• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    自發(fā)性糖尿病GK大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變模型的建立

    2016-09-10 08:50:59富曉旭馮露琳張翕宇胡蕓南小亞謝春光杜聯(lián)
    天津醫(yī)藥 2016年8期
    關(guān)鍵詞:心端高脂造模

    富曉旭,馮露琳,張翕宇,胡蕓,南小亞,謝春光,杜聯(lián)

    實(shí)驗(yàn)研究

    自發(fā)性糖尿病GK大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變模型的建立

    富曉旭1,馮露琳1,張翕宇1,胡蕓2,南小亞1,謝春光1,杜聯(lián)3△

    目的 通過高脂飼養(yǎng)GK大鼠建立一種符合人類糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)發(fā)病特點(diǎn),又操作簡(jiǎn)單的DPN大鼠模型。方法 7~8周齡SPF級(jí)雄性自發(fā)性2型糖尿病GK大鼠30只,喂養(yǎng)高脂飼料造模。另取30只SPF級(jí)正常Wistar大鼠作為正常組,喂養(yǎng)普通飼料。每周監(jiān)測(cè)動(dòng)物血糖、體質(zhì)量、飲水量、飼料量。分別于干預(yù)8周、12周、16周后檢測(cè)血清糖化血紅蛋白、坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度,取對(duì)側(cè)坐骨神經(jīng)做HE染色,TUNEL染色計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果 隨著造模時(shí)間延長,GK大鼠逐漸出現(xiàn)多飲、多食、生長遲緩等表現(xiàn)。與正常組相比,造模12周及16周的大鼠血糖、糖化血紅蛋白升高(P<0.01),感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度降低(P<0.01),運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度有一定下降趨勢(shì)(12周P<0.05,16周P>0.05),坐骨神經(jīng)病理形態(tài)及雪旺細(xì)胞凋亡情況均提示DPN的形成,并與正常大鼠形成鮮明對(duì)照(凋亡指數(shù)P<0.01)。結(jié)論 長期高脂飼料喂養(yǎng)的GK大鼠是DPN研究的良好模型,12周是較為成熟且經(jīng)濟(jì)的造模時(shí)間。

    糖尿病神經(jīng)病變;疾病模型,動(dòng)物;GK大鼠

    糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病常見的慢性并發(fā)癥之一,也是糖尿病患者致殘甚至致死的主要原因之一,嚴(yán)重地影響著糖尿病患者的生活質(zhì)量,造成了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)負(fù)擔(dān)。越來越多的有關(guān)DPN病理、生理的大鼠實(shí)驗(yàn)研究得到開展和報(bào)道,但實(shí)驗(yàn)所使用的大鼠卻沒有公認(rèn)的、主流的造模方法。本研究旨在通過高脂飼養(yǎng)GK大鼠,從而建立一種既符合人類DPN發(fā)病特點(diǎn),又操作簡(jiǎn)單的DPN大鼠模型。

    1 材料與方法

    1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。自發(fā)性2型糖尿病GK大鼠30只,SPF級(jí)、雄性、7~8周齡,購自中國科學(xué)院上海斯萊克(SLAC)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司,許可證號(hào):SCXK(滬)2012-0002。Wistar大鼠30只,SPF級(jí)、雄性、7~8周齡,購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,許可證號(hào):SCXK(川)2013-24。(2)主要儀器與試劑。血糖儀(美國強(qiáng)生公司),滬食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2010第2400865號(hào);石蠟切片機(jī)(德國Leica公司,2015型);數(shù)碼顯微攝像系統(tǒng)(麥克奧迪公司,PHY-Ⅲ型);圖像分析系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司,Image-Pro Plus 6.0型);酶標(biāo)儀(芬蘭Thermo公司,DENLEY DRAGON Wellscan MK3型);生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司,BL420型)。濃縮型DAB試劑盒(北京中杉金橋公司,批號(hào):K135925C);TUNEL試劑盒(瑞士羅氏公司,批號(hào):14590300);大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測(cè)試劑盒(上海西唐公司,貨號(hào):F15631)。

    1.2 方法

    1.2.1 造模 GK大鼠作為模型組予以高脂飼料喂養(yǎng)造模,Wistar大鼠作為正常組予以普通飼料喂養(yǎng),動(dòng)物飼料均購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)于四川省中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)屏障系統(tǒng)大鼠實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi),室溫(22±2)℃,空氣流通,相對(duì)濕度59%~61%,12 h光照維持,晝夜循環(huán)。自動(dòng)物飼養(yǎng)開始,每日觀察動(dòng)物一般情況,每周三于禁食8 h后逐一稱量體質(zhì)量,并測(cè)量小鼠尾靜脈血糖水平。干預(yù)8周、12周、16周后于2組中分別隨機(jī)抽取10只動(dòng)物進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。

    1.2.2 坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢測(cè) 采用BL420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢測(cè)。待動(dòng)物完全麻醉后,俯臥固定,剖開股二頭肌與半膜肌之間的皮膚,并沿兩肌之間行鈍性分離,暴露分離右側(cè)坐骨神經(jīng),剝離過程中蘸取液體石蠟保護(hù)神經(jīng),切斷腓總神經(jīng),以防止容積導(dǎo)電干擾。分別于坐骨神經(jīng)近心端和遠(yuǎn)心端放置2個(gè)特制的鉤狀電極,近心端為刺激電極,遠(yuǎn)心端為記錄電極,通過BL420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定系統(tǒng)刺激器給近心端電極施加刺激信號(hào),記錄儀將記錄刺激信號(hào)所誘發(fā)的神經(jīng)誘發(fā)電位從近心端傳導(dǎo)至遠(yuǎn)心端電極所需時(shí)間,重復(fù)電刺激共3次,每次間隔1 min,取平均值記為t。將動(dòng)物后足以自然狀態(tài)與脊柱成45°。夾角向斜后方拉直,沿坐骨神經(jīng)經(jīng)過部位和方向,在動(dòng)物體表以彎角規(guī)準(zhǔn)確測(cè)定兩極間的距離s。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNVC)=s/t。對(duì)換兩個(gè)電極,同樣方法測(cè)感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)。

    1.2.3 坐骨神經(jīng)HE染色 分離左側(cè)坐骨神經(jīng),取近心端約1 cm長的坐骨神經(jīng)投入4%甲醛固定液中固定。脫水前用自來水沖洗過夜,全自動(dòng)脫水機(jī)各級(jí)乙醇脫水、TO透明液透明、兩次浸蠟;包埋機(jī)常規(guī)石蠟包埋;輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片5 μm;HE染色;切片以TO透明液透明,加拿大樹膠封片供鏡檢。以上標(biāo)本均按病理檢驗(yàn)SOP程序進(jìn)行,部分標(biāo)本照像并記錄數(shù)據(jù)。

    1.2.4 雪旺細(xì)胞凋亡檢測(cè) 切片常規(guī)脫蠟至水;胰蛋白酶處理組織;加TUNEL反應(yīng)混合液,37℃,避光孵育60 min;PBS漂洗3次;滴加DAPI復(fù)染,避光孵育5 min;PBS漂洗3次;緩沖甘油封片,4℃冰箱避光暫存。熒光顯微鏡下觀察拍照、讀片,凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核顯示綠色熒光,復(fù)染DAPI的所有細(xì)胞的細(xì)胞核為藍(lán)色。在400倍鏡下隨機(jī)讀取2個(gè)視野,計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)。

    1.2.5 ELISA法檢測(cè)HbA1c 按大鼠HbA1c檢測(cè)試劑盒說明書逐步操作,主要步驟包括加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品(大鼠血清),加入抗體,沖洗,加緩沖液和終止液,490 nm酶標(biāo)儀檢測(cè)HbA1c。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料根據(jù)數(shù)據(jù)的具體分布情況用±s或M(P25,P75)描述。除凋亡指數(shù)外,2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn);凋亡指數(shù)組間比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn),組內(nèi)比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 2組大鼠一般情況比較 兩種類大鼠干預(yù)前體質(zhì)量差異較大,隨干預(yù)時(shí)間的延長,差異逐漸縮小,至12周開始差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。8周及以前,2組大鼠進(jìn)食量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,自12周起,模型組進(jìn)食量顯著高于正常組(P<0.01)。模型組大鼠的飲水量則從飼養(yǎng)之初開始,除4周外,始終高于正常組(P<0.01),見表1。

    Tab.1 Comparison of body mass,food intake and water intake at different time points between two groups表1 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量及飲水量比較(n=10,±s)

    Tab.1 Comparison of body mass,food intake and water intake at different time points between two groups表1 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量及飲水量比較(n=10,±s)

    *P<0.05,**P<0.01

    組別正常組模型組t體質(zhì)量(g)4周8周0周105.5±4.7 260.9±14.9 31.435**274.0±22.7 352.4±18.1 8.543**370.9±26.7 398.7±22.9 2.500*12周428.6±26.8 420.1±30.6 0.645 16周441.4±39.5 417.6±16.3 1.710組別正常組模型組t進(jìn)食量(g/d)0周17.9±1.3 18.6±1.6 0.634 4周8周20.9±1.2 19.3±0.6 1.961 23.4±0.7 25.6±3.6 1.060 12周20.5±2.2 28.4±1.5 5.164**16周23.0±0.9 33.7±1.1 12.894**組別正常組模型組t飲水量(mL/d)0周22±2 52±3 6.190**4周8周70±11 59±3 1.770 63±8 117±12 11.163**12周75±10 122±13 6.415**16周80±9 129±14 6.190**

    2.2 2組大鼠血糖及HbA1c水平的比較 隨著干預(yù)時(shí)間的延長,模型組血糖呈逐漸升高的趨勢(shì),至第12周趨于平穩(wěn);而正常組血糖始終處于正常水平。8周、12周、16周2組HbA1c變化與血糖水平的變化相一致,見表2。

    2.3 2組大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)速度的比較 隨著造模時(shí)間延長,模型組大鼠SNCV呈逐步下降趨勢(shì),且明顯低于正常組(P<0.01);MNCV速度下降不明顯,與正常組比較,其下降幅度也較SNCV為弱,僅12周差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    Tab.2 Comparison of FPG and HbA1c at different time points between two groups表2 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠空腹血糖、HbA1c比較(n=10±s)

    Tab.2 Comparison of FPG and HbA1c at different time points between two groups表2 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠空腹血糖、HbA1c比較(n=10±s)

    **P<0.01

    組別正常組模型組t空腹血糖(mmol/L)0周5.21±1.32 9.36±2.16 5.191**4周8周5.28±0.81 12.98±5.16 4.659**4.78±0.63 17.03±7.53 5.124**12周4.42±0.33 21.62±8.89 6.304**16周5.70±1.06 22.56±3.53 12.272**組別正常組模型組t HbA1c(%)16周5.70±1.06 22.56±3.53 8.029**8周4.78±0.63 17.03±7.53 4.032**12周4.42±0.33 21.62±8.89 5.971**

    Tab.3 Comparison of nerve conduction velocity at different time points between two groups表3 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較(n=10,m/s,±s)

    Tab.3 Comparison of nerve conduction velocity at different time points between two groups表3 各時(shí)間點(diǎn)2組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較(n=10,m/s,±s)

    *P<0.05,**P<0.01

    組別正常組模型組t SNCV 8周43.83±5.99 29.73±9.10 3.728**12周46.48±16.04 24.11±4.49 3.581**16周42.11±12.19 15.09±6.32 5.765**組別正常組模型組t MNCV 8周12.50±2.93 9.78±4.54 1.326 12周12.39±3.95 8.67±2.26 2.381*16周11.75±3.15 9.48±4.34 1.164

    2.4 2組大鼠坐骨神經(jīng)病理形態(tài)觀察 正常組8周、12周、16周切片可見神經(jīng)束膜連續(xù)完整,神經(jīng)纖維細(xì)胞核清晰,纖維呈束狀,部分切面可見其交織成網(wǎng)狀,神經(jīng)纖維束連續(xù),其間微血管較豐富。模型組8周切片可見部分神經(jīng)束膜破損及神經(jīng)束斷裂;12周神經(jīng)束膜均破損、不完整,神經(jīng)纖維細(xì)胞核固縮,神經(jīng)纖維束斷裂,溶解嚴(yán)重,發(fā)生液化性壞死,其間微血管少見,管腔較大,可見巨噬細(xì)胞;16周神經(jīng)纖維完整程度與12周基本相當(dāng),見圖1。

    2.5 2組大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞凋亡情況 正常組切片于熒光顯微鏡下幾乎未見凋亡細(xì)胞,模型組12周與16周切片均可見呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細(xì)胞核,見圖2。模型組凋亡指數(shù)明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);而模型組12周與16周凋亡指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表4。

    Tab.4 Comparison of apoptosis index of Schwann cells between two groups表4 2組大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞凋亡指數(shù)比較[n=5,%,M(P25,P75)]

    3 討論

    DPN一直是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)課題,近年圍繞DPN開展了大量研究工作。在大鼠實(shí)驗(yàn)中,DPN的造模方法大多依賴鏈脲佐菌素(STZ)破壞胰島β細(xì)胞,即便是小劑量分次給藥,也難以模擬人類2型糖尿病發(fā)展為DPN的過程,且成模率與死亡率之間成正比,令研究者難以把握使用劑量,至今未產(chǎn)生公認(rèn)的造模方法。

    由于疾病的隱匿性和檢測(cè)手段的差異,報(bào)道的DPN發(fā)病率范圍很大,為13%~75%不等[1],但逐年上升的趨勢(shì)十分明顯[2-3]。目前有關(guān)DPN病理、生理的大鼠實(shí)驗(yàn)大多采用STZ腹腔注射Wistar或SD大鼠,或配合高脂飲食或配合動(dòng)脈鉗夾等方式。此類方法的成模時(shí)間極不穩(wěn)定,4~16周皆有報(bào)道[4-7],且僅以血糖作為篩選模型的方式,更增加了模型的不穩(wěn)定性。

    GK大鼠是一種自發(fā)性2型糖尿病模型,具有血糖輕度升高、葡萄糖刺激的胰島素分泌能力受損、胰腺β細(xì)胞團(tuán)塊量減少等特點(diǎn),且長期患病后,易發(fā)生各種并發(fā)癥[8-9]。其嚴(yán)格的篩選方式和漫長的繁育時(shí)間決定了GK大鼠穩(wěn)定的生物學(xué)特性、較高的存活率及類似于人類2型糖尿病的血糖水平與胰島素分泌的特點(diǎn),已逐漸在國內(nèi)外糖尿病實(shí)驗(yàn)研究中得到越來越多的應(yīng)用。筆者以往的研究利用高脂飼料成功建立自發(fā)性糖尿病大血管病變小鼠模型[10]。本研究證實(shí),長期高脂飼料喂養(yǎng)的自發(fā)性糖尿病大鼠亦可以作為DPN研究的良好模型,12周是較為成熟且經(jīng)濟(jì)的造模時(shí)間;模型動(dòng)物的血糖、神經(jīng)傳導(dǎo)速度、坐骨神經(jīng)病理形態(tài)及雪旺細(xì)胞凋亡情況均與正常大鼠形成鮮明對(duì)照,且狀態(tài)穩(wěn)定。長期高脂飼料喂養(yǎng)的GK大鼠是一種符合人類DPN發(fā)病特點(diǎn),又操作簡(jiǎn)單的DPN大鼠模型。

    本研究發(fā)現(xiàn),隨著造模時(shí)間的延長,GK大鼠逐漸出現(xiàn)多飲、多食、生長遲緩、活動(dòng)量減少、大便黏滯、小便黃臭等表現(xiàn),與中醫(yī)學(xué)氣陰兩虛、痰濁阻滯的病證特點(diǎn)類似。自發(fā)性糖尿病大鼠為遺傳缺陷動(dòng)物,又屬于中醫(yī)學(xué)先天稟賦不足的范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,先天稟賦不足,腎精虧虛為糖尿病最主要的病理因素,隨著病程進(jìn)展,陰損及氣,氣陰兩虛是糖尿病多種并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)[11]。本實(shí)驗(yàn)造模采用的高脂飼料由豬油、膽固醇、豬膽鹽等“膏粱厚味”之品配比而成,不僅釀生痰濁,其滋膩之性又可礙脾傷胃,使氣血生化乏源,加重氣陰兩虛的程度,形成“氣陰兩虛、痰濁阻滯”之證[12]。該證又與中醫(yī)學(xué)對(duì)DPN的認(rèn)識(shí)相符合[13]。因此,該造模方法既模擬了DPN自然發(fā)病的過程,又大大縮短了這一進(jìn)程的時(shí)間,普遍適用于DPN的藥效、藥理學(xué)研究,尤其對(duì)中醫(yī)藥治療氣陰兩虛、痰濁阻滯型DPN的研究具有針對(duì)性。

    由于本研究造模過程中未加入任何直接損傷周圍神經(jīng)的造模因素,該模型的雪旺細(xì)胞凋亡情況不甚明顯。模型組切片在熒光顯微鏡下,并非每個(gè)視野內(nèi)都能見到凋亡細(xì)胞核,僅在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后得出較正常組凋亡程度高的結(jié)論。因而,在雪旺細(xì)胞凋亡相關(guān)的DPN研究中,不建議采用該模型。

    (圖1、2見插頁)

    [1]D′Souza M,Kulkarni V,Bhaskaran U,et al.Diabetic peripheral neuropathy and its determinants among patients attending a tertiary health care centre in Mangalore,India[J].J Public Health Res,2015,4(2):450.doi:10.4081/jphr.2015.450.

    [2]Lu B,Hu J,Wen J,et al.Determination of peripheral neuropathy prevalence and associated factors in Chinese subjects with diabetes and pre-diabetes-Shanghai diabetic neuropathy epidemiology and molecular genetics study(SH-DREAMS)[J].PLoS One,2013,8 (4):e61053.doi:10.1371/journal.pone.0061053.

    [3]George H,Rakesh P,Krishna M,et al.Foot care knowledge and practices and the prevalence of peripheral neuropathy among people with diabetes attending a secondary care rural hospital in southern India[J].J Family Med Prim Care,2013,2(1):27-32.doi:10.4103/2249-4863.109938.

    [4]Li M,Huang D,Liu X,et al.Tang-Tong-Fang confers protection against experimental diabetic peripheral neuropathy by reducing inflammation[J].Evid Based Complement Alternat Med,2015,2015:574169.doi:10.1155/2015/574169.

    [5]Yang X,Yao W,Li Q,et al.Mechanism of Tang Luo Ning effect on attenuating of oxidative stress in sciatic nerve of STZ-induced diabetic rats[J].J Ethnopharmacol,2015,174:1-10.doi:10.1016/ j.jep.2015.07.047.

    [6]Han XS,Huang Y,Jing HJ,et al.Neuroprotective effect of RYGB in Zucker fatty diabetic rats[J].Int J Clin Exp Med,2014,7(10):3297-3304.

    [7]Liu LX,Liu HW,Liu LQ.Type 2 diabetics mellitus and its features of peripheral neruopathy in rat[J].Journal of Brain and Nervous Diseases,2005,13(2):117-119.[劉立新,劉好文,劉力強(qiáng).實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型及其周圍神經(jīng)病變特點(diǎn)[J].腦與神經(jīng)疾病雜志,2005,13(2):117-119].

    [8]Goto Y,Kakizaki M,Masaki N.Spontaneous diabetes produced by selective breeding of normal Wistar rats[J].Proc Jpn Acad,1975,51(1):80-85.

    [9]Liu T,Li H,Ding G,et al.Comparative genome of GK and Wistar rats reveals genetic basis of type 2 diabetes[J].PLoS One,2015,10(11):e0141859.doi:10.1371/journal.pone.0141859.

    [10]Cho YM,Xie CG.The effects of Chinese herbal shenqi decoction on insulin resistance and fatty liver in genetically diabetic KK-Ay mice[J].Diabetes Research and Clinical Practice,2014,106(S1):S162.

    [11]Gong GM,Qi LG,Li J,et al.Epidemiology of chronic diabetic complications and research of symptoms of traditional chinese medicine of newly-diagnosed type 2 diabetes[J].Liaoning Journal of TCM,2012,39(1):26-30.[龔光明,亓魯光,李潔,等.新診斷2型糖尿病慢性并發(fā)癥的調(diào)查分析及其中醫(yī)證型的研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(1):26-30].

    [12]Wang F,He HL,Zhang HM,et al.Experiment study on effect of shenqi compound prescription on abnormal lipid metabolism in GK rats[J].Tianjin Journal of TCM,2007,24(6):507-508.[王芬,何華亮,張紅敏,等.參芪復(fù)方對(duì)GK大鼠脂代謝異常的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī)藥,2007,24(6):507-508].

    [13]Pang GM,Yan Y,Zhu P,et al.Clinic draft specification of traditional Chinese medicine about diabetic peripheral neuropathy[J].China Journal of TCMand Pharmacy,2010,25(2):260-264.[龐國明,閆鏞,朱璞,等.糖尿病周圍神經(jīng)病變中醫(yī)診療規(guī)范初稿[J].中華中醫(yī)藥雜志,2010,25(2):260-264].

    (2015-10-13收稿 2016-03-14修回)

    (本文編輯 李國琪)

    The establishment of diabetic peripheral neuropathy model in spontaneous diabetic GK rats

    FU Xiaoxu1,F(xiàn)eng Lulin1,ZHANG Xiyu1,HU Yun2,NAN Xiaoya1,XIE Chunguang1,DU Lian3△
    1 Clinical Medicine College of Chengdu University of TCM,Chengdu 610072,China;2 Department of Endocrinology,Chongqing TCM Hospital;3 Basic Medical College of Chengdu University of TCM△

    Objective To establish a simple diabetic peripheral neuropathy(DPN)rat model with the high fat-fed in GK rats.Methods A total of 30 GK rats(7-8 weeks)were fed with high-fat diet to establish the DPN model.Thirty normal Wistar rats were fed with ordinary diet(control group).The blood-sugar value,body mass,water-intake and food-intake were monitored every week in two groups.The serum level of glycosylated hemoglobin,the right sciatic nerve conduction velocity were detected at 8,12 and 16 weeks respectively.The left sciatic nerve was used for HE and TUNEL staining. Results The manifestations of polydipsia,polyphagia and growth retardation were gradually appeared in GK rats.After 12 and 16 weeks,the blood-sugar and glycosylated hemoglobin were significantly increased in GK rats compared with those of normal Wistar rats(P<0.01).The sensory nerve conduction velocity decreased obviously(P<0.01).And motor nerve conduction velocity showed a certain decline trend(12 week P<0.05,16 week P>0.05).The sciatic nerve pathological features and Schwann cell apoptosis suggested that the model of DPN was successfully established(apoptosis index,P<0.01).Conclusion GK rats fed by high-fat diet are the satisfactory models of the DPN in experimental research.And 12-week is a suitable and economical time for molding.

    diabetic neuropathies;disease models,animal;Goto-Kakizaki rats

    R587.25

    A

    10.11958/20150225

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81373783)

    1成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院(郵編610072);2重慶市中醫(yī)院內(nèi)分泌科;3成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

    富曉旭(1988),女,博士在讀,主要從事中醫(yī)藥防治內(nèi)分泌及代謝性疾病的實(shí)驗(yàn)研究

    △通訊作者 E-mail:1325537604@qq.com

    猜你喜歡
    心端高脂造模
    腎陽虛證動(dòng)物模型建立方法及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展
    脾腎陽虛型骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型造模方法及模型評(píng)價(jià)
    濕熱證動(dòng)物模型造模方法及評(píng)價(jià)研究
    升結(jié)腸脂肪瘤致腸套疊及遠(yuǎn)心端腸梗阻1例
    高脂血標(biāo)本對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的干擾及消除對(duì)策
    胡桃夾綜合征患者左腎靜脈超聲影像特征和規(guī)律及其診斷意義探究
    煙霧病患者顳淺動(dòng)脈—大腦中動(dòng)脈搭橋術(shù)中朝向大腦中動(dòng)脈近心端實(shí)施血管吻合的效果
    肺動(dòng)脈帶瓣管道產(chǎn)品獲批上市
    運(yùn)動(dòng)降低MG53表達(dá)及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    高脂飲食誘導(dǎo)大鼠生精功能障礙
    日韩大尺度精品在线看网址| 一级毛片高清免费大全| 成人欧美大片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲美女视频黄频| 九九热线精品视视频播放| 亚洲国产精品成人综合色| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产伦在线观看视频一区| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲av免费在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品91蜜桃| 亚洲自拍偷在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美zozozo另类| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av黄色大香蕉| 成人永久免费在线观看视频| 欧美区成人在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲内射少妇av| 欧美三级亚洲精品| 久久香蕉国产精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲国产精品久久男人天堂| 香蕉久久夜色| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲国产色片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一二三四社区在线视频社区8| 日韩欧美免费精品| 国产不卡一卡二| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 有码 亚洲区| 最新美女视频免费是黄的| 最后的刺客免费高清国语| 国产淫片久久久久久久久 | 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲在线自拍视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜两性在线视频| 午夜影院日韩av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久精品91无色码中文字幕| 成人18禁在线播放| 亚洲色图av天堂| 在线视频色国产色| 免费观看人在逋| 精品一区二区三区视频在线 | 好男人电影高清在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 一本综合久久免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日本黄色片子视频| 一个人看的www免费观看视频| 国产高清激情床上av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 校园春色视频在线观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产视频一区二区在线看| 国产精品久久久人人做人人爽| 嫩草影院入口| 国产高清三级在线| 精品电影一区二区在线| 欧美性感艳星| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久国产精品影院| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 好男人在线观看高清免费视频| 国产色婷婷99| 免费看a级黄色片| 18禁在线播放成人免费| 99热这里只有精品一区| 国产极品精品免费视频能看的| www.999成人在线观看| 一本一本综合久久| 亚洲成av人片在线播放无| 午夜免费成人在线视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 日本成人三级电影网站| 高清日韩中文字幕在线| 可以在线观看的亚洲视频| 人人妻人人看人人澡| 日本五十路高清| 国产伦人伦偷精品视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品福利观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 九九在线视频观看精品| 宅男免费午夜| 99热6这里只有精品| netflix在线观看网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 一区二区三区免费毛片| 国产探花在线观看一区二区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 成人无遮挡网站| 日本一本二区三区精品| av中文乱码字幕在线| 一个人免费在线观看电影| 老司机福利观看| 岛国在线观看网站| 好男人电影高清在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久久久久中文| av中文乱码字幕在线| 国产黄色小视频在线观看| 国产单亲对白刺激| 丁香六月欧美| 日韩高清综合在线| 国产乱人视频| 小说图片视频综合网站| www日本在线高清视频| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲 国产 在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 中文字幕av在线有码专区| 欧美最新免费一区二区三区 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产视频一区二区在线看| 亚洲久久久久久中文字幕| 在线观看舔阴道视频| 免费在线观看影片大全网站| 美女大奶头视频| 久久久久久大精品| 国产精品电影一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 两个人视频免费观看高清| 精品久久久久久久久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 全区人妻精品视频| 亚洲av电影在线进入| 99久久综合精品五月天人人| 一区二区三区高清视频在线| 欧美性猛交黑人性爽| 免费看日本二区| av天堂中文字幕网| www.色视频.com| 在线免费观看的www视频| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美日韩精品网址| 成年女人永久免费观看视频| 国产精品永久免费网站| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲性夜色夜夜综合| 日本三级黄在线观看| 亚洲内射少妇av| 最新在线观看一区二区三区| 身体一侧抽搐| 欧美在线一区亚洲| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲精品色激情综合| 精品无人区乱码1区二区| 色综合婷婷激情| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久亚洲av毛片大全| av天堂在线播放| 国产精品三级大全| 欧美成狂野欧美在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产野战对白在线观看| 俺也久久电影网| 欧美日韩综合久久久久久 | av片东京热男人的天堂| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲无线在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 18禁国产床啪视频网站| 欧美黄色淫秽网站| 99视频精品全部免费 在线| 九九热线精品视视频播放| 欧美3d第一页| 久久精品国产综合久久久| 免费在线观看影片大全网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 天堂√8在线中文| 一级毛片女人18水好多| 成人特级黄色片久久久久久久| 免费av毛片视频| 欧美成人a在线观看| 性欧美人与动物交配| 在线观看午夜福利视频| 欧美一级毛片孕妇| 少妇熟女aⅴ在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 性色avwww在线观看| 久久久久久久久中文| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲成av人片免费观看| 国内精品久久久久精免费| 精品久久久久久,| 国产精华一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲美女视频黄频| 好男人在线观看高清免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| 免费高清视频大片| 欧美成人a在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩国内少妇激情av| av国产免费在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 狂野欧美激情性xxxx| 天天一区二区日本电影三级| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 偷拍熟女少妇极品色| 女人被狂操c到高潮| 亚洲一区二区三区不卡视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩乱码在线| 狂野欧美激情性xxxx| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利欧美成人| 亚洲av电影在线进入| 精品日产1卡2卡| 日韩免费av在线播放| 一个人观看的视频www高清免费观看| 免费观看精品视频网站| 国产免费一级a男人的天堂| 深夜精品福利| 日本免费a在线| 免费在线观看成人毛片| 少妇的逼水好多| av中文乱码字幕在线| 国产黄色小视频在线观看| 久久九九热精品免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久草成人影院| 一个人看视频在线观看www免费 | 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜两性在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产欧美日韩一区二区精品| 成人欧美大片| 亚洲精品在线观看二区| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产乱人伦免费视频| 精品国产美女av久久久久小说| 十八禁人妻一区二区| 中文字幕久久专区| 亚洲精品亚洲一区二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 俄罗斯特黄特色一大片| 一区二区三区国产精品乱码| 九色成人免费人妻av| 日本在线视频免费播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 在线免费观看不下载黄p国产 | 香蕉久久夜色| or卡值多少钱| 一级毛片高清免费大全| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国内精品久久久久精免费| 午夜福利18| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 级片在线观看| 国产毛片a区久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲18禁久久av| www.www免费av| 亚洲人成网站高清观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美+日韩+精品| 一a级毛片在线观看| 亚洲美女视频黄频| 日韩高清综合在线| 真人做人爱边吃奶动态| 久久国产乱子伦精品免费另类| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 日本与韩国留学比较| 禁无遮挡网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品久久久久久精品电影| 国产精品99久久99久久久不卡| avwww免费| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 99热6这里只有精品| 中文字幕av在线有码专区| 久久久久亚洲av毛片大全| 69人妻影院| 99热这里只有是精品50| 此物有八面人人有两片| av视频在线观看入口| 国产成人a区在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费大片18禁| 黄色丝袜av网址大全| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一个人免费在线观看电影| 午夜久久久久精精品| 91字幕亚洲| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 女同久久另类99精品国产91| 亚洲无线在线观看| av黄色大香蕉| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲黑人精品在线| 少妇高潮的动态图| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 51午夜福利影视在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 免费高清视频大片| 国产激情欧美一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 丁香六月欧美| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品野战在线观看| 波多野结衣高清作品| 午夜久久久久精精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一区福利在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 51午夜福利影视在线观看| x7x7x7水蜜桃| 欧美性感艳星| 欧美中文日本在线观看视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲美女视频黄频| 性色avwww在线观看| 一级毛片高清免费大全| 亚洲欧美日韩无卡精品| 天天躁日日操中文字幕| 真人做人爱边吃奶动态| 一区福利在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 免费av不卡在线播放| 免费搜索国产男女视频| 亚洲专区国产一区二区| 一本久久中文字幕| 欧美日韩黄片免| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 熟女人妻精品中文字幕| 老熟妇仑乱视频hdxx| 成人性生交大片免费视频hd| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲av免费高清在线观看| 国产99白浆流出| 亚洲av免费高清在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品久久久久久久电影 | 日本熟妇午夜| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产毛片a区久久久久| 欧美zozozo另类| 成人国产综合亚洲| 日本 欧美在线| 在线观看66精品国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲精品一区av在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本五十路高清| e午夜精品久久久久久久| 男人舔奶头视频| 久久久久性生活片| 国产真实伦视频高清在线观看 | 欧美成狂野欧美在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品爽爽va在线观看网站| 18+在线观看网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲av一区综合| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av熟女| 亚洲av五月六月丁香网| 最后的刺客免费高清国语| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲国产色片| 久久久久亚洲av毛片大全| av片东京热男人的天堂| 欧美bdsm另类| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品一及| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产麻豆成人av免费视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精华霜和精华液先用哪个| 婷婷丁香在线五月| 香蕉av资源在线| 级片在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲中文日韩欧美视频| 性色av乱码一区二区三区2| 国内精品一区二区在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩福利视频一区二区| 午夜福利18| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品 国内视频| 国产精品久久久久久久电影 | www日本黄色视频网| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久久久久久久大av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| netflix在线观看网站| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 美女cb高潮喷水在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲avbb在线观看| 亚洲18禁久久av| 看黄色毛片网站| 日韩欧美免费精品| 黄色成人免费大全| av女优亚洲男人天堂| 日本五十路高清| 老司机福利观看| 高清日韩中文字幕在线| 看片在线看免费视频| 国产在视频线在精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 看片在线看免费视频| 欧美日韩乱码在线| 女同久久另类99精品国产91| 操出白浆在线播放| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲avbb在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产午夜精品论理片| 欧美黑人巨大hd| 日本黄大片高清| 可以在线观看的亚洲视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久午夜亚洲精品久久| 免费无遮挡裸体视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩欧美国产在线观看| 久久人人精品亚洲av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 三级国产精品欧美在线观看| 在线观看午夜福利视频| 成人国产综合亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美乱色亚洲激情| 舔av片在线| netflix在线观看网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久精品国产综合久久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 少妇的逼水好多| 中文字幕熟女人妻在线| 美女被艹到高潮喷水动态| 热99在线观看视频| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜福利18| 国产视频内射| 日本免费一区二区三区高清不卡| 青草久久国产| 亚洲电影在线观看av| 久久精品91无色码中文字幕| 又黄又爽又免费观看的视频| 超碰av人人做人人爽久久 | 久久国产精品影院| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲成av人片在线播放无| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国内精品久久久久精免费| 国产精品久久久久久精品电影| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产真人三级小视频在线观看| 成年免费大片在线观看| 国产精品影院久久| 三级毛片av免费| 国产爱豆传媒在线观看| av女优亚洲男人天堂| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美成人一区二区免费高清观看| 白带黄色成豆腐渣| 日日干狠狠操夜夜爽| 99国产精品一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 日本熟妇午夜| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜日韩欧美国产| 久久精品综合一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| 国产私拍福利视频在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 99久国产av精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产视频内射| av中文乱码字幕在线| 女人被狂操c到高潮| 搡老岳熟女国产| 老司机福利观看| 少妇丰满av| 亚洲avbb在线观看| av欧美777| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产欧美日韩一区二区三| 级片在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美黑人巨大hd| 久久国产精品影院| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久久九九精品影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一区二区三区激情视频| 毛片女人毛片| 精品一区二区三区人妻视频| 午夜精品在线福利| 一区二区三区激情视频| tocl精华| 好男人电影高清在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 免费看a级黄色片| 国产视频内射| 亚洲乱码一区二区免费版| 在线看三级毛片| 精品人妻1区二区| 免费在线观看成人毛片| 国产男靠女视频免费网站| 国产日本99.免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 免费在线观看成人毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 午夜福利18| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 嫩草影视91久久| 少妇人妻精品综合一区二区 | 女警被强在线播放| 99国产极品粉嫩在线观看| www国产在线视频色| 少妇丰满av| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费电影在线观看免费观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久久久久大av| 真实男女啪啪啪动态图| 99精品欧美一区二区三区四区| 看免费av毛片| 亚洲无线在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产探花极品一区二区| 欧美激情在线99| 九九在线视频观看精品| 俺也久久电影网| 日韩欧美 国产精品| 国内精品久久久久久久电影| 丁香欧美五月| 黄色丝袜av网址大全| 99热只有精品国产| 国产激情欧美一区二区| 99国产综合亚洲精品| 国内精品一区二区在线观看| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| av女优亚洲男人天堂| 精品人妻1区二区| 免费看日本二区| 国产一区二区在线观看日韩 | 又黄又爽又免费观看的视频| 精品久久久久久久末码| 99视频精品全部免费 在线| 久久久色成人| 亚洲精品亚洲一区二区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 精品日产1卡2卡| 精品国产美女av久久久久小说| 国产 一区 欧美 日韩| 长腿黑丝高跟| 亚洲国产欧美网| 99国产综合亚洲精品| 色老头精品视频在线观看| av视频在线观看入口| 在线播放无遮挡| 床上黄色一级片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 桃色一区二区三区在线观看|