綠僵菌MaZPTR-01菌株固體發(fā)酵條件篩選研究

蔡守平

(1. 南京林業(yè)大學南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京林業(yè)大學林學院，江蘇 南京 210037；2. 福建省林業(yè)科學研究院,國家林業(yè)局南方山地用材林培育重點實驗室，福建 福州 350012)

?

綠僵菌MaZPTR-01菌株固體發(fā)酵條件篩選研究

蔡守平1,2

(1. 南京林業(yè)大學南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京林業(yè)大學林學院，江蘇 南京 210037；2. 福建省林業(yè)科學研究院,國家林業(yè)局南方山地用材林培育重點實驗室，福建 福州 350012)

以綠僵菌MaZPTR-01菌株為發(fā)酵菌株，進行最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基、不同加水量及加水順序篩選，培養(yǎng)基不同厚度對產(chǎn)孢的影響，以及測定固體發(fā)酵過程中的溫度變化等試驗。結果表明：不同培養(yǎng)基組分及配比對綠僵菌的產(chǎn)孢量影響均極為顯著，綠僵菌MaZPTR-01菌株的最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基配比為A1B3C1D3，即V(玉米粉)∶V(麥麩)∶V(米粉)∶V(谷殼)=1∶3∶1∶3；固體培養(yǎng)基加水后滅菌的處理綠僵菌產(chǎn)孢量顯著較先滅菌后加無菌水的處理要高；每500 g固體培養(yǎng)基加水400 mL混合后滅菌的物理狀態(tài)好、產(chǎn)孢量最高，固體培養(yǎng)基厚度以5 cm培養(yǎng)效果最好；通過測定綠僵菌固體發(fā)酵過程中的溫度變化與對綠僵菌生長情況的觀察，發(fā)現(xiàn)0～24 h為生長延滯期，24～48 h為對數(shù)生長期，48～96 h為生長穩(wěn)定期，之后為生長衰退期 (產(chǎn)孢階段)。

綠僵菌；固體發(fā)酵；固體培養(yǎng)基；培養(yǎng)基厚度；生長曲線

綠僵菌 (Metarhiziumspp.) 是一種重要的殺蟲真菌，因具有致病力強、寄主范圍廣、能在田間長期宿存、易于擴大培養(yǎng)等優(yōu)點，在農林害蟲的防治中得到了廣泛的關注和應用。綠僵菌孢子萌發(fā)后可侵入昆蟲體壁，然后在昆蟲血腔內大量增殖，引起昆蟲死亡[1-3]。因此大量收獲綠僵菌分生孢子是利用綠僵菌防治害蟲的基礎[1-2]。目前，國內外綠僵菌生產(chǎn)的方法主要有液體深層發(fā)酵、固體發(fā)酵和液固雙相發(fā)酵法，其中最為經(jīng)濟實用、效率較高、應用較廣的是液固雙相發(fā)酵法[1,2,4-12]。前人進行了較多液固雙相發(fā)酵法相關研究，其中對前期液相階段的培養(yǎng)條件，不同學者得到的培養(yǎng)參數(shù)差異不大[4-7]；而對固相培養(yǎng)階段的研究，不同學者對培養(yǎng)基質、控制條件、反應器等的研究結果差異較大，培養(yǎng)效果也不盡相同[6-12]。一方面可能由于不同菌株對營養(yǎng)和培養(yǎng)環(huán)境的需求存在一定差異；另一方面因為影響固相階段培養(yǎng)的參數(shù)較多，控制方法多樣化，受人為因素影響大，這些因素造成了目前綠僵菌固體培養(yǎng)階段環(huán)境參數(shù)和控制方法難以統(tǒng)一[9]。本研究以金龜子綠僵菌MaZPTR-01菌株為研究材料，從固體發(fā)酵階段的培養(yǎng)基質及影響綠僵菌固體發(fā)酵的培養(yǎng)條件等方面進行研究，以期為綠僵菌的大量培養(yǎng)提供參考。

1　材料與方法

1.1供試菌株及液體種子制備

金龜子綠僵菌MaZPTR-01菌株 (以下簡稱綠僵菌ZP菌株)，由福建省林業(yè)科學研究院森林保護研究所分離、保存。液體種子培養(yǎng)基選用SDY培養(yǎng)基，接種后在 (25 ± 1) ℃、120 r/min的恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，作為接種用的液體種子。

1.2最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選

在預試驗的基礎上，參考前人的配方[4-12]，選用了有利于綠僵菌生長的麥麩、米粉、玉米粉 (均為市售) 作為培養(yǎng)基主要營養(yǎng)成分，并以谷殼作為通氣基質，各組分按照L9(34) 正交設計配比 (體積份比) (表1)，各組分充分混合后，按每500 g固體基質加400 mL水的比例混勻，然后裝入耐高溫的聚乙烯塑料袋 (菌種袋) 中，121 ℃高溫蒸氣滅菌30 min，冷卻后備用。每個配方重復3次。

1.3固體培養(yǎng)方法

用75%的乙醇將透明塑料盒 (帶蓋) (長 × 寬 ×高=26 cm × 16 cm × 8 cm) 進行表面消毒，作為固體培養(yǎng)容器。將振蕩培養(yǎng)好的液體種子，在無菌條件下，按體積質量比15%的比例接入已滅菌的固體培養(yǎng)基中，攪拌均勻，倒入透明塑料盒內，培養(yǎng)基質高度5 cm。將各處理編號排列整齊后，蓋上蓋子，置于 (22 ± 1) ℃培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)。培養(yǎng)前4 d，蓋上培養(yǎng)盒的蓋子密閉培養(yǎng)；4 d (96 h) 后菌絲長滿整個培養(yǎng)基質且表面出現(xiàn)綠色孢子后，將固體培養(yǎng)基輕輕反扣于培養(yǎng)架上進行開放式培養(yǎng) (底部鋪滅過菌的報紙)，并控制培養(yǎng)室內濕度在80%～90%。繼續(xù)培養(yǎng)4～5 d，待固體培養(yǎng)基內、外部均布滿墨綠色分生孢子時，即可進行干燥處理。

表1　綠僵菌固體培養(yǎng)基篩選試驗因素與水平

1.4固體培養(yǎng)基加水量對固體發(fā)酵的影響試驗

固體培養(yǎng)基選用1.2中篩選出的最佳培養(yǎng)基，即A1B3C1D3，同時設2組試驗：1) 固體培養(yǎng)基不同組分均勻混合后，按照每500 g培養(yǎng)基加200、400、600、800 mL的水，拌勻后裝袋，進行高溫蒸氣滅菌；2) 固體培養(yǎng)基不同組分稱量后混勻，直接裝袋進行高溫蒸氣滅菌，冷卻后，按照每500 g培養(yǎng)基加200、400、600 mL和800 mL的無菌水。然后按照1.3中的方法進行綠僵菌固體發(fā)酵。每個試驗處理均設3個重復。培養(yǎng)完成后，測定各處理的發(fā)酵產(chǎn)物的含孢量。

1.5培養(yǎng)基厚度對產(chǎn)孢量的影響試驗

固體培養(yǎng)基同1.4，固體培養(yǎng)方法同1.3，接種后將固體培養(yǎng)基質倒入透明塑料盒中，分別將培養(yǎng)基質厚度設為3、5 cm和7 cm。每個厚度設置3個重復，其他培養(yǎng)參數(shù)同1.3。待培養(yǎng)完成后，測定各處理發(fā)酵產(chǎn)物的含孢量。

1.6綠僵菌固體發(fā)酵過程中的溫度變化

在1.5試驗中，將ONESET HOBO?四通道溫度記錄儀 (美國) 的溫度探針插入不同厚度固體培養(yǎng)基質中部，設置為每30 min讀取1次數(shù)據(jù)，自動記錄發(fā)酵過程中的溫度變化，直至綠僵菌產(chǎn)孢完全后 (196 h)，不再記錄溫度變化，發(fā)酵產(chǎn)物進行干燥處理(自然風干)。

1.7產(chǎn)孢量的測定

培養(yǎng)完成、干燥后，從培養(yǎng)基質中部自上而下取樣，于天平上稱量后，置于250 mL三角瓶中，加適量0.05%吐溫80水溶液，于高速振蕩器上充分振蕩，使孢子分散，稀釋后，用血球計數(shù)板進行顯微計數(shù)，測定孢子濃度，最后折算成每克發(fā)酵產(chǎn)物中的孢子含量。重復3次。

1.8分析方法

數(shù)據(jù)分析使用SPSS 16.0進行處理、分析，正交試驗設計因無空白列，誤差通過3次重復試驗來獲得。多重比較分析采用Turkey方法。

2　結果與分析

2.1最適固體培養(yǎng)基的篩選

在預試驗和參考前人研究的基礎上，選用了玉米粉、麥麩、米粉作為綠僵菌ZP菌株固體發(fā)酵的營養(yǎng)源，以谷殼作為培養(yǎng)介質 (通氣)，試驗結果見表2，通過方差分析，各個因素對綠僵菌的產(chǎn)孢量影響均極顯著 (P< 0.01)，不同配比組成的固體培養(yǎng)料產(chǎn)孢量有顯著差異，其中平均產(chǎn)孢量最大的為 (8.13 ± 0.25)×109孢子/g，顯著較其他處理的產(chǎn)孢量高，最小的為(1.67 ± 0.32)×109孢子/g。從R值可以看出，各因素對產(chǎn)孢量影響程度依次為谷殼→玉米粉→米粉→麥麩。從K值上來看，玉米粉和米粉這兩個因素中以第1水平 (1份)最佳，而谷殼和麥麩這2個因素中以第3水平(3份)為最佳。綜合分析，綠僵菌ZP菌株的最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基配比為A1B3C1D3，即V(玉米粉)∶V(麥麩)∶V(米粉)∶V(谷殼)=1∶3∶1∶3。受試驗條件所限，本次試驗沒有考慮各個因素的交互作用，因此不能排除他們之間是否有促進綠僵菌生長、產(chǎn)孢的作用，這有待進一步研究。

表2　綠僵菌固體培養(yǎng)基篩選正交試驗結果與分析

注：*同列不同字母表示同一因素不同水平存在 (0.05水平) 顯著差異，相同小字母表示不同水平間差異不顯著。

2.2固體培養(yǎng)基質加水量對固體發(fā)酵的影響

培養(yǎng)基質加水量與不同加水順序滅菌對綠僵菌固體發(fā)酵的影響見表3。從表3可以看出，將固體培養(yǎng)基質與水混合后再滅菌 (處理組1) 的固體基質顏色較深，熟化程度較高，蓬松，吸水性、通氣性佳，而固體基質直接滅菌后加無菌水的處理 (處理組2)，固體基質無明顯的熟化，基質蓬松度不佳，吸水、通氣效果較差；從產(chǎn)孢量來看，無論何種加水量，處理組1均顯著高于處理組2，其中處理組2中產(chǎn)孢量最高的僅為 (2.03 ± 0.10) × 109孢子/g (每500 g基質加水600 mL)，僅為處理組1相同加水量產(chǎn)孢量的1/4 (8.06 ± 0.29) ×109孢子/g。

表3　固體基質不同加水量及加水順序對產(chǎn)孢量的影響

處理組1中，每500 g培養(yǎng)基質加水400 mL和600 mL的培養(yǎng)效果較好，最終產(chǎn)孢量分別達 (8.11 ± 0.22) × 109孢子/g和 (8.06 ± 0.29) × 109孢子/g，兩者之間差異不顯著，但顯著大于加水200 mL和800 mL的處理。從接種后培養(yǎng)基質的物理狀態(tài)來看，每500 g培養(yǎng)基質加水400 mL最佳，而加水600 mL的處理培養(yǎng)基質略會結塊，需費力拌勻，同時在干燥過程中，含水量高會導致干燥速度較慢、效率低。每500 g培養(yǎng)基質加水800 mL后滅菌的培養(yǎng)基質結塊、成團，影響了培養(yǎng)基質的通氣性能，培養(yǎng)效果差，而加水200 mL后滅菌的培養(yǎng)基質濕度和蓬松度不夠，導致菌絲生長較慢。

2.3不同厚度培養(yǎng)基質溫度變化及綠僵菌產(chǎn)孢量

綠僵菌固體發(fā)酵過程中的溫度變化及不同厚度培養(yǎng)基質培養(yǎng)的綠僵菌產(chǎn)孢量分別見圖1和表4。培養(yǎng)基質的厚度直接影響基質內部的通氣性與散熱性，一般來說，厚度越小，通氣效果、散熱性越好。

圖1綠僵菌固體發(fā)酵培養(yǎng)過程中的溫度變化

Fig.1　Temperature dynamic of the solid medium during the fermentation process of M.anisopliae

從圖1中可以看出，培養(yǎng)基質厚度越大，發(fā)酵過程中溫度越高(尤其是菌絲對數(shù)生長期和穩(wěn)定生長期)。培養(yǎng)基質厚度為3 cm時，發(fā)酵過程中的溫度最高為26 ℃左右，厚度為5 cm時，溫度不超過28 ℃，而厚度為7 cm時，培養(yǎng)基質內溫度可達29 ℃多，且持續(xù)時間較長 (36 h～72 h固體基質內溫度始終維持在28 ℃以上)。同時通過表4可以看出，厚度為3 cm和5 cm時，發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)孢量差異不顯著，分別為 (8.29 ± 0.32)×109孢子/g和 (8.07 ± 0.40)×109孢子/g，且固體基質內外均有顯著產(chǎn)孢，而基質厚度為7 cm時，產(chǎn)孢量只有(3.20 ± 0.06)×109孢子/g，不足其他2個厚度產(chǎn)孢量的1/2，固體基質表層產(chǎn)孢量較大，而基質內部則多為菌絲，孢子較少，可能是由于內部的散熱性與通氣性較差導致的，這與農向群等的研究結果一致[9]。經(jīng)過多次發(fā)酵實踐證明，固體基質3 cm的發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)孢量雖然高，但空間利用率較低，基質厚度5 cm既可提高發(fā)酵容器空間利用率、其培養(yǎng)基質具良好散熱性和通氣性，發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)孢量較高，若厚度超過5 cm發(fā)酵過程中溫度較高，通氣、散熱性較差，易引起細菌污染，有燒料的風險，且發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)孢量顯著減少。因此，固體基質保持在5 cm左右是較理想的厚度。

2.4綠僵菌固體發(fā)酵的溫度變化曲線

通過測定綠僵菌固體發(fā)酵過程中的溫度變化并觀察綠僵菌生長情況，繪制出發(fā)酵過程中固體基質內部的溫度變化曲線 (圖1)，反映了綠僵菌的生長過程，從圖1中可以看出，發(fā)酵前24 h固體基質的溫度與室溫無明顯差異，為生長延滯期 (0～24 h)，固體培養(yǎng)基質無明顯變化；而延滯期后，固體料溫度快速上升，顯著高于室溫，即菌絲的對數(shù)生長期 (24～48 h)，此階段綠僵菌菌絲開始迅速生長，培養(yǎng)基質表層可見一層薄薄的菌絲；約24 h后，固體料溫度達到一個頂峰 (培養(yǎng)基質厚度不同，其可達到的最高溫度也不同)，在26～30 ℃之間，隨后穩(wěn)定在1個較高的溫度范圍 (維持48～72 h)，此階段為穩(wěn)定生長期 (48～96 h)，這個時期綠僵菌菌絲大量生長，固體培養(yǎng)基質完全被白色菌絲占據(jù)，后期表層出現(xiàn)綠色孢子，標志已經(jīng)開始產(chǎn)孢。本研究中，此前這3個階段均在密閉的發(fā)酵盒中完成，保證了菌絲生長階段所需的濕度。當固體料中心溫度逐漸下降至25～27 ℃以下 (96 h以后)，固體基質表面出現(xiàn)大量綠色孢子時，標志著進入菌絲生長衰退期，此時，將固體培養(yǎng)基輕輕反扣于培養(yǎng)架上進行開放式培養(yǎng)，改善固體基質的通氣條件，促進綠僵菌產(chǎn)孢，此時固體培養(yǎng)基質的溫度迅速降低 (圖1中96 h后溫度迅速下降)，固體基質中的溫度與室溫差異不大，固體基質內外均大量長出綠色的孢子，此過程為72～96 h，隨后即可進行干燥處理。

3　討　論

液固兩相發(fā)酵是迄今所知國內外真菌殺蟲劑生產(chǎn)中最成熟的生產(chǎn)工藝[4,6,8-10]，固體培養(yǎng)基質的組成與物理狀態(tài)是直接影響固相發(fā)酵階段效果的因素，培養(yǎng)綠僵菌分生孢子的常用基質是大米[13-14]，也有研究報道包括麥麩[9]、玉米粉[7-8]、米糠[14]等農副產(chǎn)品均是可滿足綠僵菌生長所需的營養(yǎng)源，同時谷殼、甘蔗渣、蛭石等一般作為通氣介質也被用于固體培養(yǎng)基質中[4-9]。除綠僵菌生長對營養(yǎng)的需求外，固體培養(yǎng)基混合滅菌后的質地 (濕度、松散度、通氣性等) 也是影響培養(yǎng)效果的重要因素。本研究中選用了常用的玉米粉、麥麩、米粉以及谷殼作為綠僵菌固體發(fā)酵基質，通過正交試驗確定了最佳配比，研究了最適水量配比以及基質厚度，篩選出的固體培養(yǎng)配方不僅營養(yǎng)充分，且接種后培養(yǎng)基質蓬松、不板結，通氣性、散熱性良好，濕度適中，能有效促進綠僵菌的菌絲生長和產(chǎn)孢。

固體基質滅菌時，現(xiàn)在部分生產(chǎn)單位采用固體料直接滅菌后再加無菌水的方法進行固體發(fā)酵，該方法較先加水后滅菌略簡單，更為省時省力。但研究中發(fā)現(xiàn)，加水后滅菌的培養(yǎng)效果較滅菌后加無菌水的好很多，可能原因是培養(yǎng)基質加水后滅菌的處理，滅菌過程中可使培養(yǎng)基質充分熟化，熟化的培養(yǎng)基中的營養(yǎng)更易被綠僵菌利用，同時也能讓培養(yǎng)基質更為蓬松，改善了培養(yǎng)基質的通氣條件，從而有利于菌絲的生長。所以，在大量培養(yǎng)綠僵菌時，建議使用固體基質加水后進行高溫蒸氣滅菌，可顯著提高產(chǎn)孢量。

真菌固體發(fā)酵過程中菌絲深入培養(yǎng)基內部，不易從底物中分離，所以直接測定菌體的生長曲線 (生物量變化) 較為困難，一般通過檢測代謝活動、測定生物體中某種特殊物質的含量、利用與菌體生長有關的某些現(xiàn)象來推斷固體發(fā)酵過程中的生長曲線[15]，溫度變化是發(fā)酵過程中微生物生長代謝、消長過程的重要表現(xiàn)形式，通過對綠僵菌固體發(fā)酵過程中的溫度連續(xù)測定，觀察到了生長延滯期、對數(shù)生長期、生長穩(wěn)定期和生長衰退期的溫度變化，并結合菌絲和產(chǎn)孢情況，發(fā)現(xiàn)前3個時期為菌絲生長階段，而生長衰退期為產(chǎn)孢階段。根據(jù)這些結果，我們在綠僵菌不同生長發(fā)育階段采用分階段調控策略，如在菌絲生長期，綠僵菌通常需要較高的濕度 (RH95%以上)[1,14]，在此階段，采用密閉的發(fā)酵盒，發(fā)酵過程中濕度不易散失，正好滿足了菌絲生長過程中所需要的高濕度；而在產(chǎn)孢期，要提高培養(yǎng)基質的通氣量，促進產(chǎn)孢，在本研究中，該時期采用了開放式的培養(yǎng)，改善了培養(yǎng)基質的通氣效果，提高了產(chǎn)孢量，這種密閉式發(fā)酵 (菌絲生長階段) 與開放式發(fā)酵 (產(chǎn)孢階段) 相結合的方式，克服了傳統(tǒng)單一采用淺盤發(fā)酵或袋裝發(fā)酵的一些缺點，有效促進了綠僵菌的菌絲生長和產(chǎn)孢，提高了生產(chǎn)效率，該方法可在進一步完善成熟后，在生產(chǎn)上推廣應用。對于如何更準確的測定或推斷綠僵菌固體發(fā)酵過程中菌體的生長曲線，還有待更深入的研究。

[1]蒲蜇龍, 李增智. 昆蟲真菌學[M]. 合肥: 安徽科學技術出版社, 1996.

[2]周燚, 王中康, 喻子牛. 微生物農藥研發(fā)與應用[M]. 北京: 化學工業(yè)出版社, 2006.

[3]Donald W R, Raymond J S L.Metarhiziumspp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: mycological aspects[J]. Advances in Applied Microbiology, 2004, 54: 1-70.

[4]梁昌聰, 彭軍, 黃志, 等. 綠僵菌發(fā)酵工藝的研究進展[J]. 熱帶農業(yè)科學, 2008, 28(6): 87-91.

[5]宋漳. 液體深層培養(yǎng)綠僵菌分生孢子的研究[J]. 林業(yè)科學, 2001, 37(5): 134-139.

[6]許天委, 張世清, 黃俊生. 金龜子綠僵菌的液固雙相發(fā)酵研究[J]. 河南農業(yè)科學, 2013(2): 93-97.

[7]吳盼盼, 吳小雙, 舒金平. 平沙綠僵菌wp08菌株固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 林業(yè)科技開發(fā), 2013, 27(1): 97-100.

[8]宋漳, 葉小真, 葉斌. 液固兩相法培養(yǎng)金龜子綠僵菌的研究[J]. 福建林學院學報, 2012, 32(2): 163-

168.

[9]農向群, 涂雄兵, 張澤華, 等. 綠僵菌R8-4菌株大量培養(yǎng)固相階段的條件[J]. 中國生物防治, 2007, 23(3): 228- 232.

[10]吳振強, 彭景龍. 金龜子綠僵菌固態(tài)培養(yǎng)生物變量優(yōu)化研究[J]. 昆蟲天敵, 2004, 26(1): 1-6.

[11]盧忠燕, 高松, 江渝. 金龜子綠僵菌固體培養(yǎng)條件的篩選[J]. 應用與環(huán)境生物學報, 2004, 10(2): 223-225.

[12]張麗萍, 程輝彩, 王迎春, 等. 綠僵菌固體生產(chǎn)條件的研究[J]. 農藥, 2002, 41(7): 20-21.

[13]Jenkins N E, Heviefo G, Langewald J, et al. Development of mass production technology for aerial conidia for use as mycopesticides[J]. Biocontrol News and Information, 1998, 19: 21-31.

[14]Dorta B, Bosch A, Arcas J A, et al. High level of sporulation ofMetarhiziumanisopliaein a medium containing by-products[J]. Applied microbiology and biotechnology, 1990, 33(6): 712-715.

[15]路秀玲, 趙樹欣. 固態(tài)發(fā)酵中生物量的測定方法[J]. 天津輕工業(yè)學院學報, 2000(4): 57-62.

(責任編輯張坤)

Optimization in Solid-state Fermentation ofMetarhiziumanisopliaeMaZPTR-01

Cai Shouping1,2

(1. Co-Innovation Center for Sustainable Forestry in Southern China, College of Forestry, Nanjing Forestry University, Nanjing Suzhou 210037, China; 2. The Key Laboratory of Timber Forest Breeding and Cultivation for Mountainous Areas in Southern China, State Forestry Administration, Fujian Academy of Forestry, Fujian Fuzhou 350012, China)

In this paper, tookMetarhiziumanisopliaeMaZPTR-01 as the fermentation strain, optimum solid-state fermentation medium, water content and water-adding order were screened, the different thickness of medium for sporulation was determined, meanwhile the temperature dynamic of the medium during the fermentation process was monitored. The results showed that composition and proportion of different medium had a significant effect on conidial production ofMetarhiziumanisopliaeMaZPTR-01. The proportion of optimized medium in solid-state fermentation was A1B3C1D3, that was composed of corn flour (1 portion, volume ratio, the same below), wheat bran (3 portions), rice flour (1 portion), and rice hull (3 portions). The conidial production in the treatment which the medium was sterilized after adding water was higher than the treatment which the medium was sterilized before adding water. The medium of 500 g solid medium mixed with 400 g water had the ideal physical state and the highest conidial production after sterilization. 5 cm-thickness solid medium has the best culture efficiency. Based on the temperature variation curve during the fermentation, 0-24 h was the lag phase, 24-48 h was the logarithmic phase and 48-96 h was stationary phase followed by decline phase (sporulation phase).

Metarhiziumspp., solid-state fermentation, solid medium, medium thickness, growth curve

10. 11929/j. issn. 2095-1914. 2016. 05. 017

2015-10-10

福建省省屬公益類科研院所基本科研專項 (2014R1011-2、閩林研 [2013] 38號、2014R1011-3) 資助。

S788

A

2095-1914(2016)05-0100-06

第1作者：蔡守平 (1981—)，男，高級工程師。研究方向：森林害蟲生物防治。Email: caishouping@163.com。