羅漢果提取物對負重游泳訓練大鼠睪丸組織細胞色素C氧化酶7A2表達的影響

李　玲

(烏魯木齊市第四人民醫(yī)院睡眠科，新疆　烏魯木齊　830000)

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羅漢果提取物對負重游泳訓練大鼠睪丸組織細胞色素C氧化酶7A2表達的影響

李玲

(烏魯木齊市第四人民醫(yī)院睡眠科，新疆烏魯木齊830000)

〔摘要〕目的探討羅漢果提取物對負重游泳訓練大鼠物質(zhì)代謝及大鼠睪丸組織細胞色素C氧化酶7A2(Cox7A2)表達的影響。方法選擇雄性Wistar大鼠60只作為研究對象，分成兩組，各30只。對照組：采取負重游泳訓練，時間為8 w。觀察組：采取負重游泳訓練，時間為8 w，同時對大鼠進行羅漢果提取物灌胃。結(jié)果干預8 w后，觀察組大鼠力竭游泳時間、睪酮水平、皮質(zhì)酮水平(P<0.01)。肝糖原儲量、肌糖原儲量血紅蛋白水平均高于對照組(均P<0.01)。觀察組血尿氮素水平低于對照組(P<0.01)。觀察組Cox7A2蛋白相對表達量低于對照組(P<0.05)。結(jié)論負重游泳訓練大鼠表現(xiàn)為Cox7A2表達明顯升高，羅漢果提取物能夠顯著提高大鼠的抗運動疲勞能力，并降低大鼠睪丸組織Cox7A2蛋白的表達。

〔關鍵詞〕負重游泳訓練；羅漢果提取物；力竭游泳時間；睪酮；皮質(zhì)酮；細胞色素C氧化酶7A2

細胞色素C氧化酶，可把呼吸底物的電子經(jīng)過細胞色素系統(tǒng)直接傳遞給分子態(tài)氧〔1〕。文獻表明，細胞色素C氧化酶7A2(Cox7A2)在老年人睪丸組織顯著上調(diào)〔2〕。長時間的運動訓練致機體內(nèi)抗氧化酶類減少，影響心臟的正常生理功能〔3〕，還可能會引起運動性低血睪酮癥，導致機體的運動功能嚴重削弱。文獻顯示〔4〕，羅漢果提取物具有較強的抗氧化活性。研究探討羅漢果提取物對負重游泳訓練大鼠物質(zhì)代謝及大鼠睪丸組織Cox7A2表達的影響。

1資料與方法

1.1動物雄性Wistar大鼠60只，隨機進行分組，每組30只。其中對照組大鼠體重183～241〔平均(205.9±23.5)〕g。鼠齡5～7 w〔平均(6.1±1.5)〕w。觀察組大鼠體重181～239〔平均(211.5±19.7)〕g。鼠齡5～7〔平均(6.4±1.9)〕w。

1.2方法對照組：大鼠進行負重游泳的訓練方式，持續(xù)的時間共8 w，且每次訓練均以大鼠的力氣耗盡為終止點。實驗的訓練裝置為玻璃游泳槽，大小為130 cm×70 cm×60 cm，溫度控制在30℃左右。玻璃泳槽的底部安放一個水泵來產(chǎn)生水流。觀察組大鼠進行負重游泳的訓練方法，訓練的持續(xù)時間為8 w，并對觀察組大鼠給予羅漢果提取物干預，藥物購自西安潤澤生物技術有限公司，灌胃給藥，劑量為160 mg/kg，每天一次。

1.3觀察指標①力竭游泳時間、皮質(zhì)酮、睪酮〔5,6〕：兩組大鼠負重游泳訓練時間均為8 w，分別記錄兩組大鼠在從開始游泳到力竭的時間，并通過放射免疫分析法對兩組大鼠的皮質(zhì)酮、睪酮水平進行測定。所使用試劑盒由上海鈺博生物科技有限公司提供。②肝、肌糖原儲量〔5,6〕：對比兩組大鼠在負重游泳訓練前后的肝、肌糖原儲量，此項檢查的試劑盒采購于上海鈺博生物科技有限公司。③血紅蛋白、血尿氮素水平〔5,6〕：比較負重游泳訓練前后兩組大鼠血紅蛋白、血尿氮素水平。高鐵氰化鉀氧法測定血紅蛋白，UV-GLDH法測定血尿氮素。

1.4Western印跡實驗采用大鼠的睪丸，約為100 mg，將冷蛋白裂解液加入其中，劑量為1 ml，使用超聲破碎機進行超聲破碎，共四次，每次10 s，間隔時間為15 s。離心后取上清液做備用。隨后取50 μg蛋白，在100℃下進行變性，時間為5 min。利用聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)進行電泳，再轉(zhuǎn)至PVDF膜，參照選擇標準蛋白，并取相應條帶給予封閉。隨后加入稀釋后的抗Cox7A2及β-actin的一抗，在4℃下保存和過夜，使用TBST 沖洗后加入二抗，在室溫下震蕩，并孵育1.5 h，經(jīng)過TBST洗滌后，進行Pierce化學發(fā)光底物 A液與B液1∶1等體積混合，并在室溫下進行5 min反應，隨后將反應液吸干。膠片顯影、定影、圖像分析。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1大鼠的力竭時間、睪酮水平及皮質(zhì)酮水平干預8 w后，觀察組大鼠的力竭游泳時間、睪酮水平、皮質(zhì)酮水平都高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.2肝糖原儲量及肌糖原儲量比較干預8 w后，觀察組肝糖原儲量(11.7±2.5)mg/(g tissue)、肌糖原儲量都高于對照組(P<0.01)。見表2。

表2　兩組肝糖原儲量及肌糖原儲量比較

2.3血紅蛋白、血尿氮素比較干預8 w后，觀察組血紅蛋白水平高于對照組(P<0.01)。觀察組血尿氮素水平低于對照組(P<0.01)。見表3。

表3　兩組大鼠血紅蛋白及血尿氮素水平的比較±s，n=30)

2.4Western印跡檢測Cox7A2蛋白的表達觀察組Cox7A2蛋白相對表達量低于對照組(12.58±1.76 vs 18.62±2.16，P<0.05)。見圖1。

圖1　各組Cox7A2蛋白的表達

3討論

運動有益于健康，但過量又可能不利于健康。睪酮是重要的促合成激素〔7〕，對機體有著重要的影響。皮質(zhì)酮可以有效地抑制機體產(chǎn)生蛋白質(zhì)〔8〕、并可以有效地削弱機體的運動能力。使用羅漢果提取物，能夠有效地減輕細胞在運動后產(chǎn)生的損傷程度〔9〕。本實驗結(jié)果說明羅漢果提取物可以有效地增加大鼠在負重游泳訓練后的抗運動能力，改善大鼠的疲勞程度，并能夠降低運動對大鼠血睪酮、皮質(zhì)酮產(chǎn)生的影響。

糖是機體重要的能量來源，血紅蛋白是高等生物體內(nèi)負責運載氧的一種蛋白質(zhì)〔10〕。血尿素氮為人體內(nèi)蛋白質(zhì)的一種代謝產(chǎn)物，是一種主要終末產(chǎn)物〔11〕，在大鼠經(jīng)過較長長時間的負重游泳后，會出現(xiàn)一定的上升〔12〕。羅漢果提取物具有增加糖原貯備〔13〕的效果，且羅漢果提取物有較好的抗氧化活性，并能夠提高機體的抗疲勞能力。且本研究結(jié)果還提示在運動后給予羅漢果提取物，可以改善運動后所產(chǎn)生的大鼠肝糖原儲量變化，并能夠?qū)√窃瓋α慨a(chǎn)生影響，并可提升運動大鼠血液含氧量，保證機體正常的能量供給和能量代謝。

Cox7A2參與細胞色素C氧化酶的構(gòu)成〔14〕，在老年人睪丸組織顯著上調(diào)，是維持氧化呼吸鏈上最后一個復合體細胞色素C氧化酶正常功能所必需的。有研究發(fā)現(xiàn)〔12〕，Cox7A2能夠?qū)ΣG酮合成限速酶產(chǎn)生一定的抑制作用，并可以抑制黃體生成素對小鼠睪丸Leydig細胞睪酮的合成。在本研究中，進行負重游泳訓練的大鼠均出現(xiàn)Cox7A2的表達升高，而羅漢果提取物降低了負重游泳訓練大鼠睪丸組織Cox7A2蛋白的表達。

4參考文獻

1Elsner M，Rauser S，Maier S，etal.MALDI imaging mass spectrometry reveals COX7A2，TAGLN2 and S100-A10 as novel prognostic markers in Barrett's adenocarcinoma〔J〕.J Proteomics,2012；75(15)：4693-704.

2Chen L，Xin ZC，Li X，etal.Cox7a2 mediates steroidogenesis in TM3 mouse Leydig cells〔J〕.Asian J Androl,2006；8(5)：589-94.

3王勇，張光芬，陳小青.牡蠣提取液對長期訓練小鼠心肌抗氧化能力、一氧化氮及一氧化氮合酶的影響〔J〕.中國老年學雜志，2015;35(5)：1346-7.

4甘勝，余艷宏，馬偉，等.羅漢果果實不同溶劑提取物抗氧化活性初步研究〔J〕.湖北科技學院學報(醫(yī)學版)，2013;27(4)：281-4.

5婁春善，曹建民，郭嫻，等.林蛙油對運動訓練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運動疲勞能力的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2014;20(20)：150-4.

6周海濤，曹建民，林強，等.紅景天對運動訓練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運動疲勞能力的影響〔J〕.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012;24(12)：1808-12，1836.

7Nieschlag E，Nieschlag S.Testosterone deficiency：a historical perspective〔J〕.Asian J Androl,2014；16(2)：161-8.

8Moore FL，Orchinik M.Membrane receptors for corticosterone：a mechanism for rapid behavioral responses in an amphibian〔J〕.Horm Behav,1994；28(4)：512-9.

9張曉峰，劉大鐸.羅漢果提取物對運動疲勞小鼠的抗疲勞作用〔J〕.吉林大學學報(醫(yī)學版)，2013;39(3)：494-7.

10Sozmen EY.Sample blank subtraction outreachs hemoglobin interferences in flurorometric methods for DBS〔J〕.Mol Genet Metab,2012；105(3)：530.

11Kazory A.Emergence of blood urea nitrogen as a biomarker of neurohormonal activation in heart failure〔J〕.Am J Cardiol,2010；106(5)：694-700.

12程鵬，陳飛，何先元，等.四棱筋骨草等對小鼠抗運動疲勞比較研究〔J〕.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014;10(13)：9-11.

13柯良芳，孫盼盼，黃赤夫，等.羅漢果莖葉提取物的血清藥物化學研究〔J〕.中國現(xiàn)代中藥，2013;15(3)：187-90.

14Elsner M，Rauser S，Maier S，etal.MALDI imaging mass spectrometry reveals COX7A2，TAGLN2 and S100-A10 as novel prognostic markers in Barrett's adenocarcinoma〔J〕.J Proteomics,2012；75(15)：4693-704.

〔2014-12-09修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號〕R285

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2869-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.019

第一作者：李玲(1981-)，女，主治醫(yī)師，主要從事睡眠醫(yī)學研究。