通脈顆粒水提及制粒工藝優(yōu)化Δ

尤文質，陳雪梅，蘇娟娟，彭連共，管昌益（.廈門市中醫(yī)院藥學部，福建廈門 36009；.廈門市中醫(yī)院心血管病科，福建廈門 36009）

通脈顆粒水提及制粒工藝優(yōu)化Δ

尤文質1＊，陳雪梅1#，蘇娟娟1，彭連共1，管昌益（21.廈門市中醫(yī)院藥學部，福建廈門 361009；2.廈門市中醫(yī)院心血管病科，福建廈門 361009）

目的：優(yōu)化通脈顆粒水提及制粒工藝。方法：以浸膏得率和三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1的總皂苷量為評價指標，采用L9（34）正交試驗法對通脈顆粒制備過程中的水提取工藝條件進行優(yōu)化與驗證；采用單因素分析對制粒工藝中的除雜、濃縮、干燥、制粒工藝進行優(yōu)化與驗證。結果：該顆粒劑水提取最佳工藝條件為8倍水，浸泡0.5 h，煎煮2次，每次煎煮1.0 h；驗證試驗中，浸膏得率為（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），總皂苷含量為（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）。優(yōu)化的制粒工藝為浸膏經(jīng)翅片式過濾除雜，于真空度0.08 MPa、溫度60℃下濃縮，按藥粉-輔料（麥芽糊精）（3∶1，質量比）加入輔料，85～90℃干燥；采用干法制粒，稀釋劑（麥芽糊精）的加入量為3%。在此條件下制備的樣品的總皂苷含量為（5.211± 0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）。結論：該工藝合理可行、穩(wěn)定可控，適用于通脈顆粒的制備。

通脈顆粒；水提工藝；制粒工藝；正交試驗；噴霧干燥

動脈粥樣硬化是心、腦、腎疾病，以及高血壓、糖尿病和周圍血管疾病的共同病理基礎，對健康危害極大，為老年人主要病死原因之一。通脈顆粒是廈門市中醫(yī)院主任醫(yī)師管昌益從中醫(yī)“毒瘀理論”出發(fā)，結合西醫(yī)“動脈粥樣硬化炎癥學說”，總結多年防治動脈粥樣硬化的臨床經(jīng)驗組方而成，主要由紅參、黃芪、半枝蓮、白蘞、三七、郁金、炙甘草等14味中藥材組成。全方以益氣解毒、化瘀通脈為法，臨床用于預防和治療動脈粥樣硬化。經(jīng)過多年的臨床觀察，此方在預防及治療動脈粥樣硬化方面取得了良好的效果[1-2]。將其制成顆粒劑既可保留煎劑吸收快、顯效迅速等特點，又可有效減小制劑體積，方便患者服用。因此，本試驗優(yōu)化了通脈顆粒水提及制粒工藝，為保證制劑的質量及療效提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1260高效液相色譜（HPLC）儀，包括G1311C四元泵、G1329B真空脫氣器、G1315D二極管陣列檢測器、ChemStation B.04.02化學工作站（美國Agilent公司）；KQ-250B超聲清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；EL2401電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 藥材與試劑

紅參、黃芪、半枝蓮、白蘞、三七、郁金、炙甘草等中藥飲片，均購自康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)廈門市中醫(yī)院中藥庫副主任藥師彭連共鑒定為正品，并符合2015年版《中國藥典》（一部）各藥材項下相關規(guī)定。人參皂苷Rb1對照品（批號：110704-201414，純度：93.7%）、人參皂苷Rg1對照品（批號：110703-201128，純度：93.4%）、人參皂苷Re對照品（批號：110754-201324，純度：92.7%）、三七皂苷R1對照品（批號：110745-200617，純度：100%）均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 水提工藝優(yōu)化[3-5]

2.1.1 色譜條件[6]色譜柱：Amethyst-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～25 min，18%A；25～35 min，18%～19%A；35～55 min，19%～29% A；55～75 min，29%A；75～95 min，29%～40%A；95～100 min，40%～18%A）；檢測波長：203 nm；進樣量：10 μl；柱溫：30℃。取“2.1.2”～“2.1.4”項下溶液進樣測定，結果理論板數(shù)以人參皂苷Rg1峰計算不低于5 000，分離度均大于1.5。色譜圖見圖1。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品適量，加入甲醇制成每1 ml含三七皂苷R10.03 mg、人參皂苷Rg10.25 mg、人參皂苷Re 0.05 mg、人參皂苷Rb10.15 mg的混合對照品溶液，搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取“2.1.6”項下浸膏適量，研細，精密稱取約1.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定質量，超聲（功率：250 W，頻率：50 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性對照品溶液的制備 按處方組成比例，稱取除紅參、三七外的其余藥味，按制備工藝要求，制成不含紅參、三七的陰性通脈顆粒。按“2.1.3”項下供試品溶液的方法制備，即得。

2.1.5 專屬性及方法學考察結果 按照2015年版《中國藥典》（四部）相關規(guī)定對專屬性和方法學進行考察。結果，人參皂苷Rg1的回歸方程為y＝186.224 9x+1.264 9（r＝0.999 6），線性范圍為0.487 86～4.878 6 μg；精密度試驗的RSD＝1.47%（n＝6）、穩(wěn)定性試驗的RSD＝0.56%（n＝6）、重復性試驗的RSD＝0.98%（n＝6）；加樣回收率范圍為93.40%～97.15%（RSD＝1.96，n＝6）。

圖1 高效液相色譜圖A.混合對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照品溶液；1.三七皂苷R1；2.人參皂苷Rg1；3.人參皂苷Re；4.人參皂苷Rb1Fig 1 HPLC chromatogramsA.mixed substance control solution；B.test sample solution；C.negative control solution；1.notoginsenoside R1；2.ginsenoside Rg1；3.ginsenoside Re；4.ginsenoside Rb1

2.1.6 浸膏制備 按處方比例稱取紅參、黃芪、三七、郁金、炙甘草等14味中藥材共9份，分別按照表2的正交試驗設計進行提取。取濾液濾過、濃縮、放至室溫，定容至1 000 ml量瓶（相當于原藥材325 g），混勻。量取300 ml提取液，于100℃濃縮、干燥至恒質量，測定浸膏得率。浸膏得率（%）＝浸膏質量×1 000/（藥材質量×300）×100%。

2.1.7 正交試驗 根據(jù)處方中藥物的性質，采用傳統(tǒng)的水煎煮法為本產(chǎn)品的提取工藝。根據(jù)預試驗結果，選取加水量（A）、浸泡時間（B）、煎煮時間（C）、煎煮次數(shù)（D）作為考察因素，以浸膏得率和總皂苷（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1）含量的綜合評分為評價指標，優(yōu)選最佳提取工藝。綜合評分＝[（浸膏得率/浸膏得率最大值）×0.4+（總皂苷量/總皂苷量最大值）×0.6]×100。因素與水平見表1，正交試驗設計與結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素對綜合評分的影響大小順序為D＞B＞A＞C，綜合評分最佳工藝為試驗號7，工藝組合為A3B1C3D2。由表3可知，浸泡時間（B）和煎煮次數(shù)（D）對結果影響顯著，故B、D因素的水平可確定為B1D2；A、C因素對試驗結果影響不明顯，綜合考慮實際生產(chǎn)效率與節(jié)約能耗等因素，最終A選取A1，C選取C2。最終優(yōu)化提取工藝為A1B1C2D2，即8倍水，浸泡0.5 h，煎煮2次，每次煎煮1.0 h。

2.1.8 驗證試驗 按最優(yōu)工藝進行3次提取試驗，結果見表4。由表4可知，浸膏得率平均為（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），總皂苷含量平均為（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）。驗證試驗結果與正交試驗結果比較接近，說明該工藝比較穩(wěn)定，方法可靠。

表2 正交試驗設計與結果Tab 2 Orthogonal experiment design and results

表3 方差分析結果Tab 3 Results of variance analysis

表4 驗證試驗結果（n＝3）Tab 4 Results of validation test（n＝3）

2.2 除雜工藝研究

選擇對化學成分影響比較小的物理除雜方法開展比較研究。分別取通脈顆粒提取液適量，采用翅片式過濾、筒式過濾、臥螺式過濾等方法進行過濾，最終確定過濾效果較好、濾液質量較高、滿足連續(xù)生產(chǎn)要求的翅片式過濾方式。

2.3 濃縮工藝研究

采用外循環(huán)式真空薄膜濃縮工藝。取通脈顆粒提取液約1 000 kg，分別考察當真空度為0.06、0.07、0.08、0.09 MPa，真空溫度對應為80、67、60、55℃條件下的濃縮效率。結果，濃縮需要的時間分別為3.0、2.4、2.3、2.1 h，即真空度為0.09 MPa、對應真空溫度為55℃時濃縮效率最高。但考慮到此真空度對設備的要求比較高，危險性較大，故最終確定的濃縮條件為真空度0.08 MPa、真空溫度60℃。

2.4 干燥工藝研究

為提高干燥效率，縮短生產(chǎn)周期，減少干燥過程對有效成分的破壞，本試驗采用噴霧干燥工藝。因提取液中含有多糖類成分，直接噴霧干燥時易黏附于干燥塔內壁，故對在噴霧干燥時加入的輔料進行考察。

2.4.1 輔料的選擇 通過選擇麥芽糊精、乳糖、淀粉等輔料進行試驗，結果麥芽糊精對改善噴霧黏壁現(xiàn)象的效果較好，且麥芽糊精具有吸水性能好、成本低的特點，故選擇麥芽糊精作為噴霧干燥的輔料。

2.4.2 麥芽糊精加入量對噴霧干燥結果的影響 通過考察麥芽糊精加入量，比較其對噴霧干燥物料性狀的影響。結果表明，當干浸膏與輔料的質量比達到3∶1和2∶1時，均可解決黏壁問題。本著少加輔料的原則，確定干浸膏與輔料的質量比為3∶1。

2.4.3 干燥溫度的控制 通過考察發(fā)現(xiàn)，當出風口溫度分別為80、85、90、95℃時，干燥粉的含水量分別為5.6%、4.7%、4.1%、3.7%，故將出風口溫度設置為85～90℃。

2.5 制粒工藝研究

本試驗采用干法制粒技術，以減少輔料用量；縮短工藝流程和受熱時間，以提高顆粒收率。由于通脈顆粒中含有多糖類成分，易吸潮結塊，直接影響產(chǎn)品使用，為提高顆粒的穩(wěn)定性，需在制粒工藝中加入適量的防濕輔料。本處方選擇價廉易得的麥芽糊精作為稀釋劑，以增加顆粒的流動性、減少吸潮。通過比較輔料的加入量，結果輔料量為3%、5%時，顆粒均不結塊。本著減少輔料用量的原則，確定輔料的加入量為3%。

2.6 含量測定

取按上述確定的最佳工藝參數(shù)制備的樣品約1.2 g，共3份，精密稱定，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。結果，總皂苷含量為（5.211±0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）。

3 討論

通脈顆粒由紅參、黃芪、半枝蓮、白蘞、三七、郁金、炙甘草等14味中藥材組成。方中以黃芪、紅參為君藥，黃芪可補中健脾，為補氣要藥，補氣同時可化內毒、消痰瘀；紅參可補脾益肺生津，大補元氣。三七通絡止痛、活血化瘀，標本兼治，以益氣為本，以活血化瘀通脈治標，治病于未病，從血脈入手，以益氣化瘀、疏通脈道，瘀血去則血脈通。

紅參主要成分為皂苷類、揮發(fā)油、糖類、氨基酸等，皂苷類為其有效成分之一；三七主要成分為皂苷類、氨基酸類、黃酮類、多糖等，且大部分皂苷與人參皂苷類成分相同[7]。三七和紅參的主要活性部位為總皂苷類成分。大多數(shù)皂苷極性較大，易溶于水、甲醇和乙醇[8]。由于水提取成本低，因此最終確定煎煮水提為提取工藝。

人參、三七皂苷的HPLC含量測定法穩(wěn)定、成熟，是2015年版《中國藥典》（四部）收載的法定方法[6]，故選紅參三七總皂苷含量作為提取工藝評價的主要指標，綜合評價時權重系數(shù)定為0.6；干浸膏得率是固體復方制劑劑型選擇的主要依據(jù)，也是確定提取效率、顆粒服用量及包裝規(guī)格的重要參數(shù)，故權重系數(shù)設為0.4。

本試驗以浸膏得率，紅參、三七的總皂苷含量為考察指標，對通脈顆粒提取工藝進行工藝篩選，用正交試驗優(yōu)化的提取工藝所制成的樣品有效成分含量高，并經(jīng)驗證其工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。制劑的成型工藝選擇噴霧干燥、干式制粒，選取干浸膏與輔料的質量比為3∶1的麥芽糊精作為噴霧干燥的輔料，制粒使用3%防濕輔料。輔料的用量少，藥物受熱時間短，可保證藥品質量；同時，無糖型顆粒也特別適用于糖尿病患者使用。以上優(yōu)化工藝穩(wěn)定可靠，可作為通脈顆粒的制備。

[1] 管昌益，林琳.通脈顆粒治療冠心病心絞痛（氣虛血瘀型）及對CRP的影響研究[J].微循環(huán)學雜志，2010，20（2）：81.

[2] 蘇天生，管昌益，羅繼紅.通脈顆粒對家兔實驗性高脂血癥及動脈粥樣硬化的影響[J].福建中醫(yī)藥，2011，42（1）：4.

[3] 張兆旺.中藥藥劑學[M].2版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2007：394、404.

[4] 霍清，孔令旭.雙丹顆粒劑制備工藝的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（7）：1 784.

[5] 涂瑤生，高華宏，張建軍，等.丹芪調經(jīng)顆粒的制備工藝研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：211.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：11、87、110、118、153、208、302.

[7] 宋立人，洪恂，丁旭亮，等.現(xiàn)代中藥學大辭典：上冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：33-35、65-70.

[8] 肖崇厚.中藥化學[M].上海：上?？茖W技術出版社，1997：385-386.

Optimization of Water Extraction and Granulating Techology of Tongmai Granule

YOU Wenzhi1，CHEN Xuemei1，SU Juanjuan1，PENG Liangong1，GUAN Changyi2（1.Dept.of Pharmacy，Xiamen Hospital of TCM，F(xiàn)ujian Xiamen 361009，China；2.Dept.of Cardiovascular Diseases，Xiamen Hospital of TCM，F(xiàn)ujian Xiamen 361009，China）

OBJECTIVE：To optimize water extraction and granulating technology of Tongmai granule.METHODS：Using the contents of notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1，ginsenoside Re and ginsenoside Rb1and yield of extracts as the index，L9（34）orthogonal design was used to optimize and validate water extraction technology in preparation process of Tongmai granule.Decontamination，concentration and drying，diluent of granulating technology were investigated.RESULTS：The optimal water extraction technology was as follows as 8-fold water，soaking for 0.5 h，decocting 1.0 h each time，for 2 times.In validation test，the yield of extract was（28.38±0.461）%（RSD＝1.63%，n＝3），and the content of total saponins was（5.029±0.060）mg/g（RSD＝1.20%，n＝3）.The optimized granulating technology was that extract was filtrated and decontaminated，and then concentrated under vacuum degree of 0.08 MPa and vacuum temperature of 60℃；the ratio of extraction powder-accessories（maltodextrin）was 3∶1，drying temperature was set at 85-90℃；the amount of diluent was 3%.Under this condition，the content of total saponins was（5.211±0.207）mg/g（RSD＝3.96%，n＝3）.CONCLUSIONS：This technology is stable and feasible，and it is suitable for the preparation of Tongmai granule.

Tongmai granule；Water extraction technology；Granulating technology；Orthogonal test；Spray drying

R943

A

1001-0408（2016）34-4835-04

2016-05-26

2016-09-26）

（編輯：劉明偉）

福建省衛(wèi)生廳中醫(yī)科研項目（No.wzze201305）

＊副主任藥師。研究方向：中藥制劑。電話：0592-5582130。E-mail：awen303@163.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學。電話：0592-5579606。E-mail：merylchen@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.26