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    醬油中黃曲霉毒素B1含量的檢測

    2016-11-18 01:32:06秦加松
    食品安全導(dǎo)刊 2016年29期
    關(guān)鍵詞:親和柱樣液黃曲霉

    醬油中黃曲霉毒素B1含量的檢測

    研究醬油中黃曲霉毒素B1含量的檢測,該方法采用免疫親和柱凈化提取,利用熒光檢測器(帶柱后光化學(xué)衍生系統(tǒng))檢測,檢測方法簡單快捷、線性好,回收率高。

    醬油;黃曲霉毒素B1;免疫親和柱;熒光檢測器;光化學(xué)衍生

    試劑和溶液 除非另有規(guī)定,所用水為蒸餾水或去離子水;乙腈(色譜純);乙腈-水溶液(8+2):取80ml乙腈加20ml水;氯化鈉(分析純)吐溫-20(分析純);黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液(3ug/ml),保存于4℃?zhèn)溆?;黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確移取適量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液,用甲醇稀釋成系列的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    儀器和設(shè)備 高速均質(zhì)機(最高轉(zhuǎn)速≥10,000r/ min)或搖床;黃曲霉毒素B1免疫親和柱;玻璃纖維濾紙;空氣壓力泵;0.22um微孔濾膜;高效液相色譜儀:具有365nm激發(fā)波長和460nm發(fā)射波長的熒光檢測器;UVE光化學(xué)柱后衍生器;色譜柱:C18柱(柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,填料直徑5um)。1 提?。悍Q取5g±0.01g樣品加入1g氯化鈉與25ml提取液(80%乙腈-水溶液)渦旋5min混勻;然后高速均質(zhì)(≥10,000r/min)1min,或搖床(200r/min~300r/min)劇烈振蕩20min后再3500r/ min離心10min;取10ml上清液加入40ml蒸餾水稀釋,在用微纖維濾紙過濾,并收集濾液作為上樣液。取25ml上樣液過免疫親和柱凈化。2 凈化:將免疫親和柱連接于20ml或50ml注射器下,并于氣控操作架相連接,將上述的提取液注入注射器中,調(diào)節(jié)氣泵開關(guān),使液體以1~2滴/秒的速度流出,待液體排干后,用10ml去離子水洗滌2次,流速2~3滴/秒;對于顏色附著比較深的樣品,先用1%吐溫-20水溶液洗滌10ml,再用去離子水洗滌10ml, 流速2~3滴/秒;待離子水排完后,用氣泵將殘留的水抽干;再用2ml甲醇進行洗脫,前1ml甲醇加入免疫親和柱后,蓋上小蓋保持5分鐘,然后以流速1滴/秒洗脫,待流完后再加入后1ml甲醇以流速1滴/秒洗脫,最后用氣泵抽干,合并2次洗脫液;洗脫液用0.22um微孔濾膜過濾后上機待測。

    測定 1 高效液相色譜條件:流動相:水/甲醇/乙腈(55/30/15,v/v)、流速:1.2ml/min、進樣量:10~100ul、柱溫:36℃、色譜柱:C18柱(柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,填料直徑5um)、熒光檢測器:具有365nm激發(fā)波長和460nm發(fā)射波長(使用柱后光化學(xué)衍生系統(tǒng))。2 定量:用進樣器吸取樣品洗脫液和黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀,在上述色譜條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品洗脫液的響應(yīng)值(峰高或峰面積),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,用外標(biāo)法定量。3 空白試驗 :除不稱取樣品外,均按上述測定條件和步驟進行。4 結(jié)果計算: 樣中黃曲霉毒素B1的含量(X)以微克每千克表示,按下式計算:

    式中:X—試樣中黃曲霉毒素B1的含量,單位微克每千克(ug/kg);C1—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣液中黃曲霉毒素B1的含量,ng;C0—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試劑空白中黃曲霉毒素B1的含量,ng;V—樣液最終定容體積,mL;V1—樣液的進樣體積,uL;f—稀釋倍數(shù);m—樣品質(zhì)量g

    4.線性:B1含量在0.003ng~0.048ng范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線線性在0.9998以上。

    線性數(shù)據(jù)表

    5.回收率:回收率在105~116之間

    醬油及加標(biāo)測定數(shù)據(jù)(本底都為未檢出)

    該方法線性好、回收率高,而且檢測過程簡便快捷,比起GB/T 5009.23,該方法省時省力檢測的準(zhǔn)確度更高,適用于檢測醬油中黃曲霉毒素B1的含量。

    《食品中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的測定》GB/T 5009.23-2006

    □安徽省淮南市食品藥品檢驗中心 秦加松

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