观看大片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产乱人偷精品视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 美女国产视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 女性生殖器流出的白浆| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 99热6这里只有精品| 亚洲三级黄色毛片| 国产伦在线观看视频一区| 欧美最新免费一区二区三区| 美女主播在线视频| 亚洲av.av天堂| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品.久久久| 成人国产av品久久久| 中文天堂在线官网| 久久精品久久精品一区二区三区| 九九爱精品视频在线观看| 熟女电影av网| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产伦精品一区二区三区四那| 男人舔奶头视频| 精品少妇久久久久久888优播| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费观看av网站的网址| 黑人猛操日本美女一级片| 婷婷色av中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲av福利一区| 日韩亚洲欧美综合| 国产成人精品福利久久| 日韩中文字幕视频在线看片 | 亚洲精品,欧美精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久这里有精品视频免费| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国精品久久久久久国模美| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美成人a在线观看| 丝袜喷水一区| 国产精品福利在线免费观看| 毛片女人毛片| 国产av一区二区精品久久 | 久久久久精品性色| 欧美+日韩+精品| 精品久久久久久电影网| 人妻系列 视频| 看十八女毛片水多多多| 激情五月婷婷亚洲| 高清在线视频一区二区三区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久久久久久精品精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 视频中文字幕在线观看| tube8黄色片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 91精品国产国语对白视频| 国产高清三级在线| 日韩中字成人| 99热全是精品| 日本黄大片高清| 欧美性感艳星| 久久婷婷青草| 国产精品一及| 啦啦啦啦在线视频资源| 交换朋友夫妻互换小说| 成人无遮挡网站| av专区在线播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 婷婷色综合www| 日韩成人伦理影院| 亚洲国产精品专区欧美| 美女高潮的动态| 99视频精品全部免费 在线| 一级毛片电影观看| av线在线观看网站| 午夜日本视频在线| 高清欧美精品videossex| 91狼人影院| 亚洲av.av天堂| 亚洲av成人精品一二三区| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产精品999| 色婷婷av一区二区三区视频| 91精品国产九色| 日本黄大片高清| 黄色怎么调成土黄色| 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品成人av观看孕妇| 夫妻性生交免费视频一级片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 日本免费在线观看一区| 国产成人91sexporn| 亚洲欧洲日产国产| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美xxxx性猛交bbbb| 男人添女人高潮全过程视频| 黑丝袜美女国产一区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 91在线精品国自产拍蜜月| 三级国产精品片| 18+在线观看网站| 久久久午夜欧美精品| 亚洲国产欧美人成| 国产人妻一区二区三区在| 中文字幕久久专区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久人人爽人人爽人人片va| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲av在线观看美女高潮| 免费看光身美女| 亚洲av成人精品一二三区| 成人无遮挡网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 直男gayav资源| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 97热精品久久久久久| 亚洲性久久影院| xxx大片免费视频| 亚洲av不卡在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩成人av中文字幕在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 美女中出高潮动态图| 制服丝袜香蕉在线| 日韩伦理黄色片| 免费观看无遮挡的男女| 久热久热在线精品观看| 免费看光身美女| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 舔av片在线| 国产精品一二三区在线看| 99re6热这里在线精品视频| 国产 一区精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 中文字幕制服av| 网址你懂的国产日韩在线| 七月丁香在线播放| 老司机影院成人| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产黄频视频在线观看| 91精品国产国语对白视频| 精品久久久噜噜| 又大又黄又爽视频免费| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久国产网址| 一区在线观看完整版| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产色婷婷99| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲性久久影院| 有码 亚洲区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品久久久久久久电影| 午夜老司机福利剧场| 国产在线视频一区二区| 综合色丁香网| 国产毛片在线视频| 激情 狠狠 欧美| 青春草视频在线免费观看| 亚洲美女视频黄频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| av播播在线观看一区| 亚洲国产色片| 人体艺术视频欧美日本| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲经典国产精华液单| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美+日韩+精品| 成人特级av手机在线观看| 免费少妇av软件| 日韩制服骚丝袜av| 免费黄网站久久成人精品| 街头女战士在线观看网站| 简卡轻食公司| 男的添女的下面高潮视频| 一本久久精品| 全区人妻精品视频| 最后的刺客免费高清国语| 国产成人精品福利久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久av网站| 九色成人免费人妻av| 18禁动态无遮挡网站| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩中字成人| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 久久热精品热| 国产美女午夜福利| 日韩av不卡免费在线播放| 女性被躁到高潮视频| 熟女电影av网| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲经典国产精华液单| 久久午夜福利片| 色综合色国产| 在线观看免费高清a一片| 日韩国内少妇激情av| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 中文字幕久久专区| 亚洲内射少妇av| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久伊人网av| 亚洲不卡免费看| 婷婷色综合大香蕉| 中文字幕制服av| 日本午夜av视频| 欧美丝袜亚洲另类| 国产精品偷伦视频观看了| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 国产爱豆传媒在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 中文天堂在线官网| 最近的中文字幕免费完整| 91久久精品电影网| 国产成人aa在线观看| 欧美精品一区二区大全| a 毛片基地| 高清黄色对白视频在线免费看 | 亚洲三级黄色毛片| 大片电影免费在线观看免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 高清午夜精品一区二区三区| 99久久精品国产国产毛片| 国产有黄有色有爽视频| 热99国产精品久久久久久7| 精品熟女少妇av免费看| 五月天丁香电影| 日本黄大片高清| 美女cb高潮喷水在线观看| 九九在线视频观看精品| 我要看黄色一级片免费的| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜福利影视在线免费观看| 男女免费视频国产| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产亚洲网站| 国产一区二区三区av在线| 美女高潮的动态| 欧美精品一区二区免费开放| 晚上一个人看的免费电影| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲av在线观看美女高潮| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲综合色惰| 一级爰片在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久久精品94久久精品| 国产精品不卡视频一区二区| 嫩草影院新地址| 黄色配什么色好看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日本-黄色视频高清免费观看| 国内精品宾馆在线| 久久久久久九九精品二区国产| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产黄色免费在线视频| 美女视频免费永久观看网站| 成人国产麻豆网| 亚洲精品一区蜜桃| 五月玫瑰六月丁香| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产精品久久久久成人av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 男人和女人高潮做爰伦理| 日本黄大片高清| 国产精品一区www在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 最近的中文字幕免费完整| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲熟女精品中文字幕| 99久久人妻综合| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久热这里只有精品99| 男女国产视频网站| 伦精品一区二区三区| 国产av国产精品国产| 伦理电影大哥的女人| 成人无遮挡网站| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 日韩免费高清中文字幕av| 天堂中文最新版在线下载| 简卡轻食公司| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久99热这里只有精品18| av在线老鸭窝| 男女国产视频网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩欧美精品免费久久| 男的添女的下面高潮视频| 三级国产精品片| av国产免费在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲精品色激情综合| a级一级毛片免费在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 免费大片黄手机在线观看| 精品久久久久久久末码| 午夜福利网站1000一区二区三区| 99热这里只有是精品在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 九九爱精品视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成人综合一区亚洲| 18禁在线播放成人免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久色成人| 国产精品成人在线| 久久久久久久久久久丰满| 一本色道久久久久久精品综合| 美女中出高潮动态图| 久久影院123| 日本黄色日本黄色录像| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成人美女网站在线观看视频| 成人影院久久| h日本视频在线播放| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲人成网站在线播| 亚州av有码| 久热这里只有精品99| 视频中文字幕在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 熟女人妻精品中文字幕| 深夜a级毛片| 国产久久久一区二区三区| 在线观看三级黄色| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区三区免费毛片| 午夜福利高清视频| 国产精品伦人一区二区| 十分钟在线观看高清视频www | 大香蕉久久网| 日韩亚洲欧美综合| 欧美日韩在线观看h| 久久久久久久久久久丰满| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 免费少妇av软件| 国产亚洲91精品色在线| 国产成人一区二区在线| videossex国产| 交换朋友夫妻互换小说| 香蕉精品网在线| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美变态另类bdsm刘玥| 午夜福利视频精品| 男的添女的下面高潮视频| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品色激情综合| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲国产av新网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 在线看a的网站| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲综合色惰| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲图色成人| 男女国产视频网站| .国产精品久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 联通29元200g的流量卡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| av在线蜜桃| 超碰97精品在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 在线播放无遮挡| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久久人妻| 九色成人免费人妻av| 久久久久国产网址| av女优亚洲男人天堂| 免费观看a级毛片全部| 国产日韩欧美在线精品| 日本爱情动作片www.在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 美女高潮的动态| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 最后的刺客免费高清国语| 国产极品天堂在线| 亚洲国产精品国产精品| 激情 狠狠 欧美| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产乱来视频区| 十分钟在线观看高清视频www | 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产精品伦人一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 久久鲁丝午夜福利片| 一本一本综合久久| 久久国产乱子免费精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产av国产精品国产| 男的添女的下面高潮视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| av一本久久久久| av天堂中文字幕网| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久久伊人网av| 亚洲无线观看免费| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲欧美精品专区久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 一区二区三区四区激情视频| 黄色配什么色好看| 水蜜桃什么品种好| 国产成人91sexporn| 亚洲国产精品999| 国内精品宾馆在线| 久久精品国产自在天天线| 人妻 亚洲 视频| videossex国产| 国产黄频视频在线观看| 精品久久久噜噜| 欧美zozozo另类| 久久热精品热| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一级毛片久久久久久久久女| av在线蜜桃| 成年av动漫网址| 91久久精品国产一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| 国产69精品久久久久777片| 777米奇影视久久| 国产精品.久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 成人国产麻豆网| 国产精品不卡视频一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 欧美日韩精品成人综合77777| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品一品国产午夜福利视频| av卡一久久| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品国产亚洲av天美| xxx大片免费视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美zozozo另类| 黑丝袜美女国产一区| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲欧美精品自产自拍| 毛片女人毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 国产乱来视频区| 观看av在线不卡| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产亚洲91精品色在线| 赤兔流量卡办理| av在线播放精品| 九九在线视频观看精品| 在线免费十八禁| 亚洲欧美精品专区久久| av线在线观看网站| 日韩av免费高清视频| 国产欧美亚洲国产| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲av不卡在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频|