不同培養(yǎng)基配方對(duì)云芝生長狀態(tài)影響的研究

云芝（Coriolus versicolor）狀似云彩狀，故名云芝。云芝有具有較強(qiáng)的保健治病作用，如能夠抑制肝炎病毒的生長、加速受損肝組織的修復(fù)、抗氧化、提高機(jī)體免疫功能、抑制某些腫瘤細(xì)胞的生長等。對(duì)云芝的藥理學(xué)研究表明：云芝提取物能提高 免疫細(xì)胞如NK 細(xì)胞、T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、 LAK 細(xì)胞等殺傷病源微生物的能力，降低腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫細(xì)胞的抑制作用。云芝在機(jī)體抗輻射能力和降低有害化學(xué)物對(duì)機(jī)體上損害方面也發(fā)揮了顯著的作用，它減輕放射性射線對(duì)骨髓的傷害，減輕腫瘤化療藥物環(huán)磷酰胺對(duì)機(jī)體的傷害程度，通過抑制腫瘤細(xì)胞 DNA和RNA 的合成實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤生長的作用。目前云芝被廣泛用于臨床，如云芝肝泰等，因此大規(guī)模開發(fā)云芝能夠?yàn)橐恍┮栽浦プ鳛樵系乃幬锖捅＝∑诽峁┰?。而云芝的生長常受各種條件的制約，因此本文通過制備出含有不同配比的花生和大豆的4種培養(yǎng)基，通過觀察云芝在4種不同培養(yǎng)基上的生長狀態(tài)，分別對(duì)云芝的生長狀態(tài)和生物量進(jìn)行觀察和測(cè)定，綜合以上研究結(jié)果，最終確定適合云芝生長的培養(yǎng)基配方。

本研究從實(shí)際應(yīng)用的角度，通過對(duì)云芝的生長狀態(tài)和生物量進(jìn)行觀察和測(cè)定，，對(duì)云芝的培養(yǎng)基進(jìn)行了研究，通過本研究，以期為云芝的液體深層發(fā)酵培養(yǎng)提供有價(jià)值的參考。

實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)材料。云芝夠自于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所

實(shí)驗(yàn)試劑。YPG培養(yǎng)基：胰蛋白胨 10 g/L，酵母提取物 5 g/L，葡萄糖 20 g/L（或麥芽糖15g/L），MgSO4 0.5 g/L，KH2PO4 1g/L。配制固體培養(yǎng)基時(shí)加瓊脂粉15 g/L。110℃ 高壓滅菌30min。

實(shí)驗(yàn)方法。

（1）云芝菌絲體的活化。在無菌條件下，用接種針挑取一小塊菌絲體在超凈工作臺(tái)中接種于固體YPG培養(yǎng)基中，在26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天，挑選出長勢(shì)良好無污染的菌絲體作為初級(jí)菌種，活化后作為次級(jí)菌種保存于4℃冰箱中備用。

（2）配置不同成分配比的花生和大豆培養(yǎng)基

按如上配方配置好不同配比的花生和大豆液體培養(yǎng)基，分裝，每瓶裝250ml，110℃ 高壓滅菌30min。

（3）云芝菌絲體在不同配比花生和大豆液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)。取上述配置好的4種培養(yǎng)基。將鑷子滅菌后，取出菌絲體小塊加入到不同成分配比的六種花生液體培養(yǎng)基和大豆液體培養(yǎng)基中，（每瓶加3-4塊菌絲體小塊）。將上述接種后的含有云芝菌絲體的花生和大豆液體培養(yǎng)基放置于26℃搖床中， 140rpm振蕩培養(yǎng)5-7天。

（4）云芝菌絲體在4種不同成分配比的液體培養(yǎng)基中鮮重和干重的測(cè)定。分別取出4瓶菌絲體發(fā)酵液， -4℃，12000rpm離心20mim，棄上清，沉淀為發(fā)酵菌體。將菌體用蒸餾水沖洗3-5次，再用潔凈的濾紙吸干多余水分。分別稱取每瓶發(fā)酵液菌絲體的總重，求出每種菌種在每一配比的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出菌絲體的重量平均值，記為平均鮮重；將上述菌絲體放置于恒溫干燥烘干箱（65℃）進(jìn)行烘干處理，測(cè)出烘干恒重時(shí)的重量，求出每種菌種在每一配比的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出菌絲體的干重平均值，記為平均干重。

結(jié)果與分析

云芝在不同配比培養(yǎng)基中生長狀態(tài)的觀察。我們采取相同的培養(yǎng)條件，對(duì)云芝菌絲體在花生和大豆固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)云芝在大豆2號(hào)和花生2號(hào)培養(yǎng)基中的生長優(yōu)于在1號(hào)培養(yǎng)基中生長狀態(tài)，（結(jié)果如圖1所示）；因此我們選擇了2號(hào)培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行液體培養(yǎng)，通過比對(duì)可以看出云芝菌絲體在大豆液體培養(yǎng)基中生長狀態(tài)明顯優(yōu)于花生液體培養(yǎng)基中生長狀態(tài)。（結(jié)果如圖2所示）

云芝在不同配比培養(yǎng)基中生物量的測(cè)定。我們選取了等量的不同配比的培養(yǎng)基對(duì)云芝菌絲體進(jìn)行培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)后的云芝菌絲體的生長比搖瓶培養(yǎng)的生長要好；不同配比的大豆粉和花生粉的培養(yǎng)基中，云芝菌絲體鮮重明顯不同，含大豆粉的培養(yǎng)基得到的菌絲體的鮮重均較高，而且2號(hào)培養(yǎng)基獲得的云芝菌絲體的鮮重比1號(hào)培養(yǎng)基要高。平板培養(yǎng)獲得的云芝菌絲體的鮮重結(jié)果為：大豆一號(hào)培養(yǎng)基約為208.67g/L，大豆二號(hào)培養(yǎng)基約為272.68g/L，花生一號(hào)約為180.88g/L，花生二號(hào)約為213.45g/L；搖瓶培養(yǎng)獲得的云芝菌絲體的鮮重結(jié)果為：大豆一號(hào)培養(yǎng)基約為101.36g/L，大豆二號(hào)培養(yǎng)基約為138.65g/L，花生一號(hào)約為98.02g/L，，花生二號(hào)約為117.25g/L（結(jié)果如圖3所示 ）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

培養(yǎng)基的成分對(duì)于菌體的生長狀態(tài)和生物量均會(huì)產(chǎn)生一定的影響，本研究通過加入不同量的大豆粉和花生粉來改變培養(yǎng)基的配方，我們的結(jié)果表明：培養(yǎng)基中的氮源配比不同對(duì)云芝的生長狀態(tài)和生物量均產(chǎn)生了一定的影響，固體培養(yǎng)時(shí)得出結(jié)論為云芝在大豆2號(hào)和花生2號(hào)培養(yǎng)基中的生長優(yōu)于在1號(hào)培養(yǎng)基中生長狀態(tài)，對(duì)選擇2號(hào)培養(yǎng)基的液體培養(yǎng)，結(jié)果表明云芝菌絲體在大豆液體培養(yǎng)基中生長狀態(tài)要優(yōu)于花生液體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)。進(jìn)一步的生物量測(cè)定表明：不同配比的大豆粉和花生粉的培養(yǎng)基中，云芝菌絲體鮮重明顯不同，含大豆粉的培養(yǎng)基得到的菌絲體的鮮重均較高，而且2號(hào)培養(yǎng)基獲得的云芝菌絲體的鮮重比1號(hào)培養(yǎng)基要高。

作者簡介：宋笛（1982—），女，長春職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品生物技術(shù)分院講師，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹参锷锛夹g(shù)。