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    五氯柳胺口服混懸劑的制備及其含量測定

    2016-11-08 01:17:06張吉麗司鴻飛尚曉飛周緒正張繼瑜
    畜牧獸醫(yī)學(xué)報 2016年10期
    關(guān)鍵詞:卡波姆懸劑亞硫酸鈉

    張吉麗,李 冰,司鴻飛,郭 肖,朱 陣,尚曉飛,周緒正,張繼瑜

    (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,農(nóng)業(yè)部獸藥創(chuàng)制重點實驗室,蘭州 730050)

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    五氯柳胺口服混懸劑的制備及其含量測定

    張吉麗,李冰,司鴻飛,郭肖,朱陣,尚曉飛,周緒正,張繼瑜*

    (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,農(nóng)業(yè)部獸藥創(chuàng)制重點實驗室,蘭州 730050)

    研究的目的是制備五氯柳胺混懸劑,研究其理化性質(zhì)并建立含量測定方法。通過單因素篩選及二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計,以沉降體積比和再分散性為考察因素,優(yōu)化處方制備五氯柳胺混懸劑,用透射電子顯微鏡、激光粒度測定儀對其形態(tài)和粒徑進(jìn)行測定,考察制劑的穩(wěn)定性,建立測定含量的高效液相色譜方法。五氯柳胺混懸劑每100 mL中含五氯柳胺 3.2 g,卡波姆974p 0.2 g,十二烷基硫酸鈉 0.3 g,對羥基苯甲酸甲酯0.02 g,焦亞硫酸鈉0.4 g?;鞈覄┏两刁w積比為0.999,再分散性良好。五氯柳胺在18~100 μg·mL-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。制備的五氯柳胺混懸劑工藝簡單,物理性狀良好,穩(wěn)定性和分散性好,質(zhì)量可控。

    五氯柳胺混懸劑;二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計;含量測定;HPLC

    肝片吸蟲病(fascioliasis hepatica)是由肝片吸蟲引起的食源性人畜共患病,該病遍及歐洲、亞洲、非洲、美洲和大洋洲等區(qū)域[1],引起動物消瘦、貧血、使役能力下降和生產(chǎn)性能降低,嚴(yán)重阻礙了畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,同時對食品安全、公共衛(wèi)生安全和環(huán)境生態(tài)安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。

    臨床對肝片吸蟲病的防治主要依靠化學(xué)藥物。在疫苗預(yù)防方面,雖然肝片吸蟲重組卡介苗的研制取得了明顯進(jìn)展,但距離批量化生產(chǎn)和大面積推廣還有很大差距。常用于防治肝片吸蟲感染的化學(xué)藥物有三氯苯達(dá)唑(triclabendazole)、阿苯達(dá)唑(albendazole)、氯舒隆(clorsulon)和五氯柳胺(oxyclozanide)等[4-5],其中三氯苯達(dá)唑、阿苯達(dá)唑和氯舒隆等由于在臨床長期大面積使用已產(chǎn)生了耐藥性,導(dǎo)致臨床療效大大降低[6-7]。五氯柳胺作為水楊酰苯胺類化學(xué)合成抗蠕蟲藥物,主要用于防治牛、羊等動物的吸蟲病、絳蟲病和蛔蟲病,對線蟲也有一定的治療效果,其通過抑制蟲體線粒體中氧化磷酸化過程從而阻礙三磷酸腺苷的生成,使蟲體因能量耗盡而死亡[8]。該藥的驅(qū)蟲效率高、毒性小、安全范圍大。國外大量的臨床應(yīng)用證實了五氯柳胺對蠕蟲感染具有良好的治療效果,特別是對肝片吸蟲的感染效果十分突出[9-11]。至今為止,該藥在歐、美和非洲等地區(qū)仍廣泛應(yīng)用,且未出現(xiàn)耐藥性。

    五氯柳胺在國內(nèi)尚未開發(fā)為獸藥產(chǎn)品,基于其優(yōu)良的藥效性能,為滿足我國對獸醫(yī)吸蟲病防控的巨大臨床需求,作者開展了抗牛、羊吸蟲病五氯柳胺新制劑的研制。本研究通過單因素篩選以及二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計方法建立和優(yōu)化制劑處方,制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的五氯柳胺口服混懸劑,并對其物理性狀、再分散性、沉降體積比等藥學(xué)特性進(jìn)行了研究,建立了藥物有效成分含量測定的高效液相色譜方法,為五氯柳胺新藥開發(fā)和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1主要材料

    1.1.1主要儀器ME403型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);KQ-600DE數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器限公司);D2010W電動攪拌器(上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司);UPT-Ⅱ-40L優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)(上海優(yōu)普實業(yè)有限公司);FE20實驗室pH計(梅特勒-托利多儀器有限公司);ZetasizerNano ZS ZEN 3600激光動態(tài)散射儀(英國Malverninstrument公司);TECNAL G2型場發(fā)射高分辨透射電子顯微鏡(美國FEI公司);Waters2695 高效液相色譜儀(美國Waters公司);Waters2489 紫外檢測器(美國Waters公司);WD-A藥物穩(wěn)定性檢測儀(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器有限公司);針筒式微孔濾膜過濾器(孔徑0.22 μm,廣州優(yōu)瓦儀器有限公司);Hypersil ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm,大連依利特分析儀器有限公司)。

    1.1.2主要試劑五氯柳胺原料藥(常州亞邦齊暉醫(yī)藥化工有限公司,批號:RD1506001,含量:99%以上);五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品(美國TSZ公司,批號:T121-043);十二烷基硫酸鈉(化學(xué)純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);卡波姆974p(上海阿拉丁生化科技股份有限公司);對羥基苯甲酸甲酯(化學(xué)純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);焦亞硫酸鈉(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);甲醇(色譜純,美國費舍爾公司);磷酸(色譜純,Sigma公司);超純水和純水為作者實驗室自制。

    1.2試驗方法

    1.2.1混懸劑的制備將五氯柳胺、焦亞硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、卡波姆 974p等原料藥和輔料分別用研缽研磨,過篩,備用。將卡波姆 974p、焦亞硫酸鈉等輔料成分分別緩慢加入裝有蒸餾水的燒杯中,調(diào)動攪拌機(jī)轉(zhuǎn)速,攪拌1.5 h,得溶液A;另將十二烷基硫酸鈉和五氯柳胺加入盛有蒸餾水的燒杯中,混勻,得到溶液B;將溶液B緩慢加入到正在攪拌的溶液A中,加蒸餾水定容;攪拌1.5 h,即得[12]。

    1.2.2評價指標(biāo)及測定依據(jù)《中國獸藥典》2010年版對口服混懸劑的質(zhì)量評價要求,以沉降體積比和再分散性作為主要評價指標(biāo)[13]并進(jìn)行測定。

    1.2.3輔料及其用量篩選主要輔料中,選擇卡波姆 974p作為助懸劑,十二烷基硫酸鈉作為潤濕劑,焦亞硫酸鈉作為抗氧化劑,通過單因素試驗確定各種輔料的最佳用量范圍。采用SAS軟件中“GLM ”程序分析輔料各成分的顯著性。

    以單因素試驗中顯著性因素作為主要考察指標(biāo),選用二次正交回歸旋轉(zhuǎn)設(shè)計對處方進(jìn)行優(yōu)化,各因素水平見表1,并通過SAS軟件進(jìn)行試驗設(shè)計。

    以沉降體積比及再分散性作為評價指標(biāo),計算Y值進(jìn)行綜合評價。計算方法如下:

    沉降體積比(F)測定:將各處方混懸劑置于50 mL的具塞試管中,放置,記錄初始高度H0,分別在3 h、1 d、3 d和7 d進(jìn)行觀察,記錄沉降后體積H,以H/H0為沉降體積比數(shù)值。

    再分散性次數(shù)(N)測定:將各種處方混懸劑的具塞試管倒轉(zhuǎn)180°,測定恢復(fù)到初制混懸狀態(tài)時所需翻轉(zhuǎn)的次數(shù)即為再分散性次數(shù)。

    表1二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計各因素水平表

    Table 1The levels of factors in the quadratic regression orthogonal rotational combination design

    因素Factors水平Levels卡波姆974pCarbomer974p0.10.180.30.420.5十二烷基硫酸鈉Sodiumdodecylsulfate0.10.180.30.420.5焦亞硫酸鈉Sodiumpyrosulfite0.010.210.5050.81.0

    Y值計算方程:

    Y為沉降體積比與再分散性倒數(shù)之和,值越大則混懸劑效果越好。

    1.2.4驗證性試驗按照篩選的最優(yōu)處方制備3批五氯柳胺混懸劑樣品,測定粒徑大小及分布、再分散性、沉降體積比、外觀顏色和pH等指標(biāo)。

    1.2.4.1粒徑大小及分布:測定方法如下。

    粒徑大小測定:采用激光動態(tài)散射儀對五氯柳胺混懸劑進(jìn)行粒徑的測定。將制備好的混懸劑進(jìn)行100倍稀釋,超聲5 min,在激光粒度儀中進(jìn)樣檢測,每個樣品測定3次,記錄平均粒徑的大小及分布范圍。

    形態(tài)分布測定:將三批樣品用超純水稀釋10倍,負(fù)染后,自然揮干,置于透射電鏡下觀察,在50和100 nm標(biāo)尺下檢測樣品的形態(tài)分布。

    1.2.4.2再分散性及沉降體積比:測定方法同“1.2.3”中所述。

    1.2.4.3外觀顏色和pH:觀察并記錄五氯柳胺混懸劑的外觀色澤,用酸度計進(jìn)行pH測定。

    1.2.5含量測定方法

    1.2.5.1色譜分析條件:色譜柱為Hypersil ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為甲醇:0.1%磷酸水(80∶20);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:300 nm;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。

    1.2.5.2方法專屬性試驗:將甲醇配制的五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液,五氯柳胺混懸劑供試品溶液和空白混懸劑樣品溶液,分別經(jīng)0.22 μm微孔濾器過濾,注入液相色譜儀,依次進(jìn)樣測定。

    1.2.5.3線性考察:精密稱取五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg,置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容,配制成100 μg·mL-1的五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品母液,待用。采用梯度稀釋法,取標(biāo)準(zhǔn)品母液配制成質(zhì)量濃度為100、60、45、36、18 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,精確吸取20 μL進(jìn)樣,記錄峰面積。以五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積為縱坐標(biāo)Y,以五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo),繪制峰面積(Y)-質(zhì)量濃度(C)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程[14-15]。

    1.2.5.4回收率試驗:精密稱取五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解,配制成30(低)、60(中)、80 μg·mL-1(高)三個質(zhì)量濃度的對照品溶液,每份溶液分別進(jìn)樣3次,測定每個樣品的實測質(zhì)量濃度。根據(jù)實測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的比值,計算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

    1.2.5.5精密度試驗:精密稱取五氯柳胺標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇配制成30(低)、60(中)、80 μg·mL-1(高)三個質(zhì)量濃度的對照品溶液,分別考察日內(nèi)精密度和日間精密度。

    1.2.5.6重復(fù)性試驗:按供試品溶液制備方法,配制供試品溶液5份,并按上述色譜條件,精密吸取各樣品溶液10 μL進(jìn)樣,記錄峰面積,計算含量及其RSD值[16]。

    1.2.5.7樣品含量測定:分別精密吸取三批五氯柳胺混懸劑樣品(含五氯柳胺32 mg·mL-1)各0.2 mL置于100 mL的容量瓶中,用甲醇稀釋并定容,經(jīng)0.22 μm微孔濾器過濾,注入液相色譜儀,記錄峰面積,計算含量及RSD值。

    1.2.6混懸劑的穩(wěn)定性考察為了對混懸劑的穩(wěn)定性進(jìn)行評價,試驗中進(jìn)行了為期半年的短期穩(wěn)定性考察和相關(guān)試驗,內(nèi)容包括加速試驗和強(qiáng)光、高溫條件下的影響因素試驗。

    1.2.6.1加速試驗:將3批樣品在市售包裝條件下,放置于恒溫恒濕試驗箱中,在溫度40 ℃±2 ℃、相對濕度75%±5%的條件下進(jìn)行6個月的穩(wěn)定性考察,分別于第0個月、第1個月、第2個月、第3個月、第6個月進(jìn)行外觀性狀、再分散性和沉降體積比考察,測定pH及含量。

    1.2.6.2影響因素試驗:包括強(qiáng)光照射試驗和高溫試驗。

    強(qiáng)光照射試驗:將3批樣品置于照度4 500 lx±500 lx的光照箱中放置10 d,分別于第0天、第5天和第10天取樣分析。與第0天比較,觀察外觀性狀,考察沉降體積比、再分散性、pH等指標(biāo)的變化,并進(jìn)行含量測定。

    高溫試驗:將3批樣品在60 ℃下放置10 d,分別于第0天、第5天和第10天取樣分析,與第0天比較,檢測指標(biāo)同上所述。

    2 結(jié) 果

    2.1二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計試驗

    通過單因素篩選各輔料的最佳用量范圍,應(yīng)用SAS軟件對各因素的顯著性進(jìn)行分析,結(jié)果表明,卡波姆 974p、十二烷基硫酸鈉及焦亞硫酸鈉三種輔料對五氯柳胺混懸劑的穩(wěn)定性影響極顯著。

    根據(jù)對沉降體積比與再分散性指標(biāo)的測定,計算Y值的評價結(jié)果見表2。二次回歸正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計試驗的結(jié)果如圖1所示,其中,圖A為當(dāng)十二烷基硫酸鈉固定時,卡波姆 974p與焦亞硫酸鈉對混懸劑穩(wěn)定性的影響;圖B為當(dāng)焦亞硫酸鈉固定時,卡波姆 974p與十二烷基硫酸鈉對混懸劑穩(wěn)定性的影響;圖C為卡波姆974p固定時,焦亞硫酸鈉與十二烷基硫酸鈉對混懸劑穩(wěn)定性的影響。

    表2二次回歸旋轉(zhuǎn)正交設(shè)計試驗結(jié)果

    Table 2The result of the quadratic regression orthogonal rotational combination design test

    試驗次數(shù)Testtimes因素Factors卡波姆974pCarbomer十二烷基硫酸鈉Sodiumdodecylsulfate焦亞硫酸鈉SodiumpyrosulfiteY值ThevalueofY10.1800.1800.2101.02720.1800.1800.8000.98630.1800.4200.2101.57940.1800.4200.8001.49550.4200.1800.2100.83960.4200.1800.8001.45570.4200.4200.2101.99980.4200.4200.8001.99990.1000.3000.5051.323100.5000.3000.5051.735110.3000.1000.5050.912120.3000.5000.5051.486130.3000.3000.0101.500140.3000.3001.0001.582150.3000.3000.5051.590160.3000.3000.5051.350170.3000.3000.5051.480180.3000.3000.5051.331190.3000.3000.5051.596200.3000.3000.5051.112210.3000.3000.5051.577220.3000.3000.5051.484230.3000.3000.5051.053240.3000.3000.5051.572250.3000.3000.5051.041

    A.卡波姆 974p與焦亞硫酸鈉的濃度對五氯柳胺混懸劑穩(wěn)定性的響應(yīng)面;B.卡波姆 974p與十二烷基硫酸鈉的濃度對五氯柳胺混懸劑穩(wěn)定性的響應(yīng)面;C.十二烷基硫酸鈉與焦亞硫酸鈉的濃度對五氯柳胺混懸劑穩(wěn)定性的響應(yīng)面A.Response surface of carbomer 974p and sodium pyrosulfite on the stable of oxyclozanide suspension;B.Response surface of carbomer 974p and sodium dodecyl sulfate concentration on the stable of oxyclozanide suspension;C.Response surface of sodium pyrosulfite and sodium dodecyl sulfate concentration on the stable of oxyclozanide suspension圖1 SAS分析二次回歸旋轉(zhuǎn)正交設(shè)計的響應(yīng)面結(jié)果Fig.1 The response surface of the quadratic regression orthogonal rotational combination design test by SAS analysis

    通過對響應(yīng)面的SAS軟件分析得到一個駐點如表3所示,由于此駐點是一個鞍點,因此作者對其進(jìn)行了嶺分析,找到了符合實際情況的最大值即:Y=1.999 943,此時,卡波姆 974p最優(yōu)值為2.0 mg·mL-1,十二烷基硫酸鈉最優(yōu)值為3.0 mg·mL-1,焦亞硫酸鈉最優(yōu)值為4.0 mg·mL-1。

    試驗得到的最優(yōu)處方:以100 mL計,當(dāng)卡波姆 974p為0.2 g、焦亞硫酸鈉為0.4 g、十二烷基硫酸鈉為0.3 g、對羥基苯甲酸甲酯為0.02 g時,沉降體積比最大為0.999 8,接近于1,再分散性最好。

    2.2驗證試驗

    2.2.1粒徑大小及分布結(jié)果根據(jù)試驗優(yōu)化后得到的處方,分別配制3批五氯柳胺的混懸劑,測定粒徑大小及分布如圖2所示,A、B、C為三批樣品的粒徑分布圖,粒徑大小分別為791、767和713 nm。

    圖2 混懸劑粒徑分布Fig.2 The particle distribution of suspension

    在透射電鏡下,對混懸劑的稀釋液進(jìn)行檢查,圖3表示在標(biāo)尺為50和100 nm時的粒徑分布,可見粒徑分布較集中,大小適宜。

    表3SAS分析二次回歸旋轉(zhuǎn)正交設(shè)計的駐點結(jié)果

    Table 3The stationary point in the quadratic regression orthogonal rotational combination design test by SAS analysis

    因素Factor臨界值Criticalvalue編碼Coded非編碼Uncoded卡波姆974pCarbomer974p-0.962517-0.949736十二烷基硫酸鈉Sodiumdodecylsulfate0.2616980.691937焦亞硫酸鈉Sodiumpyrosulfite0.1145650.192698在駐點的預(yù)測值為1.476144Predictedvalueatstationarypoint:1.476144

    圖3 混懸劑電鏡下形態(tài)分布Fig.3 The electron micrograph of suspension morphology distribution

    2.2.2再分散性及沉降體積比測定結(jié)果三批樣品放置一個月后,測定沉降體積比及再分散性,結(jié)果如表4所示,沉降體積比均值為0.999 3,再分散性較好。

    2.2.3外觀顏色觀察和pH測定結(jié)果本試驗中制得的五氯柳胺混懸劑為乳白色均勻、渾濁、無丁達(dá)爾效應(yīng)的混懸液,靜止較長時間可能出現(xiàn)分層現(xiàn)象,上清液無色透明,下層為乳白色的沉降物,但輕輕振搖后重新恢復(fù)均勻體系。測定三批樣品的pH分別為5.98、6.03和6.08,平均pH為6.03。

    表4沉降體積比及再分散性結(jié)果

    Table 4The result of sedmientation rate and redispersion

    樣品Thesamples沉降體積比Sedmientationrate再分散性振搖次數(shù)Theshakefrequencyofredispersion10.999220.9991311

    由以上結(jié)果可知,優(yōu)化后的處方粒徑大小適宜,粒徑均勻,沉降體積比較大,再分散性良好,pH值較為穩(wěn)定,符合2010年版《中國獸藥典》中關(guān)于混懸劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

    2.3含量測定

    2.3.1專屬性考察由圖4結(jié)果可見,空白的混懸劑溶劑對五氯柳胺的含量測定無干擾,該方法專屬性強(qiáng)。

    圖4 五氯柳胺含量的色譜測定Fig.4 The content measurementchromatogram of oxyclozanide

    2.3.2線性考察得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5,線性回歸方程為:Y=24 942x-113 147(r2=0.999 3),表明五氯柳胺在18~100 μg·mL-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與對應(yīng)峰面積的線性關(guān)系良好。

    2.3.3回收率與精密度五氯柳胺的平均回收率為99.37%±0.14%,RSD為0.14%(表5),表明該方法準(zhǔn)確度較高。

    五氯柳胺的日內(nèi)精密度的RSD值為0.37%,日間精密度的RSD值為0.64%,表明該方法的精密度良好。

    2.3.4重復(fù)性取同批五氯柳胺混懸劑樣品5份,測定五氯柳胺混懸劑的含量RSD值為0.67%,表明該方法的重復(fù)性良好。

    2.3.5樣品含量測定將三批樣品稀釋液分別進(jìn)樣20 μL,測定3次,記錄峰面積并計算實測值與理論值的比值,三批樣品的平均含量為標(biāo)示量的96.52%±0.47%,RSD為0.47%,如表6。

    圖5 五氯柳胺峰面積-質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 The peak area-concentration standard curve of oxyzanide

    表5五氯柳胺混懸劑回收率試驗結(jié)果(n=9)

    Table 5The recovery test results of oxyclozanide oral suspension

    樣品質(zhì)量濃度/(μg·mL-1)Thesampleconcentration實測質(zhì)量濃度/(μg·mL-1)Theactualconcentration回收率/%Therecoveryrate平均回收率(x-±s)/%TheaveragerecoveryrateRSD/%3029.3597.826059.7199.5199.37±0.150.158080.61100.77

    表6含量測定結(jié)果

    Table 6The result of content determination

    樣品Thesample質(zhì)量濃度/(μg·mL-1)Concentration標(biāo)示量含量/%Labeledamountofcontent平均標(biāo)示量含量(x-±s)/%TheaveragelabeledamountofcontentRSD/%61.7296.44161.3895.9061.4195.9562.1097.04262.1397.0896.52±0.470.4761.8996.7061.4996.08361.8596.6461.9996.86

    2.4穩(wěn)定性試驗

    2.4.1加速試驗在加速條件下,檢測五氯柳胺混懸劑三批樣品的外觀性狀、含量、pH、再分散性和沉降體積比都無明顯變化。說明在市售包裝下的五氯柳胺混懸劑在加速條件下性質(zhì)穩(wěn)定。檢測結(jié)果見表7所示。

    2.4.2影響因素試驗在高溫、強(qiáng)光照射條件下,五氯柳胺混懸劑的外觀性狀、含量、pH 值、再分散性和沉降體積比幾乎沒有變化,說明五氯柳胺混懸劑對熱、光很穩(wěn)定。檢測結(jié)果見表8所示。

    表7加速試驗結(jié)果

    Table 7The result of accelerated test

    項目Project常態(tài)下各項指標(biāo)Theindicatorsundernormalcondition第0個月Month0第1個月Month1第2個月Month2第3個月Month3第6個月Month6外觀性狀A(yù)ppearance乳白色、均勻、渾濁,靜止后可能出現(xiàn)分層,上層為澄清透明,下層為乳白色沉降物同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層pHpHvalue5.5~6.36.015.935.885.995.865.906.025.915.956.055.886.036.035.925.99沉降體積比Sedimentationvolumeratio0.9以上0.999110.9980.9990.9980.9830.9920.9890.9790.9820.9810.9730.9790.974再分散性Redispersibility輕輕振搖即恢復(fù)均勻狀態(tài)111111111211222含量Content95%~105%97.08%96.73%96.89%97.10%96.07%96.14%96.92%96.11%95.97%96.57%95.83%95.68%96.63%95.67%95.49%

    表8高溫、強(qiáng)光照射試驗結(jié)果

    Table 8The result of high temperatures test and strong light test

    項目Project常態(tài)下各項目指標(biāo)Theindicatorsundernormalcondition高溫試驗Hightemperaturestest強(qiáng)光照射試驗Stronglighttest第0天Day0第5天Day5第10天Day10第0天Day0第5天Day5第10天Day10外觀性狀A(yù)ppearance乳白色、均勻、渾濁,靜止后可能出現(xiàn)分層,上層為澄清透明,下層為乳白色沉降物同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層同上所述,出現(xiàn)分層pHpHvalue5.5~6.35.985.886.035.945.855.995.975.836.015.885.996.095.935.956.035.875.986.07沉降體積比Sedimenta-tionvolumeratio0.9以上1110.9990.9990.9980.9970.9980.9981110.9990.9980.9990.9980.9950.997再分散性Redispers-ibility輕輕振搖即恢復(fù)均勻狀態(tài)111111111111111111含量Content95%~105%96.75%96.35%97.39%96.69%96.28%97.04%96.59%96.31%97.17%95.67%96.85%96.39%95.98%96.43%96.47%95.73%96.52%96.36%

    3 討 論

    據(jù)報道,在研藥物中難溶性藥物比例高達(dá)70%以上,因其溶解性大大限制了藥物的開發(fā)及應(yīng)用。在藥物制劑過程中,可以將不溶性藥物考慮制成混懸劑,使不溶性藥物粉粒分散在液體分散媒中形成的不均勻分散體系。混懸劑制備方法多樣,生產(chǎn)過程簡單,工業(yè)化大生產(chǎn)可行性強(qiáng)[17-19]。本研究制備的五氯柳胺口服混懸劑,由于藥物粒徑小,顆粒生物黏附性提高,與目前市售的抗寄生蟲藥物口服制劑如片劑、膠囊劑相比,五氯柳胺口服混懸劑的藥物吸收良好,顆粒分布均勻,在胃腸道中降低了食物對藥物吸收的影響,提高了難溶性藥物的口服生物利用度,且具有分布面積大、吸收快、用量精準(zhǔn)、給藥方便等優(yōu)點,該劑型在獸醫(yī)臨床上備受青睞。

    通過篩選,最佳處方工藝中各輔料的用量均符合《藥用輔料手冊》中關(guān)于輔料用量的相關(guān)規(guī)定[20]以及《獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編》中關(guān)于獸用化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則[21]。在處方工藝中,為了增加混懸劑的物理穩(wěn)定性,制備時需加入能使混懸劑穩(wěn)定的穩(wěn)定劑,包括助懸劑、潤濕劑等。本試驗中選擇卡波姆 974p作為助懸劑,使混懸劑的黏度適中,有助于藥物均勻分散,不易沉降和絮凝[22],且制成的混懸劑為假塑性流體[23],靜止時黏度較大,倒出時粘度較小,有利于臨床用藥,增加了五氯柳胺的動力學(xué)穩(wěn)定性。本試驗選用十二烷基硫酸鈉作為潤濕劑,它是一種陰離子型表面活性劑,它的加入改變了五氯柳胺與水相之間的表面張力,分散相的分散度大,使之形成均勻穩(wěn)定的分散體系。

    在制劑制備過程中,考慮到混懸劑具有動力學(xué)不穩(wěn)定性,粒徑的大小及分布直接影響其沉降速度,因此,本實驗采用研磨法,該法適用范圍廣,制備過程簡便,制備的混懸劑顆粒分布窄,混懸性能良好。采用該方法制備的五氯柳胺混懸劑外觀呈乳白色,均勻,渾濁,且無丁達(dá)爾效應(yīng),其沉降體積比、再分散性、粒徑分布、pH及含量測定等結(jié)果,均符合我國關(guān)于獸藥混懸劑的相關(guān)要求。

    本研究提供了一種制備工藝簡單、性質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可控、成本低廉、投藥方便的用于防治牛、羊肝片吸蟲病的五氯柳胺口服混懸劑,彌補(bǔ)了國內(nèi)五氯柳胺制劑的空白。在動物抗寄生蟲藥物混懸劑的研制與應(yīng)用方面,由于近年來我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)迅速向規(guī)?;较虬l(fā)展,臨床對藥物劑型的需求也在發(fā)生變化,傳統(tǒng)的片劑劑型由于給藥難度大,人力耗費以及劑量準(zhǔn)確性的等因素的影響,在臨床使用中帶來了一定的局限性。本研究對滿足獸醫(yī)臨床對五氯柳胺的需求、提升我國獸藥制劑水平和保障畜牧業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。

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    (編輯白永平)

    Preparation and Content Measurement of Oxyclozanide Oral Suspension

    ZHANG Ji-li,LI Bing,SI Hong-fei,GUO Xiao,ZHU Zhen,SHANG Xiao-fei,ZHOU Xu-zheng,ZHANG Ji-yu*

    (KeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceuticalDevelopmentofMinistryofAgriculture,LanzhouInstituteofHusbandryandPharmaceuticalSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Lanzhou730050,China)

    The study aimed to prepare oxyclozanide oral suspension and evaluate its physical and chemical properties,and establish an HPLC method for the determination of oxyclozanide.The sedimentation volume ratio and redispersibility were used as variable factors,the single factor experiment and the quadratic regression orthogonal rotational combination design were carried out to optimize the prescription.Then,the shape,size of oxyclozanide suspension was measured by transmission electron microscopylaser and particle size analyzer,and the content of oxyclozanide in suspension was determined by HPLC.The result showed that the suspension (100 mL) was consisted of 3.2 g oxyclozanide,0.2 g carbomer 974p,0.3 g sodium dodecyl sulfate sodium salt,0.02 g methyl 4-hydroxybenzoate and 0.4 g sodium pyrosulfite.With good redispersibility,the sedimentation volume ratio of oxyclozanide suspension was 0.999.Excellent line relationship was obtained in the range of 18-100 μg·mL-1(r2=0.999 3).The oxyclozanide suspension was successfully prepared with simple preparation process,good stability and well quality-controlled product.

    oxyclozanide suspension;quadratic regression orthogonal rotational combination design;determination of content;HPLC

    10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.021

    2016-02-01

    國家科技支撐計劃項目(2015BAD1101);國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(CAR-38)

    張吉麗(1992-),女,黑龍江大慶人,碩士生,主要從事動物抗寄生蟲藥研究,E-mail:zhangjlzjl@sina.com

    張繼瑜(1967-),E-mail: infzjy@sina.com

    S859.5

    A

    0366-6964(2016)10-2115-11

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