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    雙色茉莉的組培快繁體系建立

    2016-09-02 10:01劉敏杰劉柱明
    現(xiàn)代園藝 2016年13期
    關(guān)鍵詞:培養(yǎng)基

    劉敏杰 劉柱明

    摘要:以雙色茉莉嫩枝莖段為外植體,采用不同的滅菌處理,不同的誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)基,進(jìn)行最佳培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)程序的研究。結(jié)果表明:滅菌處理以75%乙醇浸泡10s后,再在O.1%升汞溶液中浸泡3min為最佳;腋芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;誘導(dǎo)生根的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭;試管苗移栽基質(zhì)以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高,可達(dá)95%。

    關(guān)鍵詞:雙色茉莉;滅菌方法;組織快繁;培養(yǎng)基

    雙色茉莉又名鴛鴦茉莉,是茄科常綠矮灌木?;ǘ涑蹰_(kāi)為藍(lán)紫色,漸變?yōu)檠┣嗌詈笞優(yōu)榘咨?,由于在同株上能同時(shí)見(jiàn)到藍(lán)紫色和白色的花,故名雙色茉莉。其花期長(zhǎng),花香濃郁,盆栽可點(diǎn)綴庭院和居室,片植色彩斑斕,具有廣闊的市場(chǎng)前景。目前雙色茉莉多采用扦插和壓條的方法繁殖,但該方法容易攜帶病毒,使植株生長(zhǎng)不良,且繁殖系數(shù)小,成苗慢。利用組培技術(shù)可以優(yōu)質(zhì)、快速地生產(chǎn)大量的雙色茉莉苗來(lái)滿足市場(chǎng)需求。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    2014年4月22號(hào)在信陽(yáng)綠欣花市購(gòu)買的2~3年生雙色茉莉盆栽。從生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害的新生嫩枝上剪取帶頂芽或腋芽的莖段,作為外植體培養(yǎng)材料。

    1.2 方法

    1.2.1 外植體的滅菌。剪去外植體莖段葉片,留葉柄基部,先用自來(lái)水沖洗3 min,再用洗潔精漂洗5 min,后用流水沖洗30 min。將清洗干凈的莖段放在燒杯中轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)。然后用75%乙醇浸泡10、20s做表面消毒,無(wú)菌水沖洗4次,再移入0.1%的升汞溶液中,分別浸泡1、3、5min。后用無(wú)菌水浸泡2 min,并沖洗3次,用滅菌濾紙吸干水分備用。將滅菌好的外植體用解剖刀切成1cm大小的莖段,接種到初代培養(yǎng)基上,初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。每個(gè)處理分別接種10瓶,每瓶接種3個(gè)外植體。定期觀察并記錄外植體污染情況和外植體成活率。

    1.2.2 腋芽誘導(dǎo)。以滅菌效果最佳的處理進(jìn)行外植體滅菌,切取帶腋芽的莖段1cm大小,接種到下列培養(yǎng)基中:A1:MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;A2:MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;A3:MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.1mg/L;A4:MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L;A5:MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 0.1mg/L;A6:MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.1 mg/L。每種處理接種10瓶,每瓶接種3個(gè)外植體,定期觀察芽的誘導(dǎo)情況。

    1.2.3 繼代培養(yǎng)。將誘導(dǎo)出的芽叢,轉(zhuǎn)接于MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

    1.2.4 生根培養(yǎng)。選取2cm以上,有3片完整葉片的無(wú)根苗轉(zhuǎn)接到下列培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根:B1:1/2 Ms;B2:1/2MS+NAA 0.5mg/L;B3:1/2MS+NAA 1.0mg/L;B4:1/2MS+NAA 2.0mg/L;B5:1/2 MS+NAA 3.0mg/L,并在B3、B4、B5培養(yǎng)基中各添加濃度為0.2%的活性炭。每種處理接種10瓶,每瓶接種3株,20d后,統(tǒng)計(jì)生根率。

    以上MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為30g/L,1/2 MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為20g/L,瓊脂含量均為8g/L,pH值5.8。培養(yǎng)溫度:25±2℃,光照強(qiáng)度:1500~2000Lx,光照時(shí)間:12~14h/d。

    1.3 馴化移栽

    當(dāng)試管苗長(zhǎng)至3~4cm高,根長(zhǎng)1cm以上時(shí),打開(kāi)瓶口煉苗5~7d。將經(jīng)過(guò)鍛煉的試管苗輕輕取出,用自來(lái)水沖洗掉根部的培養(yǎng)基,分別栽植于下列基質(zhì)中:C1:蛭石;C2:珍珠巖;C3:細(xì)沙;C4:園土;C5:蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份,蓋上塑料薄膜,溫度控制在25%左右,保證80%以上的相對(duì)濕度。30d后,統(tǒng)計(jì)移栽苗成活率。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同滅菌方法的滅菌效果

    20d后的觀察顯示(表1),延長(zhǎng)乙醇浸泡時(shí)間,對(duì)降低外植體污染率效果不明顯,而增加升汞浸泡時(shí)間,明顯減少了外植體的污染率。但是過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的升汞接觸外植體,發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)外植體皺縮,失去萌動(dòng)力,后期褐化率也明顯增加。這可能因汞離子具有很強(qiáng)的殺傷力和穿透力,容易殺死或損傷植物細(xì)胞,造成外植體成活率低,因此在控制污染發(fā)生的過(guò)程中,用升汞做滅菌處理的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),控制在3min左右為宜。

    2.2 不同培養(yǎng)基激素組合對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響

    外植體培養(yǎng)5~7天,莖段基部開(kāi)始膨大,產(chǎn)生少量愈傷組織,腋芽也開(kāi)始萌動(dòng)。6種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)腋芽萌動(dòng),但腋芽生長(zhǎng)情況有所差異(表2),在A1、A2、A3培養(yǎng)基上腋芽萌動(dòng)時(shí)間早,但數(shù)量少,苗細(xì)弱。在A4:MS+1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基上,芽萌動(dòng)后直接分化叢生芽,苗健壯。A5、A6形成的叢芽時(shí)間短且數(shù)量多,但芽畸形、變異??梢?jiàn)培養(yǎng)基的成分直接影響外植體的萌動(dòng)和分化。培養(yǎng)基的濃度不適合會(huì)導(dǎo)致新生芽矮小,還可能出現(xiàn)玻璃狀苗。

    2.3 生根培養(yǎng)

    在培養(yǎng)基中加入活性炭可以顯著促進(jìn)生根量和根的長(zhǎng)勢(shì),這可能與活性炭對(duì)有害酚類物質(zhì)的吸附有關(guān),同時(shí)活性炭所造成的暗環(huán)境也可能有利于根的發(fā)生和發(fā)育。從表3可以看出,B1、B2的根徒長(zhǎng)且比較細(xì)弱,植株難以在移栽時(shí)正常生長(zhǎng),B3、B4、B5的生根率都達(dá)到100%,且生根時(shí)間短,根數(shù)多。但以B3:1/2MS+NAA1.0mg/L+0.2%的活性炭,生根效果最好,根粗壯且有根毛,最適合移栽。

    2.4 生根苗馴化移栽

    從表4可以看出,雙色茉莉試管苗在所試5種栽培基質(zhì)上,移栽成活率都很高。其中基質(zhì)D5的幼苗生長(zhǎng)健壯,葉色嫩綠,成活率高達(dá)95%。

    3 小結(jié)

    (1)在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中,要盡量降低污染率,同時(shí)還要盡可能減少消毒劑對(duì)外植體的傷害。雙色茉莉外植體滅菌以75%的醇消毒10s,再配合0.1%的升汞溶液浸泡3min效果最好,可達(dá)80%。

    (2)細(xì)胞分裂素6-BA能克服頂端優(yōu)勢(shì),促進(jìn)側(cè)枝的萌發(fā)和生長(zhǎng),因而,嫩芽的繁殖主要是細(xì)胞分裂素影響的結(jié)果。生長(zhǎng)素NAA最明顯的作用是促進(jìn)生長(zhǎng),但其促進(jìn)作用因濃度而異,較低濃度促進(jìn)生長(zhǎng),較高濃度抑制生長(zhǎng)。外源激素6-BA和NAA的不同濃度對(duì)芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)影響十分顯著。適宜芽誘導(dǎo)的初代培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;幼苗的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭。試管苗移栽基質(zhì)以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高,可達(dá)95%。

    (3)通過(guò)組織培養(yǎng)可大大提高雙色茉莉的繁殖速率,且生長(zhǎng)健壯。

    (收稿:2016-03-10)

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