醋制降低京大戟對(duì)正常小鼠胃腸道氧化損傷的初步研究

曹雨誕，張楷承，張 麗，丁安偉

(南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023)

醋制降低京大戟對(duì)正常小鼠胃腸道氧化損傷的初步研究

曹雨誕，張楷承，張 麗，丁安偉

(南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023)

Vinegar processing attenuates gastrointestinal oxidative injury in mice caused by Euphorbia Pekinensis Radix

CAO Yu-dan, ZHANG Kai-cheng, ZHANG Li, DING An-wei

(JiangsuKeyLaboratoryforHighTechnologyResearchofTCMFormulae,JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China)

京大戟；醋制；小鼠；胃腸道；氧化損傷；減毒

Euphorbia Pekinensis Radix; vinegar processing; mice; gastrointestinal tract; oxidative injury; detoxication

京大戟(Euphorbia Pekinensis Radix)為大戟科(Euphorbiaceace)植物大戟(EuphorbiapekinensisRupr.)的干燥根[1]，性苦、寒，有毒，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品。近年研究發(fā)現(xiàn)京大戟具有雙重生理活性，既具有瀉下、抗腫瘤、抗病毒、抗白血病等藥理活性，同時(shí)對(duì)皮膚、口腔及胃腸道黏膜有強(qiáng)烈的刺激性，以及細(xì)胞毒作用[2-6]，所以中醫(yī)臨床多用醋制降低其毒性和刺激性。本課題組前期已證實(shí)醋制能降低京大戟的肝毒性[7-8]和腸細(xì)胞毒性[9]，而對(duì)于京大戟胃腸道整體毒性研究卻鮮有報(bào)道。因此，本研究擬從整體動(dòng)物初步探討醋制降低京大戟胃腸道毒性可能的作用機(jī)制，為研究京大戟醋制減毒的作用機(jī)制提供一定的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物 ICR小鼠70只，♀♂各半，體質(zhì)量18～22 g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK(滬)2013-0006。

1.2 藥物與試劑 京大戟各部位提取物提取方法見(jiàn)已發(fā)表文章[8]，京大戟、醋京大戟石油醚部位浸膏(得率分別為6.33%和5.26%)，乙酸乙酯部位浸膏(得率為7.53%和6.48%)。臨用前，用0.5%的CMC-Na溶液和食用油(9 ∶1)分別配成所需濃度的藥液?？捡R斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒、微量丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒、微量還原型谷胱甘肽(GSH)測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 TP1020自動(dòng)脫水機(jī)、RM2135型石蠟切片機(jī)、DM1000光學(xué)顯微鏡(均為德國(guó)LEICA公司)，CS-VI型攤片烤片機(jī)(湖北孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司)，Powerwave X340全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)，AY220電子分析天平(日本島津)，MX-S混勻儀(北京大龍)，JJ-2高速組織勻漿機(jī)(江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組 將70只ICR小鼠置于室溫、通風(fēng)的清潔級(jí)動(dòng)物室中，自由攝食飲水，適應(yīng)3 d后，按體質(zhì)量、性別隨機(jī)分為7組，每組10只，即空白對(duì)照組，京大戟石油醚-乙酸乙酯部位高、中、低劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)京大戟高、中、低劑量組)，醋京大戟石油醚-乙酸乙酯部位高、中、低劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)醋京大戟高、中、低劑量組)。

2.2 劑量設(shè)計(jì) 按照人臨床用量的6、4、2倍，并結(jié)合本課題組前期預(yù)試結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)京大戟和醋京大戟高、中、低劑量組分別灌胃給予60、40、20 mg·g-1，空白對(duì)照組灌胃等體積的0.5% CMC-Na溶液和食用油(9 ∶1)，每日2次，連續(xù)灌胃6 d。d 6灌胃1 h后，脫頸椎處死小鼠，取胃、腸組織用4%中性多聚甲醛固定，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。取胃、腸組織分別制成10%組織勻漿，以3 500 r·min-1離心15 min后，取上清液-20 ℃凍存，待測(cè)各指標(biāo)。

2.3 胃、腸組織氧化損傷指標(biāo)測(cè)定 取1%胃、1%腸勻漿，按考馬斯亮藍(lán)蛋白試劑盒方法測(cè)定胃、腸組織中蛋白含量。取各組小鼠的2%胃、2%腸勻漿，按SOD試劑盒方法測(cè)定胃、腸組織中SOD活性；取10%胃、10%腸勻漿，按MDA、GSH試劑盒方法測(cè)定胃、腸組織中MDA含量和GSH含量。

3 結(jié)果

3.1 京大戟對(duì)胃、腸組織HE染色結(jié)果的影響 空白對(duì)照組小鼠胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，京大戟高劑量組胃黏膜表面上皮細(xì)胞壞死破碎，結(jié)構(gòu)完全破壞；空白對(duì)照組小腸黏膜結(jié)構(gòu)正常，京大戟高劑量組腸黏膜層組織破裂，黏膜表面覆蓋大量分泌物。京大戟中、低劑量組胃、腸組織變化不明顯。

Tab 1 Effects ofEuphorbiapekinensisbefore and after processing with vinegar on levels of SOD,GSH and MDA in gastric- intestinal±s，n=10)

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vscrude group

3.2 京大戟對(duì)胃、腸組織氧化損傷指標(biāo)的影響 與空白對(duì)照組相比，京大戟各劑量組小鼠胃、腸組織中MDA含量明顯增高(P<0.01)，SOD活力、GSH含量明顯降低(P<0.01)。與京大戟組相比，醋京大戟各劑量組小鼠胃、腸組織中MDA含量明顯降低，SOD活力、GSH含量明顯增高(P<0.01)，提示醋制能降低京大戟對(duì)胃、腸組織的氧化損傷。見(jiàn)Tab 1。

4 討論

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，京大戟對(duì)皮膚、口腔及胃腸道黏膜有強(qiáng)烈的刺激性和致炎、促發(fā)致癌等毒性作用，其毒性部位主要集中在石油醚、乙酸乙酯部位，醋制后毒性作用降低[10-11]。京大戟產(chǎn)生毒性的原因主要是其對(duì)胃腸道的損傷，其中較常見(jiàn)的是氧自由基損傷。氧自由基所致的細(xì)胞損害是很多病理過(guò)程中組織損傷所共同的方式，胃腸黏膜在藥物作用等情況下，可產(chǎn)生大量的氧自由基。氧自由基損傷引起的主要變化為MDA含量升高、GSH和SOD含量下降[12]。

本研究結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，京大戟各劑量組對(duì)小鼠胃腸道具有明顯的氧化損傷作用；與京大戟各劑量組比較，醋京大戟各劑量組能明顯降低對(duì)胃腸道的氧化損傷作用。其中SOD變化最大，SOD作為生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，它在生物體內(nèi)的水平高低意味著自身抗氧化能力高低。在本研究中，空白對(duì)照組SOD最高，京大戟各劑量組SOD最低，說(shuō)明經(jīng)過(guò)京大戟作用后提高了自由基在機(jī)體內(nèi)的積存，使線(xiàn)粒體氧化磷酸化功能損傷加重，而醋制后氧化損傷程度則有所降低。上述結(jié)果顯示，京大戟對(duì)胃腸道有較強(qiáng)的毒性作用，不僅嚴(yán)重制約著臨床的用藥安全，也為新藥創(chuàng)制帶來(lái)了困難。醋制后，其胃腸道毒性部位石油醚-乙酸乙酯部位可明顯降低對(duì)小鼠胃腸道的氧化損傷，為后續(xù)從細(xì)胞、分子水平闡述京大戟醋制減毒的作用機(jī)制提供了一定的依據(jù)。

(致謝：本文實(shí)驗(yàn)在南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥化學(xué)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室以及江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心完成，在此致謝。)

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時(shí)間：2017-1-13 11:38:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170113.1138.056.html

2016-11-01,

2016-11-28

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(No 81503250)；江蘇省中醫(yī)藥局科技項(xiàng)目(No LZ13021)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(No ysxk-2014)

曹雨誕(1977-)，女，博士生，講師，研究方向:中藥炮制與質(zhì)量控制,E-mail：raindc@163.com； 丁安偉(1950-)，男，教授，博士生導(dǎo)師,研究方向：中藥炮制，通訊作者,E-mail:awding105@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.02.028

A

1001-1978(2017)02-0291-03

R-332;R282.711；R322.44；R322.45；R349.1；R573.02；R574.02