顯色培養(yǎng)基在檢測(cè)食品中沙門氏菌的應(yīng)用研究

范志龍

本文通過對(duì)顯色培養(yǎng)基沙門氏菌檢測(cè)方法進(jìn)行研究，通過相關(guān)實(shí)踐檢測(cè)分析和對(duì)比，沙門氏菌是影響食品公共衛(wèi)生安全的重要因素之一。

隨著這些年的發(fā)展，顯色培養(yǎng)基成為當(dāng)前一種新型的食品沙門氏菌培養(yǎng)基。在以往培養(yǎng)基的基礎(chǔ)之上，增加了一種新型的具有組合式的特異發(fā)色性酶底物，一旦特異酶在細(xì)菌發(fā)酵過程中顯現(xiàn)出特異性的發(fā)色底物以后，那么當(dāng)目標(biāo)菌落呈現(xiàn)出不同顏色，此時(shí)就能對(duì)目標(biāo)菌落進(jìn)行有效的鑒別和分離措施，也可以通過計(jì)數(shù)的方式進(jìn)行。

其中沙門氏菌有一種非常重要的性質(zhì)就是食源性。目前，沙門氏菌在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)依舊沿用傳統(tǒng)生化的方式進(jìn)行，這個(gè)過程包括了分離培養(yǎng)、增菌、生化鑒定、血清鑒定等多個(gè)步驟。這樣的方式所需要的時(shí)間久，通常是需要一周的時(shí)間，并且操作的難度大，準(zhǔn)確度低。為此，這些年以來(lái)沙門氏菌顯色培養(yǎng)基由于其操作簡(jiǎn)單、具有很強(qiáng)的選擇性、所需要的時(shí)間較短，從而被全面推廣。這與其他顯色培養(yǎng)基相比較而言，更能被人們所接受。通過總結(jié)這些年顯色培養(yǎng)基在進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)時(shí)，結(jié)合技術(shù)人員所培養(yǎng)得出的成果，從而獲得以下經(jīng)驗(yàn)：

培養(yǎng)基的菌落種類

進(jìn)口類沙門氏菌顯色培養(yǎng)基? 對(duì)于市面上常見的幾種進(jìn)口沙門氏菌可以有以下幾種：美國(guó)BD、法國(guó)AES、法國(guó)科馬嘉、英國(guó)OXOID等品種，它們的共同特點(diǎn)是菌落小、沙門氏菌所實(shí)驗(yàn)的菌落顏色對(duì)比十分明顯。進(jìn)口沙門氏菌在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基過程中使用最為廣泛的屬法國(guó) CHROMagar 顯色培養(yǎng)基，所呈現(xiàn)出顏色則為紫色[1]。

國(guó)產(chǎn)類的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基? 沙門氏菌培養(yǎng)顯色培養(yǎng)基在使用過程中較為簡(jiǎn)便，從而降低了檢測(cè)的整體工作量。我國(guó)許多培養(yǎng)基都是靠自主研發(fā)，當(dāng)前，國(guó)產(chǎn)類的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基在使用過程中主要有以下三種銷售量最多：廣東環(huán)凱、北京陸橋以及青島海博。其中北京陸橋的通過顏色可以判斷出這跟法國(guó)科馬嘉的顯色培養(yǎng)基的效果是相同的;對(duì)于沙門氏菌會(huì)呈現(xiàn)出紫紅色，那么不是沙門氏菌則呈現(xiàn)出藍(lán)綠色或者是沒有顏色。在2009年廣東環(huán)凱沙門氏菌顯色培養(yǎng)基獲得了全國(guó)的發(fā)明銀獎(jiǎng)，對(duì)沙門氏菌其顏色則呈現(xiàn)出粉紅色，如果是大腸桿菌或是大腸菌落則呈現(xiàn)出顯藍(lán)色，枸櫞酸桿菌則會(huì)呈現(xiàn)出紫色，對(duì)于其他菌落顯無(wú)色或者黃色。

沙門氏菌培養(yǎng)基應(yīng)用研究

從1974年開始法國(guó) CHROMagar 公司便開始進(jìn)行顯色培養(yǎng)基的相關(guān)研究，為此，從2000年開始沙門氏菌顯色培養(yǎng)基就開始投入使用，對(duì)于所研究可以從兩大方面進(jìn)行分析： 其一，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基跟以往的選擇性的培養(yǎng)基進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)沙門氏菌培養(yǎng)基可以全面取代以往的選擇性的培養(yǎng)基;其二，是屬于國(guó)產(chǎn)類的沙門氏菌培養(yǎng)基與國(guó)外的沙門氏菌培養(yǎng)基對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

培養(yǎng)基及試劑? 沙門氏、志賀氏、腸道菌、GN增液菌、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、瓊脂（SS、HE）。北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司所制定出培養(yǎng)基試劑：腸道綜合雙糖管以及對(duì)腸桿菌科鑒定進(jìn)行編碼。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基產(chǎn)地來(lái)自法國(guó)科馬嘉公司，那么則由鄭州的博騫生物技術(shù)研究所進(jìn)行分裝。對(duì)于沙門氏菌、大腸埃希氏菌以及志賀氏族進(jìn)行診斷的血清選購(gòu)來(lái)自蘭州生物制品研究所。上面所使用的試劑都是在有效期內(nèi)[2]。

所用儀器和設(shè)備? 生物安全柜、顯微鏡、電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、高壓滅菌鍋。

實(shí)驗(yàn)方法? 在實(shí)驗(yàn)過程中初了所使用的顯微鏡和培養(yǎng)基配置之外，具體的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該在100— 1000 級(jí)具有生物特性的潔凈室內(nèi)。

第一，菌株檢測(cè)方法按照 GB/T4789— 2008 中相應(yīng)操作規(guī)程進(jìn)行;第二，菌株的篩選和鑒定經(jīng)過初篩在 CAS、SS、HE 分離平板上挑取相應(yīng)的疑似菌落接種雙糖鑒別生化管，初篩符合者，血清玻片凝集試驗(yàn)和鏡檢，系統(tǒng)生化鑒別實(shí)驗(yàn)。

討論

沙門氏菌成為引起人們食物中毒或者是導(dǎo)致腸道腹瀉的病原菌之一，成為重要的腸道病原菌。其中通過添加了特異的顯色底物的方式就能更快檢測(cè)出樣品中所含的沙門氏菌，從而快速地提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率。當(dāng)前沙門氏菌檢測(cè)的方法依舊沿用之前的生化方法，其中包括了亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液增菌、分離培養(yǎng)、血清型鑒定生化鑒定等多個(gè)步驟，這個(gè)過程一般需要一個(gè)星期，操作起來(lái)比較繁瑣，并且不能很好地保證和滿足微生物檢測(cè)要求，所以，要快速檢查沙門氏菌顯色培養(yǎng)基這個(gè)是非常重要的環(huán)節(jié)。通過顯色培養(yǎng)基進(jìn)行微生物鑒定的方法，成為這些年配置新型快速檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)，就能直接根據(jù)沙門氏菌的實(shí)驗(yàn)菌落的顏色，從中獲取相關(guān)的變化進(jìn)行初步的鑒定，從而能有效減少其他的干擾因素。在腸道相關(guān)的診斷部門來(lái)看，其對(duì)食物的采集并不是很規(guī)范，對(duì)于培養(yǎng)基而言有其局限性等眾因素的影響，從而使以往的檢測(cè)分離方法的靈敏度降低。 由于顯色培養(yǎng)基具有高靈敏度、高效率等優(yōu)點(diǎn)，作為一種新型的微生物檢測(cè)技術(shù)，這種方式得到人們普遍的認(rèn)可。對(duì)于沙門氏菌在 CAS 顯色平板上，其所呈現(xiàn)出的菌落顏色非常容易辨別出來(lái)是紫色，然而不是沙門氏菌則會(huì)表現(xiàn)為藍(lán)色或者是灰白色，則充分說明 CAS 平板的沙門氏菌檢出率都普遍高于 SS以及HE 平板，從而有效簡(jiǎn)化相關(guān)的程序，節(jié)約時(shí)間，由此可見，在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基時(shí)，是屬于有價(jià)值的分離鑒定平板，可以作為以往平板的補(bǔ)充[3]。

結(jié)語(yǔ)

總而言之，對(duì)于CAS 平板而言其具有易鑒別、選擇性好的特點(diǎn)，其最大的優(yōu)勢(shì)是對(duì)普通培養(yǎng)基的選擇，尤其在面對(duì)突發(fā)事件的處理過程，通過選擇CAS 平板的鑒定方式就能取得很好的結(jié)果。通過將顯色培養(yǎng)基與以往的檢測(cè)技術(shù)結(jié)合的方式能對(duì)食物性致病的菌落進(jìn)行檢測(cè)，能快速地獲取到結(jié)果，最終成為微生物快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的重要方向。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳博， 滕昆侖， 盧勉飛，等. 高特異性沙門菌顯色培養(yǎng)基性能評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2018， 28（18）：2189-2192.

[2]劉亞鋒， 王則宇， 吳志洋，等. 一種新型B群鏈球菌顯色培養(yǎng)基在孕婦產(chǎn)前B群鏈球菌檢測(cè)中的應(yīng)用效果研究[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2020（8）.

[3]程瀟， 劉娟娟， 賈貞，等. 2種培養(yǎng)基對(duì)乳粉中沙門氏菌的定量檢測(cè)比較[J]. 農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究， 2020， 010（002）：121-123.

范志龍

河池市食品藥品檢驗(yàn)所

廣西河池? ?547000