• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響

    2016-08-10 07:25:00劉雙平周志磊薛景波江南大學食品學院江蘇無錫214122江南大學糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室江蘇無錫214122國家黃酒工程技術(shù)研究中心浙江紹興312000
    食品科學 2016年13期
    關鍵詞:色價洛伐他汀中藥

    車 鑫,毛 健,3,*,劉雙平,3,周志磊,3,薛景波(1.江南大學食品學院,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122;3.國家黃酒工程技術(shù)研究中心,浙江 紹興 312000)

    ?

    產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響

    車 鑫1,2,毛 健1,2,3,*,劉雙平1,2,3,周志磊1,2,3,薛景波1,2
    (1.江南大學食品學院,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122;3.國家黃酒工程技術(shù)研究中心,浙江 紹興 312000)

    摘 要:經(jīng)洛伐他汀(Monacolin K)抗性平板篩選和固態(tài)發(fā)酵實驗驗證,從紅曲分離源中得到一株產(chǎn)洛伐他汀能力最強的菌株,并命名為M2-1,發(fā)酵12 d后其洛伐他汀產(chǎn)量可達1.472 mg/g(以干基計)。結(jié)合形態(tài)學特征和核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列分析,將其鑒定為紅色紅曲菌(Monascus ruber)??疾?5 種藥食同源中藥及其添加形式(藥粉、藥汁)對菌株M2-1固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)洛伐他汀、色價等指標的影響,結(jié)果顯示:陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉制備藥紅曲效果最佳(P<0.05),其中陳皮粉紅曲和山楂汁紅曲的洛伐他汀和色價最高,分別為2.118 mg/g和320.12 U/g,分別較普通紅曲提高43.89%和71.79%。本研究發(fā)現(xiàn)多種中藥能夠促進紅曲菌產(chǎn)洛伐他汀和紅曲色素,為進一步提升傳統(tǒng)紅曲的藥食兩用功能提供了新的思路。

    關鍵詞:紅色紅曲菌;中藥;固態(tài)發(fā)酵;洛伐他??;色價

    引文格式:

    車鑫, 毛健, 劉雙平, 等.產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及中藥對其固態(tài)發(fā)酵的影響[J].食品科學, 2016, 37(13): 114-119.

    紅曲菌屬真菌(Monascus spp.)接種于大米,經(jīng)固態(tài)發(fā)酵得到的制品即為紅曲[1]。紅曲是我國傳統(tǒng)的食藥兩用發(fā)酵產(chǎn)品,被廣泛應用于食品著色、酒類糖化發(fā)酵、肉類保鮮、降脂保健醫(yī)療等各個領域[2]。紅曲菌在發(fā)酵過程中能代謝產(chǎn)生紅素色素、水解酶類、洛伐他汀(Monacolin K)、麥角固醇、γ-氨基丁酸等多種有益物質(zhì)[2-4]。其中,紅曲色素是一類天然、安全的食品著色劑,普遍存在于紅曲產(chǎn)品中,其有效成分通常以色價表示[5];洛伐他汀為一種關鍵的降脂功效成分,臨床研究表明,洛伐他汀紅曲具有降脂效果顯著、無不良反應等優(yōu)點[6-7]。然而,并非所有紅曲菌屬真菌都能代謝產(chǎn)生洛伐他汀,從目前報道來看[3],主要以紅色紅曲菌(M.ruber)、紫色紅曲菌(M.purpureus)和叢毛紅曲菌(M.pilosus)3 個種為主,其野生菌株的洛伐他汀固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)量一般在0.53~2.80 mg/g。

    固態(tài)發(fā)酵因具有投資少、能耗低、產(chǎn)量高、環(huán)境污染小等優(yōu)點,已得到世界各國的重視[8]。目前關于提高固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)量的研究主要集中在菌種選育、培養(yǎng)條件優(yōu)化和生物反應器選擇等方面[9-11]。近年來有學者研究發(fā)現(xiàn)一些外源添加物如中藥,能進一步較大幅度地提高真菌發(fā)酵代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量:羅芳等[12]考察了21 種中藥對米曲制備的影響,發(fā)現(xiàn)紅景天、黃芪、西洋參對糖化酶活力和液化酶活力的提高效果最為顯著,提高率為36.76%~59.43%;崔培梧等[13]研究發(fā)現(xiàn)添加質(zhì)量濃度為1 g/100 mL的黃芪、茶葉、麥芽、三七、葛根或穿心蓮,均能使茯苓菌發(fā)酵體系表現(xiàn)出極強的胞外多糖合成能力,認為植物藥能起到發(fā)酵調(diào)控作用;劉高強等[14]研究了5 種藥用昆蟲對靈芝多糖生物合成的影響,結(jié)果表明蜣螂在添加量為5 g/L時,雖不能促進靈芝細胞的生長,但卻能顯著促進靈芝多糖的形成(P<0.05),提示蜣螂蟲粉中含有促進靈芝多糖形成的功能因子??梢?,中藥的引入可為固態(tài)發(fā)酵調(diào)控提供一種新的策略和手段。另外,中藥本身具有一定的營養(yǎng)、風味和功能性成分,應用于發(fā)酵可以增加產(chǎn)品的附加值。例如我國一些釀造法制備的藥酒(如董酒)在糧醅拌曲發(fā)酵時加入藥粉或藥汁,不僅起到調(diào)控釀酒微生物發(fā)酵的作用,亦能提升酒體的香味和保健功效。綜上可見,中藥與固態(tài)發(fā)酵實踐相結(jié)合具有重要意義,而有關中藥影響產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的固態(tài)發(fā)酵目前未見報道。

    曾有學者探討了中藥對釀酒紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響[15],結(jié)果表明,西洋參和紅景天能夠顯著提高紅曲酶活。借鑒該研究思路,本研究從我國傳統(tǒng)制曲用藥和相關文獻常見藥材中遴選出15 味藥食同源中藥,考察其對產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌固態(tài)發(fā)酵洛伐他汀、色價等指標的影響,以期為深度開發(fā)藥食兩用紅曲提供更多參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料、培養(yǎng)基和藥材

    1.1.1 紅曲樣品

    從福建寧德、三明市,浙江溫州、麗水市和廣東梅州市采集11 份紅曲樣品。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    分離和保藏培養(yǎng)基(g/L):麥芽汁粉100、瓊脂20,自然pH值;察式酵母提取粉瓊脂(Czapek's yeast extract agar,CYA)培養(yǎng)基[16];洛伐他汀抗性培養(yǎng)基(g/L):可溶性淀粉5、蛋白胨1、瓊脂20、洛伐他汀0~800,自然pH值。以上培養(yǎng)基于0.1 MPa滅菌20 min。

    固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基:取35 g秈米用pH 5.0乳酸水浸泡2 h,瀝干后裝入250 mL三角瓶,8 層紗布封口后于0.08 MPa滅菌20 min,趁熱搖散米粒,冷卻至室溫備用。

    1.1.3 中藥

    白芷、丁香、茯苓、黑胡椒、肉豆蔻、杏仁、桑葉、甘草、赤小豆、牡蠣、枸杞、桑葚、麥芽、陳皮、山楂,均屬藥食同源藥材,購自無錫山禾集團中藥飲片有限公司。

    1.2 儀器與設備

    SW-CJ系列超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;UV-2100紫外-可見分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司;Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)(配有2489紫外檢測器及Empower 2色譜工作站) 美國沃特世公司;CX31RTSF顯微鏡 日本奧林巴斯公司。

    1.3 方法

    1.3.1 產(chǎn)洛伐他汀菌株的篩選

    初篩:稱取紅曲樣品5 g至盛有95 mL帶玻璃珠的無菌生理鹽水的三角瓶中,振蕩20 min后取懸浮液0.5 mL進行梯度稀釋,取0.1 mL涂布于分離培養(yǎng)基,于28 ℃培養(yǎng)5~6 d,滅菌牙簽挑取單菌落轉(zhuǎn)至新的分離平板,相同條件下多次純化,結(jié)合顯微形態(tài)挑選具有紅曲菌基本特征的菌株[16],于4 ℃斜面保藏。

    復篩:使抗性培養(yǎng)基的洛伐他汀質(zhì)量濃度分別為0、50、100、200、400、800 mg/L,三點接種斜面保藏的菌株,于28 ℃倒置培養(yǎng)3 d,觀察菌落生長情況,選擇在高質(zhì)量濃度洛伐他汀平板上生長良好的菌株。

    固態(tài)發(fā)酵驗證:考察復篩菌株,以接種量105個孢子/g(以干基計)接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基;補加pH 5.0乳酸水使干基水分含量為0.8;搖瓶使培養(yǎng)基堆至瓶內(nèi)一角,于28 ℃靜置培養(yǎng)2 d;用無菌藥匙將培養(yǎng)基搗散、攤平,以吸收瓶內(nèi)水分;此后每24 h搖瓶1 次,直到第12天發(fā)酵結(jié)束。高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)測定洛伐他汀產(chǎn)量,選擇產(chǎn)量高的菌株用于后續(xù)研究。實驗重復3 次取平均值。

    1.3.2 菌株鑒定

    個體形態(tài)觀察:采用載片培養(yǎng)法在25 ℃條件下培養(yǎng)7 d,用乳酸石碳酸棉藍染色液制成水浸片,高倍鏡下觀察受試菌的個體形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

    菌落形態(tài)觀察:采用點種法將受試菌接種于CYA培養(yǎng)基,在25 ℃條件下培養(yǎng)7 d,觀察菌落特征,包括大小、顏色、表面質(zhì)地、邊緣。

    分子生物學鑒定:以受試菌總DNA[17]為模板,采用核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer of ribosomal DNA,rDNA-ITS)通用引物(ITS1:5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′;ITS4:5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進行聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)擴增,產(chǎn)物送至南京金斯瑞生物技術(shù)有限公司進行測序。結(jié)果通過BLAST程序與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫比對,選取同源性高的模式菌株的rDNA-ITS序列,利用MEGA5.0軟件進行多序列比對分析,以Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹[18]。

    1.3.3 藥紅曲的制備

    藥粉準備:中藥于45 ℃烘干24 h,粉碎后取20~50 目細粉,0.8 MPa條件下滅菌20 min,冷卻后于4 ℃冰箱保存。

    藥汁準備:取上述藥粉4 g于50 mL離心管,加入20 mL去離子水,室溫浸泡4 h,0.8 MPa條件下滅菌20 min,冷卻后5 000 r/min離心15 min,取上清于4 ℃冰箱保存。

    固態(tài)發(fā)酵:取0.2 g藥粉或1 mL藥汁加入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基,按照1.3.1節(jié)固態(tài)發(fā)酵方法培養(yǎng)得到藥紅曲,測定發(fā)酵失質(zhì)量、洛伐他汀產(chǎn)量和色價。實驗重復3 次取平均值,以不加藥的普通紅曲為空白對照。

    1.3.4 指標測定

    發(fā)酵失質(zhì)量:稱量(精確至0.001 g)發(fā)酵起始培養(yǎng)基濕質(zhì)量與發(fā)酵結(jié)束培養(yǎng)基濕質(zhì)量,兩者之差即得發(fā)酵失質(zhì)量。

    洛伐他汀產(chǎn)量:采用HPLC法,準確稱取紅曲粉0.5 g置于50 mL比色管,加入體積分數(shù)70%的乙醇30 mL,50 ℃超聲提取1 h(250 W,40 kHz),搖勻,8 000 r/min離心5 min,取上清液過0.22 μm微孔濾膜。色譜條件:色譜柱:Athena C18-WP(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈-0.1%的磷酸水溶液(65∶35,V/V);流速:1.0 mL/min;紫外檢測波長:238 nm;進樣量:5 μL;柱溫:(30.0±0.5)℃。外標定量,結(jié)果以酸式洛伐他汀計。

    色價:采用分光光度計法,參見國標GB 4926—2008《食品添加劑 紅曲米(粉)》。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    采用逼近理想點排序法(technique for order preference by similarity to an ideal solution,TOPSIS)對1.3.3節(jié)的數(shù)據(jù)進行綜合評價以確定最優(yōu)藥紅曲方案?;谕蚧?、歸一化后的原始數(shù)據(jù)矩陣,找出理論最優(yōu)、最劣方案,然后分別計算各評價方案與最優(yōu)、最劣方案間的歐式距離,獲得各評價方案與最優(yōu)方案的相對接近程度,以此作為評價優(yōu)劣的依據(jù)[19]。顯著性分析采用t檢驗。

    2 結(jié)果與分析

    2.1.1 菌株篩選結(jié)果

    經(jīng)梯度稀釋和分離培養(yǎng)基純化,從11 份紅曲樣品中獲得純培養(yǎng)菌株共計32 株,經(jīng)顯微鏡檢初篩,得到9 株具有紅曲菌典型特征的菌株,命名為M1、M6、M8、M9、M11、M17、M2-1、M2-2、M3-1。接種于洛伐他汀抗性培養(yǎng)基,28 ℃培養(yǎng)3 d后,菌株生長情況有明顯差異(圖1)。以菌株M6、M8和M2-1為例,空白平板(左起第一列)所有菌株均能正常生長,抗性平板僅菌株M2-1能夠生長但長勢較空白平板稍差,但未發(fā)現(xiàn)受高質(zhì)量濃度洛伐他汀抑制現(xiàn)象。結(jié)果表明,洛伐他汀會對真菌生長產(chǎn)生抑制作用,與此前的報道一致[20-21];菌株M2-1對高質(zhì)量濃度洛伐他汀不敏感,是高產(chǎn)洛伐他汀的潛在菌株,故選為目標菌株進行固態(tài)發(fā)酵驗證。

    2.1.2 菌株產(chǎn)洛伐他汀的固態(tài)發(fā)酵驗證

    以菌株M2-1固態(tài)發(fā)酵紅曲,采用HPLC精確定量洛伐他汀,以其他菌株為對照。由圖2可知,菌株M2-1的洛伐他汀產(chǎn)量為1.472 mg/g(以干基計,下同),顯著高于其他菌株,故確定菌株M2-1為供試菌進行后續(xù)實驗。

    2.2 菌株M2-1的鑒定

    2.2.1 菌落和個體形態(tài)學特征

    由圖3a、b可知,在高倍顯微鏡鏡下觀察,菌株M2-1的閉囊殼呈球形,直徑45 μm左右,單生在菌絲上,由糾結(jié)的菌絲構(gòu)成;菌絲具有橫隔,3~6 μm寬;分生孢子成串著生在菌絲頂端,倒梨形或球形。由圖3c可知,25 ℃條件下,在CYA平板上培養(yǎng)7 d后,菌株M2-1菌落直徑20~23 mm,放射狀,邊緣呈流蘇狀,褐色,平坦,表面質(zhì)地叢卷毛狀。參照《真菌鑒定手冊》[22]和《紅曲菌的形態(tài)與分類學》[16],菌株M2-1可初步鑒定為紅曲菌屬(Monascus spp.)。

    2.2.2 分子生物學鑒定

    2)自動化控制系統(tǒng)。地面控制系統(tǒng)均為撬裝OCS控制器獨立運行,地面壓力信號與現(xiàn)場井口BB井控系統(tǒng)進行聯(lián)鎖。當?shù)孛媲搜b設備壓力高于設定值時自動關井,具有緊急關井聯(lián)鎖功能,從而確保運行安全可靠。地面各撬裝采用就地控制與中控室控制相融合,撬塊上的各重要工藝參數(shù)的顯示、控制、報警以及各相關邏輯聯(lián)鎖保護控制均由中控室DCS+PC系統(tǒng)進行遠程監(jiān)控。

    菌株M2-1的rDNA-ITS PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,由圖4可知,產(chǎn)物條帶單一、明亮,說明特異性擴增良好,測序后得到長度為582 bp的序列,在NCBI上比對發(fā)現(xiàn)與紅色紅曲菌Monascus ruber FRR2447的同源性達99%以上,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹(圖5),菌株M2-1與Monascus ruber的親緣關系最近(相似度100%)。結(jié)合形態(tài)學特征,將菌株M2-1鑒定為Monascus ruber。該種是常見的三大紅曲固態(tài)發(fā)酵菌種之一[23],具有較強的產(chǎn)洛伐他汀和紅曲色素能力。

    2.3 中藥對紅色紅曲菌M2-1固態(tài)發(fā)酵的影響

    2.3.1 對發(fā)酵失質(zhì)量的影響

    長時間的紅曲固態(tài)發(fā)酵過程中,底物經(jīng)紅曲菌分解代謝后產(chǎn)生水和二氧化碳,水分蒸發(fā)和二氧化碳逸出造成質(zhì)量損失,因此發(fā)酵失質(zhì)量能夠反映紅曲菌的代謝活躍程度[24]。由圖6可知,與空白對照組相比,添加白芷粉/汁、丁香粉、茯苓粉、黑胡椒粉、肉豆蔻粉、桑葉粉、甘草粉、赤小豆粉、牡蠣粉、枸杞粉、桑葚汁、山楂汁紅曲的發(fā)酵失質(zhì)量增加;添加茯苓汁、肉豆蔻汁、杏仁粉/汁、桑葉汁、甘草汁、牡蠣汁、桑葚粉、陳皮汁時發(fā)酵失質(zhì)量降低;添加丁香汁、黑胡椒汁、赤小豆汁、枸杞汁、麥芽粉/汁、陳皮粉、山楂粉對發(fā)酵失質(zhì)量影響不明顯。結(jié)果表明,15 種中藥材對紅曲菌的生長代謝有三方面作用:促進、無效和抑制,原因可能是中藥的多種成分綜合作用于菌體生長的結(jié)果[25],其作用機制尚有待進一步研究。

    2.3.2 對洛伐他汀產(chǎn)量的影響

    由圖7可知,普通紅曲洛伐他汀產(chǎn)量為1.472 mg/g,添加白芷粉/汁、丁香汁、茯苓粉、黑胡椒汁、杏仁粉、桑葉粉、枸杞粉/汁、桑葚粉、麥芽粉、陳皮粉/汁、山楂粉/汁發(fā)酵對洛伐他汀的生成有促進作用,其中以陳皮粉效果最顯著(P<0.01),達到2.118 mg/g,較普通紅曲提高43.89%;而添加茯苓粉/汁、黑胡椒粉、肉豆蔻粉/汁、桑葉汁、甘草粉、赤小豆粉、牡蠣粉、桑葚汁、麥芽汁發(fā)酵對洛伐他汀的生成有抑制作用;白芷汁、丁香粉、杏仁汁、甘草汁、赤小豆汁、牡蠣汁的添加對洛伐他汀的生成影響不明顯。上述結(jié)果表明,中藥種類與添加形式(藥粉、藥汁)均會對紅曲菌生長代謝產(chǎn)生影響,與李麗等[15]的研究結(jié)論一致。由于受試藥材本身不含他汀類物質(zhì),因此可判定紅曲洛伐他汀產(chǎn)量的提高來源于中藥的間接作用,其機理可能是中藥弱極性或非極性成分(如中、長鏈脂肪酸)使紅曲菌細胞膜通透性增加,從而有利于營養(yǎng)物質(zhì)的攝取和洛伐他汀的分泌[26],或是中藥的有效物質(zhì)能影響生物合成途徑,有利于洛伐他汀的生成[27]。

    2.3.3 對色價的影響

    色價能在一定程度上反映紅曲色素含量的高低和著色能力的強弱。由圖8可知,添加白芷粉、丁香汁、黑胡椒汁、桑葉粉、陳皮粉、山楂粉/汁有利于提高紅曲色價,其中山楂汁的效果最為顯著(P<0.01),達到320.12 U/g,較普通紅曲提高71.79%;丁香粉對紅曲色價無明顯作用;除以上藥材外,其他藥材的添加均會從不同程度上降低紅曲色價,說明在本實驗藥材的添加量下,抑制紅曲色素合成的因子起主導作用,但根據(jù)趙燕等[28]的報道,不排除有促進因子的存在,需通過改變添加量進行驗證。中藥對色價的影響相對洛伐他汀指標更加復雜,因為藥材成分除了可以間接作用于紅曲菌產(chǎn)色素外,一些藥材(如黑胡椒、陳皮、山楂等)自身的天然色素也可直接貢獻于紅曲色價;雖然枸杞紅色素在本實驗的低溫和酸性發(fā)酵環(huán)境下較穩(wěn)定[29],能夠?qū)ι珒r產(chǎn)生直接正效應,但可能不足以抵消枸杞中抑制因子產(chǎn)生的負效應,因此最終表現(xiàn)為降低紅曲色價;此外,紅曲色素的產(chǎn)生是一個耗氧過程[30],而藥粉能夠疏松曲料,有利于氧氣傳遞,這可能是桑葉粉紅曲色價較高的部分原因。

    2.3.4 確定最佳制曲藥材

    注:Di+.評價方案與最優(yōu)方案的歐氏距離;Di-.評價方案與最劣方案的歐氏距離;Ci.評價方案與最優(yōu)方案的接近程度,Ci∈[0,1],其值越大,評價結(jié)果越優(yōu)。

    TOPSIS法是一種優(yōu)秀的多目標決策和多屬性評價方法,具有計算簡便、應用靈活的優(yōu)點,在經(jīng)濟、社會、科技、環(huán)境等領域得到了非常廣泛的應用[19,31]。根據(jù)圖5~7中的數(shù)據(jù),利用該法對藥紅曲綜合評價??紤]到發(fā)酵失質(zhì)量指標的增加會造成產(chǎn)品得率下降,故將其確定為低優(yōu)指標,而洛伐他汀和色價顯然為高優(yōu)指標。用藥方案的優(yōu)劣按照Ci值排序,結(jié)果見表1。排序前7位藥紅曲的Ci值顯著高于普通紅曲(Ci>0.555,P<0.05),即陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉用于制備藥紅曲效果最佳。從藥材成分來看,這些藥材的纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等豐富的營養(yǎng)成分可被紅曲菌的酶系分解,用于菌體生長和產(chǎn)物合成;從中藥理論來看,這些藥材大多屬溫性,味苦、辛,與紅曲藥性相近而味相反,根據(jù)傳統(tǒng)制曲用藥規(guī)律[32],促進真菌活動和抑制細菌繁殖的雙重作用可能是這些藥材制曲效果較好的原因。

    3 結(jié) 論

    洛伐他汀作為紅曲菌的次級代謝產(chǎn)物,會在一定程度上抑制其自身生長。本研究利用該原理從紅曲分離源中篩選得到一株對洛伐他汀抗性最強的菌株M2-1,經(jīng)固態(tài)發(fā)酵驗證,發(fā)現(xiàn)其洛伐他汀產(chǎn)量也最高,該菌株能在較短的發(fā)酵時間內(nèi)(12 d)發(fā)酵積累較高的洛伐他汀(1.472 mg/g),通過形態(tài)學和分子生物學鑒定為紅色紅曲菌(Monascus ruber)。

    藥材種類和添加形式對紅色紅曲菌M2-1固態(tài)發(fā)酵影響顯著。通過TOPSIS綜合評價結(jié)果可知,陳皮粉、山楂粉、山楂汁、桑葉粉、丁香汁、黑胡椒汁、白芷粉制備藥紅曲的效果顯著優(yōu)于普通紅曲(P<0.05),其中,陳皮粉紅曲的洛伐他汀產(chǎn)量和山楂汁紅曲的色價最高,分別較普通紅曲提高43.89%和71.79%。本研究為進一步提高紅曲的降脂保健和著色效果提供了新的思路,對深度開發(fā)藥食兩用紅曲有良好的應用前景。此外,中藥添加量和復配作用會如何影響紅曲固態(tài)發(fā)酵,還需作進一步研究。

    參考文獻:

    [1] Lü Xucong, WENG Xing, ZHANG Wen, et al.Microbial diversity of traditional fermentation starters for Hong Qu glutinous rice wine as determined by PCR-mediated DGGE[J].Food Control, 2012, 28(2): 426-434.DOI:10.1016/j.foodcont.2012.05.025.

    [2] CHEN Wanping, HE Yi, ZHOU Youxiang, et al.Edible flamentous fungi from the species Monascus: early traditional fermentations,modern molecular biology, and future genomics[J].Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2015, 14(5): 555-567.DOI:10.1111/1541-4337.12145.

    [3] 江利香, 葛鋒, 劉暢.紅曲洛伐他汀的高產(chǎn)策略[J].中草藥, 2011,42(7): 1446-1452.

    [4] 姜冰潔, 許贛榮, 張薄博, 等.降脂紅曲產(chǎn)品質(zhì)量標準的探討[J].中草藥, 2015, 46(3): 453-456.DOI:10.7501/ j.issn.0253-2670.2015.03.027.

    [5] 高彥祥.食品添加劑基礎[M].北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2012: 109.

    [6] LI Yinhua, JIANG Long, JIA Zhangrong, et al.A Meta-analysis of red yeast rice: an effective and relatively safe alternative approach for dyslipidemia[J].PLoS ONE, 2014, 9(6): e98611.DOI:10.1371/journal.pone.0098611.

    [7] GORDON R Y, BECKER D J.The role of red yeast rice for the physician[J].Current Atherosclerosis Reports, 2011, 13(1): 73-80.DOI:10.1007/s11883-010-0145-0

    [8] 喬延江.中藥發(fā)酵炮制學[M].北京: 科學出版社, 2013: 42-44.

    [9] 陳洪章.現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)、理論與實踐[M].北京: 化學工業(yè)出版社, 2013: 6-10.

    [10] FARINAS C S.Developments in solid-state fermentation for the production of biomass-degrading enzymes for the bioenergy sector[J].Renewable and Sustainable Energy Reviews, 2015, 52: 179-188.DOI:10.1016/j.rser.2015.07.092.

    [11] THOMAS L, LARROCHE C, PANDEY A.Current developments in solid-state fermentation[J].Biochemical Engineering Journal, 2013,81: 146-161.DOI:10.1016/j.bej.2013.10.013.

    [12] 羅芳, 李麗, 羅頌, 等.多種中藥材制作純種藥曲的性能比較及優(yōu)化研究[J].釀酒科技, 2014(2): 7-9.DOI:10.13746/j.njkj.2014.02.012.

    [13] 崔培梧, 吳紅娟, 譚朝陽, 等.植物藥-茯苓菌雙向發(fā)酵代謝特征初探[J].湖南中醫(yī)藥大學學報, 2013, 33(7): 37-40.DOI:10.3969/ j.issn.1674-070X.2013.07.009.037.04.

    [14] 劉高強, 丁重陽, 章克昌, 等.藥用昆蟲蜣螂對靈芝多糖生物合成的影響[J].生物工程學報, 2009, 25(6): 914-919.DOI:10.3321/ j.issn:1000-3061.2009.06.019.

    [15] 李麗, 張文學, 羅芳, 等.紅曲藥曲的制備工藝及藥曲清酒的研究[J].食品工業(yè)科技, 2014, 35(18): 194-198.DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.18.033.

    [16] 郭芳, 李鐘慶.紅曲菌的形態(tài)與分類學[M].北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2003.

    [17] CENIS J L.Rapid extraction of fungal DNA for PCR amplifcation[J].Nucleic Acids Research, 1992, 20(9): 2380.DOI:10.1093/ nar/20.9.2380.

    [18] 陳靜, 郝偉偉, 王春梅, 等.產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌的篩選鑒定、純化及酶學性質(zhì)分析[J].食品科學, 2013, 34(5): 191-196.

    [19] PAKPOUR S, OLISHEVSKA S V, PRASHER S O, et al.DNA extraction method selection for agricultural soil using TOPSIS multiple criteria decision-making model[J].American Journal of Molecular Biology, 2013, 3(4): 215-228.DOI:10.4236/ajmb.2013.34028.

    [20] KUMAR M S, KUMAR P M, SARNAIK H M, et al.A rapid technique for screening of lovastatin-producing strains of Aspergillus terreus by agar plug and Neurospora crassa bioassay[J].Journal of Microbiological Methods, 2000, 40(1): 99-104.DOI:10.1016/S0167-7012(99)00135-9.

    [21] 張良.高產(chǎn)Monacolin K紅曲菌的誘變選育及其固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化[D].南昌: 南昌大學, 2010: 35.DOI:10.7666/d.y1747013.

    [22] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海: 上??茖W技術(shù)出版社, 1979: 129-136.

    [23] PATAKOVA P.Monascus secondary metabolites: production and biological activity[J].Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 2013, 40(2): 169-181.DOI:10.1007/s10295-012-1216-8.

    [24] 路秀玲, 趙樹欣, 劉忠華.紅曲霉固態(tài)發(fā)酵中生物量的測定方法[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2001, 27(6): 45-49.DOI:10.3321/j.issn:0253-990X.2001.06.010.

    [25] 韋朝陽, 亮賀, 邵雙雙, 等.外源添加物對食藥用菌液體發(fā)酵影響的研究進展[J].食品科學, 2015, 36(7): 245-250.DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201507045.

    [26] 侯曉梅, 陳敏青, 張慧蕾, 等.中藥提取物對灰樹花深層發(fā)酵的影響[J].食品科技, 2013, 38(9): 185-188.DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2013.09.033.

    [27] 劉高強, 趙艷, 王曉玲, 等.靈芝多糖的生物合成和發(fā)酵調(diào)控[J].菌物學報, 2011, 30(2): 198-205.DOI:10.13346/ j.mycosystema.2011.02.015.

    [28] 趙艷, 劉高強, 朱朝陽, 等.不同植物藥提取物對靈芝細胞生長和胞內(nèi)三萜產(chǎn)物形成的影響[J].菌物學報, 2011, 30(2): 249-254.DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.02.018.

    [29] 李金梅, 楊秋林, 趙智宏.枸杞紅色素的穩(wěn)定性及其在食品中的應用研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學學報, 2012, 33(1): 243-247.

    [30] 王克明.固定化紅曲生物反應器發(fā)酵紅曲色素的研究[J].江蘇調(diào)味副食品, 2005, 22(1): 16-18.DOI:10.3969/j.issn.1006-8481.2005.01.005.

    [31] BEHZADIAN M, OTAGHSARA S K, YAZDANI M, et al.A state-of the-art survey of TOPSIS applications[J].Expert Systems with Applications, 2012, 39(17): 13051-13069.DOI:10.1016/ j.eswa.2012.05.056.

    [32] 楊俊, 李麗, 張文學, 等.傳統(tǒng)釀酒制曲應用中藥材的規(guī)律及其現(xiàn)代意義探討[J].釀酒科技, 2015(1): 16-18.DOI:10.13746/ j.njkj.2014171.

    DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613020 10.7506/spkx1002-6630-201613020. http://www.spkx.net.cnCHE Xin, MAO Jian, LIU Shuangping, et al.Screening of Monacolin K-producing Monascus and effects of Chinese medicinal herbal materials on Monacolin K production in solid-state fermentation[J].Food Science, 2016, 37(13): 114-119.(in Chinese with English abstract) 10.7506/spkx1002-6630-201613020. http://www.spkx.net.cn

    中圖分類號:TS201.3

    文獻標志碼:A

    文章編號:1002-6630(2016)13-0114-06

    收稿日期:2015-09-10

    基金項目:國家自然科學基金面上項目(31571823)

    作者簡介:車鑫(1990—),男,碩士研究生,主要從事食品生物技術(shù)研究。E-mail:403995925@qq.com

    *通信作者:毛健(1970—),男,教授,博士,主要從事食品生物技術(shù)研究。E-mail:biomao@263.net

    Screening of Monacolin K-Producing Monascus and Effects of Chinese Medicinal Herbal Materials on Monacolin K Production in Solid-State Fermentation

    CHE Xin1,2, MAO Jian1,2,3,*, LIU Shuangping1,2,3, ZHOU Zhilei1,2,3, XUE Jingbo1,2
    (1.School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;2.National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;3.National Engineering Research Center of Chinese Rice Wine, Shaoxing 312000, China)

    Abstract:One strain with the most powerful capability of producing Monacolin K named M2-1 was screened from red mold rice (RMR) using Monacolin K-containing plates and validated by solid-state fermentation.The yield of Monacolin K reached 1.472 mg/g (dry basis) after 12 d fermentation.The strain was identified as Monascus ruber by morphological and rDNA-ITS sequence analysis.The effects of powders and water extracts of 15 edible and medicinal herbs on Monacolin K production and color value of M2-1 in solid-state fermentation were studied.Results indicated that Pericarpium Citri Reticulatae, Fructus Crataegi, Folium Mori and Radix Angelicae Dahuricae powder as well as Fructus Crataegi, Flos Caryophylli and Fructus Piperis extracts significantly improved the quality of RMR (P < 0.05).By adding Pericarpium Citri Reticulatae powder and Fructus Crataegi extract to the fermentation medium, the maximum Monacolin K production of 2.118 mg/g and the highest color value of RMR of 320.12 U/g were obtained which were increased by 43.89% and 71.79% compared those obtained with the ordinary strain, respectively.This study discovered a variety of Chinese medicinal herbs that could promote the production of Monacolin K and Monascus pigment by Monascus ruber, which will provide a novel strategy for improving the efficacy of traditional RMR as an edible and medicinal resource.

    Key words:Monascus ruber; Chinese medicinal herb; solid-state fermentation; Monacolin K; color value

    猜你喜歡
    色價洛伐他汀中藥
    中藥久煎不能代替二次煎煮
    中老年保健(2021年4期)2021-12-01 11:19:40
    您知道嗎,沉香也是一味中藥
    中老年保健(2021年4期)2021-08-22 07:08:32
    中醫(yī),不僅僅有中藥
    金橋(2020年7期)2020-08-13 03:07:00
    高色價紅曲米液態(tài)制種的培養(yǎng)條件優(yōu)化
    梔子黃色素提取工藝及品質(zhì)評價
    洛伐他汀腫瘤治療的研究進展
    紅曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)洛伐他汀條件的研究
    中藥貼敷治療足跟痛
    紅曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)洛伐他汀條件的研究
    果膠酶法提取紫甘藍花青素工藝條件研究
    啦啦啦观看免费观看视频高清| 日本三级黄在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 最后的刺客免费高清国语| 级片在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 免费观看的影片在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 内射极品少妇av片p| 国产老妇女一区| 日本免费一区二区三区高清不卡| eeuss影院久久| 婷婷色综合大香蕉| 22中文网久久字幕| 欧美日韩在线观看h| 亚洲综合色惰| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线观看午夜福利视频| 在现免费观看毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品永久免费网站| 色尼玛亚洲综合影院| 麻豆国产av国片精品| 午夜免费激情av| 搡老妇女老女人老熟妇| av在线播放精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产亚洲精品久久久com| 在线免费十八禁| 在现免费观看毛片| 激情 狠狠 欧美| 男女边吃奶边做爰视频| 久久亚洲精品不卡| 亚州av有码| 亚洲最大成人av| 国产高清有码在线观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲第一电影网av| av专区在线播放| 亚洲色图av天堂| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美在线一区亚洲| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产黄片美女视频| 日本 av在线| 嫩草影院精品99| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品电影一区二区三区| av天堂在线播放| av免费在线看不卡| 国产精品嫩草影院av在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产黄片美女视频| 国产精品福利在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 性欧美人与动物交配| 亚洲无线观看免费| 午夜福利18| 黄色视频,在线免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 午夜久久久久精精品| 女同久久另类99精品国产91| 国产成人91sexporn| 最后的刺客免费高清国语| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| h日本视频在线播放| 3wmmmm亚洲av在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲va在线va天堂va国产| 变态另类丝袜制服| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品不卡视频一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲国产精品合色在线| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲欧美日韩无卡精品| 99热只有精品国产| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲四区av| 成人鲁丝片一二三区免费| 别揉我奶头 嗯啊视频| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久久丰满| 一本精品99久久精品77| 亚洲三级黄色毛片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 中文在线观看免费www的网站| 精品久久久久久成人av| 美女被艹到高潮喷水动态| 99热精品在线国产| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久久国产成人免费| 久久韩国三级中文字幕| 最近的中文字幕免费完整| 国产av一区在线观看免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 青春草视频在线免费观看| 黄色一级大片看看| 国产成人精品久久久久久| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 在线免费观看不下载黄p国产| 精品乱码久久久久久99久播| 国产免费男女视频| 国产精品99久久久久久久久| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲成人久久性| 日韩中字成人| 国产黄a三级三级三级人| 最近视频中文字幕2019在线8| 给我免费播放毛片高清在线观看| 秋霞在线观看毛片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 老女人水多毛片| 国产精品99久久久久久久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 草草在线视频免费看| 舔av片在线| 亚洲最大成人手机在线| 成年免费大片在线观看| 精品久久久久久成人av| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 亚洲最大成人av| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产中年淑女户外野战色| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| .国产精品久久| 亚洲人成网站高清观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产av麻豆久久久久久久| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲美女视频黄频| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品一二三区在线看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产伦在线观看视频一区| 三级国产精品欧美在线观看| 免费高清视频大片| 成人性生交大片免费视频hd| 老司机福利观看| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲av.av天堂| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜精品在线福利| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品久久久噜噜| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 免费av毛片视频| 日本免费a在线| 久久久久性生活片| 亚洲在线自拍视频| 亚洲色图av天堂| av在线观看视频网站免费| 床上黄色一级片| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美三级亚洲精品| 久久久成人免费电影| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 搡老岳熟女国产| 国产精品三级大全| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 久久精品人妻少妇| 五月玫瑰六月丁香| 欧美激情在线99| 99热6这里只有精品| 成人欧美大片| 一区二区三区高清视频在线| а√天堂www在线а√下载| 成年女人毛片免费观看观看9| 成年版毛片免费区| 有码 亚洲区| 51国产日韩欧美| 国产毛片a区久久久久| www日本黄色视频网| a级毛片a级免费在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 日本黄大片高清| 偷拍熟女少妇极品色| 国产在视频线在精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 日本黄大片高清| 免费大片18禁| 99热精品在线国产| 国产高清激情床上av| 久99久视频精品免费| 少妇高潮的动态图| 我要看日韩黄色一级片| 国产 一区 欧美 日韩| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 嫩草影院入口| 中文资源天堂在线| 亚洲18禁久久av| 成人二区视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 91在线精品国自产拍蜜月| 成人美女网站在线观看视频| 深夜a级毛片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品日韩av在线免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 午夜福利在线观看吧| 99久久精品一区二区三区| avwww免费| 国产精品一区www在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜久久久久精精品| 最好的美女福利视频网| 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久大精品| 精品久久久噜噜| 欧美bdsm另类| 麻豆成人午夜福利视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产日本99.免费观看| 欧美+日韩+精品| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲精品影视一区二区三区av| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 91久久精品国产一区二区成人| 日韩欧美精品v在线| 欧美+日韩+精品| 亚洲成人久久性| 我的女老师完整版在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲五月天丁香| 俺也久久电影网| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品99久久久久久久久| 成人毛片a级毛片在线播放| 男女之事视频高清在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 99热这里只有是精品50| 国产成人freesex在线 | 成人永久免费在线观看视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 精品久久国产蜜桃| 一本一本综合久久| 久久久久久久久中文| 在线天堂最新版资源| 最好的美女福利视频网| av视频在线观看入口| 国产视频内射| 天堂影院成人在线观看| 一级黄色大片毛片| 神马国产精品三级电影在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 97超视频在线观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲在线观看片| 国产精品国产高清国产av| 久久精品国产自在天天线| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 一本精品99久久精品77| 内射极品少妇av片p| 国内精品美女久久久久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 露出奶头的视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲人成网站在线观看播放| 男人舔奶头视频| 成年女人永久免费观看视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 色哟哟哟哟哟哟| or卡值多少钱| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产不卡一卡二| 久久久久九九精品影院| av在线亚洲专区| 男女边吃奶边做爰视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国内精品美女久久久久久| 天堂√8在线中文| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 男女边吃奶边做爰视频| 中文字幕久久专区| 深夜a级毛片| 亚洲七黄色美女视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 深夜a级毛片| 麻豆成人午夜福利视频| 日本熟妇午夜| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 一进一出好大好爽视频| 国产真实乱freesex| 久久久欧美国产精品| 哪里可以看免费的av片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 插阴视频在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 91久久精品国产一区二区成人| 成人午夜高清在线视频| 99热6这里只有精品| 日本黄色视频三级网站网址| 国产一区二区三区av在线 | 亚洲av免费高清在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美3d第一页| av在线蜜桃| 亚洲最大成人手机在线| 欧美+日韩+精品| 乱人视频在线观看| 男女那种视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久国产成人精品二区| 国产高清不卡午夜福利| 99久久精品热视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲av熟女| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品亚洲一级av第二区| 免费大片18禁| av在线老鸭窝| 黑人高潮一二区| 国产视频内射| 在线观看免费视频日本深夜| 美女cb高潮喷水在线观看| av在线亚洲专区| 听说在线观看完整版免费高清| 成熟少妇高潮喷水视频| eeuss影院久久| 精品欧美国产一区二区三| 欧美激情久久久久久爽电影| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美高清成人免费视频www| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲人成网站在线播| 12—13女人毛片做爰片一| 好男人在线观看高清免费视频| 日本熟妇午夜| 久久精品综合一区二区三区| 午夜视频国产福利| 日韩欧美三级三区| 久久久久性生活片| 国产av在哪里看| 亚洲欧美清纯卡通| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品无大码| 成人二区视频| 国产爱豆传媒在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品av视频在线免费观看| 国产淫片久久久久久久久| 99久久九九国产精品国产免费| 日日摸夜夜添夜夜爱| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品av视频在线免费观看| 日本一二三区视频观看| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美zozozo另类| 国产色婷婷99| 色哟哟·www| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人av一区二区三区在线看| av女优亚洲男人天堂| 看十八女毛片水多多多| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久久久久久久黄片| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 村上凉子中文字幕在线| av在线播放精品| 国产在线男女| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 一级a爱片免费观看的视频| 成人亚洲精品av一区二区| 波野结衣二区三区在线| 久久久久久久久大av| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 天天躁日日操中文字幕| 久久久久久久久久成人| 毛片一级片免费看久久久久| 内射极品少妇av片p| 天堂√8在线中文| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 美女高潮的动态| 国产精品一区二区性色av| 熟女人妻精品中文字幕| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 永久网站在线| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲性久久影院| av在线播放精品| 午夜视频国产福利| 久久中文看片网| 精品免费久久久久久久清纯| a级一级毛片免费在线观看| 国产 一区精品| 午夜激情欧美在线| 亚洲精品成人久久久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 白带黄色成豆腐渣| 俺也久久电影网| 内射极品少妇av片p| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 女人被狂操c到高潮| 国产视频一区二区在线看| av在线播放精品| 在线a可以看的网站| 综合色丁香网| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲精品亚洲一区二区| 夜夜夜夜夜久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 午夜老司机福利剧场| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 在线播放国产精品三级| av.在线天堂| 中文字幕熟女人妻在线| 成人av在线播放网站| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲,欧美,日韩| 欧美日韩在线观看h| 免费观看人在逋| 日本在线视频免费播放| 九九在线视频观看精品| 国产成年人精品一区二区| 午夜老司机福利剧场| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产av在哪里看| 日本免费a在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久国产网址| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久久伊人网av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产探花极品一区二区| 无遮挡黄片免费观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费看av在线观看网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲av中文av极速乱| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲真实伦在线观看| avwww免费| 欧美精品国产亚洲| 久久99热这里只有精品18| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人欧美大片| 精品人妻视频免费看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久中文看片网| 国产人妻一区二区三区在| 91精品国产九色| 亚洲乱码一区二区免费版| 97热精品久久久久久| 欧美潮喷喷水| 美女免费视频网站| 午夜老司机福利剧场| 99久国产av精品| 全区人妻精品视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 男人和女人高潮做爰伦理| 少妇人妻精品综合一区二区 | 欧美潮喷喷水| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 免费高清视频大片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲不卡免费看| 一个人看视频在线观看www免费| 最好的美女福利视频网| 精品久久久久久久久av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产一区二区三区av在线 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 黄片wwwwww| 亚洲不卡免费看| 国产精品一及| 亚洲三级黄色毛片| 欧美精品国产亚洲| 18+在线观看网站| 岛国在线免费视频观看| 国内精品一区二区在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 全区人妻精品视频| av女优亚洲男人天堂| 久久欧美精品欧美久久欧美| 少妇熟女欧美另类| 国产精品福利在线免费观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩精品有码人妻一区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av成人av| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 又黄又爽又免费观看的视频| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲第一电影网av| 国产成人91sexporn| 美女被艹到高潮喷水动态| 成年女人永久免费观看视频| 真人做人爱边吃奶动态| 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美日韩乱码在线| 国产毛片a区久久久久| 亚洲高清免费不卡视频| 三级国产精品欧美在线观看| 国产视频内射| 热99在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 欧美日韩精品成人综合77777| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品久久久久久精品电影| 久久人妻av系列| 国产男人的电影天堂91| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美一区二区亚洲| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久韩国三级中文字幕| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 最近在线观看免费完整版| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 国产乱人视频| 毛片女人毛片| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产v大片淫在线免费观看| 久久99热这里只有精品18| 天堂网av新在线| 亚洲最大成人av| 国内精品一区二区在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 久久亚洲国产成人精品v| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久精品夜色国产| 亚洲精品成人久久久久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品三级大全| 国产精品99久久久久久久久| 色播亚洲综合网| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 最近视频中文字幕2019在线8| 国语自产精品视频在线第100页| 久久午夜福利片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产高清激情床上av| 欧美中文日本在线观看视频| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜精品一区二区三区免费看| 一级毛片电影观看 | 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产精品sss在线观看| av专区在线播放| av卡一久久| 免费看a级黄色片| 欧美最黄视频在线播放免费| 国模一区二区三区四区视频| 久久国产乱子免费精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 毛片女人毛片| 男女做爰动态图高潮gif福利片|