不同離心力分離動物血清對抗體效價(jià)檢測結(jié)果的影響

潘 懿

（百色市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 百色 533300）

不同離心力分離動物血清對抗體效價(jià)檢測結(jié)果的影響

潘 懿

（百色市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 百色 533300）

為探不同離心力（轉(zhuǎn)速）對抗體效價(jià)檢測結(jié)果的影響，文章中以檢測雞新城疫抗體效價(jià)為驗(yàn)證試驗(yàn)，用100份雞血液經(jīng)不同離心力分離血清開展檢測，結(jié)果表明抗體效價(jià)檢測結(jié)果和離心力（轉(zhuǎn)速）相關(guān)性不大，不同離心力分離動物血清對抗體效價(jià)檢測結(jié)果影響不顯著。

離心力；血清；抗體效價(jià)；相關(guān)性；顯著

動物血清的質(zhì)量好壞直接影響實(shí)驗(yàn)室抗體效價(jià)檢測結(jié)果。目前分離血清常用的方法有兩種，第一種是自然析出法，即將采集血液樣品靜置自然環(huán)境中，讓其凝固后自然析出血清；第二種方法是離心法，借助離心機(jī)的離心力在血液凝固后離心分離出血清。在實(shí)際工作中因時(shí)間、工作環(huán)境所限，通常使用第二種方法分離血清。該方法省時(shí)省力，血清感觀質(zhì)量好，但對實(shí)驗(yàn)室抗體效價(jià)檢測結(jié)果是否有影響未知。為了保證實(shí)驗(yàn)室抗體效價(jià)檢測結(jié)果的科學(xué)性、準(zhǔn)確性，筆者以檢測雞新城疫抗體效價(jià)開展驗(yàn)證試驗(yàn)，探討不同離心力分離的血清抗體效價(jià)檢測結(jié)果的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、材料與試劑

高速離心機(jī)（珠海黑馬醫(yī)學(xué)有限公司 TGL-16R型）。新城疫抗原（北京海淀中海動物保健科技公司，批號：201503，有效期至：2015.11.03）。雞1%紅血球：采集 SPF雞血全加20倍PBS液2000rpm離心5min，異去上清液，反復(fù)洗5次，第6次2500rpm離心10min，異去上清液，吸1ml紅血球移加到99ml PBS液。

1.2 血清的采集和處理

準(zhǔn)備10只經(jīng)雞新城疫免疫后30日的雞，編號分別為A-J。每只雞采集10ml 全血，分成10等份，每份1ml，分別編號為A1-A10；第2只雞血液編號分別為B1-B10，如此類推，共分成100份雞全血。每只雞第1管全血編號分別為A1、B1....JI采用自然析出法分離血清，其余管的血液用不同離心力離心（0～15010g）5min分離血清，分離所得血清透明清亮、無污染。

1.3 檢測方法

按《新城疫血凝和血凝抑制試驗(yàn)》GB/T16550-2008［1］開展檢測。結(jié)果判定：在對照、陰、陽性都成立的情況下，將血凝抑制板傾斜45°，以完全流淚最大稀釋度為該血清的血凝抑制滴度。

1.4 數(shù)據(jù)處理方法

（1）用離心力與轉(zhuǎn)速換算公式計(jì)算出離心力，公式：離心力RCF=0.00001118×R ×N2RCF表示離心力，單位：xg；R 表示離心機(jī)半徑，單位：cm；N表示轉(zhuǎn)速，單位：轉(zhuǎn)/分鐘單位：rpm

（2）檢測結(jié)果數(shù)據(jù)使用配對設(shè)計(jì)兩樣品平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)［2］

2 結(jié)果與分析

（1）檢測結(jié)果

陰性、陽性對照都成立。100份全血用不同離力（0～11028g）分離所得血清經(jīng)新城疫血凝抑制試驗(yàn)檢測抗體效價(jià)，每份樣品檢測兩次取平均值，檢測結(jié)果見表1。

表1 新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)檢測結(jié)果單位：log2

（2）檢測結(jié)果數(shù)據(jù)使用配對設(shè)計(jì)兩樣品平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)｜t｜結(jié)果，見表2。

表2 配對設(shè)計(jì)兩樣品平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)｜t｜結(jié)果

（3）本次檢測陰、陽對照成立。同份血清經(jīng)新城疫血凝和血凝抑制試驗(yàn)平行檢測兩次，抗體效價(jià)檢測結(jié)果部分存在微小波動，波動范圍在一個(gè)滴度內(nèi)，符合血凝和血凝抑制試驗(yàn)檢測要求。

（4）試驗(yàn)設(shè)計(jì)離心力和轉(zhuǎn)速跨度大。從表1來看，血清組A1-J1離心力及轉(zhuǎn)速勻是0，A2-J2組離心力306xg，轉(zhuǎn)速2000rpm，A10-J10組離心力達(dá)11028xg，轉(zhuǎn)速高達(dá)12000rpm，A10-J10組離心力是A2-J2的36倍，轉(zhuǎn)速是6倍。

（5）檢測結(jié)果運(yùn)用配對設(shè)計(jì)兩樣品平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果差異不顯著。血清按離心力（轉(zhuǎn)速）小到大（慢到快）分成10個(gè)組（A1-J1....A10-J10），運(yùn)用配對設(shè)計(jì)兩樣品平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)計(jì)算出各組之間｜t｜值。查臨界t0.05（9）=2.262，從表2的計(jì)算結(jié)果可以看出表中全部的｜t｜＜2.262，P＞0.05，表明同只雞的血液經(jīng)不同離心力分離出來的血清抗體效價(jià)檢測結(jié)果差異不顯著，不同離心力對血清抗體效價(jià)檢測結(jié)果影響不大。

（6）離心力的大小不直接影響到抗體效價(jià)檢測結(jié)果。有人認(rèn)為在有離心機(jī)血清分離過程中，離心力（轉(zhuǎn)速）越大（越快），抗體成分在離心力作用下沉降速度越快，導(dǎo)致檢測結(jié)果抗體效價(jià)變低，離心力（轉(zhuǎn)速）與抗體效價(jià)呈負(fù)相關(guān)。經(jīng)過本次對雞新城疫抗體效價(jià)檢測的驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明雞血清中的抗體效價(jià)并沒有因離心力（轉(zhuǎn)速）的改變而改變，抗體效價(jià)檢測結(jié)果和離心力（轉(zhuǎn)速）相關(guān)性不明顯。

（7）本次驗(yàn)證試驗(yàn)每份樣品勻開展平行檢測。為了使本次驗(yàn)證試驗(yàn)數(shù)據(jù)更加科學(xué)、客觀、準(zhǔn)確，每份樣品進(jìn)行了平行檢測，盡量減少實(shí)驗(yàn)操作誤差。

［1］ GB/T16550-2008.新城疫檢疫技術(shù)規(guī)范（血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)）［S］.北京：中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，2008.

［2］ 明道緒，王欽德，耿社民，等.生物統(tǒng)計(jì)附試驗(yàn)設(shè)計(jì)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：75-89.

The test results of different centrifugal force to separate animal serum antibody titer

To explore the result of influence of different centrifugal force （speed） against the titer detection， the test to detect NDV antibody titer .using the100 chicken blood by different centrifugal force to separate serum carry out inspection. The results showed that antibody titer has little relevance with the centrifugal force （speed）， the result of influence of different centrifugal force to separate of animal serum on the antibody titer is not significant.

Centrifugal force； blood serum； antibody titer； relativity； conspicuousness

S851

A

1008-1151（2016）01-0088-02

2015-12-11

潘懿（1974-），男，廣西田林人，百色市動物疫病預(yù)防控制中心高級獸醫(yī)師。