TS水平在晚期胃癌患者中對(duì)替吉奧化療療效的影響

張丹　陳妍妍

[摘要]目的 探討胸苷酸合成酶（TS）水平對(duì)晚期胃癌（AGC）患者接受替吉奧（S-1）化療方案療效的影響。方法 選取2014年2月～2015年2月我院收治的AGC患者共50例，所有患者均經(jīng)病理確診。使用RT-PCR法檢測(cè)所有患者化療前外周血TS mRNA水平，將患者分為TS mRNA高表達(dá)組與低表達(dá)組，之后給予口服S-1化療，并觀察化療效果與TS mRNA水平的關(guān)系，進(jìn)行相應(yīng)分析。結(jié)果 所有患者外周血中TS mRNA表達(dá)水平平均為2.61。兩組相比，高表達(dá)組患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率為96.27%，高于低表達(dá)組的69.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而在性別、年齡、腫瘤大小及浸潤(rùn)深度方面的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。同時(shí)，高表達(dá)組總有效率為66.67%，低于低表達(dá)組的總有效率91.30%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），TS mRNA表達(dá)量與化療療效呈負(fù)相關(guān)，r=-3.4512。結(jié)論 外周血TS mRNA表達(dá)水平與AGC患者S-1化療療效呈負(fù)相關(guān)陛，其水平越高，化療有效率越低，患者生存時(shí)間越短，反之亦然。

[關(guān)鍵詞]胸苷酸合成酶；晚期胃癌；替吉奧；療效

[中圖分類號(hào)]R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]2095-0616（2016）12-166-04

目前我國(guó)的胃癌發(fā)生率正逐年上升，且其發(fā)病隱匿，初期臨床表現(xiàn)往往不能引起患者的足夠重視，待來(lái)院就診，常已為中晚期，錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)。替代吉奧（S-1）是近年來(lái)臨床上常用的晚期胃癌患者化療藥物，其效果穩(wěn)定，但一直缺乏特異性的療效評(píng)價(jià)標(biāo)靶。本研究選取2014年2月～2015年2月我院收治的晚期胃癌（AGC）患者共50例，探討TS mRNA水平在晚期胃癌患者中對(duì)接受S-1化療方案后療效的影響，結(jié)果令人滿意?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

選取2014年2月-2015年2月我院收治的AGC患者共50例，其中男28例，女22例，年齡45-77歲，平均（65.4±7.5）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理學(xué)確診胃癌原發(fā)灶，經(jīng)MR或CT等影像學(xué)檢查有1處以上轉(zhuǎn)移灶；（2）18歲≤年齡≤80歲；（3）功能狀態(tài)評(píng)分（Ps評(píng)分）≥2分；（4）無(wú)化療治療史或距末次化療史>6個(gè)月；（5）預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月。排除年齡過(guò)大或過(guò)小，以及合并有心、腦、肺、腎嚴(yán)重器質(zhì)性病變者。所有患者均經(jīng)患者本人知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核。

1.2治療方法

使用S-1膠囊（山東新時(shí)代藥業(yè)，H20130802），80mg/（m²×d），分2次口服。共口服14d。以3周為一個(gè)周期?；熎陂g，本研究中所有患者均給予保肝、止吐、止瀉、移酸、防過(guò)敏、升白細(xì)胞和血小板等對(duì)癥支持治療。

1.3療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

使用計(jì)算機(jī)斷層掃描在每2個(gè)周期結(jié)束后對(duì)患者可測(cè)量病灶采用UICC標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。病灶完全消失，并持續(xù)1個(gè)月以上定義為完全緩解（CR）；病灶縮小超過(guò)50%，時(shí)間超過(guò)4周定義為部分緩解（PR）；病灶縮小未達(dá)到50%或增大不超過(guò)25%定義為疾病穩(wěn)定（SD）；病灶出現(xiàn)增大，并超過(guò)25%，甚至出現(xiàn)新病灶定義為疾病進(jìn)展（PD）?；熡行?（CR+PR）/n×100%，化療無(wú)效率=（SD+PD）/n×100%?？偵嫫冢╫verall survival，OS）為患者人組至任何原因致其死亡的時(shí)間。對(duì)本研究所有患者進(jìn)行從入組開始到失訪或死亡的隨訪工作。

1.4實(shí)驗(yàn)試劑與方法

1.4.1實(shí)驗(yàn)試劑 RNA提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogengen公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司，PCR擴(kuò)增試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司。TS引物序列為：上游為5-ACC AAC CCT GAC GACAGA AG-3，下游為5-ATG CGG ATT GTA CCCTTC AA-3，由美國(guó)Invitrogengen公司合成。

1.4.2實(shí)驗(yàn)方法 取患者外周血10mL，抗凝處理，使用Ficoll-Hypaque法對(duì)其有核細(xì)胞進(jìn)行分離后，用經(jīng)焦磷酸二乙酯（DEPC）處理的PBS液進(jìn)行洗滌，共2次。使用RNA提取試劑盒根據(jù)說(shuō)明書操作提取總RNA，并以之為模板，根據(jù)RT-PCR試劑盒說(shuō)明書操作進(jìn)行RT-PCR循環(huán)，在94℃條件下變性30s后，以55℃退火1min，之后在68℃下延伸2min，共35個(gè)循環(huán)。使用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS18.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。根據(jù)Ts mRNA表達(dá)水平的均值，將所有患者分為高表達(dá)組與低表達(dá)組。使用x2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)Ts mRNA表達(dá)水平與臨床病理特征間的關(guān)系，以Spearman相關(guān)分析法分析TS mRNA表達(dá)水平與化療療效的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 TSmRNA表達(dá)水平與臨床病理特征間的相關(guān)性

本研究中，所有患者外周血中TS mRNA表達(dá)水平經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)顯示，相對(duì)于B-actin相對(duì)分?jǐn)?shù)范圍為0.89～12.75，平均2.61。將2.61作為分界，TS mRNA表達(dá)水平>2.61為高表達(dá)組，共27例患者；Ts mRNA表達(dá)水平≤2.61為低表達(dá)組，共23例患者。在與臨床病理特征關(guān)系的結(jié)果中顯示，高表達(dá)組中有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者為26例，占高表達(dá)組患者的96.27%，高于低表達(dá)組中遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率（69.56%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而兩組患者在性別、年齡、腫瘤大小及浸潤(rùn)深度方面的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2兩組患者S-1436療療效情況

兩組患者化療效果對(duì)比分析結(jié)果顯示，TSmRNA高表達(dá)組，CR、PR分別為5例和13例，總有效率為66.67%。而Ts mRNA低表達(dá)組中，CR與PR分別為8例和13例，總有效率91.30%，高于高表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 TS mlLNA表達(dá)量與S-HE療療效相關(guān)性分析

采用Spearman相關(guān)分析法分析TsmRNA表達(dá)量與S-1化療有效率之間的關(guān)系得知r=-3.4512，表明TsmRNA表達(dá)量與S-1化療有效率成負(fù)相關(guān)關(guān)系。

3.討論

作為由替加氟、吉美嘧啶與奧替拉西按照1.0：0.4：1.0摩爾比所構(gòu)成的復(fù)方化療藥劑，S-1目前正逐漸成為晚期胃癌患者的一線臨床治療藥物。其中，5-Fu前體藥物替加氟能夠通過(guò)體內(nèi)轉(zhuǎn)化達(dá)到抗腫瘤目的；吉美嘧啶則可以通過(guò)抑制5-Fu在體內(nèi)的分解代謝，延長(zhǎng)5-Fu的有效濃度維持時(shí)間，增加S-1抗瘤活性；奧替拉西則通過(guò)阻斷5-Fu的磷酸化，對(duì)其口服后在胃腸組織中的分布造成影響，大大降低5-Fu的毒性副作用。三者的復(fù)合制劑S-1經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者的研究顯示，在治療晚期胃癌患者有療效可靠，耐受性好，毒副作用小等諸多優(yōu)點(diǎn)。

而5-Fu作為S-1的主要抗瘤成分，是通過(guò)代謝為活性產(chǎn)物5-fluoro-deoxyuridine-monopho-sphate（FdUMP）發(fā)揮作用。dUMP甲基化為dTMP需要Ts進(jìn)行催化，因此，Ts是S-1正常代謝并發(fā)揮抗瘤作用的重要DNA聚合靶酶。關(guān)于TS表達(dá)水平與S-1抗腫瘤化療療效的相關(guān)性，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究結(jié)果不一。Miyazaki I等通過(guò)研究認(rèn)為，TS蛋白表達(dá)水平在預(yù)測(cè)S-1化療效果中有重要價(jià)值，但Fujiwara H等的研究結(jié)果卻顯示，在人胃癌裸鼠模型中，TS酶活性與S-1的抗腫瘤活性并無(wú)聯(lián)系。Miyamoto s等通過(guò)免疫組化法檢測(cè)Ts表達(dá)水平，也得出Ts表達(dá)水平與S-1抗瘤活性無(wú)關(guān)的結(jié)論。而在本研究中，筆者使用RT-PCR法對(duì)TS mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示TS mRNA表達(dá)高水平組的患者，其治療總有效率低于低表達(dá)組患者，且與臨床病理特征關(guān)系的研究也顯示，高表達(dá)組患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率為96.27%，高于低表達(dá)組的69.56%。通過(guò)量化TS mRNA表達(dá)量，用Spearman相關(guān)分析方法分析其與S-1化療方案療效相關(guān)性得出，相關(guān)系數(shù)r=-3.4512。以上結(jié)果均提示，外周血Ts mRNA表達(dá)水平與AGC患者S-1化療療效呈負(fù)相關(guān)。TS mRNA低表達(dá)的AGC患者使用S-1化療效果較好，且遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率低。但本研究樣本量有限，對(duì)于TS水平對(duì)AGC患者S-1化療的預(yù)測(cè)價(jià)值，仍有待于進(jìn)一步的研究。

綜上所述，外周血TS mRNA表達(dá)水平與AGC患者S-1化療療效呈負(fù)相關(guān)性，其水平越高，化療有效率越低，患者生存時(shí)間越短，反之亦然。