液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定海產(chǎn)品中氯霉素不確定度的評(píng)定

□ 邢　華　湛江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所　廖建萌　湛江市食品藥品檢驗(yàn)所　羅　林　湛江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局

液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定海產(chǎn)品中氯霉素不確定度的評(píng)定

□ 邢華湛江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所廖建萌湛江市食品藥品檢驗(yàn)所羅林湛江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局

按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定氯霉素的含量，利用液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定了海產(chǎn)品中氯霉素含量，對(duì)氯霉素測(cè)量不確定度的來(lái)源進(jìn)行了分析和量化評(píng)定。水產(chǎn)品中氯霉素含量為5.0 μ g/k g時(shí)，測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為0.58 μ g/k g（k=2）。

測(cè)量不確定度；海產(chǎn)品；氯霉素；液質(zhì)聯(lián)用法

測(cè)量的目的是用某種手段或者方法獲得數(shù)值指標(biāo)的真值，在化學(xué)分析或儀器分析中得到的數(shù)值由于存在分析誤差會(huì)有波動(dòng)，這些數(shù)值的波動(dòng)圍繞在真值的周圍，離真值很近但不是真值，在一個(gè)合理的范圍內(nèi)該測(cè)量數(shù)值可以接受，往往也可以說(shuō)測(cè)量數(shù)值是一個(gè)近似估計(jì)值，具有離散性和不確定性，人們引入測(cè)量不確定度來(lái)描述這個(gè)離散性和不確定性，用測(cè)量不確定度來(lái)表達(dá)各種誤差的總和。在質(zhì)量管理體系中，對(duì)測(cè)定不確定度是重點(diǎn)管理范疇。原則上，所有的測(cè)定結(jié)果都應(yīng)該標(biāo)示不確定度，不確定度的評(píng)定方法是質(zhì)量計(jì)量研究領(lǐng)域的重點(diǎn)，不同的測(cè)定方法評(píng)定不確定度的內(nèi)容和過(guò)程不同。儀器分析和化學(xué)分析中不確定度是分析工作者要掌握的技能。

氯霉素是一種有效的廣譜抗生素。其化學(xué)結(jié)構(gòu)為對(duì)硝基-D-蘇阿糖型-二氯乙酰氨基-1，3-丙二醇，易溶于甲醇、乙酸乙酯、丙醇等有機(jī)溶劑，其結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)等效發(fā)色基團(tuán)存在，在275～280 nm處有最大紫外吸收峰。對(duì)于很多種類的真菌、霉菌等，氯霉素都具有很強(qiáng)的抑制作用，在海產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)曾被廣泛應(yīng)用。但由于低濃度的氯霉素藥物殘留會(huì)誘發(fā)多種致病菌如大腸桿菌、沙門(mén)菌等的耐藥性，還會(huì)引起人體粒狀白細(xì)胞缺乏癥、骨髓造血功能、障礙性貧血等其他惡性血液性疾病，對(duì)人體健康構(gòu)成潛在性的危害，引起世界許多國(guó)家和地區(qū)的高度重視。歐盟、美國(guó)等均在法規(guī)中規(guī)定氯霉素在動(dòng)物組織中不得檢出。

本文參考《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20756-2006），將該方法引入到實(shí)驗(yàn)室，測(cè)定海產(chǎn)品中氯霉素含量，分析了測(cè)定海產(chǎn)品中氯霉素含量的步驟和方法帶來(lái)的不確定度，并對(duì)測(cè)量氯霉素含量不確定度進(jìn)行了評(píng)定。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1試劑與儀器

高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：LCMS-8030（日本島津公司）；液相色譜柱：C18；電子分析天平：XS205（METTELER TOLEDO）；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.0%（Dr.E公司）。

1.2測(cè)定方法

取魚(yú)、蝦肌肉組織用肉類組織粉碎機(jī)粉碎。然后稱取樣品5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入15 mL 1%氨化乙酸乙酯，5 g無(wú)水硫酸鈉，均質(zhì)提取30 s，4000 r/min離心5 min。重復(fù)提取1次，合并上清液，定容50 mL，取10.0 mL乙酸乙酯提取液在45 ℃濃縮至干，用流動(dòng)相復(fù)溶解并定容至2.0 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，上機(jī)進(jìn)行測(cè)定。測(cè)量流程如圖1所示。

圖1　測(cè)量流程圖

1.3數(shù)學(xué)模型

測(cè)定海產(chǎn)品中氯霉素含量按(1)公式計(jì)算。

式（1）中，X為試樣中氯霉素含量，μg/kg；c為在標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合讀取的氯霉素樣品溶液濃度，μg/L；V為樣品最終定容體積，mL；m為樣品的稱樣量，g；r為回收率。

1.4測(cè)量不確定度來(lái)源

結(jié)合樣品的處理過(guò)程和儀器測(cè)定過(guò)程，分析測(cè)量不確定度主要有以下的來(lái)源：樣品取樣的隨機(jī)性和在稱樣是用到電子分析天平，其測(cè)量的隨機(jī)誤差構(gòu)成樣品稱樣量的不確定度；用來(lái)校準(zhǔn)未知樣濃度的標(biāo)準(zhǔn)擬合曲線的不確定度；定容體積引入的不確定度；提取、濃縮、轉(zhuǎn)移過(guò)程的誤差；儀器精密度和重復(fù)性引起的不確定度；LC/ MS儀器測(cè)定及校準(zhǔn)引入的不確定度；標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所產(chǎn)生的不確定度。測(cè)定氯霉素含量的步驟及不確定度來(lái)源見(jiàn)圖2。

2　不確定度評(píng)定

2.1氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的不確定度

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制方法為：準(zhǔn)確稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.010 0 g，置于含有少量甲醇100 mL容量瓶中，溶解后用甲醇溶解定容，得到氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為100 mg/L；然后取1.0 mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于100 mL容量瓶中并用甲醇定容。

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液的濃度按式（2）計(jì)算。

圖2　測(cè)定氯霉素含量的步驟及不確定度來(lái)源

式（2）中，配制氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液溶液濃度用C（m g/L）表示；v1為移取1.0 mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液體積，v2為兩次定容的體積相乘。

2.2稱量過(guò)程物質(zhì)帶來(lái)的不確定度

2.2.1稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量帶來(lái)的不確定度

由于稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用精度為0.000 1 g的電子分析天平，這個(gè)不確定度是由電子分析天平校準(zhǔn)不確定度引入，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響很小，可以忽略不計(jì)。

2.2.2氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量的不確定度。

因?yàn)闆](méi)有絕對(duì)純的物質(zhì)，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的絕對(duì)含量不可能為100%，按照購(gòu)買(mǎi)有資質(zhì)機(jī)構(gòu)提供的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)，顯示氯霉素含量的不確定度為：u（m）=0.5%。

2.2.3容量瓶定容體積的不確定度

使用前對(duì)容量瓶進(jìn)行檢定，根據(jù)具有資質(zhì)的機(jī)構(gòu)給出的檢定證書(shū)，100 mL容量瓶的不確定度為：u1（V1）=u2（V3）=0.05 mL；

同樣，1.0 mL可調(diào)移液器具有資質(zhì)的機(jī)構(gòu)給出的檢定證書(shū)顯示不確定度為：u3（V2）=0.034 mL。

綜合上述的各個(gè)因素，氯霉素溶液濃度的不確定度為整個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制過(guò)程合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，結(jié)果為：

2.3液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)量引入的不確定度

液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)量引入的不確定度可根據(jù)液質(zhì)聯(lián)用儀校準(zhǔn)證書(shū)提供：U=5%，k=2，液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)量引入的相對(duì)不確定度為:u(S1)=5%/2=0.025。其中，引入的為以下幾個(gè)方面：自動(dòng)進(jìn)樣器；儀器的調(diào)諧校準(zhǔn)；霧化器的霧化效率穩(wěn)定性；質(zhì)量傳輸穩(wěn)定性；質(zhì)量漂移的準(zhǔn)確性；標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的不確定度等。由于標(biāo)準(zhǔn)和樣品測(cè)定同樣受到B類不確定度影響，液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定氯霉素含量主要是有擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線引入不確定度。

2.4樣品稱量引入的不確定度

稱樣5.00 g，天平的檢定證書(shū)給出MPE為±0.05 g，取矩形分布，導(dǎo)致的不確定度為:

2.5前處理操作過(guò)程引入的不確定度

依據(jù)所述方法，對(duì)加標(biāo)樣品做6次前處理平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:RSD（%）=5.19%，由前處理操作過(guò)程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度即為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）=0.051 9%在不確定度公式中用urel(rep)表示。

3　合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

將上述的整個(gè)檢測(cè)流程引入的不確定度，計(jì)算測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

在根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的公式得到: U(W)=urel(W)×=0.058×5=0.29μ g/k g

4　擴(kuò)展不確定度與測(cè)量結(jié)果表示

根據(jù)擴(kuò)展不確定度的定義，取包含因子k=2時(shí)，則測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素含量擴(kuò)展不確定度為:U=k×u(W)=0.58 μg/kg。

用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法 GB/T 20756-2006，測(cè)定結(jié)果含量為5.0 μg/kg時(shí)，氯霉素測(cè)量結(jié)果應(yīng)表述為:W=(5.0±0.58) μg/kg，k=2。

5　結(jié)語(yǔ)

對(duì)氯霉素測(cè)量結(jié)果不確定度貢獻(xiàn)較大的分量有前處理操作過(guò)程引入的不確定度和液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)量引入的不確定度。水產(chǎn)品中氯霉素含量為5.0 μg/kg時(shí)，氯霉素測(cè)量結(jié)果應(yīng)表述為:W=(5.0±0.58)μg/kg，k=2.測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為0.58 μg/kg(k=2)。

［1］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GB/T 20756-2006）［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［2］中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南（CNAS GL06）［S］.2006.

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示（JJF 105921999）［S］.1999.

［4］李東剛，李春娟，吳凡，等.高效液相色譜法測(cè)定巴氏殺菌乳中糠氨酸不確定度的評(píng)定［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2008，17（3）：7-9.

［5］余孔捷，黃杰，劉正才，等.液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠、結(jié)晶紫的不確定度評(píng)定［J］.分析試驗(yàn)室，2008，27（5）：203-209.

邢華（1975-），女，漢族，河北廣宗人，本科，助理工程師。研究方向：計(jì)量管理。