• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜法測定蔬菜中β-胡蘿卜素的不確定度評定

    2017-02-22 08:54:58王曉婧曹夢錦張雪松王國棟
    中國食物與營養(yǎng) 2017年1期
    關(guān)鍵詞:反式胡蘿卜素批號

    王曉婧,曹夢錦,張雪松,王國棟,王 竹

    (中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與健康所/國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會微量元素重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100050)

    高效液相色譜法測定蔬菜中β-胡蘿卜素的不確定度評定

    王曉婧,曹夢錦,張雪松,王國棟,王 竹

    (中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與健康所/國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會微量元素重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100050)

    建立高效液相色譜法測定蔬菜中β-胡蘿卜素的不確定度評定數(shù)學(xué)模型,計(jì)算β-胡蘿卜素測量結(jié)果的不確定度。胡蘿卜和菠菜中β-胡蘿卜素的擴(kuò)展不確定分別為0.684和0.444 mg/100g(k=2、P=95%)。影響β-胡蘿卜素HPLC法測定的不確定度來源主要是樣品均勻性、前處理過程及HPLC儀器定量重復(fù)性,不確定度評定有利于完善測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    不確定度;β-胡蘿卜素;蔬菜;高效液相色譜法

    β-胡蘿卜素由于其如顯著的維生素A原活性、抗氧化、防癌、利于心血管健康等而備受關(guān)注[1-3]。天然攝入的β-胡蘿卜素主要來源于植物性食物,其含量測定方法中高效液相色譜法(HPLC)因其準(zhǔn)確度高、操作相對簡便,可將胡蘿卜素各單體物質(zhì)分離并分別予以定性和定量的優(yōu)點(diǎn)而成為β-胡蘿卜素分析的主流方法[4-7]。本研究組在《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中β-胡蘿卜素的測定》的標(biāo)準(zhǔn)整合過程中,為提高提取效率、改善色譜分離效果及增進(jìn)β-胡蘿卜素結(jié)果的科學(xué)表達(dá),提出了以下幾點(diǎn)改進(jìn)之處:一是前處理過程中增加了低溫醇提步驟,有效提高胡蘿卜素的提取效率;二是在HPLC測定中采用C30Carotenoid色譜柱,將α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素及其順反異構(gòu)體進(jìn)行分離,從而實(shí)現(xiàn)分別計(jì)量;三是按照AOAC方法將β-胡蘿卜素的各順反式異構(gòu)體分別定性定量并綜合評定β-胡蘿卜素的含量[9],以避免造成結(jié)果的低估或偏估。本試驗(yàn)根據(jù)JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[10],對蔬菜中β-胡蘿卜素含量測定的不確定度進(jìn)行了測量和評定,以期為評定測量結(jié)果提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 測量所需材料與步驟

    1.1.1 儀器與試劑 儀器與耗材:高效液相色譜儀(Waters 2 695,美國Waters公司);紫外檢測器(Waters 2 487,美國Waters公司);YMC Carotenoid C30色譜柱(3μm,4.6×150 mm);紫外分光光度計(jì)(722G型,上海精科);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2010型,鞏義市京華儀器有限責(zé)任公司);恒溫振蕩水浴鍋(SHZ-88,太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠);分析天平(Mettler MS204S,瑞士梅特勒托利多公司);所有玻璃器皿均為A級。

    標(biāo)準(zhǔn)品與試劑:β-胡蘿卜素(CAS號:7235-40-7,純度>95%),購于Sigma公司;甲醇為色譜級 (Fisher Scientific公司,批號152469);乙腈為色譜級(Fisher Scientific公司,批號150942);甲基叔丁基醚為色譜純(Fisher Scientific公司,批號147314);二氯甲烷為色譜純(Fisher Scientific公司,批號148424);正己烷為色譜純(Fisher Scientific公司,批號152474);試驗(yàn)用水為超純水(電阻率≥18.2MΩ·cm)。無水乙醇為優(yōu)級純(北京化工廠,批號20150618);石油醚(沸程30~60℃,北京化工廠,批號20151012);氫氧化鉀(西隴化工股份有限公司,批號120716);無水硫酸鈉(西隴化工股份有限公司,批號140913);均為分析純。

    1.1.2 測量步驟 (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)定:將β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品用二氯甲烷溶解,配制成濃度約500 μg/mL儲備液,分裝保存在-20℃冰箱內(nèi);試驗(yàn)當(dāng)日,取β-胡蘿卜素儲備液100 mL,加正己烷稀釋并定容至10 mL。以正己烷為空白,入射光波長為450 nm測定其吸光度值,平行測定3次,取均值,按式(1)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)液濃度。

    (1)

    式(1)中:CR為β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲備液的標(biāo)定濃度;A為β-胡蘿卜素的吸光度值;E為以正己烷為溶劑時β-胡蘿卜素的比吸光系數(shù)(0.262 0);V2為定容體積(mL);V1為移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液的體積(mL)。

    (2)全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子(RF)的測定:將β-胡蘿卜素儲備液稀釋為濃度約3 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液,注入HPLC儀中,根據(jù)保留時間測定-胡蘿卜素各異構(gòu)體峰面積,平行測定6次。全反式β-胡蘿卜素的色譜純度(CP)和響應(yīng)因子(RF)分別按式(2)和式(3)計(jì)算:

    (2)

    (3)

    式(2)和(3)中:CP為全反式β-胡蘿卜素的色譜純度;Rsum為標(biāo)準(zhǔn)使用液中β-胡蘿卜素各異構(gòu)體(包括全反式β-胡蘿卜素、9-順式β-胡蘿卜素、13-順式β-胡蘿卜素、15-順式β-胡蘿卜素及其他順式結(jié)構(gòu))的峰面積總和;Rall-E為標(biāo)準(zhǔn)使用液中全反式β-胡蘿卜素的峰面積;R9Z為標(biāo)準(zhǔn)使用液中9-順式β-胡蘿卜素的峰面積;R13Z為標(biāo)準(zhǔn)使用液中13-順式β-胡蘿卜素的峰面積;R15Z為標(biāo)準(zhǔn)使用液中15-順式β-胡蘿卜素的峰面積;RxZ為標(biāo)準(zhǔn)使用液中其他順式β-胡蘿卜素的峰面積;Cr為β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液的濃度。

    (3)樣品前處理:取勻質(zhì)化的蔬菜樣品0.5~1 g(精確至0.001g)于100mL錐形瓶中,加入0.5 g抗壞血酸,30 mL無水乙醇,于60 ℃水浴振蕩30 min,后加入10 mL飽和氫氧化鉀溶液,蓋上瓶塞。置于已預(yù)熱至53℃恒溫振蕩水浴箱中,皂化30 min。取出,靜置,冷卻到室溫。將皂化液轉(zhuǎn)入250 mL分液漏斗中,加入50 mL石油醚,輕輕搖動,排氣,蓋好瓶塞,室溫下振蕩10 min后靜置分層,將水相轉(zhuǎn)入另一分液漏斗中按上述方法進(jìn)行第二次提取。合并有機(jī)相,用水洗至近中性。棄水相,有機(jī)相通過無水硫酸鈉過濾脫水。濾液收入250 mL蒸發(fā)瓶中,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃減壓濃縮,近干。用氮?dú)獯蹈?,用移液管?zhǔn)確加入5.0 mL二氯甲烷,蓋上瓶塞,充分溶解提取物。經(jīng)0.45 μm膜過濾后供液相色譜分析用。

    (4)色譜條件:YMC Carotenoid C30色譜柱(4.6 mm×150 mm,3 μm);流速1 mL/min;柱溫30℃;檢測波長450 nm;流動相為A(甲醇∶乙腈∶水73.5∶24.5∶2)、B(甲基叔丁基醚),洗脫程序:100%~59% A線性變換(0~15 min),59%~20% A線性變換(15~19 min),20%~0% A線性變換(19~20 min)。根據(jù)保留時間和相對位置定性,通過計(jì)算各異構(gòu)體的峰面積來定量。

    1.2 測量數(shù)學(xué)模型的建立

    本試驗(yàn)中β-胡蘿卜素的計(jì)算公式為式(4):

    (4)

    式(4)中:X為待測樣品中β-胡蘿卜素的含量(μg/100g);S為待測液中β-胡蘿卜素各異構(gòu)體經(jīng)校正后的色譜峰總面積;V為試樣液定容體積(mL);RF為全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子(計(jì)算方法見1.1.2);m為試樣質(zhì)量(g);其中:S=Sall-E+S9Z+S13Z×1.2+S15Z×1.4+SxZ,Sall-E為待測液中全反式β-胡蘿卜素峰面積、S9Z為待測液中9-順式-β-胡蘿卜素的峰面積、S13Z為待測液中13-順式-β-胡蘿卜素的峰面積、S15Z為待測液中15-順式-β-胡蘿卜素的峰面積,SxZ為待測液中其他順式β-胡蘿卜素的峰面積,1.2和1.4分別為13-順式-β-胡蘿卜素和15-順式-β-胡蘿卜素的相對校正因子。

    測量結(jié)果的不確定性除受到公式中S、V、RF和m的影響外,樣品均勻性和前處理過程的一致性都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響,考慮其影響量,公式中需加入校正因子frep,式(4)則轉(zhuǎn)化為式(5):

    (5)

    (6)

    1.3 不確定度來源分析

    蔬菜中β-胡蘿卜素測量結(jié)果的不確定度來源主要包括:標(biāo)準(zhǔn)儲備液的標(biāo)定、標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液稀釋定容過程中的玻璃量器、樣品的天平稱量、HPLC定量、樣品均勻性和前處理引入的不確定度等方面。

    1.4 不確定度分量的評定方法

    1.4.1 A類評定 由觀測列統(tǒng)計(jì)分布所作的不確定度評定,即對被測量進(jìn)行獨(dú)立重復(fù)觀測,A類評定的標(biāo)準(zhǔn)不確定度以所得到的一系列測得值的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。此類評定包括了測量過程中的各種隨機(jī)效應(yīng),包括樣品的均勻性和代表性、環(huán)境條件、儀器狀態(tài)、人員操作及前處理等導(dǎo)致的不確定度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 β-胡蘿卜素色譜峰總面積(S)的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

    2.2 全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子(RF)測定的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

    本試驗(yàn)采用紫外-可見分光光度計(jì)(722G型)進(jìn)行標(biāo)定,其檢定證書顯示其相對擴(kuò)展不確定度為0.5%,k=2,則相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.005/2=0.002 5。

    2.2.3 HPLC測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(LC) 計(jì)算方法見2.1。

    2.3 樣品稱重(m)的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

    樣品稱重引入的不確定度由天平的最大允許誤差構(gòu)成。稱重使用Mettler MS204S電子天平,其檢定證書給出稱量砝碼重量為10 mg時的擴(kuò)展不確定度為0.002 mg,k=2,由天平稱量產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.002/2/10=0.000 1。

    2.4 樣品定容體積(V)的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

    2.5 樣品均勻性和樣品前處理過程中(frep)引入的不確定度

    表1 測量重復(fù)性結(jié)果 單位:mg/100g

    表2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)及前處理引入的不確定評定

    2.6 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度 urel(X)

    將表3中各種相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度按照式(6)合成,可以得到兩種蔬菜中β-胡蘿卜素含量測量結(jié)果的合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度及合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

    表3 兩種蔬菜樣品中β-胡蘿卜素不確定度來源及合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

    2.7 擴(kuò)展不確定度及測量結(jié)果

    依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[10],對大多數(shù)測量不確定評估,取置信水平95%,k=2,則擴(kuò)展不確定度為 U(X)= 2×uc(X) 。測得胡蘿卜中β-胡蘿卜素的含量及不確定度為5.68 mg/100g (U =0.684 mg/100g,k=2),菠菜中β-胡蘿卜素的含量及不確定度為3.00 mg/100g (U =0.444 mg/100g,k=2)。

    3 討論

    本試驗(yàn)以富含β-胡蘿卜素的胡蘿卜和菠菜為代表,評估了HPLC法測量β-胡蘿卜素含量的不確定度,得出影響測量結(jié)果的不確定度的主要來源為HPLC儀器測量重復(fù)性、樣品測量重復(fù)性及前處理過程。前者引入的不確定度由方法本身決定,主要體現(xiàn)在全反式β-胡蘿卜素的響應(yīng)因子RF的測定和樣品結(jié)果測量過程中均需要計(jì)入4種順反式異構(gòu)體的峰面積。因此今后在使用HPLC法測量β-胡蘿卜素含量時,根據(jù)不確定度分量加強(qiáng)準(zhǔn)確測量,應(yīng)注意以下幾點(diǎn):(1)減少前處理及其他隨機(jī)過程引入的系統(tǒng)誤差,注意取樣的均勻性、代表性,保證操作規(guī)范和一致,平行測量;(2)定期對儀器進(jìn)行期間核查和維護(hù)保養(yǎng),以保證儀器的穩(wěn)定性;(3)將標(biāo)準(zhǔn)儲備液制備得到標(biāo)準(zhǔn)使用液過程中,經(jīng)歷了兩次稀釋步驟,增加了不確定度來源,可考慮將制備得的標(biāo)準(zhǔn)使用液再次標(biāo)定,將標(biāo)定所得的標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度Cr代入計(jì)算,減少測定結(jié)果的不確定度。從本試驗(yàn)研究結(jié)果來看,不確定度評價(jià)不僅可用于評估測量方法的可靠性和測量結(jié)果的可信程度,而且可以通過分析測量過程的主要誤差來源完善方法的準(zhǔn)確性。◇

    [1]靳青,畢宇霖,劉曉牧,等.類胡蘿卜素代謝及功能研究進(jìn)展[J].動物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2014,26 (12):3561-3571.

    [2]孫玉敬,喬麗萍,鐘烈洲,等.類胡蘿卜素生物活性的研究進(jìn)展[J].中國食品學(xué)報(bào),2012,12 (1):160-166.

    [3]翟艷麗,惠伯棣,蔡靳,等.類胡蘿卜素與癌癥風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的研究[J].食品科學(xué),2013,34 (13):307-313.

    [4]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T5009.83-2003 食品中胡蘿卜素的測定[S]. 北京:中華人民共和國衛(wèi)生部中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會,2003.

    [5]食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) GB 5413.35-2010嬰幼兒食品和乳品中β-胡蘿卜素的測定[S]. 北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,2010.

    [6]趙大球,薛銀芳,周春華.植物類胡蘿卜素分析方法研究進(jìn)展[J].北方園藝,2011(2):195-199.

    [7]惠伯棣,歐陽清波,曾悅.植物食品中類胡蘿卜素的高壓液相色譜檢測[J].中國食品添加劑,2002(5):72-82.

    [8]食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) GB 5009.83-2016 食品中胡蘿卜素的測定[S]. 北京:中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會,2016.

    [9]Association of Official Agricultural Chemists.AOAC Official Method 2005.07.β-Carotene in supplements and raw materials reversed-phase high pressure liquid chromatographic method[S].USA.2005.

    [10]中華人民共和國國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范.JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示[S]. 北京:國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,2012.

    [11]ELLISON S L R,WILLIAMS A.Quantifying uncertainty in analytical measurement[M]. 3rd ed.UK:EURACHEM /CITAC Guide CG4.2012.

    [12]全國流量容量計(jì)量技術(shù)委員會.JJG 196-2006 常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].北京:中國計(jì)量出版社,2006.

    [13]于晞,濮鑫.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定塑料制品中鄰苯二甲酸酯類化學(xué)物的不確定度評定[J].金山,2011(5):157-158.

    [14]張明,唐訪良,徐建芬,等.超高效液相色譜法測定地表水中多環(huán)芳烴實(shí)驗(yàn)分析測量不確定度評定[J].環(huán)境科學(xué)導(dǎo)刊,2012,31 (5):122-127.

    [15]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-GL06 化學(xué)分析中不確定度的評估指南[S]. 北京:中國計(jì)量出版社,2006.

    [16]宋業(yè)萍,肖亮,宗萬里.氣相色譜法測定海帶中多氯聯(lián)苯含量的不確定度評定[J].衛(wèi)生研究,2015,44 (4):604-609.

    [17]沈葹,陳曦,畢燁,等.高效液相色譜法測定參類食品中人參皂苷的不確定度評定[J].衛(wèi)生研究,2015,44 (2):288-293.

    (責(zé)任編輯 劉宏)

    Uncertainty Evaluation on Determination ofβ-carotene in Vegetables by HPLC

    WANG Xiao-jing,CAO Meng-jin,ZHANG Xue-song,WANG Guo-dong,WANG Zhu

    (National Institute for Nutrition and health,CDC/Key Laboratory of Trace Element Nutrition,National Health and Family Planning Commission of the People’s Republic of China,Beijing 100050,China)

    A mathematical model was established for determiningβ-carotene in vegetables by HPLC and the measurement uncertainty was evaluated.The expand uncertainties ofβ-carotene were 0.684 mg/100g (k=2,P=95%,for carrot)and 0.444 mg/100g (k=2,P=95%,for spinach),respectively.The uncertainty from sample uniformity,pretreatment and HPLC instrument were the main sources of uncertainty and uncertainty evaluation was helpful to promote the accuracy of measurement.

    uncertainty;β-carotene;vegetable;high performance liquid chromatography (HPLC)

    “十二五”國家科技支撐項(xiàng)目“功能食品資源優(yōu)化和評價(jià)共性關(guān)鍵技術(shù)研究”(項(xiàng)目編號:2012BAD33B01);衛(wèi)計(jì)委標(biāo)準(zhǔn)司“國家食品安全標(biāo)準(zhǔn) 食品中β-胡蘿卜素的測定方法研究”。

    王曉婧(1985— ),女,博士,助理研究員,研究方向:食物營養(yǎng)。

    王竹(1970— ),女,博士,研究員,研究方向:食物營養(yǎng)。

    猜你喜歡
    反式胡蘿卜素批號
    一種JTIDS 信號批號的離線合批方法
    揭開反式脂肪酸的真面目
    醫(yī)學(xué)科技期刊中藥品生產(chǎn)批號標(biāo)注探析
    揭開反式脂肪酸的真面目
    中藥材批號劃分與質(zhì)量管理
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:26
    世衛(wèi)組織建議減少飽和脂肪和反式脂肪攝入
    全反式蝦青素對環(huán)磷酰胺誘發(fā)小鼠睪丸氧化損傷的保護(hù)作用
    β-胡蘿卜素微乳液的體外抗氧化性初探
    中國果菜(2016年9期)2016-03-01 01:28:39
    “醫(yī)用材料批號監(jiān)控追蹤”質(zhì)量改進(jìn)及實(shí)施評估
    RP-HPLC法測定螺旋藻中β-胡蘿卜素的含量
    18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩欧美精品免费久久| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品三级大全| 97精品久久久久久久久久精品| 中文在线观看免费www的网站| 九草在线视频观看| 只有这里有精品99| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 99热6这里只有精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 99re6热这里在线精品视频| 男女边摸边吃奶| 午夜福利在线在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 色视频在线一区二区三区| 亚洲国产色片| 国产精品国产av在线观看| 我的老师免费观看完整版| 免费电影在线观看免费观看| 午夜老司机福利剧场| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人免费观看视频高清| 美女国产视频在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产高清三级在线| 九九在线视频观看精品| 在线观看三级黄色| 最近2019中文字幕mv第一页| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久久久伊人网av| 久久韩国三级中文字幕| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本熟妇午夜| 精品国产三级普通话版| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 99热这里只有精品一区| 国产老妇女一区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 69人妻影院| 国产精品伦人一区二区| 成人免费观看视频高清| 日韩三级伦理在线观看| 午夜激情福利司机影院| 人妻一区二区av| 久久久午夜欧美精品| 丰满乱子伦码专区| 男人狂女人下面高潮的视频| 搞女人的毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 69av精品久久久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 免费看光身美女| 成人黄色视频免费在线看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产69精品久久久久777片| 亚洲性久久影院| av在线观看视频网站免费| 国产亚洲最大av| 在线免费观看不下载黄p国产| 美女被艹到高潮喷水动态| 两个人的视频大全免费| 男女国产视频网站| 久热久热在线精品观看| 亚洲色图av天堂| 一区二区av电影网| 毛片女人毛片| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久国产乱子免费精品| 国产成人精品久久久久久| 99热这里只有是精品50| 成年av动漫网址| 亚洲成人一二三区av| 91在线精品国自产拍蜜月| 搡老乐熟女国产| 久久久国产一区二区| 免费观看a级毛片全部| av天堂中文字幕网| 国产老妇女一区| 国产毛片在线视频| tube8黄色片| 91精品国产九色| 青春草国产在线视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 91aial.com中文字幕在线观看| av在线亚洲专区| 国产日韩欧美在线精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 熟女电影av网| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲国产高清在线一区二区三| 中国三级夫妇交换| 简卡轻食公司| 欧美+日韩+精品| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久久久久午夜电影| 美女视频免费永久观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 91久久精品国产一区二区三区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 赤兔流量卡办理| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产成人一区二区在线| 精华霜和精华液先用哪个| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 婷婷色av中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 大码成人一级视频| 午夜激情福利司机影院| 十八禁网站网址无遮挡 | 中文天堂在线官网| 国产视频首页在线观看| 久热久热在线精品观看| 亚洲成人av在线免费| 高清日韩中文字幕在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩av在线免费看完整版不卡| 我要看日韩黄色一级片| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久久久久久久大av| 美女cb高潮喷水在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产免费福利视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 晚上一个人看的免费电影| 久久久久国产网址| 一本色道久久久久久精品综合| 99久国产av精品国产电影| 好男人视频免费观看在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜福利在线在线| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲av不卡在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 51国产日韩欧美| 99久国产av精品国产电影| 美女内射精品一级片tv| 午夜福利视频精品| 精品少妇久久久久久888优播| 视频中文字幕在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲人成网站高清观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 午夜免费鲁丝| 亚洲人成网站高清观看| 国产一区二区三区av在线| 欧美zozozo另类| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费观看在线日韩| 一级毛片久久久久久久久女| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩欧美 国产精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久精品久久久久久久性| 99久久九九国产精品国产免费| 高清日韩中文字幕在线| 国产视频内射| 99视频精品全部免费 在线| av免费在线看不卡| 久久99热6这里只有精品| 黄色配什么色好看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 免费黄色在线免费观看| 黄色日韩在线| 激情五月婷婷亚洲| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产精品一区二区性色av| 亚洲精品国产成人久久av| 美女高潮的动态| 亚洲经典国产精华液单| 欧美国产精品一级二级三级 | 我的老师免费观看完整版| 另类亚洲欧美激情| 久久精品国产a三级三级三级| 成年人午夜在线观看视频| 日韩一区二区视频免费看| 黄色一级大片看看| 国产色婷婷99| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 一级毛片久久久久久久久女| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 男女边摸边吃奶| 日产精品乱码卡一卡2卡三| av在线天堂中文字幕| 色哟哟·www| 97超视频在线观看视频| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品无大码| 制服丝袜香蕉在线| 精品酒店卫生间| kizo精华| 免费黄频网站在线观看国产| 国内精品宾馆在线| 大码成人一级视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 99热这里只有是精品50| 亚洲综合精品二区| 亚洲av.av天堂| 亚洲性久久影院| 美女高潮的动态| 女人被狂操c到高潮| 免费在线观看成人毛片| 久久久精品欧美日韩精品| 久久久久久九九精品二区国产| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美激情在线99| 在线观看一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 99热这里只有精品一区| 超碰97精品在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 国产老妇女一区| 精品一区二区三卡| 欧美激情在线99| 国产永久视频网站| 成人欧美大片| 久久精品国产a三级三级三级| 国产黄片视频在线免费观看| 久久久午夜欧美精品| 国产成人精品一,二区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产永久视频网站| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产亚洲精品久久久com| av免费在线看不卡| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲图色成人| 国产探花极品一区二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 搡老乐熟女国产| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品蜜桃在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 男女国产视频网站| 免费看日本二区| 网址你懂的国产日韩在线| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 国产综合懂色| 国产精品一区二区在线观看99| 99热国产这里只有精品6| 国产男人的电影天堂91| 婷婷色综合www| 国产成人精品一,二区| 人体艺术视频欧美日本| 免费av毛片视频| 能在线免费看毛片的网站| 老女人水多毛片| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 99久国产av精品国产电影| 在线观看人妻少妇| 大香蕉久久网| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 深爱激情五月婷婷| 99热6这里只有精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲成人av在线免费| 久久久久久久久大av| 最后的刺客免费高清国语| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成人免费观看视频高清| 国产精品av视频在线免费观看| 好男人视频免费观看在线| 久久久久久久国产电影| 三级经典国产精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 青春草国产在线视频| 国产成人一区二区在线| 日本午夜av视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 极品教师在线视频| 尾随美女入室| 成人黄色视频免费在线看| 国产男女内射视频| 国产在视频线精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲精品,欧美精品| 免费大片18禁| 麻豆乱淫一区二区| 国产成人freesex在线| 久久精品综合一区二区三区| 高清av免费在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产成人精品福利久久| 国产精品三级大全| 国产91av在线免费观看| 在线天堂最新版资源| 国产精品爽爽va在线观看网站| 18禁动态无遮挡网站| 色网站视频免费| 五月玫瑰六月丁香| 51国产日韩欧美| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 中国三级夫妇交换| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲最大成人中文| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产美女午夜福利| 搞女人的毛片| 精品一区二区免费观看| 简卡轻食公司| 久久鲁丝午夜福利片| 色吧在线观看| 久久精品夜色国产| 成人免费观看视频高清| 久久久精品94久久精品| 欧美潮喷喷水| 高清av免费在线| 观看免费一级毛片| 日韩大片免费观看网站| 国产在线一区二区三区精| 在线观看一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 免费高清在线观看视频在线观看| 99热全是精品| 大话2 男鬼变身卡| 成人特级av手机在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 国产成人精品婷婷| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久热精品热| 99久国产av精品国产电影| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲精品国产av成人精品| 成年女人在线观看亚洲视频 | 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲国产日韩一区二区| 国产成人精品婷婷| 高清毛片免费看| 中文字幕av成人在线电影| 丝袜美腿在线中文| 成人综合一区亚洲| 欧美日韩精品成人综合77777| 在线 av 中文字幕| 亚洲在久久综合| 大片电影免费在线观看免费| 男人狂女人下面高潮的视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 嫩草影院精品99| 伊人久久国产一区二区| 精品久久久久久电影网| av在线老鸭窝| 大码成人一级视频| 久久久精品免费免费高清| 久久久久久国产a免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产色婷婷99| av一本久久久久| 国产成人a区在线观看| 全区人妻精品视频| h日本视频在线播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产淫片久久久久久久久| 欧美+日韩+精品| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品伦人一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 嫩草影院新地址| 久久这里有精品视频免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 人妻少妇偷人精品九色| 成年版毛片免费区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| videos熟女内射| 街头女战士在线观看网站| 久久久色成人| 国产精品.久久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 美女被艹到高潮喷水动态| 在线观看av片永久免费下载| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 精品一区二区免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 一个人看视频在线观看www免费| 97超视频在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线| 国产伦理片在线播放av一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产成人aa在线观看| 亚洲色图av天堂| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美97在线视频| 成人一区二区视频在线观看| 成人免费观看视频高清| 欧美精品国产亚洲| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久亚洲国产成人精品v| 我的女老师完整版在线观看| 色视频www国产| 三级经典国产精品| 国产男女内射视频| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品视频女| 久久久色成人| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产高清有码在线观看视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| freevideosex欧美| 国产精品熟女久久久久浪| 白带黄色成豆腐渣| 超碰av人人做人人爽久久| 久热这里只有精品99| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 婷婷色av中文字幕| 精品国产乱码久久久久久小说| 高清在线视频一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲色图综合在线观看| 日本免费在线观看一区| 国产美女午夜福利| 亚洲精品成人久久久久久| 直男gayav资源| 日韩三级伦理在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 熟女av电影| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜福利视频精品| 永久网站在线| 99久国产av精品国产电影| 国产高清不卡午夜福利| 国产老妇伦熟女老妇高清| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品一及| 久久久精品免费免费高清| 色视频在线一区二区三区| 黄色日韩在线| 国产精品一区www在线观看| av网站免费在线观看视频| 国内精品宾馆在线| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美最新免费一区二区三区| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美97在线视频| 精品一区二区免费观看| 中文字幕亚洲精品专区| 免费高清在线观看视频在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品一区二区在线观看99| 久久97久久精品| 中文资源天堂在线| 少妇的逼好多水| 国产综合懂色| 精品国产三级普通话版| 国产v大片淫在线免费观看| 一区二区三区精品91| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲电影在线观看av| 国模一区二区三区四区视频| 久久女婷五月综合色啪小说 | 最近2019中文字幕mv第一页| 寂寞人妻少妇视频99o| 在现免费观看毛片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| av线在线观看网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 岛国毛片在线播放| 亚洲国产色片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 深爱激情五月婷婷| 全区人妻精品视频| 青春草国产在线视频| 精品一区二区免费观看| 另类亚洲欧美激情| 美女内射精品一级片tv| 亚洲激情五月婷婷啪啪| av线在线观看网站| 激情五月婷婷亚洲| av福利片在线观看| 午夜激情福利司机影院| 精品久久久久久电影网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 午夜福利视频精品| 午夜福利高清视频| 中文字幕亚洲精品专区| 国产黄a三级三级三级人| 天天一区二区日本电影三级| 五月天丁香电影| 久久国产乱子免费精品| 天堂网av新在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 身体一侧抽搐| 国产精品蜜桃在线观看| 九色成人免费人妻av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 99久久精品国产国产毛片| 国产极品天堂在线| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久精品综合一区二区三区| 黄色日韩在线| 久久精品国产亚洲网站| 日日撸夜夜添| 欧美日本视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲av国产av综合av卡| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 九九在线视频观看精品| 久久精品国产亚洲网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲国产精品999| 男插女下体视频免费在线播放| 2022亚洲国产成人精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 91久久精品国产一区二区三区| av天堂中文字幕网| 青春草国产在线视频| 中国三级夫妇交换| 国产探花极品一区二区| 亚洲国产精品成人久久小说| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久这里有精品视频免费| 男男h啪啪无遮挡| 22中文网久久字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人漫画全彩无遮挡| av.在线天堂| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产男女内射视频| .国产精品久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩欧美精品v在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产成人freesex在线| av免费在线看不卡| 丝袜喷水一区| 亚洲内射少妇av| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久ye,这里只有精品| 尾随美女入室| 免费观看无遮挡的男女| 国产av码专区亚洲av| av女优亚洲男人天堂| 国产精品国产三级专区第一集| 如何舔出高潮| 亚洲怡红院男人天堂| 免费少妇av软件| a级毛片免费高清观看在线播放| 伦精品一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲精品国产av蜜桃| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产又色又爽无遮挡免| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲经典国产精华液单| 天堂俺去俺来也www色官网| 黑人高潮一二区| 亚洲国产日韩一区二区| 免费黄色在线免费观看| 亚洲av免费在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 97精品久久久久久久久久精品| 国产成人91sexporn| av在线亚洲专区| 亚洲国产色片| 久久久久久伊人网av| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久精品性色| 日日撸夜夜添| 国产欧美亚洲国产| 韩国av在线不卡| 欧美精品国产亚洲| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美3d第一页| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 久久人人爽人人片av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产欧美亚洲国产| 麻豆乱淫一区二区| 久久久国产一区二区| 成人亚洲欧美一区二区av| 久热久热在线精品观看| 综合色av麻豆| 亚洲电影在线观看av| 免费黄网站久久成人精品| 深爱激情五月婷婷| 22中文网久久字幕| 男女那种视频在线观看|