頭花蓼的血清藥物化學(xué)研究

向文英，梅朝葉，楊　武，孫　佳，陸　苑，陳思穎，黃　勇

(1. 貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2. 國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心；3.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)　550004)

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頭花蓼的血清藥物化學(xué)研究

向文英1，2，3，梅朝葉1，3，楊武1，3，孫佳1,3，陸苑1,3，陳思穎1,3，黃勇1

(1. 貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2. 國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心；3.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)550004)

中藥血清藥物化學(xué)是以藥物化學(xué)的研究手段和方法為基礎(chǔ)，采用現(xiàn)代分析方法鑒定口服中藥后血清中藥源性成分及移行成分，它能夠直觀地分析中藥口服后的血液中的形態(tài)表現(xiàn)，快速尋找藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[1]。

頭花蓼(PolygonumcapitatumBuch.-Ham.ex D.Don) 又名四季紅、石莽草等，屬于蓼科多年生草本植物的干燥全草或地上部分[2]。其味苦、辛，性涼，歸腎，具有清熱利濕、利尿通淋等功效，主要用于治療腎盂腎炎、尿道感染、膀胱炎等疾病[3-5]。但其體內(nèi)作用成分及代謝過程研究還未見報(bào)道，因此本次研究采用血清藥物化學(xué)研究方法，和色譜分析等手段對(duì)頭花蓼進(jìn)行了初步研究，為探討頭花蓼提取物在大鼠體內(nèi)的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和提高臨床療效奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。

1　材料

1.1儀器與試藥Agilent Technologies 1290 Infinity液相色譜系統(tǒng)；ESI-Q-TOF/MS(美國(guó)布魯克道爾頓)；Allegra 64R低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Beckman Coulter 公司)；CQ 250A-TS超聲波清洗機(jī)(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠)；MTN-2800D氮吹濃縮裝置(天津奧特塞恩斯儀器有限公司)；EL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；

頭花蓼藥材(購(gòu)自貴州施秉頭花蓼GAP種植基地，由貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室龍慶德副教授鑒定)；對(duì)照品[沒食子酸(批號(hào)MB6346)、原兒茶酸(批號(hào)MB6312)、槲皮苷(批號(hào)MB6680)，大連美侖生物科技有限公司]；金絲桃苷、陸地棉苷對(duì)照品(自制，經(jīng)UV、IR、MS、1H-MNR、13C-NMR結(jié)構(gòu)確證， HPLC在多個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)，其峰面積歸一化含量均大于98.0%)；頭花蓼提取物(自制，批號(hào)：20130508)；乙腈、甲酸(色譜純，德國(guó)Merck 公司)；純凈水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；其他試劑均為分析純。

1.2動(dòng)物分組及給藥健康SD大鼠，體質(zhì)量為(220±20)g，由貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供[批號(hào)SCXK(黔)2002-0001]?！狻岣靼耄S機(jī)分為2組(給藥組及空白組)，每組6只，分別給予頭花蓼有效組分及蒸餾水，按每次87 g·Kg-1(生藥量)劑量連續(xù)灌胃3 d，每天2次，空白組灌胃同等體積的蒸餾水。

2　方法

2.1色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)，柱溫：45 ℃，流動(dòng)相：0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)梯度洗脫，進(jìn)樣體積為2 μL，梯度洗脫：(0～10 min, 5% B～45% B, 10～14 min, 45% B～95% B, 14～15 min, 95% B～100% B, 15～16 min, 100% B～5% B。

2.2質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)，掃描方式為負(fù)離子掃描(ESI-，m/z 50～1 000)，毛細(xì)管電壓3 KV，錐孔電壓：80 V，離子源溫度：110 ℃，霧化氣(N2)壓力：1.2 bar，流速：8.0 L·min-1，溫度200 ℃，脫溶劑氣溫度：300 ℃，氣體體積流量：50 L·h-1，脫溶劑氣體積流量：550 L·h-1，準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定采用甲酸鈉校正標(biāo)準(zhǔn)液，校正模式選用：Enhanced Quadratic。數(shù)據(jù)分析：Data Analysis，Metabolite Detect。

2.3供試品的制備分別于末次給藥后30 min股動(dòng)脈采血，取全血置于37 ℃恒溫水浴上，至上層有黃色液體析出，4 ℃離心10 min，置于-20 ℃保存，備用。取大鼠血清0.5 mL，用甲醇沉淀蛋白，加入300 μL 50%甲醇水溶液溶解殘留物，UHPLC-ESI-Q-TOF/MS進(jìn)樣分析。

3　結(jié)果

在本實(shí)驗(yàn)色譜和質(zhì)譜條件下，大鼠口服頭花蓼提取物后血清樣本中共檢測(cè)出18個(gè)移行成分，通過與對(duì)照品對(duì)照和題組前期對(duì)頭花蓼的化學(xué)成分研究[6]，確定5個(gè)為原型成分，13個(gè)可能為原型成分的代謝產(chǎn)物，其中1號(hào)指紋峰為沒食子酸，3號(hào)指紋峰為原兒茶酸，5號(hào)指紋峰為陸地棉苷、7號(hào)指紋峰為金絲桃苷、10號(hào)指紋峰為槲皮苷，見Tab 1。

Tab 1　Total ion chromatogram of peak retention and vested of Polygonum capitatum

4　討論

本研究建立了UHPLC-ESI-Q-TOF/ MS對(duì)血清的檢測(cè)方法，其具有離子傳輸效率高、傳輸離子質(zhì)量范圍寬、靈敏度高、錯(cuò)誤率低、重現(xiàn)性高等優(yōu)點(diǎn)。在頭花蓼提取物含藥血清中檢測(cè)到大量的黃酮類成分槲皮素的葡萄糖醛酸化、甲基化、硫酸化代謝產(chǎn)物，同時(shí)還存在酚酸類成分沒食子酸、原兒茶酸的甲基化、硫酸化代謝產(chǎn)物等，這些成分可能為頭花蓼的體內(nèi)直接作用物質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行深入的研究，將有助于闡明頭花蓼藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及藥效機(jī)制。

[1]霍仕霞,彭曉明,高莉.維藥沒食子血清藥化初步研究[J].中成藥,2011,33(10):1754-7.

[1]Huo S X, Peng X M, Gao L. Pharmacochemistry of traditional Uighur medicine Calla Turcica[J].ChinTraditPatentMed,2011,33(10):1754-7.

[2]唐麗,劉躍,黃勇,等.離體外翻腸囊法研究頭花蓼提取物中5個(gè)成分的腸吸收特性[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2014,30(7):1031-2.

[2]Tang L, Liu Y, Huang Y, et al. Study on absorption characteristics of five com ponents from Polygonum capitatum by isolated everted intestine model[J].ChinPharmacolBull,2014,30(7):1031-2.

[3]陸苑,潘杰,謝玉敏,等.頭花蓼水提取物對(duì)CYP450 酶誘導(dǎo)和抑制作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2015,31(8):1147-52.

[3]Lu Y, Pan J, Xie Y M, et al. Inhibitory and inductive effects of Polygonum capitatum water extract on CYP450[J].ChinPharmacolBull,2015,31(8):1147-52.

[4]楊蓓蓓,馮茹,王維聰,等. HPLC/DAD/MS法同時(shí)測(cè)定苗藥頭花蓼中3種有效成分的含量[J]. 藥物分析雜志, 2008, 28(11): 1793-6.

[4]Yang B B, Feng R, Wang W C, et al. Quantitative analysis of three aetive consittuents in Miao regional herb,Plygonum capiatutm by HPLC/DAD/MS[J].JPharmAnal， 2008, 28(11): 1793-6.

[5]謝宇,張麗艷,梁斌,等.HPLC法檢測(cè)頭花蓼及制劑熱淋清顆粒中槲皮苷的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2009,34(8):984-6.

[5]Xie Y, Zhang L Y, Lian B, et al. Determination of quercitrin in Polygonum capitatum and Re lin qing granules by HPLC[J].ChinaJChinMaterMed,2009,34(8):984-6.

[6]劉躍,胡杰,謝玉敏,等.UPLC- MRM-MS法測(cè)定頭花蓼藥材中7個(gè)指標(biāo)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2015,27(1):73-6.

[6]Liu Y, Hu J, Xie Y M, et al. Determination of seven components in Polygonum capitatum by UPLC-MRM-MS[J].NaturalProdResDev, 2015,27(1):73-6.

Serum pharmacochemistry ofPolygonumcapitatum

XIANG Wen-ying1,2,3,MEI Chao-ye1,3,YANG Wu1,3, SUN Jia1,3, LU Yuan1,3, CHEN Si-ying1,3, HUANG Yong1

(1.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofPharmaceutics;2.NationalEngineeringResearchCenterofMiao’sMedicine, 3.SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,GuizhouGuiyang550004,China)

頭花蓼；血清藥物化學(xué)；UHPLC-Q-TOF/MS；含藥血清；指紋圖譜；移行成分

Polygonumcapitatum; serum pharmacochemistry; UHPLC-Q-TOF；serum containing drug; fingerprint; compounds

時(shí)間：2016-9-22 11:14

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160922.1114.056.html

2016-06-10,

2016-08-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No 81260688)；貴州省國(guó)際科技合作計(jì)劃(No 2012-7040)，貴州省研究生卓越人才計(jì)劃項(xiàng)目(黔教研合ZYRC字[2014]J012)

向文英(1992-)，女，碩士生，研究方向：藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，E-mail:852017994@qq.com；

黃勇(1976-)，男，博士，教授，研究方向：中藥活性成分及新藥開發(fā)研究，通訊作者，E-mail：Hujie51619@sina.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.10.028

A

1001-1978(2016)10-1476-02

R-332；R282.71；R284.1