人乳頭瘤病毒與宮頸癌

陳守真+夏和霞+張煒

摘 要 宮頸癌是常見的婦科三大惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命和健康。研究發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses， HPV）感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。HPV致癌是一個多步驟的、漸進(jìn)的復(fù)雜過程，其中早期基因編碼的E6、E7蛋白起著關(guān)鍵作用，早期基因編碼的E2蛋白和晚期基因編碼的L1蛋白也參與了致癌過程。闡明HPV致癌的機(jī)制有助于臨床工作者加深對宮頸癌的認(rèn)識、積極篩查和治療HPV感染以減少宮頸癌的發(fā)生，有利于對已確診為宮頸癌或癌前病變患者的治療評估和風(fēng)險分析。

關(guān)鍵詞 宮頸癌 人乳頭瘤病毒 早期蛋白 致癌機(jī)制

中圖分類號：R730.231； R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2016）11-0003-05

Human papillomavirus and cervical cancer

CHEN Shouzhen， XIA Hexia， ZHANG Wei*

（Department of Gynecology， Obstetrics and Gynecology Hospital， Fudan University， Shanghai 200011， China）

ABSTRACT Cervical cancer is one of the most common gynecologic malignant tumors and can seriously threaten the health of women. There are many studies which confirmed that human papillomavirus （HPV） infection was an essential condition for the occurrence and development of cervical cancer. Carcinogenesis of HPV is a gradual complex process with multiple steps， in which protein E6 and E7 encoded by early genes are thought to play a key role， while protein E2 and L1 are also involved in the carcinogenesis. Elucidation of the mechanism of carcinogenic HPV is helpful for gynecologists to deepen the awareness of cervical cancer and to actively screen and treat HPV infection so as to reduce the occurrence of cervical cancer， which is of benefit to the diagnosis and treatment of patients with cervical cancer or precancerous lesions.

KEY WORDS cervical cancer； human papillomavirus； early protein； carcinogenesis

宮頸癌是常見的婦科三大惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命和健康，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位居第2位，僅次于乳腺癌，全世界每年約有50萬新發(fā)病例，同時有25萬死亡病例[1]。目前，國內(nèi)宮頸癌的發(fā)病率和死亡率均較高，并且出現(xiàn)了病例年輕化的趨勢。深刻認(rèn)識宮頸癌、全面開展篩查工作、及早診斷、系統(tǒng)治療宮頸癌成為婦產(chǎn)科醫(yī)師的一項重要工作。大量的臨床醫(yī)學(xué)研究及流行病學(xué)調(diào)查均發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（human papillomavirus， HPV）感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切：HPV感染可引起子宮頸上皮內(nèi)腫瘤（cervical intraepithelial neoplasia， CIN）及宮頸癌的發(fā)生，其中高危型HPV的持續(xù)感染是促進(jìn)宮頸癌發(fā)生的最主要因素[2]。因此，研究HPV感染與宮頸癌的關(guān)系對開展宮頸癌的預(yù)防和治療工作有著重要意義。本文就HPV的生物學(xué)特征、致宮頸癌的分子生物學(xué)機(jī)制和檢測現(xiàn)狀作一綜述。

1 HPV的生物學(xué)特征

1.1 HPV的病毒學(xué)特點(diǎn)

HPV是一類嗜黏膜和皮膚的上皮性病毒，在人和動物中分布廣泛，具有高度特異性。HPV屬于乳多空病毒科的乳頭瘤病毒家族，鏡下呈無包膜的20面體對稱的球形結(jié)構(gòu)，直徑約45 ～ 55 mm。HPV為一類較小的DNA病毒，相對分子質(zhì)量約為5×106，其中病毒蛋白約占80%。HPV基因組呈雙鏈閉環(huán)的非均質(zhì)DNA結(jié)構(gòu)，長度為7 200 ～ 8 000 bp，包含8 ～ 9個開放式閱讀框，它們分布在3個區(qū)域：非編碼的上游調(diào)控區(qū)、早期蛋白編碼區(qū)和晚期蛋白編碼區(qū)。早期蛋白編碼區(qū)主要編碼E1、E2、E4、E5、E6和E7等蛋白，它們主要參與調(diào)節(jié)病毒的生命周期并調(diào)控細(xì)胞DNA的復(fù)制、RNA的轉(zhuǎn)錄和病毒蛋白的翻譯，還可誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排及細(xì)胞轉(zhuǎn)化等。E1蛋白具有腺苷三磷酸酶和解旋酶活性，可與E2蛋白相互作用來識別HPV基因組DNA復(fù)制的起始點(diǎn)。E2蛋白可特異性地結(jié)合到E6和E7基因啟動子DNA的識別序列中，進(jìn)而調(diào)節(jié)E6和E7蛋白的轉(zhuǎn)錄。E4蛋白可在上皮細(xì)胞骨架的重構(gòu)和解體過程中與細(xì)胞的中間絲結(jié)合，參與HPV DNA的復(fù)制與釋放過程。E5蛋白的作用尚不明確，可能參與了刺激E6和E7蛋白表達(dá)的信號傳導(dǎo)途徑。有研究表明，高危型HPV的E5蛋白可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的miRNA而改變細(xì)胞的基因表達(dá)[3]；E6和E7蛋白是主要的致癌蛋白[4]。晚期蛋白編碼區(qū)編碼具有抗原性的主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白L2，其中L1蛋白的分子量較大并高度保守，為各型HPV的特異性蛋白抗原，占病毒表面的90%；L2蛋白的分子量較小，高度變異且不具有特異性。LI和L2蛋白參與了病毒表面的吸附、胞吞作用和病毒粒子的包裝等過程。

目前已發(fā)現(xiàn)有200種以上的不同基因型HPV，其中得到鑒定并被完整測序的有170余種[5]。根據(jù)L1蛋白核酸序列的不同，HPV可分為α、β、γ等不同亞型。α型HPV包括30余種嗜黏膜型和少數(shù)嗜皮膚型HPV。嗜黏膜型HPV又可分為低危型和高危型HPV，低危型HPV主要引起生殖器疣，高危型HPV則與宮頸癌、肛周癌和口咽癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，主要包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68和HPV73等[6]。β型HPV由一大組嗜皮膚型HPV構(gòu)成，可在紫外線的協(xié)同作用下引起非黑素瘤型皮膚癌的發(fā)生、發(fā)展[5]；其他如γ、μ、ν等型HPV也多是可引起乳頭瘤和疣的嗜皮膚型HPV。

1.2 HPV感染的流行病學(xué)特點(diǎn)

HPV對皮膚和黏膜上皮有強(qiáng)力的嗜組織性，是人類常見的性傳播病原體，主要通過直接或間接接觸被污染的物品以及不潔性行為等方式傳播，其感染僅局限于人類上皮細(xì)胞表層的基底細(xì)胞中[7]，不發(fā)生遷移。大多數(shù)的HPV感染可被宿主清除，但有小部分的高危型HPV，由于宿主的基因突變或防疫機(jī)制出現(xiàn)缺陷等原因能持續(xù)或反復(fù)感染宿主而引起惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。多個性伴侶、不良衛(wèi)生狀況、繼發(fā)于人免疫缺陷病毒感染或合并其他病毒感染是HPV感染的高危因素。全球每年約有50萬女性感染HPV，且此感染率仍在不斷上升。約80%有性行為的女性在其人生的某個階段感染過HPV。大樣本量調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在13個不同國家和地區(qū)的15 ～ 74歲女性中，HPV感染率為6.6%[8]。國際癌癥協(xié)會資料表明，低危型HPV感染主要引起皮膚疣狀增生、生殖道和肛周皮膚濕疣樣良性疾病；高危型HPV感染則與皮膚基底細(xì)胞癌、鼻咽癌、口腔癌和宮頸癌等惡性腫瘤密切相關(guān)，尤其是HPV16和HPV18，主要引起高級別CIN和宮頸癌發(fā)生。不同亞型HPV感染的分布具有一定的地域性差異，其中在亞洲國家，除HPV16和HPV18感染外，HPV52和HPV58感染也較在西方及非洲國家常見；而在南美洲，HPV33和HPV39感染更為常見[9]。

2 HPV致宮頸癌的分子機(jī)制

已知HPV感染引起的惡性腫瘤約占全部惡性腫瘤的5%。20世紀(jì)70年代，Zur在對宮頸癌風(fēng)險因素探索、研究的基礎(chǔ)上首次提出，HPV感染是宮頸癌的重要致癌因素。此后開展的一系列研究證實(shí)，約98.5%的浸潤性宮頸癌與HPV感染有關(guān)。因此，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[10]。約80%性生活活躍的女性一生中會至少感染1次HPV，但大多數(shù)的感染處于亞臨床狀態(tài)，病毒一般會在6 ～ 18個月內(nèi)被免疫系統(tǒng)清除，只有約10%的持續(xù)性感染會經(jīng)歷長期的由低級別到高級別CIN、最終演變成宮頸癌的過程。不過，在這個長期過程中，CIN也可能消退。隨著近幾年對HPV感染研究的深入，人們已初步揭示了HPV致癌的分子機(jī)制，即HPV的持續(xù)感染、HPV早期蛋白的異常表達(dá)、HPV基因的不穩(wěn)定性以及由此引起的宿主基因失衡是HPV致癌的關(guān)鍵因素[11]。一些流行病學(xué)研究還表明，吸煙、性生活混亂、使用口服避孕藥、基因易感性和合并其他感染會增強(qiáng)HPV的致癌作用。目前，國內(nèi)外學(xué)者對HPV致癌機(jī)制的研究主要集中在以下幾個方面。

2.1 HPV DNA與宿主基因的整合

HPV感染宿主后，其以游離或整合狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中。低危型HPV的DNA總是保持游離狀態(tài)，而高危型HPV感染宿主后，其DNA通常會整合到宿主細(xì)胞的基因組中，導(dǎo)致宿主基因缺失或突變，進(jìn)而干擾宿主細(xì)胞中癌基因和抑癌基因的表達(dá)。目前認(rèn)為，上述整合過程中E2基因的丟失會導(dǎo)致E6和E7基因失去控制而表達(dá)過度。E6和E7蛋白可使p53蛋白和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（retinoblastoma protein， pRb）失活[12]，進(jìn)而使這兩種蛋白不能與其他細(xì)胞蛋白發(fā)生相互作用而引起宿主細(xì)胞的永生化和惡性變。有關(guān)實(shí)驗證實(shí)，高危型HPV基因組與宿主基因整合是其致癌過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但對此后會否促進(jìn)宮頸癌發(fā)生以及在何種程度上促進(jìn)宮頸癌發(fā)生目前尚無定論。

2.2 E6和E7蛋白的作用

E6和E7蛋白是HPV基因組表達(dá)的主要致癌蛋白，致癌機(jī)制與其蛋白結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。有關(guān)實(shí)驗已經(jīng)證實(shí)，這兩種蛋白可與其他多種細(xì)胞蛋白發(fā)生相互作用，進(jìn)而引起細(xì)胞的惡性增殖。

E6基因位于HPV基因組的第83 ～ 559 bp間，其編碼的E6蛋白定位于細(xì)胞核中，約150 aa，分子量為16 ～ 18 kD。E6蛋白可與多種細(xì)胞蛋白結(jié)合，所以存在多種相關(guān)的關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)[13]，如有2個存在共同C（色氨酸）-x（任意氨基酸）-x-C為基序的鋅指結(jié)構(gòu)、多個p53蛋白結(jié)合位點(diǎn)和由x-S/T（絲氨酸/蘇氨酸）-x-V/L/I（纈氨酸/亮氨酸/異亮氨酸）構(gòu)成的可與宿主細(xì)胞PDZ蛋白相互作用的結(jié)合域[14]。E6蛋白可從多個方面引起宮頸癌發(fā)生。E6蛋白與p53蛋白的相互作用是導(dǎo)致HPV感染的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。p53蛋白是一種抑癌蛋白，是穩(wěn)定基因組的關(guān)鍵因素，不僅參與DNA復(fù)制及其損傷修復(fù)，而且能促進(jìn)細(xì)胞凋亡、阻止產(chǎn)生突變細(xì)胞，進(jìn)而抑制細(xì)胞癌變。E6蛋白可導(dǎo)致p53蛋白失活，進(jìn)而影響多種細(xì)胞活動，包括細(xì)胞的凋亡、周期控制和衰老等過程。也有研究提示，HPV感染與宮頸癌前病變及其惡性變過程中p53基因的表達(dá)之間并無顯著相關(guān)性[15]。通常認(rèn)為，E6蛋白可通過E6相關(guān)蛋白（E6-associate protein， E6-AP）使p53蛋白泛素化分解失活或?qū)53蛋白留在細(xì)胞胞漿內(nèi)而阻止p53蛋白發(fā)揮正常功能[16]。p53蛋白失活會使細(xì)胞G1/S期及G2/M期的調(diào)控點(diǎn)失控，進(jìn)而阻止細(xì)胞凋亡。在因感染高危型的HPV16而癌變的細(xì)胞中，p53蛋白的含量較正常細(xì)胞中的低，半衰期也更短。對HPV52和HPV58基因型的研究顯示，在感染這兩型HPV的宮頸組織中，宮頸癌的發(fā)生可能與細(xì)胞中p53蛋白的損失有關(guān)[17]。乙?；D(zhuǎn)移酶是在DNA轉(zhuǎn)錄過程中有重要作用的賴氨酸乙酰基轉(zhuǎn)移酶，其參與DNA損傷應(yīng)答和細(xì)胞凋亡過程，在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)降低。最近的研究顯示，E6蛋白可以提高E3蛋白連接酶EDD1/UBR5的表達(dá)和降低乙?；D(zhuǎn)移酶的水平，進(jìn)而引起宮頸癌的發(fā)生[18]。此外，E6蛋白可通過影響端粒酶的功能來改變端粒長度和破壞細(xì)胞染色體的穩(wěn)定性。端粒酶由端粒RNA、人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase， hTERT）和端粒酶相關(guān)蛋白等亞單位組成。E6蛋白可直接與hTERT結(jié)合，進(jìn)而穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)或改變其在細(xì)胞中的定位[19]。E6蛋白可通過促進(jìn)hTERT的表達(dá)而提高端粒酶的活性。E6蛋白之所以對hTERT有誘導(dǎo)作用，一方面是E6蛋白與c-Myc蛋白形成的復(fù)合物可作用于hTERT基因的啟動子，進(jìn)而調(diào)節(jié)hTERT基因的轉(zhuǎn)錄水平；另一方面是E6蛋白/E6-AP可使hTERT基因啟動子的天然抑制物NFX1-91進(jìn)入泛素依賴的降解途徑，進(jìn)而促進(jìn)hTERT基因的轉(zhuǎn)錄[20]。hTERT除與端粒酶活性有關(guān)外，還可激活Wnt信號傳導(dǎo)通路，但其機(jī)制目前還不清楚[21]。Wnt信號傳導(dǎo)通路與多種細(xì)胞進(jìn)程相關(guān)，激活該通路可能會提供一個有利于高危型HPV復(fù)制的細(xì)胞環(huán)境。此外，高危型HPV的E6蛋白與宿主細(xì)胞PDZ蛋白的結(jié)合及相互作用也可通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)將PDZ蛋白降解，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞黏附、細(xì)胞間連接及其信息傳遞功能被破壞，使腫瘤惡性變并利于腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移[14]。E6蛋白還可影響一些已知的參與細(xì)胞生長調(diào)節(jié)的miRNA，進(jìn)而顯著影響細(xì)胞進(jìn)程[22]。高危型HPV的E6蛋白可通過E6蛋白/E6-AP途徑下調(diào)抑癌基因miR-23b、miR-218和miR-34a的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞的遷移和代謝，引起腫瘤的發(fā)生及惡性變[23]。

E7基因編碼一種約100 aa的磷酸化核蛋白，后者上既有核定位信號、又有核輸出信號，可定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)[24]。E7基因的N端有2個保守結(jié)構(gòu)域CR1和CR2，它們在E7蛋白的體外轉(zhuǎn)化過程中起著重要作用。CR1介導(dǎo)抑癌蛋白pRb的降解，CR2中有LxCxE基序及2個可被蛋白激酶Ⅱ磷酸化的絲氨酸位點(diǎn)，它們可直接與pRb口袋結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合并使之失活。E7蛋白的C末端包含2個C-x-x-C基序，它們構(gòu)成了鋅指結(jié)構(gòu)，可使E7蛋白形成二聚體，同時介導(dǎo)其與pRb、C-Jun和其他宿主細(xì)胞蛋白的相互作用[25]?；|(zhì)金屬蛋白酶在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著關(guān)鍵作用。E7蛋白可激活基質(zhì)金屬蛋白酶的內(nèi)源性調(diào)節(jié)劑，提高基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[26]。

HPV表達(dá)的E7蛋白可與pRb及其家族成員p107和p130結(jié)合，進(jìn)而影響細(xì)胞周期調(diào)控。E7蛋白可促使pRb進(jìn)入泛素依賴的途徑降解。pRb失活可使轉(zhuǎn)錄因子E2F活化，進(jìn)而激活細(xì)胞自G1期進(jìn)入S期的DNA復(fù)制相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。研究顯示，在HPV陽性的惡性腫瘤細(xì)胞系中，當(dāng)p130-DREAM復(fù)合物重新形成時，細(xì)胞生長抑制會重獲恢復(fù)[27]。E7蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)和LxCxE基序可與轉(zhuǎn)錄因子AP-1發(fā)生直接或間接的相互作用，進(jìn)而激活細(xì)胞早期基因或影響細(xì)胞周期調(diào)控。E7蛋白N端的CR1可與pRb家族成員p600發(fā)生相互作用，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和增殖并延長細(xì)胞的G2期[28]。抑癌基因miR-15a和miR16-1是miRNA基因簇成員，具有調(diào)控細(xì)胞的增殖、存活和侵襲的作用。有關(guān)研究顯示，E7蛋白可顯著上調(diào)miR16-1的水平，進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲[23]。

2.3 其他相關(guān)的研究進(jìn)展

信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription， STAT）是一組可調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄并參與細(xì)胞增殖、分化以及炎癥和免疫反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子。STAT3可誘導(dǎo)和維持致癌的炎性微環(huán)境，在腫瘤惡性變過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。STAT3在多種惡性腫瘤中的表達(dá)提高，其可參與腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移以及免疫逃逸等。STAT3基因的多態(tài)性與中國女性的高危型HPV易感、低分化宮頸癌及宮旁浸潤等顯著相關(guān)[29]。研究顯示HPV16和HPV18感染與STAT3的過表達(dá)顯著相關(guān)[30]，說明高危型HPV感染可能引起宮頸細(xì)胞內(nèi)STAT3的異常激活，進(jìn)而引起宮頸細(xì)胞惡性變。

HPV表達(dá)的L1蛋白是HPV復(fù)制早期的一種結(jié)構(gòu)蛋白，可反映HPV的復(fù)制狀態(tài)。當(dāng)HPV基因組整合到宿主基因后，L1蛋白表達(dá)消失。L1蛋白也是機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)的靶蛋白。當(dāng)L1蛋白表達(dá)缺失時，HPV感染細(xì)胞將不能被機(jī)體免疫系統(tǒng)有效識別和清除，進(jìn)而可能促進(jìn)上皮細(xì)胞的惡性變。因此，L1蛋白的表達(dá)情況與宮頸病變之間可能存在一定的關(guān)系。

還有其他HPV致癌機(jī)制的研究。我們相信，對HPV與宮頸癌關(guān)系的研究終將使我們更清楚宮頸癌的發(fā)病和進(jìn)展機(jī)制，進(jìn)而幫助我們有效防治宮頸癌。

3 HPV感染的實(shí)驗室檢測方法

大多數(shù)的HPV感染無臨床癥狀，難以通過相關(guān)癥狀和體征發(fā)現(xiàn)，只能通過實(shí)驗室檢測得知。鑒于HPV至今尚不能在體外培養(yǎng)，也無合適的實(shí)驗動物作為載體，因此不能用簡便的血清學(xué)檢測來進(jìn)行HPV感染的診斷及分型，檢測主要依賴形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法。

3.1 形態(tài)學(xué)方法

常用的形態(tài)學(xué)方法有細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)和電鏡等檢查方法。細(xì)胞學(xué)檢查法系應(yīng)用巴氏涂片或液基細(xì)胞學(xué)方法制片、而后再根據(jù)細(xì)胞形態(tài)的轉(zhuǎn)變情況來予以診斷的。HPV陽性細(xì)胞的特征性改變是出現(xiàn)挖空細(xì)胞。細(xì)胞學(xué)檢查法診斷HPV感染的敏感性較差。病理學(xué)檢查法主要觀察宿主上皮的形態(tài)學(xué)改變，包括鱗狀上皮疣狀或乳頭狀增生、基底細(xì)胞增生和層次增加等。但因較多的HPV感染患者的病理學(xué)表現(xiàn)并不典型，故還需聯(lián)合應(yīng)用其他檢測方法來進(jìn)一步予以診斷。免疫學(xué)檢查法包括應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測抗體與L1蛋白或E6、E7蛋白的反應(yīng)，應(yīng)用放射免疫沉淀法檢測組織和血清中的抗HPV抗體水平，應(yīng)用血清免疫吸附試驗法檢測血清中E6、E7蛋白的特異性抗體等方法。但是，HPV蛋白的表達(dá)須待其DNA在宿主體內(nèi)與宿主細(xì)胞內(nèi)的DNA整合并復(fù)制以后才會出現(xiàn)，因此對檢測陰性者也不能作出否定的診斷，即免疫學(xué)檢查法的敏感性仍較低。應(yīng)用電鏡檢查法可直接觀察到HPV的病毒顆粒。掃描電鏡的分辨力為1 nm，透射電鏡的分辨力可達(dá)0.1 nm。不過，應(yīng)用電鏡檢查法診斷HPV感染的成本太高，且敏感度也僅有30% ～ 50%。上述各傳統(tǒng)檢查方法的特異性和敏感性均不夠理想，存在較高的假陰性率，加之無法對HPV感染進(jìn)行分型，目前在臨床上的實(shí)際應(yīng)用已趨減少。

3.2 分子生物學(xué)方法

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有關(guān)HPV核酸的檢測方法漸趨增多，而現(xiàn)臨床上最常用的是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction， PCR）法，其診斷HPV感染的敏感性較高。

PCR法結(jié)合反向點(diǎn)雜交技術(shù)檢測等方法不僅可以對HPV感染進(jìn)行確診，還可以對HPV感染進(jìn)行分型、測定病毒載量、進(jìn)行基因序列分析和發(fā)現(xiàn)新基因型等。PCR法的缺點(diǎn)是樣品間易交叉污染導(dǎo)致假陽性，而且各種PCR法由于引物、反應(yīng)體系及產(chǎn)物檢測方法等不同，敏感性和特異性也不相同，缺乏一致的診斷標(biāo)準(zhǔn)。為解決這一問題，技術(shù)人員發(fā)明了應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測HPV感染的方法，其原理是應(yīng)用PCR技術(shù)放大基因信號，而后通過高特異性的導(dǎo)流雜交技術(shù)及高通量的基因芯片技術(shù)一次性地檢測HPV感染及其分型?；蛐酒夹g(shù)已用于對細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)等標(biāo)本的HPV感染檢測，但目前因成本昂貴，并未廣泛用于臨床。除此之外，原位雜交技術(shù)、核酸印跡原位雜交技術(shù)和斑點(diǎn)印跡檢測方法等也可用于HPV感染檢測，但因操作繁瑣、費(fèi)時耗力，實(shí)際應(yīng)用均不多。

4 結(jié)語

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性生命和健康的常見惡性腫瘤類型，其發(fā)生與高危型HPV的持續(xù)感染密切相關(guān)。對HPV致癌的分子生物學(xué)機(jī)制的深入研究可幫助我們發(fā)明新的篩查方法，做到宮頸癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。闡明HPV的致癌機(jī)制還可幫助我們開發(fā)針對性的藥物，以更有效地治療宮頸癌。此外，HPV感染的檢測方法很多，但因不同亞型HPV的致病能力不同，故需重視HPV感染分型的檢測，這有利于在臨床上分流管理高危型HPV感染患者、預(yù)測疾病進(jìn)展并指導(dǎo)HPV疫苗的開發(fā)及使用。

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