• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響

    2016-08-10 07:25:00劉雙平周志磊薛景波江南大學食品學院江蘇無錫214122江南大學糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室江蘇無錫214122國家黃酒工程技術(shù)研究中心浙江紹興312000
    食品科學 2016年13期
    關鍵詞:色價洛伐他汀中藥

    車 鑫,毛 健,3,*,劉雙平,3,周志磊,3,薛景波(1.江南大學食品學院,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122;3.國家黃酒工程技術(shù)研究中心,浙江 紹興 312000)

    ?

    產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響

    車 鑫1,2,毛 健1,2,3,*,劉雙平1,2,3,周志磊1,2,3,薛景波1,2
    (1.江南大學食品學院,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122;3.國家黃酒工程技術(shù)研究中心,浙江 紹興 312000)

    摘 要:經(jīng)洛伐他汀(Monacolin K)抗性平板篩選和固態(tài)發(fā)酵實驗驗證,從紅曲分離源中得到一株產(chǎn)洛伐他汀能力最強的菌株,并命名為M2-1,發(fā)酵12 d后其洛伐他汀產(chǎn)量可達1.472 mg/g(以干基計)。結(jié)合形態(tài)學特征和核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列分析,將其鑒定為紅色紅曲菌(Monascus ruber)??疾?5 種藥食同源中藥及其添加形式(藥粉、藥汁)對菌株M2-1固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)洛伐他汀、色價等指標的影響,結(jié)果顯示:陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉制備藥紅曲效果最佳(P<0.05),其中陳皮粉紅曲和山楂汁紅曲的洛伐他汀和色價最高,分別為2.118 mg/g和320.12 U/g,分別較普通紅曲提高43.89%和71.79%。本研究發(fā)現(xiàn)多種中藥能夠促進紅曲菌產(chǎn)洛伐他汀和紅曲色素,為進一步提升傳統(tǒng)紅曲的藥食兩用功能提供了新的思路。

    關鍵詞:紅色紅曲菌;中藥;固態(tài)發(fā)酵;洛伐他??;色價

    引文格式:

    車鑫, 毛健, 劉雙平, 等.產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響[J].食品科學, 2016, 37(13): 114-119.

    紅曲菌屬真菌(Monascus spp.)接種于大米,經(jīng)固態(tài)發(fā)酵得到的制品即為紅曲[1]。紅曲是我國傳統(tǒng)的食藥兩用發(fā)酵產(chǎn)品,被廣泛應用于食品著色、酒類糖化發(fā)酵、肉類保鮮、降脂保健醫(yī)療等各個領域[2]。紅曲菌在發(fā)酵過程中能代謝產(chǎn)生紅素色素、水解酶類、洛伐他汀(Monacolin K)、麥角固醇、γ-氨基丁酸等多種有益物質(zhì)[2-4]。其中,紅曲色素是一類天然、安全的食品著色劑,普遍存在于紅曲產(chǎn)品中,其有效成分通常以色價表示[5];洛伐他汀為一種關鍵的降脂功效成分,臨床研究表明,洛伐他汀紅曲具有降脂效果顯著、無不良反應等優(yōu)點[6-7]。然而,并非所有紅曲菌屬真菌都能代謝產(chǎn)生洛伐他汀,從目前報道來看[3],主要以紅色紅曲菌(M.ruber)、紫色紅曲菌(M.purpureus)和叢毛紅曲菌(M.pilosus)3 個種為主,其野生菌株的洛伐他汀固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)量一般在0.53~2.80 mg/g。

    固態(tài)發(fā)酵因具有投資少、能耗低、產(chǎn)量高、環(huán)境污染小等優(yōu)點,已得到世界各國的重視[8]。目前關于提高固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)量的研究主要集中在菌種選育、培養(yǎng)條件優(yōu)化和生物反應器選擇等方面[9-11]。近年來有學者研究發(fā)現(xiàn)一些外源添加物如中藥,能進一步較大幅度地提高真菌發(fā)酵代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量:羅芳等[12]考察了21 種中藥對米曲制備的影響,發(fā)現(xiàn)紅景天、黃芪、西洋參對糖化酶活力和液化酶活力的提高效果最為顯著,提高率為36.76%~59.43%;崔培梧等[13]研究發(fā)現(xiàn)添加質(zhì)量濃度為1 g/100 mL的黃芪、茶葉、麥芽、三七、葛根或穿心蓮,均能使茯苓菌發(fā)酵體系表現(xiàn)出極強的胞外多糖合成能力,認為植物藥能起到發(fā)酵調(diào)控作用;劉高強等[14]研究了5 種藥用昆蟲對靈芝多糖生物合成的影響,結(jié)果表明蜣螂在添加量為5 g/L時,雖不能促進靈芝細胞的生長,但卻能顯著促進靈芝多糖的形成(P<0.05),提示蜣螂蟲粉中含有促進靈芝多糖形成的功能因子??梢?,中藥的引入可為固態(tài)發(fā)酵調(diào)控提供一種新的策略和手段。另外,中藥本身具有一定的營養(yǎng)、風味和功能性成分,應用于發(fā)酵可以增加產(chǎn)品的附加值。例如我國一些釀造法制備的藥酒(如董酒)在糧醅拌曲發(fā)酵時加入藥粉或藥汁,不僅起到調(diào)控釀酒微生物發(fā)酵的作用,亦能提升酒體的香味和保健功效。綜上可見,中藥與固態(tài)發(fā)酵實踐相結(jié)合具有重要意義,而有關中藥影響產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的固態(tài)發(fā)酵目前未見報道。

    曾有學者探討了中藥對釀酒紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響[15],結(jié)果表明,西洋參和紅景天能夠顯著提高紅曲酶活。借鑒該研究思路,本研究從我國傳統(tǒng)制曲用藥和相關文獻常見藥材中遴選出15 味藥食同源中藥,考察其對產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌固態(tài)發(fā)酵洛伐他汀、色價等指標的影響,以期為深度開發(fā)藥食兩用紅曲提供更多參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料、培養(yǎng)基和藥材

    1.1.1 紅曲樣品

    從福建寧德、三明市,浙江溫州、麗水市和廣東梅州市采集11 份紅曲樣品。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    分離和保藏培養(yǎng)基(g/L):麥芽汁粉100、瓊脂20,自然pH值;察式酵母提取粉瓊脂(Czapek's yeast extract agar,CYA)培養(yǎng)基[16];洛伐他汀抗性培養(yǎng)基(g/L):可溶性淀粉5、蛋白胨1、瓊脂20、洛伐他汀0~800,自然pH值。以上培養(yǎng)基于0.1 MPa滅菌20 min。

    固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基:取35 g秈米用pH 5.0乳酸水浸泡2 h,瀝干后裝入250 mL三角瓶,8 層紗布封口后于0.08 MPa滅菌20 min,趁熱搖散米粒,冷卻至室溫備用。

    1.1.3 中藥

    白芷、丁香、茯苓、黑胡椒、肉豆蔻、杏仁、桑葉、甘草、赤小豆、牡蠣、枸杞、桑葚、麥芽、陳皮、山楂,均屬藥食同源藥材,購自無錫山禾集團中藥飲片有限公司。

    1.2 儀器與設備

    SW-CJ系列超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;UV-2100紫外-可見分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司;Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)(配有2489紫外檢測器及Empower 2色譜工作站) 美國沃特世公司;CX31RTSF顯微鏡 日本奧林巴斯公司。

    1.3 方法

    1.3.1 產(chǎn)洛伐他汀菌株的篩選

    初篩:稱取紅曲樣品5 g至盛有95 mL帶玻璃珠的無菌生理鹽水的三角瓶中,振蕩20 min后取懸浮液0.5 mL進行梯度稀釋,取0.1 mL涂布于分離培養(yǎng)基,于28 ℃培養(yǎng)5~6 d,滅菌牙簽挑取單菌落轉(zhuǎn)至新的分離平板,相同條件下多次純化,結(jié)合顯微形態(tài)挑選具有紅曲菌基本特征的菌株[16],于4 ℃斜面保藏。

    復篩:使抗性培養(yǎng)基的洛伐他汀質(zhì)量濃度分別為0、50、100、200、400、800 mg/L,三點接種斜面保藏的菌株,于28 ℃倒置培養(yǎng)3 d,觀察菌落生長情況,選擇在高質(zhì)量濃度洛伐他汀平板上生長良好的菌株。

    固態(tài)發(fā)酵驗證:考察復篩菌株,以接種量105個孢子/g(以干基計)接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基;補加pH 5.0乳酸水使干基水分含量為0.8;搖瓶使培養(yǎng)基堆至瓶內(nèi)一角,于28 ℃靜置培養(yǎng)2 d;用無菌藥匙將培養(yǎng)基搗散、攤平,以吸收瓶內(nèi)水分;此后每24 h搖瓶1 次,直到第12天發(fā)酵結(jié)束。高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)測定洛伐他汀產(chǎn)量,選擇產(chǎn)量高的菌株用于后續(xù)研究。實驗重復3 次取平均值。

    1.3.2 菌株鑒定

    個體形態(tài)觀察:采用載片培養(yǎng)法在25 ℃條件下培養(yǎng)7 d,用乳酸石碳酸棉藍染色液制成水浸片,高倍鏡下觀察受試菌的個體形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

    菌落形態(tài)觀察:采用點種法將受試菌接種于CYA培養(yǎng)基,在25 ℃條件下培養(yǎng)7 d,觀察菌落特征,包括大小、顏色、表面質(zhì)地、邊緣。

    分子生物學鑒定:以受試菌總DNA[17]為模板,采用核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer of ribosomal DNA,rDNA-ITS)通用引物(ITS1:5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′;ITS4:5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進行聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)擴增,產(chǎn)物送至南京金斯瑞生物技術(shù)有限公司進行測序。結(jié)果通過BLAST程序與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫比對,選取同源性高的模式菌株的rDNA-ITS序列,利用MEGA5.0軟件進行多序列比對分析,以Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹[18]。

    1.3.3 藥紅曲的制備

    藥粉準備:中藥于45 ℃烘干24 h,粉碎后取20~50 目細粉,0.8 MPa條件下滅菌20 min,冷卻后于4 ℃冰箱保存。

    藥汁準備:取上述藥粉4 g于50 mL離心管,加入20 mL去離子水,室溫浸泡4 h,0.8 MPa條件下滅菌20 min,冷卻后5 000 r/min離心15 min,取上清于4 ℃冰箱保存。

    固態(tài)發(fā)酵:取0.2 g藥粉或1 mL藥汁加入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基,按照1.3.1節(jié)固態(tài)發(fā)酵方法培養(yǎng)得到藥紅曲,測定發(fā)酵失質(zhì)量、洛伐他汀產(chǎn)量和色價。實驗重復3 次取平均值,以不加藥的普通紅曲為空白對照。

    1.3.4 指標測定

    發(fā)酵失質(zhì)量:稱量(精確至0.001 g)發(fā)酵起始培養(yǎng)基濕質(zhì)量與發(fā)酵結(jié)束培養(yǎng)基濕質(zhì)量,兩者之差即得發(fā)酵失質(zhì)量。

    洛伐他汀產(chǎn)量:采用HPLC法,準確稱取紅曲粉0.5 g置于50 mL比色管,加入體積分數(shù)70%的乙醇30 mL,50 ℃超聲提取1 h(250 W,40 kHz),搖勻,8 000 r/min離心5 min,取上清液過0.22 μm微孔濾膜。色譜條件:色譜柱:Athena C18-WP(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈-0.1%的磷酸水溶液(65∶35,V/V);流速:1.0 mL/min;紫外檢測波長:238 nm;進樣量:5 μL;柱溫:(30.0±0.5)℃。外標定量,結(jié)果以酸式洛伐他汀計。

    色價:采用分光光度計法,參見國標GB 4926—2008《食品添加劑 紅曲米(粉)》。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    采用逼近理想點排序法(technique for order preference by similarity to an ideal solution,TOPSIS)對1.3.3節(jié)的數(shù)據(jù)進行綜合評價以確定最優(yōu)藥紅曲方案?;谕蚧?、歸一化后的原始數(shù)據(jù)矩陣,找出理論最優(yōu)、最劣方案,然后分別計算各評價方案與最優(yōu)、最劣方案間的歐式距離,獲得各評價方案與最優(yōu)方案的相對接近程度,以此作為評價優(yōu)劣的依據(jù)[19]。顯著性分析采用t檢驗。

    2 結(jié)果與分析

    2.1.1 菌株篩選結(jié)果

    經(jīng)梯度稀釋和分離培養(yǎng)基純化,從11 份紅曲樣品中獲得純培養(yǎng)菌株共計32 株,經(jīng)顯微鏡檢初篩,得到9 株具有紅曲菌典型特征的菌株,命名為M1、M6、M8、M9、M11、M17、M2-1、M2-2、M3-1。接種于洛伐他汀抗性培養(yǎng)基,28 ℃培養(yǎng)3 d后,菌株生長情況有明顯差異(圖1)。以菌株M6、M8和M2-1為例,空白平板(左起第一列)所有菌株均能正常生長,抗性平板僅菌株M2-1能夠生長但長勢較空白平板稍差,但未發(fā)現(xiàn)受高質(zhì)量濃度洛伐他汀抑制現(xiàn)象。結(jié)果表明,洛伐他汀會對真菌生長產(chǎn)生抑制作用,與此前的報道一致[20-21];菌株M2-1對高質(zhì)量濃度洛伐他汀不敏感,是高產(chǎn)洛伐他汀的潛在菌株,故選為目標菌株進行固態(tài)發(fā)酵驗證。

    2.1.2 菌株產(chǎn)洛伐他汀的固態(tài)發(fā)酵驗證

    以菌株M2-1固態(tài)發(fā)酵紅曲,采用HPLC精確定量洛伐他汀,以其他菌株為對照。由圖2可知,菌株M2-1的洛伐他汀產(chǎn)量為1.472 mg/g(以干基計,下同),顯著高于其他菌株,故確定菌株M2-1為供試菌進行后續(xù)實驗。

    2.2 菌株M2-1的鑒定

    2.2.1 菌落和個體形態(tài)學特征

    由圖3a、b可知,在高倍顯微鏡鏡下觀察,菌株M2-1的閉囊殼呈球形,直徑45 μm左右,單生在菌絲上,由糾結(jié)的菌絲構(gòu)成;菌絲具有橫隔,3~6 μm寬;分生孢子成串著生在菌絲頂端,倒梨形或球形。由圖3c可知,25 ℃條件下,在CYA平板上培養(yǎng)7 d后,菌株M2-1菌落直徑20~23 mm,放射狀,邊緣呈流蘇狀,褐色,平坦,表面質(zhì)地叢卷毛狀。參照《真菌鑒定手冊》[22]和《紅曲菌的形態(tài)與分類學》[16],菌株M2-1可初步鑒定為紅曲菌屬(Monascus spp.)。

    2.2.2 分子生物學鑒定

    2)自動化控制系統(tǒng)。地面控制系統(tǒng)均為撬裝OCS控制器獨立運行,地面壓力信號與現(xiàn)場井口BB井控系統(tǒng)進行聯(lián)鎖。當?shù)孛媲搜b設備壓力高于設定值時自動關井,具有緊急關井聯(lián)鎖功能,從而確保運行安全可靠。地面各撬裝采用就地控制與中控室控制相融合,撬塊上的各重要工藝參數(shù)的顯示、控制、報警以及各相關邏輯聯(lián)鎖保護控制均由中控室DCS+PC系統(tǒng)進行遠程監(jiān)控。

    菌株M2-1的rDNA-ITS PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,由圖4可知,產(chǎn)物條帶單一、明亮,說明特異性擴增良好,測序后得到長度為582 bp的序列,在NCBI上比對發(fā)現(xiàn)與紅色紅曲菌Monascus ruber FRR2447的同源性達99%以上,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹(圖5),菌株M2-1與Monascus ruber的親緣關系最近(相似度100%)。結(jié)合形態(tài)學特征,將菌株M2-1鑒定為Monascus ruber。該種是常見的三大紅曲固態(tài)發(fā)酵菌種之一[23],具有較強的產(chǎn)洛伐他汀和紅曲色素能力。

    2.3 中藥對紅色紅曲菌M2-1固態(tài)發(fā)酵的影響

    2.3.1 對發(fā)酵失質(zhì)量的影響

    長時間的紅曲固態(tài)發(fā)酵過程中,底物經(jīng)紅曲菌分解代謝后產(chǎn)生水和二氧化碳,水分蒸發(fā)和二氧化碳逸出造成質(zhì)量損失,因此發(fā)酵失質(zhì)量能夠反映紅曲菌的代謝活躍程度[24]。由圖6可知,與空白對照組相比,添加白芷粉/汁、丁香粉、茯苓粉、黑胡椒粉、肉豆蔻粉、桑葉粉、甘草粉、赤小豆粉、牡蠣粉、枸杞粉、桑葚汁、山楂汁紅曲的發(fā)酵失質(zhì)量增加;添加茯苓汁、肉豆蔻汁、杏仁粉/汁、桑葉汁、甘草汁、牡蠣汁、桑葚粉、陳皮汁時發(fā)酵失質(zhì)量降低;添加丁香汁、黑胡椒汁、赤小豆汁、枸杞汁、麥芽粉/汁、陳皮粉、山楂粉對發(fā)酵失質(zhì)量影響不明顯。結(jié)果表明,15 種中藥材對紅曲菌的生長代謝有三方面作用:促進、無效和抑制,原因可能是中藥的多種成分綜合作用于菌體生長的結(jié)果[25],其作用機制尚有待進一步研究。

    2.3.2 對洛伐他汀產(chǎn)量的影響

    由圖7可知,普通紅曲洛伐他汀產(chǎn)量為1.472 mg/g,添加白芷粉/汁、丁香汁、茯苓粉、黑胡椒汁、杏仁粉、桑葉粉、枸杞粉/汁、桑葚粉、麥芽粉、陳皮粉/汁、山楂粉/汁發(fā)酵對洛伐他汀的生成有促進作用,其中以陳皮粉效果最顯著(P<0.01),達到2.118 mg/g,較普通紅曲提高43.89%;而添加茯苓粉/汁、黑胡椒粉、肉豆蔻粉/汁、桑葉汁、甘草粉、赤小豆粉、牡蠣粉、桑葚汁、麥芽汁發(fā)酵對洛伐他汀的生成有抑制作用;白芷汁、丁香粉、杏仁汁、甘草汁、赤小豆汁、牡蠣汁的添加對洛伐他汀的生成影響不明顯。上述結(jié)果表明,中藥種類與添加形式(藥粉、藥汁)均會對紅曲菌生長代謝產(chǎn)生影響,與李麗等[15]的研究結(jié)論一致。由于受試藥材本身不含他汀類物質(zhì),因此可判定紅曲洛伐他汀產(chǎn)量的提高來源于中藥的間接作用,其機理可能是中藥弱極性或非極性成分(如中、長鏈脂肪酸)使紅曲菌細胞膜通透性增加,從而有利于營養(yǎng)物質(zhì)的攝取和洛伐他汀的分泌[26],或是中藥的有效物質(zhì)能影響生物合成途徑,有利于洛伐他汀的生成[27]。

    2.3.3 對色價的影響

    色價能在一定程度上反映紅曲色素含量的高低和著色能力的強弱。由圖8可知,添加白芷粉、丁香汁、黑胡椒汁、桑葉粉、陳皮粉、山楂粉/汁有利于提高紅曲色價,其中山楂汁的效果最為顯著(P<0.01),達到320.12 U/g,較普通紅曲提高71.79%;丁香粉對紅曲色價無明顯作用;除以上藥材外,其他藥材的添加均會從不同程度上降低紅曲色價,說明在本實驗藥材的添加量下,抑制紅曲色素合成的因子起主導作用,但根據(jù)趙燕等[28]的報道,不排除有促進因子的存在,需通過改變添加量進行驗證。中藥對色價的影響相對洛伐他汀指標更加復雜,因為藥材成分除了可以間接作用于紅曲菌產(chǎn)色素外,一些藥材(如黑胡椒、陳皮、山楂等)自身的天然色素也可直接貢獻于紅曲色價;雖然枸杞紅色素在本實驗的低溫和酸性發(fā)酵環(huán)境下較穩(wěn)定[29],能夠?qū)ι珒r產(chǎn)生直接正效應,但可能不足以抵消枸杞中抑制因子產(chǎn)生的負效應,因此最終表現(xiàn)為降低紅曲色價;此外,紅曲色素的產(chǎn)生是一個耗氧過程[30],而藥粉能夠疏松曲料,有利于氧氣傳遞,這可能是桑葉粉紅曲色價較高的部分原因。

    2.3.4 確定最佳制曲藥材

    注:Di+.評價方案與最優(yōu)方案的歐氏距離;Di-.評價方案與最劣方案的歐氏距離;Ci.評價方案與最優(yōu)方案的接近程度,Ci∈[0,1],其值越大,評價結(jié)果越優(yōu)。

    TOPSIS法是一種優(yōu)秀的多目標決策和多屬性評價方法,具有計算簡便、應用靈活的優(yōu)點,在經(jīng)濟、社會、科技、環(huán)境等領域得到了非常廣泛的應用[19,31]。根據(jù)圖5~7中的數(shù)據(jù),利用該法對藥紅曲綜合評價??紤]到發(fā)酵失質(zhì)量指標的增加會造成產(chǎn)品得率下降,故將其確定為低優(yōu)指標,而洛伐他汀和色價顯然為高優(yōu)指標。用藥方案的優(yōu)劣按照Ci值排序,結(jié)果見表1。排序前7位藥紅曲的Ci值顯著高于普通紅曲(Ci>0.555,P<0.05),即陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉用于制備藥紅曲效果最佳。從藥材成分來看,這些藥材的纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等豐富的營養(yǎng)成分可被紅曲菌的酶系分解,用于菌體生長和產(chǎn)物合成;從中藥理論來看,這些藥材大多屬溫性,味苦、辛,與紅曲藥性相近而味相反,根據(jù)傳統(tǒng)制曲用藥規(guī)律[32],促進真菌活動和抑制細菌繁殖的雙重作用可能是這些藥材制曲效果較好的原因。

    3 結(jié) 論

    洛伐他汀作為紅曲菌的次級代謝產(chǎn)物,會在一定程度上抑制其自身生長。本研究利用該原理從紅曲分離源中篩選得到一株對洛伐他汀抗性最強的菌株M2-1,經(jīng)固態(tài)發(fā)酵驗證,發(fā)現(xiàn)其洛伐他汀產(chǎn)量也最高,該菌株能在較短的發(fā)酵時間內(nèi)(12 d)發(fā)酵積累較高的洛伐他汀(1.472 mg/g),通過形態(tài)學和分子生物學鑒定為紅色紅曲菌(Monascus ruber)。

    藥材種類和添加形式對紅色紅曲菌M2-1固態(tài)發(fā)酵影響顯著。通過TOPSIS綜合評價結(jié)果可知,陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉制備藥紅曲的效果顯著優(yōu)于普通紅曲(P<0.05),其中,陳皮粉紅曲的洛伐他汀產(chǎn)量和山楂汁紅曲的色價最高,分別較普通紅曲提高43.89%和71.79%。本研究為進一步提高紅曲的降脂保健和著色效果提供了新的思路,對深度開發(fā)藥食兩用紅曲有良好的應用前景。此外,中藥添加量和復配作用會如何影響紅曲固態(tài)發(fā)酵,還需作進一步研究。

    參考文獻:

    [1] Lü Xucong, WENG Xing, ZHANG Wen, et al.Microbial diversity of traditional fermentation starters for Hong Qu glutinous rice wine as determined by PCR-mediated DGGE[J].Food Control, 2012, 28(2): 426-434.DOI:10.1016/j.foodcont.2012.05.025.

    [2] CHEN Wanping, HE Yi, ZHOU Youxiang, et al.Edible flamentous fungi from the species Monascus: early traditional fermentations,modern molecular biology, and future genomics[J].Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2015, 14(5): 555-567.DOI:10.1111/1541-4337.12145.

    [3] 江利香, 葛鋒, 劉暢.紅曲洛伐他汀的高產(chǎn)策略[J].中草藥, 2011,42(7): 1446-1452.

    [4] 姜冰潔, 許贛榮, 張薄博, 等.降脂紅曲產(chǎn)品質(zhì)量標準的探討[J].中草藥, 2015, 46(3): 453-456.DOI:10.7501/ j.issn.0253-2670.2015.03.027.

    [5] 高彥祥.食品添加劑基礎[M].北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2012: 109.

    [6] LI Yinhua, JIANG Long, JIA Zhangrong, et al.A Meta-analysis of red yeast rice: an effective and relatively safe alternative approach for dyslipidemia[J].PLoS ONE, 2014, 9(6): e98611.DOI:10.1371/journal.pone.0098611.

    [7] GORDON R Y, BECKER D J.The role of red yeast rice for the physician[J].Current Atherosclerosis Reports, 2011, 13(1): 73-80.DOI:10.1007/s11883-010-0145-0

    [8] 喬延江.中藥發(fā)酵炮制學[M].北京: 科學出版社, 2013: 42-44.

    [9] 陳洪章.現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)、理論與實踐[M].北京: 化學工業(yè)出版社, 2013: 6-10.

    [10] FARINAS C S.Developments in solid-state fermentation for the production of biomass-degrading enzymes for the bioenergy sector[J].Renewable and Sustainable Energy Reviews, 2015, 52: 179-188.DOI:10.1016/j.rser.2015.07.092.

    [11] THOMAS L, LARROCHE C, PANDEY A.Current developments in solid-state fermentation[J].Biochemical Engineering Journal, 2013,81: 146-161.DOI:10.1016/j.bej.2013.10.013.

    [12] 羅芳, 李麗, 羅頌, 等.多種中藥材制作純種藥曲的性能比較及優(yōu)化研究[J].釀酒科技, 2014(2): 7-9.DOI:10.13746/j.njkj.2014.02.012.

    [13] 崔培梧, 吳紅娟, 譚朝陽, 等.植物藥-茯苓菌雙向發(fā)酵代謝特征初探[J].湖南中醫(yī)藥大學學報, 2013, 33(7): 37-40.DOI:10.3969/ j.issn.1674-070X.2013.07.009.037.04.

    [14] 劉高強, 丁重陽, 章克昌, 等.藥用昆蟲蜣螂對靈芝多糖生物合成的影響[J].生物工程學報, 2009, 25(6): 914-919.DOI:10.3321/ j.issn:1000-3061.2009.06.019.

    [15] 李麗, 張文學, 羅芳, 等.紅曲藥曲的制備工藝及藥曲清酒的研究[J].食品工業(yè)科技, 2014, 35(18): 194-198.DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.18.033.

    [16] 郭芳, 李鐘慶.紅曲菌的形態(tài)與分類學[M].北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2003.

    [17] CENIS J L.Rapid extraction of fungal DNA for PCR amplifcation[J].Nucleic Acids Research, 1992, 20(9): 2380.DOI:10.1093/ nar/20.9.2380.

    [18] 陳靜, 郝偉偉, 王春梅, 等.產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌的篩選鑒定、純化及酶學性質(zhì)分析[J].食品科學, 2013, 34(5): 191-196.

    [19] PAKPOUR S, OLISHEVSKA S V, PRASHER S O, et al.DNA extraction method selection for agricultural soil using TOPSIS multiple criteria decision-making model[J].American Journal of Molecular Biology, 2013, 3(4): 215-228.DOI:10.4236/ajmb.2013.34028.

    [20] KUMAR M S, KUMAR P M, SARNAIK H M, et al.A rapid technique for screening of lovastatin-producing strains of Aspergillus terreus by agar plug and Neurospora crassa bioassay[J].Journal of Microbiological Methods, 2000, 40(1): 99-104.DOI:10.1016/S0167-7012(99)00135-9.

    [21] 張良.高產(chǎn)Monacolin K紅曲菌的誘變選育及其固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化[D].南昌: 南昌大學, 2010: 35.DOI:10.7666/d.y1747013.

    [22] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海: 上??茖W技術(shù)出版社, 1979: 129-136.

    [23] PATAKOVA P.Monascus secondary metabolites: production and biological activity[J].Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 2013, 40(2): 169-181.DOI:10.1007/s10295-012-1216-8.

    [24] 路秀玲, 趙樹欣, 劉忠華.紅曲霉固態(tài)發(fā)酵中生物量的測定方法[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2001, 27(6): 45-49.DOI:10.3321/j.issn:0253-990X.2001.06.010.

    [25] 韋朝陽, 亮賀, 邵雙雙, 等.外源添加物對食藥用菌液體發(fā)酵影響的研究進展[J].食品科學, 2015, 36(7): 245-250.DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201507045.

    [26] 侯曉梅, 陳敏青, 張慧蕾, 等.中藥提取物對灰樹花深層發(fā)酵的影響[J].食品科技, 2013, 38(9): 185-188.DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2013.09.033.

    [27] 劉高強, 趙艷, 王曉玲, 等.靈芝多糖的生物合成和發(fā)酵調(diào)控[J].菌物學報, 2011, 30(2): 198-205.DOI:10.13346/ j.mycosystema.2011.02.015.

    [28] 趙艷, 劉高強, 朱朝陽, 等.不同植物藥提取物對靈芝細胞生長和胞內(nèi)三萜產(chǎn)物形成的影響[J].菌物學報, 2011, 30(2): 249-254.DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.02.018.

    [29] 李金梅, 楊秋林, 趙智宏.枸杞紅色素的穩(wěn)定性及其在食品中的應用研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學學報, 2012, 33(1): 243-247.

    [30] 王克明.固定化紅曲生物反應器發(fā)酵紅曲色素的研究[J].江蘇調(diào)味副食品, 2005, 22(1): 16-18.DOI:10.3969/j.issn.1006-8481.2005.01.005.

    [31] BEHZADIAN M, OTAGHSARA S K, YAZDANI M, et al.A state-of the-art survey of TOPSIS applications[J].Expert Systems with Applications, 2012, 39(17): 13051-13069.DOI:10.1016/ j.eswa.2012.05.056.

    [32] 楊俊, 李麗, 張文學, 等.傳統(tǒng)釀酒制曲應用中藥材的規(guī)律及其現(xiàn)代意義探討[J].釀酒科技, 2015(1): 16-18.DOI:10.13746/ j.njkj.2014171.

    DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613020 10.7506/spkx1002-6630-201613020. http://www.spkx.net.cnCHE Xin, MAO Jian, LIU Shuangping, et al.Screening of Monacolin K-producing Monascus and effects of Chinese medicinal herbal materials on Monacolin K production in solid-state fermentation[J].Food Science, 2016, 37(13): 114-119.(in Chinese with English abstract) 10.7506/spkx1002-6630-201613020. http://www.spkx.net.cn

    中圖分類號:TS201.3

    文獻標志碼:A

    文章編號:1002-6630(2016)13-0114-06

    收稿日期:2015-09-10

    基金項目:國家自然科學基金面上項目(31571823)

    作者簡介:車鑫(1990—),男,碩士研究生,主要從事食品生物技術(shù)研究。E-mail:403995925@qq.com

    *通信作者:毛健(1970—),男,教授,博士,主要從事食品生物技術(shù)研究。E-mail:biomao@263.net

    Screening of Monacolin K-Producing Monascus and Effects of Chinese Medicinal Herbal Materials on Monacolin K Production in Solid-State Fermentation

    CHE Xin1,2, MAO Jian1,2,3,*, LIU Shuangping1,2,3, ZHOU Zhilei1,2,3, XUE Jingbo1,2
    (1.School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;2.National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;3.National Engineering Research Center of Chinese Rice Wine, Shaoxing 312000, China)

    Abstract:One strain with the most powerful capability of producing Monacolin K named M2-1 was screened from red mold rice (RMR) using Monacolin K-containing plates and validated by solid-state fermentation.The yield of Monacolin K reached 1.472 mg/g (dry basis) after 12 d fermentation.The strain was identified as Monascus ruber by morphological and rDNA-ITS sequence analysis.The effects of powders and water extracts of 15 edible and medicinal herbs on Monacolin K production and color value of M2-1 in solid-state fermentation were studied.Results indicated that Pericarpium Citri Reticulatae, Fructus Crataegi, Folium Mori and Radix Angelicae Dahuricae powder as well as Fructus Crataegi, Flos Caryophylli and Fructus Piperis extracts significantly improved the quality of RMR (P < 0.05).By adding Pericarpium Citri Reticulatae powder and Fructus Crataegi extract to the fermentation medium, the maximum Monacolin K production of 2.118 mg/g and the highest color value of RMR of 320.12 U/g were obtained which were increased by 43.89% and 71.79% compared those obtained with the ordinary strain, respectively.This study discovered a variety of Chinese medicinal herbs that could promote the production of Monacolin K and Monascus pigment by Monascus ruber, which will provide a novel strategy for improving the efficacy of traditional RMR as an edible and medicinal resource.

    Key words:Monascus ruber; Chinese medicinal herb; solid-state fermentation; Monacolin K; color value

    猜你喜歡
    色價洛伐他汀中藥
    中藥久煎不能代替二次煎煮
    中老年保健(2021年4期)2021-12-01 11:19:40
    您知道嗎,沉香也是一味中藥
    中老年保健(2021年4期)2021-08-22 07:08:32
    中醫(yī),不僅僅有中藥
    金橋(2020年7期)2020-08-13 03:07:00
    高色價紅曲米液態(tài)制種的培養(yǎng)條件優(yōu)化
    梔子黃色素提取工藝及品質(zhì)評價
    洛伐他汀腫瘤治療的研究進展
    紅曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)洛伐他汀條件的研究
    中藥貼敷治療足跟痛
    紅曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)洛伐他汀條件的研究
    果膠酶法提取紫甘藍花青素工藝條件研究
    国产亚洲欧美98| 乱人伦中国视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲五月色婷婷综合| 岛国在线观看网站| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品成人av观看孕妇| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成年版毛片免费区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲专区中文字幕在线| 无遮挡黄片免费观看| 日本欧美视频一区| 国产xxxxx性猛交| 亚洲国产精品999在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 麻豆一二三区av精品| 黄色毛片三级朝国网站| 免费不卡黄色视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久草成人影院| 成人国语在线视频| 黄色丝袜av网址大全| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品高清国产在线一区| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美不卡视频在线免费观看 | www.自偷自拍.com| 波多野结衣av一区二区av| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲成国产人片在线观看| 99热国产这里只有精品6| 最新在线观看一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 操美女的视频在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 看片在线看免费视频| 午夜日韩欧美国产| netflix在线观看网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 纯流量卡能插随身wifi吗| 97碰自拍视频| 波多野结衣av一区二区av| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 嫩草影院精品99| 香蕉丝袜av| 99在线人妻在线中文字幕| 国产免费现黄频在线看| 精品免费久久久久久久清纯| 国产99白浆流出| 国产av在哪里看| 亚洲av成人av| 午夜福利,免费看| a级片在线免费高清观看视频| 国产午夜精品久久久久久| 久久中文看片网| 丁香欧美五月| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲中文av在线| а√天堂www在线а√下载| 国产黄色免费在线视频| 日韩有码中文字幕| 99久久精品国产亚洲精品| 一级片'在线观看视频| av天堂久久9| 日日夜夜操网爽| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲色图av天堂| 悠悠久久av| 波多野结衣高清无吗| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲视频免费观看视频| 啦啦啦 在线观看视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久国产成人免费| 中文字幕色久视频| xxx96com| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品一区二区精品视频观看| 老汉色∧v一级毛片| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费高清视频大片| 一级,二级,三级黄色视频| 国产成人av教育| 国产精品久久电影中文字幕| 热re99久久国产66热| 国产精品一区二区精品视频观看| 91成人精品电影| 99热只有精品国产| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩高清综合在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久影院123| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 麻豆久久精品国产亚洲av | 午夜精品在线福利| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 男女午夜视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 高清毛片免费观看视频网站 | 99国产精品一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 一a级毛片在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| a在线观看视频网站| 十分钟在线观看高清视频www| 丁香六月欧美| 又黄又爽又免费观看的视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 少妇被粗大的猛进出69影院| 淫秽高清视频在线观看| 久久性视频一级片| 狂野欧美激情性xxxx| 久久热在线av| 757午夜福利合集在线观看| 精品电影一区二区在线| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜福利一区二区在线看| 91成年电影在线观看| 久久久久九九精品影院| 少妇的丰满在线观看| 怎么达到女性高潮| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产精品影院久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 午夜久久久在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲av片天天在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 国产成年人精品一区二区 | 9热在线视频观看99| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 香蕉丝袜av| 一区在线观看完整版| 老司机福利观看| 9191精品国产免费久久| 一区二区三区激情视频| 国产又爽黄色视频| 黑丝袜美女国产一区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品国产综合久久久| 亚洲精品在线美女| 日韩欧美一区视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 高清毛片免费观看视频网站 | 国产99久久九九免费精品| 成年版毛片免费区| 亚洲精品一区av在线观看| 久久香蕉国产精品| 久久久久国内视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲专区国产一区二区| 丁香欧美五月| 91成年电影在线观看| 久久久久国内视频| 久久久国产成人精品二区 | 十八禁网站免费在线| 久久亚洲真实| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99精品在免费线老司机午夜| 丰满饥渴人妻一区二区三| 99re在线观看精品视频| 欧美日韩乱码在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 午夜免费鲁丝| 在线观看免费视频日本深夜| 在线观看一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 免费在线观看日本一区| 亚洲欧美激情在线| 午夜免费成人在线视频| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品久久视频播放| 日本三级黄在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | av国产精品久久久久影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| av在线播放免费不卡| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久九九热精品免费| 国产人伦9x9x在线观看| 黑人操中国人逼视频| 色哟哟哟哟哟哟| 免费av毛片视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美丝袜亚洲另类 | 交换朋友夫妻互换小说| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本五十路高清| 久久久久久久午夜电影 | 身体一侧抽搐| 18禁国产床啪视频网站| 久久99一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 免费在线观看日本一区| 水蜜桃什么品种好| 免费少妇av软件| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲免费av在线视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品乱码久久久久久99久播| 99国产精品一区二区蜜桃av| 操美女的视频在线观看| 9191精品国产免费久久| 色哟哟哟哟哟哟| 日韩欧美三级三区| 日韩高清综合在线| 天堂影院成人在线观看| 不卡av一区二区三区| 欧美在线黄色| 亚洲av熟女| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲专区国产一区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 午夜激情av网站| 国产高清激情床上av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美久久黑人一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜福利欧美成人| 老鸭窝网址在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜a级毛片| 视频在线观看一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 女人精品久久久久毛片| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美成狂野欧美在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美黑人精品巨大| 大型av网站在线播放| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日韩免费高清中文字幕av| 国产成人系列免费观看| 色综合站精品国产| 一进一出抽搐动态| 一级毛片女人18水好多| 黄色 视频免费看| 亚洲第一青青草原| 两性夫妻黄色片| 欧美大码av| 亚洲成人免费电影在线观看| 99热只有精品国产| 国产精品偷伦视频观看了| 久久国产精品人妻蜜桃| 久热爱精品视频在线9| 一进一出好大好爽视频| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 曰老女人黄片| 在线观看一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 日韩欧美在线二视频| 精品国产国语对白av| 999久久久国产精品视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 99久久国产精品久久久| 精品国产国语对白av| 国产三级在线视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 女人被狂操c到高潮| 老司机深夜福利视频在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 嫩草影院精品99| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 美女国产高潮福利片在线看| 国产av一区二区精品久久| 又大又爽又粗| 国产高清国产精品国产三级| 精品国产亚洲在线| 国产午夜精品久久久久久| 精品无人区乱码1区二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产在线观看jvid| 69av精品久久久久久| 欧美中文综合在线视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产一卡二卡三卡精品| 波多野结衣一区麻豆| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久久亚洲av毛片大全| 叶爱在线成人免费视频播放| 老司机福利观看| 又紧又爽又黄一区二区| 1024香蕉在线观看| 成人黄色视频免费在线看| xxxhd国产人妻xxx| 韩国精品一区二区三区| 视频区欧美日本亚洲| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 女性被躁到高潮视频| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 一级毛片女人18水好多| 乱人伦中国视频| 交换朋友夫妻互换小说| 黑人欧美特级aaaaaa片| 999久久久国产精品视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 成熟少妇高潮喷水视频| 一二三四在线观看免费中文在| 在线免费观看的www视频| 国产国语露脸激情在线看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品影院久久| 久久久久久久精品吃奶| 两个人看的免费小视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久伊人香网站| 亚洲午夜理论影院| 精品一区二区三区av网在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 女性被躁到高潮视频| 精品国产一区二区久久| 黄色片一级片一级黄色片| 国产高清videossex| 色老头精品视频在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一级片'在线观看视频| 少妇粗大呻吟视频| 91av网站免费观看| 欧美久久黑人一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久久久久久久久久久大奶| 一级毛片高清免费大全| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 日韩国内少妇激情av| 91精品三级在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 手机成人av网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 1024香蕉在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利在线免费观看网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av中文乱码字幕在线| 中国美女看黄片| 亚洲欧美一区二区三区久久| www.999成人在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精华国产精华精| 热re99久久国产66热| 宅男免费午夜| 99久久综合精品五月天人人| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品久久视频播放| 午夜福利影视在线免费观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产亚洲欧美98| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲黑人精品在线| 在线国产一区二区在线| 一进一出好大好爽视频| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精华国产精华精| 一本综合久久免费| 免费高清视频大片| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久久久亚洲av毛片大全| 中文欧美无线码| 岛国在线观看网站| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久久久久久免费视频了| avwww免费| 桃色一区二区三区在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 大香蕉久久成人网| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲九九香蕉| 搡老乐熟女国产| 一区福利在线观看| 三级毛片av免费| 欧美日韩黄片免| 丝袜人妻中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品日产1卡2卡| 国产精品影院久久| 成人手机av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久中文字幕人妻熟女| 一级毛片女人18水好多| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精品久久视频播放| 日韩免费高清中文字幕av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 高清在线国产一区| 99re在线观看精品视频| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲成人久久性| 久久久久九九精品影院| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 91精品国产国语对白视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 69精品国产乱码久久久| 老汉色∧v一级毛片| 人人妻人人澡人人看| 亚洲美女黄片视频| svipshipincom国产片| 午夜福利,免费看| 丁香六月欧美| 午夜亚洲福利在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| 真人做人爱边吃奶动态| 大陆偷拍与自拍| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 热99re8久久精品国产| 99国产极品粉嫩在线观看| 中出人妻视频一区二区| 国产精品国产av在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 天天添夜夜摸| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成人黄色视频免费在线看| 波多野结衣高清无吗| 精品久久蜜臀av无| 国产欧美日韩一区二区三| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 露出奶头的视频| 高清欧美精品videossex| 亚洲精华国产精华精| 身体一侧抽搐| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产av一区二区精品久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 女性被躁到高潮视频| 午夜免费激情av| 亚洲全国av大片| 十分钟在线观看高清视频www| 在线观看免费视频网站a站| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 大陆偷拍与自拍| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久午夜亚洲精品久久| 最好的美女福利视频网| 国产av一区在线观看免费| 久久久水蜜桃国产精品网| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久久久精品吃奶| 麻豆久久精品国产亚洲av | 国产免费av片在线观看野外av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 丁香欧美五月| 老司机福利观看| 日本 av在线| 一级片'在线观看视频| 久久人人精品亚洲av| 精品无人区乱码1区二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲欧美激情综合另类| 神马国产精品三级电影在线观看 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲第一av免费看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 国产成人欧美在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产av在哪里看| 女人精品久久久久毛片| 涩涩av久久男人的天堂| 午夜老司机福利片| 波多野结衣高清无吗| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产深夜福利视频在线观看| 精品国产一区二区久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 在线av久久热| 99re在线观看精品视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 天天影视国产精品| 中出人妻视频一区二区| avwww免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲 欧美一区二区三区| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩免费高清中文字幕av| 精品福利永久在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 脱女人内裤的视频| 村上凉子中文字幕在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜福利一区二区在线看| 天堂影院成人在线观看| 亚洲av美国av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线观看一区二区三区激情| 精品午夜福利视频在线观看一区| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲情色 制服丝袜| 五月开心婷婷网| netflix在线观看网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 咕卡用的链子| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| av网站免费在线观看视频| 又紧又爽又黄一区二区| 黄片大片在线免费观看| 色哟哟哟哟哟哟| 视频区图区小说| 欧美日本亚洲视频在线播放| www国产在线视频色| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 色尼玛亚洲综合影院| a级片在线免费高清观看视频| 午夜免费鲁丝| 色综合站精品国产| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 老司机在亚洲福利影院| 一边摸一边抽搐一进一小说| 热re99久久精品国产66热6| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲精品在线观看二区| 99久久综合精品五月天人人| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 丰满迷人的少妇在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美日韩黄片免| av网站在线播放免费| 色综合站精品国产| 一边摸一边做爽爽视频免费| 少妇的丰满在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 1024香蕉在线观看| 超碰成人久久| 久99久视频精品免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av成人一区二区三| 一区二区三区精品91| 国产又爽黄色视频| 99国产精品99久久久久| 高清毛片免费观看视频网站 | 日本wwww免费看| 欧美激情 高清一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 日韩有码中文字幕| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 操出白浆在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美黑人精品巨大| 午夜91福利影院| 欧美成狂野欧美在线观看| 在线观看一区二区三区| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜精品在线福利| 日本 av在线| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产av一区二区精品久久| 亚洲专区字幕在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 麻豆国产av国片精品| 两个人免费观看高清视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 精品熟女少妇八av免费久了| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产成人影院久久av| 亚洲国产精品sss在线观看 | 日韩欧美三级三区|