綿羊肌肉組織MyoG和PID1 基因的表達(dá)及其與肌內(nèi)脂肪含量的關(guān)系

欒兆進(jìn)，賀建寧，程　明，劉開東，曲緒仙，柳　楠*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島 266109；2.包頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，包頭 014013；3.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，青島 266121；4.山東省畜牧總站，濟(jì)南 250000)

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綿羊肌肉組織MyoG和PID1 基因的表達(dá)及其與肌內(nèi)脂肪含量的關(guān)系

欒兆進(jìn)1,2，賀建寧1，程明3，劉開東3，曲緒仙4，柳楠1*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島 266109；2.包頭市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，包頭 014013；3.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，青島 266121；4.山東省畜牧總站，濟(jì)南 250000)

本研究旨在探究綿羊不同部位肌肉MyoG和PID1基因mRNA的發(fā)育變化規(guī)律，分析MyoG和PID1 基因mRNA表達(dá)水平對肌內(nèi)脂肪沉積的影響。選取2、4、5、6 月齡敖漢細(xì)毛羊公羔和12月齡敖漢細(xì)毛羊成年公羊各5只，屠宰后取背最長肌和股二頭肌檢測肌內(nèi)脂肪(Intramuscular fat，IMF)含量，用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測兩個(gè)部位肌肉MyoG和PID1 mRNA 表達(dá)量，并進(jìn)一步分析表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪含量的關(guān)系。結(jié)果表明，2～5月齡時(shí)，背最長肌和股二頭肌的IMF含量均隨著月齡的增加而增加；而5～12月齡時(shí)則基本保持不變；同月齡背最長肌IMF 含量極顯著高于股二頭肌(P<0.01)。兩個(gè)部位肌肉MyoG和PID1 mRNA 表達(dá)的發(fā)育模式有所不同，具有組織特異性。背最長肌MyoG基因表達(dá)量5月齡最高(P<0.01)，PID1基因表達(dá)量6月齡最高(P<0.05)，均呈上升-下降趨勢；股二頭肌MyoG和PID1基因各月齡之間表達(dá)量均差異極顯著(P<0.01)，MyoG基因表達(dá)量隨著月齡增長呈上升-下降趨勢，PID1基因表達(dá)量大體呈下降-上升趨勢。同月齡MyoG和PID1 表達(dá)量存在組織差異。相關(guān)分析表明，MyoG和PID1 表達(dá)量與 IMF 含量呈不同程度正相關(guān)。綜上，MyoG基因表達(dá)對綿羊肌內(nèi)脂肪的沉積可能有正調(diào)控作用，而PID1基因表達(dá)可能對肌內(nèi)脂肪的沉積產(chǎn)生一定的影響。

肌內(nèi)脂肪；MyoG；PID1；表達(dá)規(guī)律；相關(guān)性

近年來，肥羔肉因其瘦肉率高、口感鮮嫩、營養(yǎng)價(jià)值高、膽固醇含量低等特點(diǎn)使得市場需求量不斷上升[1]，敖漢細(xì)毛羊因其適應(yīng)性強(qiáng)、抓膘快、繁殖率高等優(yōu)點(diǎn)比較適合肥羔生產(chǎn)，增加肥羔肉產(chǎn)量，以更好的適應(yīng)市場需求量。肌內(nèi)脂肪(Intramuscular fat，IMF)的沉積量在一定程度上決定了口感品質(zhì)[2]，若能在穩(wěn)定瘦肉比例的基礎(chǔ)上，適量提高IMF含量，可以有效的改善羊肉口感品質(zhì)，了解脂肪沉積機(jī)理及規(guī)律可為改善肉質(zhì)提供理論依據(jù)[3]，此領(lǐng)域的研究具有較好的實(shí)際意義[4]。研究表明，0～6月齡綿羊肌內(nèi)脂肪含量呈上升趨勢，12月齡基本維持與6月齡相同的水平[5]。

遺傳和環(huán)境因素的改變都會(huì)導(dǎo)致IMF沉積產(chǎn)生變化，其中遺傳因素的影響較大。利用分子生物學(xué)的標(biāo)記輔助選擇來研究調(diào)控IMF含量的主效基因，通過品種選育來提高IMF含量是改善肉質(zhì)的可行途徑之一[6]。肌細(xì)胞生成素(Myogenin，MyoG)基因調(diào)控成肌細(xì)胞的分化與融合，是調(diào)節(jié)骨骼肌發(fā)育的重要因子[7]，并參與骨骼肌損傷及修復(fù)過程[8]，雞Mrf4和MyoG基因共表達(dá)參與了骨骼肌細(xì)胞終末分化[9]；杜琛檢測到MyoG基因在成熟脂肪細(xì)胞中的表達(dá)量顯著高于前體脂肪細(xì)胞[10]，M.Bocian等發(fā)現(xiàn)豬MyoG基因?qū)﹄伢w脂肪沉積和肌肉增長有重要影響[11]，L.Zhu等研究證實(shí)MyoG基因極顯著影響肌內(nèi)脂肪含量[12]，相關(guān)研究表明MyoG啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化變化對脂肪沉積具有一定的調(diào)控作用[13]。磷酸酪氨酸互作結(jié)構(gòu)域1(Phosphotyrosine interaction domain containing1，PID1)基因通過引起線粒體功能障礙而導(dǎo)致與肥胖相關(guān)的胰島素抵抗使葡萄糖攝取降低，同時(shí)影響成熟脂肪細(xì)胞線粒體中的脂肪酸合成酶合成乙酰基來調(diào)控脂肪酸的合成，進(jìn)而對脂肪沉積產(chǎn)生促進(jìn)作用[14-16]。PID1基因在山羊內(nèi)臟和肌肉組織中均有不同程度表達(dá)，其中背最長肌的表達(dá)量在不同月齡間表現(xiàn)出發(fā)育特異性[17]。相關(guān)研究表明，PID1可能影響山羊和豬肌肉組織中IMF沉積[18-19]。綿羊MyoG和PID1基因的表達(dá)對IMF沉積是否產(chǎn)生影響鮮有報(bào)道。

本研究擬通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR對綿羊不同肌肉組織MyoG和PID1基因的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行研究，并分析其與IMF含量的關(guān)系，為尋找綿羊肉質(zhì)相關(guān)候選基因提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)羊來自青島奧特種羊場，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致，分別選擇2、4、5、6、12月齡的毛肉兼用型敖漢細(xì)毛羊各5只，現(xiàn)場屠宰，迅速采集背最長肌、股二頭肌組織樣，并立即置于液氮中，然后保存于-80 ℃冰箱，用于總RNA提取。另取背最長肌、股二頭肌樣各150 g，于-20 ℃保存，待測IMF含量。

1.2主要試劑

Tripure RNA Isolation Reagent，Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit，LightCycler?480 SYBR Green I Master購于Roche公司；瓊脂糖購于 Thermo scientific 公司；Dream Taq Green PCR Master Mix(2×) 購自天根生化科技(北京)有限公司。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1總RNA提取和cDNA第一鏈的合成取50 mg各組織樣加液氮充分研磨，采用Trizol法提取背最長肌、股二頭肌組織的總RNA，采用Eppendorf BioPhotometer Plus 分光光度計(jì)測量RNA濃度，并通過電泳檢測其完整性。反轉(zhuǎn)錄總RNA用量為1 μg，按照Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒上的操作進(jìn)行，合成的cDNA于-20 ℃貯存。

1.3.2引物設(shè)計(jì)參考GenBank綿羊MyoG和PID1基因序列(登錄號(hào)：GU550517和XM_012147826)，以3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)為內(nèi)參基因，采用Primer5.0設(shè)計(jì)特異性引物，由生工生物(上海)有限公司合成，引物序列信息見表1。

表1MyoG、PID1和GAPDH基因引物序列

Table 1MyoG，PID1 andGAPDHgenes primer sequence

基因Gene引物序列(5'-3')Primersequence產(chǎn)物大小/bpProductsize退火溫度/℃AnnealingtemperatureMyoGF:CGTGGGCGTGTAAGGTGTR:GGCGCTCTATGTACTGGATG19560PID1F:CATCTTCGCCTGGGTTTAR:GCCATCGCTCTTCATACTG16558GAPDHF:GTCGGAGTGAACGGATTTR:CTCTGCCTTAGCATCAGCC17460

1.3.3MyoG和PID1基因在綿羊肌肉組織的表達(dá)量測定采用羅氏LightCycler?480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行定量分析。每個(gè)待測樣本設(shè)3個(gè)重復(fù)，以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算分析數(shù)據(jù)。采用20 μL實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系，包含10 μL SYBR@Premix EX Taq TMⅡ(2×)、0.5 μL PCR Forward primer(10 μmol·L-1)、0.5 μL PCR Reverse primer(10 μmol·L-1)、1.0 μL DNA Templet(<100 ng)、8.0 μL dd H2O(滅菌蒸餾水)。

1.3.4IMF含量測定采用索氏抽提法測定背最長肌、股二頭肌中的IMF含量，每個(gè)樣品重復(fù)測量3次，按照公式：IMF含量(%)=(x-y)/a×100%計(jì)算IMF含量，式中x表示浸提前含烘干樣品濾紙包重，y表示浸提后含烘干樣品濾紙包重，a表示烘干樣品重。

1.3.5數(shù)據(jù)分析熒光定量的數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對表達(dá)處理，構(gòu)建單因素試驗(yàn)線性模型：

式中：yij表示mRNA的表達(dá)量，μ表示總體平均數(shù)，αi表示組織效應(yīng)，εij表示試驗(yàn)誤差。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan法對各年齡間mRNA表達(dá)量和IMF含量的主效應(yīng)進(jìn)行多重比較，采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)分別對同月齡兩塊肌肉基因表達(dá)量和肌內(nèi)脂肪含量進(jìn)行比較，采用Pearson分析方法對MyoG和PID1基因 mRNA表達(dá)量與IMF含量進(jìn)行相關(guān)分析。

2　結(jié)　果

2.1總RNA提取與檢測

提取組織總RNA后，經(jīng)Eppendorf BioPhotometer Plus 分光光度計(jì)檢測，D260 nm/OD280 nm為1.8～2.0，并用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，由圖1可見，28SRNA和18SRNA均較明亮，且兩條帶的比值接近2∶1，表明所提取的總RNA完整性較好，濃度和純度可以滿足后續(xù)試驗(yàn)要求。

M.DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～2.總RNAM.DL-2000 bp marker；1-2.Total RNA圖1　總RNA電泳圖Fig.1　The electrophoresis of total RNA

2.2MyoG和PID1基因普通PCR擴(kuò)增結(jié)果

由圖2可見，內(nèi)參基因GAPDH、目的基因MyoG和PID1的PCR電泳結(jié)果顯示，引物擴(kuò)增目的條帶單一，大小與設(shè)計(jì)的一致，說明引物可用。

M.DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)M.DL-1000 bp marker圖2　綿羊GAPDH(a)、MyoG(b)和PID1基因(c)擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2　PCR products of sheep GAPDH (a)，MyoG (b) and PID1(c) genes

2.3綿羊不同肌肉部位 IMF 含量的發(fā)育性變化

對5個(gè)時(shí)期綿羊肌肉IMF含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表2，2、4、5、6月齡敖漢細(xì)毛羊羔羊的背最長肌IMF含量逐漸增加，5、6、12月齡IMF含量極顯著高于2和4月齡(P<0.01)；其中2與4月齡差異不顯著，5、6、12月齡間差異不顯著(P>0.05)。股二頭肌IMF含量呈緩慢的上升趨勢，5月齡極顯著高于2和4月齡(P<0.01)，6和12月齡顯著高于2和4月齡(P<0.05)；其中2和4月齡差異不顯著(P>0.05)，5月齡與6和12月齡差異顯著(P<0.05)，6和12月齡差異不顯著(P>0.05)。從同月齡不同肌肉部位IMF含量來看，背最長肌IMF含量極顯著高于股二頭肌(P<0.01)。

表2綿羊背最長肌和股二頭肌IMF含量

Table 2IMF content oflongissimusdorsiandbicepsfemorisin sheep (Mean±SD)

月齡Monthsofage背最長肌IMF含量/%LongissimusdorsiIMFcontent股二頭肌IMF含量/%BicepsfemorisIMFcontent23.067±0.404Aa1.733±0.153Bb44.467±0.503Aa3.300±0.608Bb59.160±0.985Aa**8.650±0.208Bb**69.167±1.258Aa**7.200±0.624Bb*129.163±0.777Aa**6.967±0.764Bb*

同一月齡不同部位間的差異用字母表示：不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。**.表示同部位不同月齡間差異極顯著(P<0.01)；*.表示同部位不同月齡間差異顯著(P<0.05)

In different parts of muscles at the same age，different lowercase letters means significant difference between muscles (P<0.05)，different capital letters means extremely significant differences between muscles(P<0.01).**. Indicates extremely significant differences (P<0.01) between different ages of the same part of muscles;*. Indicates significant differences (P<0.05) between different ages of the same part of muscles

2.4綿羊肌肉組織MyoG基因mRNA 表達(dá)量的發(fā)育性變化

如圖3所示，內(nèi)參和MyoG基因引物擴(kuò)增特異性較好，可用于下一步試驗(yàn)。采用qRT-PCR法對2、4、5、6月齡綿羊羔羊和12月齡育成羊的背最長肌、股二頭肌兩個(gè)部位肌肉的MyoG基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果顯示(圖4)，綿羊兩個(gè)部位肌肉MyoG基因表達(dá)的發(fā)育性變化規(guī)律有差異，背最長肌該基因的表達(dá)量先上升后下降，從2月齡開始逐漸增加，5月齡時(shí)最高，且極顯著高于4月齡(P<0.01)，而與6月齡差異不顯著(P>0.05)，12月齡有所下降，且與6月齡差異極顯著(P<0.01)；股二頭肌該基因的表達(dá)量先上升后下降，各月齡之間表達(dá)量均差異極顯著(P<0.01)。將同月齡不同部位肌肉MyoG基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，4月齡背最長肌顯著高于股二頭肌(P<0.05)，其余月齡背最長肌極顯著高于股二頭肌(P<0.01)。

圖3　GAPDH(A)、PID1(B)和MyoG(C)基因熔解曲線Fig.3　Dissociation curves of GAPDH(A)， PID1(B) and MyoG(C) genes

bj.背最長?。籫j.股二頭肌。同部位不同月齡間的差異用字母表示，相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。**.表示同月齡不同部位間差異極顯著(P<0.01)；*.表示同月齡不同部位間差異顯著(P<0.05)。圖5同bj. Longissimus dorsi；gj.Biceps femoris. In the same part of muscles，common letter indicate no difference between ages (P>0.05)，different lowercase letters means significant difference between ages (P<0.05)，different capital letters means extremely significant difference between ages(P<0.01).**. Indicates extremely significant differences (P<0.01) between different parts of muscle at the same age；*. Indicates significant differences (P<0.05) between muscles at the same age.The same as Figure 5圖4　MyoG基因組織表達(dá)量的發(fā)育性變化Fig.4　The developmental changes of the expression level of MyoG in tissues

2.5綿羊肌肉組織PID1基因 mRNA 表達(dá)量的發(fā)育性變化

如圖3所示，內(nèi)參和PID1基因引物擴(kuò)增特異性較好，可用于下一步試驗(yàn)。采用qRT-PCR法對2、4、5、6月綿羊羔羊和12月齡育成羊的背最長肌、股二頭肌兩個(gè)部位肌肉的PID1 mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果顯示(圖5)，綿羊背最長肌該基因的表達(dá)量先上升后下降，2、4、5月齡間均差異極顯著(P<0.01)，6月齡與5和12月齡差異顯著(P<0.05)；股二頭肌該基因的表達(dá)量先下降后上升，各月齡之間表達(dá)量均差異極顯著(P<0.01)。將同月齡不同部位肌肉PID1 mRNA表達(dá)量進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)：2月齡背最長肌與股二頭肌差異不顯著(P>0.05)，4、5、6、12月齡背最長肌極顯著高于股二頭肌(P<0.01)。

圖5　PID1基因組織表達(dá)量的發(fā)育性變化Fig.5　The developmental changes of the expression level of PID1 in tissues

2.6綿羊肌肉組織MyoG和PID1基因 mRNA表達(dá)水平與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性

對綿羊兩個(gè)部位肌肉MyoG和PID1的表達(dá)量與IMF含量的相關(guān)分析(表3)表明，5個(gè)時(shí)期的背最長肌MyoG的表達(dá)量與IMF含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為0.896；5個(gè)時(shí)期的股二頭肌MyoG的表達(dá)量與IMF含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為0.953；5個(gè)時(shí)期的背最長肌PID1的表達(dá)量與IMF含量呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)，相關(guān)系數(shù)為0.996，5個(gè)時(shí)期的股二頭肌PID1的表達(dá)量與IMG含量呈不顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.548。如圖6所示，可以直觀的看出背最長肌和股二頭肌MyoG和背最長肌PID1基因的表達(dá)量與各自IMF含量趨勢呈不同程度一致性，而股二頭肌PID1基因的表達(dá)量與其IMF含量趨勢的一致性不明顯，這與相關(guān)分析數(shù)據(jù)的結(jié)果一致，也說明了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

表3MyoG和PID1 mRNA表達(dá)量與IMF含量的相關(guān)性

Table 3Correlation analysis ofMyoGandPID1 mRNA and IMF content

指標(biāo)IndexMyoG基因mRNA表達(dá)量MyoGmRNAexpressionlevelPID1基因mRNA表達(dá)量PID1mRNAexpressionlevel背最長肌IMF含量LongissimusdorsiIMFcontent0.896*0.996**股二頭肌IMF含量BicepsfemorisIMFcontent0.953*0.548

*.顯著相關(guān)(P<0.05)；**.極顯著相關(guān)(P<0.01)

*.Indicates significant correlation (P<0.05)；**.Indicates extremely significant correlation (P<0.01)

A.背最長肌MyoG與IMF；B.股二頭肌MyoG與IMF；C.背最長肌PID1與IMF；D.股二頭肌PID1與IMFA.Longissimus dorsi MyoG and IMF；B.Biceps femoris MyoG and IMF；C.Longissimus dorsi PID1 and IMF；D.Biceps femoris PID1 and IMF圖6　背最長肌和股二頭肌MyoG、PID1表達(dá)量與IMF含量趨勢Fig.6　Longissimus dorsi and biceps femoris MyoG，PID1 expression and IMF content tendency

3　討　論

MyoG是至關(guān)重要的成肌調(diào)節(jié)因子[7]，其表達(dá)水平對肌細(xì)胞的生成、融合以及肌肉組織生長都會(huì)產(chǎn)生重要影響。M.Bocian等發(fā)現(xiàn)豬MyoG對胴體脂肪沉積和肌肉增長有重要影響[11]。L.Zhu等研究證實(shí)MyoG基因的表達(dá)對IMF含量產(chǎn)生極顯著影響[12]。張曉卉研究顯示MyoG只在骨骼肌組織中有所表達(dá)，而在內(nèi)臟、消化器官、卵巢中均不表達(dá)[20]，所以只選取肌肉組織作為MyoG基因表達(dá)的研究對象。相關(guān)遺傳學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果都曾表明，PID1直接調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和成脂過程，對脂肪細(xì)胞分化不產(chǎn)生影響[15，21]。PID1對多個(gè)組織胰島素的敏感性有調(diào)節(jié)作用，可能與胰島素PI3K和Ras-MAPK信號(hào)途徑有關(guān)[22]，通過影響脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的高低調(diào)控脂肪沉積[23]。PID1基因在肥胖者脂肪組織中的表達(dá)量顯著高于健康者的脂肪組織，由此推斷PID1是調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞成脂過程的相關(guān)基因[24]。

結(jié)合綿羊與山羊和豬的種間保守性[25]，MyoG和PID1可能同樣調(diào)控綿羊的脂質(zhì)代謝。而肌肉組織是IMF沉積最主要的組織[26]，由此選取了背最長肌和股二頭肌兩塊典型的肌肉組織來研究MyoG和PID1對IMF沉積的影響。mRNA水平的表達(dá)分析是研究不同組織中分子調(diào)控機(jī)制要充分考慮的一個(gè)方面[27]，為基因功能的驗(yàn)證提供選擇依據(jù)。

本試驗(yàn)通過熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)，2、4、5、6、12月齡綿羊兩個(gè)部位肌肉MyoG和PID1 基因mRNA 表達(dá)的規(guī)律不同，背最長肌MyoG和PID1表達(dá)量呈上升-下降趨勢；股二頭肌MyoG表達(dá)量呈先上升后下降趨勢，PID1基因呈下降-上升趨勢。2、5、6、12月齡綿羊MyoG基因和4、5、6、12月齡綿羊PID1基因在背最長肌和股二頭肌之間表達(dá)量存在極顯著差異，表明MyoG和PID1的轉(zhuǎn)錄具有一定的組織特異性。IMF測定的結(jié)果顯示，各月齡背最長肌和股二頭肌的IMF含量差異極顯著，并且這兩個(gè)部位的MyoG基因表達(dá)量與各自的IMF含量均表現(xiàn)出顯著正相關(guān)，而PID1基因表達(dá)量與各自的IMF含量分別表現(xiàn)出極顯著和不顯著正相關(guān)，初步表明MyoG和PID1基因表達(dá)對IMF沉積可能具有一定的積極作用，此結(jié)論與前人在其他物種上的研究基本相符，這兩個(gè)基因?qū)d羊IMF同樣有一定的調(diào)控作用。

MyoG和PID1對于綿羊IMF的影響和調(diào)控機(jī)制仍處在基礎(chǔ)研究階段，未來可以考慮通過細(xì)胞水平RNA干擾和超表達(dá)來驗(yàn)證其表達(dá)對綿羊細(xì)胞脂肪沉積的影響，找到其調(diào)控通路、互作基因以及調(diào)節(jié)因子，以準(zhǔn)確判斷MyoG和PID1是否為影響綿羊育肥性狀的候選基因。

4　結(jié)　論

本研究發(fā)現(xiàn)MyoG和PID1在不同時(shí)期綿羊的背最長肌、股二頭肌組織中均有表達(dá)，且MyoGmRNA表達(dá)量與各自的IMF含量均表現(xiàn)出顯著正相關(guān)，PID1 mRNA表達(dá)量與各自的IMF含量分別表現(xiàn)出極顯著和不顯著正相關(guān)，結(jié)果可為進(jìn)一步研究MyoG和PID1的功能和脂質(zhì)代謝調(diào)控通路提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

[1]趙有璋.羊生產(chǎn)學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：69-75.

ZHAO Y Z.Production science of sheep and goat[M].Beijing：China Agriculture Press，2002：69-75.(in Chinese)

[2]URBAN T，MIKOLASOVA R，KUCIEL J，et al.A study of associations of theH-FABPgenotypes with fat and meat production of pigs[J].JApplGenet，2002，43(4)：505-510.

[3]杜琛，李金泉，陳秀娟.白絨山羊PPARγ基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建及對肌內(nèi)脂肪細(xì)胞增殖分化的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，47(4)：671-678.

DU C，LI J Q，CHEN X J.Construction of lentiviral RNAi vector ofPPARγgene in cashmere goat and its effect on proliferation and differentiation of intramuscular adipocytes[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica，2016，47(4)：671-678.(in Chinese)

[4]WANG Y H，BYRNE K A，REVERTER A，et al.Transcriptional profiling of skeletal muscle tissue from two breeds of cattle[J].MammGenome，2005，16(3)：201-210.

[5]郝稱莉，李齊發(fā)，喬永，等.湖羊肌肉組織H-FABP和PPARγ基因表達(dá)水平與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，41(11)：3776-3783.

HAO C L，LI Q F，QIAO Y，et al.Association of theH-FABPandPPARγgene expression with intramuscular fat content in Hu sheep muscles[J].ScientiaAgriculturaSinica，2008，41(11)：3776-3783.(in Chinese)

[6]MEUWISSEN T H E，GODDARD M E.The use of marker haplotypes in animal breeding schemes[J].GenetSelEvol，1996，28(2)：161-176.

[7]HASTY P，BRADLEY A，MORRIS J H，et al.Muscle deficiency and neonatal death in mice with a targeted mutation in the myogenin gene[J].Nature，1993，364 (6437)：501-506.

[8]蘇艷紅，齊鷙，周越，等.Caveolin-3，MyoGenin，MyoD在大鼠力竭運(yùn)動(dòng)后骨骼肌損傷過程的時(shí)程表達(dá)[J].北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35(12)：57-61.

SU Y H，QI Z，ZHOU Y，et al.Effect of Caveolin-3，Myogenin and MyoD on the rehabilitation of skeletal muscle injury after rats’exhausting exercise[J].JournalofBeijingSportUniversity，2012，35(12)：57-61.(in Chinese)

[9]BERTI F，NOGUEIRA J M，WOHRLE S，et al.Time course and side-by-side analysis of mesodermal，pre-myogenic，myogenic and differentiated cell markers in the chicken model for skeletal muscle formation[J].JAnat，2015，227(3)：361-382.

[10]杜琛.絨山羊肌內(nèi)脂肪沉積特征及脂肪細(xì)胞分化機(jī)理的研究[D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

DU C.Characteristics of intramuscular fat deposition and mechanism of adipocyte differentiation in cashmere goat[D].Hohhot：Inner Mongolia Agricultural University，2014.(in Chinese)

[11]BOCIAN M，CIESLAK D，GRAJEWSKA S，et al.A relationship between genotypes at MYOG，MYF3 and MYF5 loci and carcass meat and fat deposition traits in pigs[J].AnimSciPapRep，2002，20(2)：79-92.

[12]ZHU L，LI X W.The genetic effects of MyoG gene[J].Hereditas(Beijing)，2005，27(5)：710-714.

[13]姜美華，巨婷婷，劉洋，等.成肌細(xì)胞成脂過程中PPARγ、C/EBPα和Myogenin基因啟動(dòng)子的甲基化變化[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46(14)：3010-3021.

JIANG M H，JU T T，LIU Y，et al.Dynamics ofPPARγ，C/EBPαandMyogeningene promoter methylation during myoblasts intracellular lipid accumulation[J].ScientiaAgriculturaSinica，2013，46(14)：3010-3021.(in Chinese)

[14]SHI C M，XU G F，YANG L，et al.Overexpression of TFAM protects 3T3-L1 adipocytes from NYGGF4 (PID1) overexpression-induced insulin resistance and mitochondrial dysfunction[J].CellBiochemBiophys，2013，66(3)：489-497.

[15]ZHAO Y，ZHANG C，CHEN X，et al.Overexpression of NYGGF4(PID1) induces mitochondrial impairment in 3T3-L1 adipocytes[J].MolCellBiochem，2010，340(1-2)：41-48.

[16]李娟，史春梅，季晨博，等.NYGGF4(PID1)基因過表達(dá)對脂肪細(xì)胞中脂肪酸合成酶表達(dá)的影響[J].江蘇醫(yī)藥，2012，38(19)：2233-2235.

LI J，SHI C M，JI C B，et al.Effect ofNYGGF4(PID1) gene over-expression on fatty acid synthase in adipocytes[J].JiangsuMedicalJournal，2012，38(19)：2233-2235.(in Chinese)

[17]XU H，XU G，WANG D，et al.Molecular cloning and tissue distribution of the phosphotyrosine interaction domain containing 1 (PID1) gene in Tianfu goat[J].Gene，2013，515(1)：71-77.

[18]殷捷，凌英會(huì)，丁建平，等.山羊PID1基因組織表達(dá)譜及其與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，30(4)：784-789.

YIN J，LING Y H，DING J P，et al.Expression ofPID1 and the association with intramuscular fat in goat[J].JiangsuJournalofAgriculturalSciences，2014，30(4)：784-789.(in Chinese)

[19]錢源，曾勇慶，杜金芳，等.豬PID1基因CDS區(qū)的克隆及其mRNA表達(dá)與肌內(nèi)脂肪沉積關(guān)系[J].遺傳，2010，32(11)：68-73.

QIAN Y，ZENG Y Q，DU J F，et al.CDS cloning and relationship between intramuscular fat content and mRNA expression ofPID1 gene in pig[J].Hereditas，2010，32(11)：68-73.(in Chinese)

[20]張曉卉.民豬MyoG基因的克隆、表達(dá)與啟動(dòng)子核心區(qū)的定位[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

ZHANG X H.The cloning，expression and the core area promoter positioning of min pigMyoGgene[D].Harbin：Northeast Agricultural University，2012.(in Chinese)

[21]CHIBA T，YAMAZA H，KOMATSU T，et al.Pituitary growth hormone suppression reduces resistin expression and enhances insulin effectiveness：relationship with calonic restriction[J].ExpGerontol，2008，43(6)：595-600.

[22]錢源，曾勇慶，崔景香，等.萊蕪豬PID1基因的功能分析及表達(dá)譜研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，42(5)：621-628.

QIAN Y，ZENG Y Q，CUI J X，et al.Functional analysis and tissue specific expression profile ofPID1 gene in laiwu pig[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica，2011，42(5)：621-628.(in Chinese)

[23]WU W，GARI W，TONG M，et al.Over-expression of NYGGF4 (PID1) inhibits glucose transport in skeletal myotubes by blocking the IRS1/PI3K/AKT insulin pathway[J].MolGenetMetab，2011，102(3)：374-377.

[24]WANG B，ZHANG M，NI Y，et al.Identification and characterization of NYGGF4，a novel gene containing a phosphotyrosine-binding (PTB) domain that stimulates 3T3-L1 preadipocytes proliferation[J].Gene，2006，379(1)：132-140.

[25]WU D D，IRWIN D M，ZHANG Y P.Molecular evolution of the keratin associated protein gene family in mammals，role in the evolution of mammalian hair[J].BMCEvolBiol，2008，8：241.

[26]DA COSTA A S，PIRES V M，F(xiàn)ONTES C M，et al.Expression of genes controlling fat deposition in two genetically diverse beef cattle breeds fed high or low silage diets[J].BMCVetRes，2013，9：118.

[27]GRAUGNARD D E，PIANTONI P，BIONAZ M，et al.Adipogenic and energy metabolism gene networks in longissimus lumborum during rapid post-weaning growth in Angus and Angus×Simmental cattle fed high-starch or low-starch diets[J].BMCGenomics，2009，10：142.

(編輯郭云雁)

Association of theMyoGandPID1 Gene Expression with Intramuscular Fat Content in Sheep Muscles

LUAN Zhao-jin1，2，HE Jian-ning1，CHENG Ming3，LIU Kai-dong3，QU Xu-xian4，LIU Nan1*

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao266109，China；2.BaotouAgriculturalResearchInstitute,Baotou014013,China;3.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineofQingdao，Qingdao266121，China；4.StationoftheShandongAnimalHusbandryandVeterinary，Jinan250000，China)

The objectives of this study were to investigate the developmental changes of Myogenin (MyoG) and Phosphotyrosine interaction domain containing 1 (PID1) mRNA expression in different parts of muscles in sheep and research its effect on intramuscular fat (IMF) accumulation.Five Aohan fine wool sheep were slaughtered at 2，4，5，6，12 months，respectively，to collect samples fromlongissimusdorsiandbicepsfemoris，for determining the IMF content.The mRNA expression of theMyoGandPID1 in 2 parts of muscles was investigated by real-time PCR，and association between their mRNA levels and IMF contents were also analyzed.The results showed that，2-5 month，with growing of the age，the IMF contents oflongissimusdorsiandbicepsfemorisincreased.And 5-12 month，the IMF contents remained unchanged.The IMF content oflongissimusdorsiwere extremely significantly higher thanbicepsfemoris(P<0.01) at the same age.MyoGandPID1 mRNA expression level was different in 2 parts of muscles and had tissues-dependent.Inlongissimusdorsi，MyoGexpression level was the highest (P<0.01) in 5 month old sheep，PID1 expression level was the highest (P<0.05) in 6 month old sheep，there was an increase and then decrease trend in the 2 gene expression.Inbicepsfemoris，theMyoGandPID1 expression level difference was extremely significant(P<0.01) among different month ages，andMyoGexpression level presented increased and declined slowly with growing，PID1 expression level presented declined-increased with growing.In the same month，MyoGandPID1 expression level had significant difference in different parts.Correlation analysis showed thatMyoGandPID1 expression level was inordinately positively related to IMF content.In conclusion，MyoGexpression has positively effect on IMF accumulation in sheep，andPID1 expression is likely to influence on IMF accumulation.

IMF；MyoG；PID1；expression changes；correlation

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.006

2016-02-03

山東省良種工程項(xiàng)目(2011-16)

欒兆進(jìn)(1991-)，女，山東青島人，碩士生，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究，E-mail:15264246691@163.com

柳楠，教授，博士，E-mail:nanliu@sina.com

S826;S813.3

A

0366-6964(2016)10-1986-09