成都地區(qū)健康成人血清游離睪酮和生物可利用睪酮水平調(diào)查

蒙立業(yè)，劉 稚，楊家良，何 訸，張 玫

(四川大學華西醫(yī)院實驗醫(yī)學科，四川成都 610041)

睪酮是雄激素的主要成分，男性睪酮幾乎全部來自睪丸，女性主要由卵巢分泌?？偛G酮是實驗室最常用的雄激素檢測指標，但不能準確反映出機體組織真正能夠利用的雄激素水平。睪酮主要與性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和清蛋白結(jié)合，在外周血循環(huán)中，只有小部分(1%～2%)未與蛋白質(zhì)結(jié)合，稱為游離睪酮，只有游離部分才能進入細胞并發(fā)揮雄激素活性[1]。與清蛋白結(jié)合的睪酮，其與清蛋白親和力低于與SHBG的親和力，在組織毛細血管中容易解離生成游離睪酮。因此游離睪酮與清蛋白結(jié)合睪酮的總和稱為生物可利用睪酮[2]。已有研究表明，睪酮的測定，特別是游離睪酮，對于許多疾病的診斷特別是對于男性的雄激素缺乏癥以及女性雄激素過多癥有指導意義[3-4]，但在常規(guī)的臨床實踐中基于技術(shù)上的困難，臨床游離睪酮很少被直接測量，相應游離睪酮參考范圍的研究也很少。本研究調(diào)查了成都地區(qū)健康成人血清總睪酮、游離睪酮和生物可利用睪酮水平，以期為該地區(qū)成人血清睪酮參考范圍的建立提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2017年12月到2018年7月四川大學華西醫(yī)院體檢中心健康人群。納入標準[5]：年齡20～90歲，女性月經(jīng)期規(guī)律，排卵正常。排除標準[5]：(1)有嚴重或(和)慢性病史(特別是內(nèi)分泌疾病)，如垂體疾病、糖尿??；(2)目前正在使用處方藥或者在抽血前1個月做過任何影響性激素水平的治療；(3)過去1年內(nèi)曾接受過激素治療。共納入健康觀察人群499例，其中男性246例，女性253例。

1.2儀器與試劑 使用羅氏全自動分析儀(購自瑞士羅氏公司，型號E601)與其配套試劑盒及校準品檢測總睪酮(電化學發(fā)光免疫分析法)、SHBG(電化學發(fā)光免疫分析法)。選用第三方質(zhì)控品(購自美國Bio-Rad公司)，所有試劑均在效期內(nèi)使用?？偛G酮可報告范圍為0.025～15.0 ng/mL，變異系數(shù)(CV)為4.4%(0.696 ng/mL)、3.3%(8.79 ng/mL)、2.5%(13.1 ng/mL)；SHBG可報告范圍為0.25～2 000 nmol/mL，CV為1.1%(14.9 nmol/mL)、1.3%(45.7 nmol/mL)、1.7%(219 nmol/mL)。

1.3方法

1.3.1標本處理 收集符合上述標準人群空腹血清1.5～2.0 mL，存儲于-20℃。統(tǒng)一完成血清總睪酮和SHBG檢測，采用Vermeulen A等的在線計算公式計算血清游離睪酮與生物可利用睪酮[6]。

1.3.2離群值檢測[7]D是指一個極端觀測值(大的或小的值)和緊接著的極端觀測值(第二大或第二小的值)之間的絕對差值，而R是指所有觀測值的全距，即最大極值和最小極值的差值。采用D/R比率方法進行群值檢測，當D/R比率≥1/3，剔除該極端觀測值。

2 結(jié) 果

2.1總睪酮、游離睪酮和生物可利用睪酮與年齡的相關性 結(jié)果顯示：在男性中，總睪酮水平隨年齡變化，呈現(xiàn)平緩下降(r=-0.171)，游離睪酮、生物可利用睪酮隨年齡變化呈現(xiàn)明顯下降趨勢(r=-0.510、-0.571，P<0.05)。在女性健康個體中，總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮與年齡呈負相關(r=-0.569、-0.491、-0.501，P<0.05)。見圖1、2。

注：A表示總睪酮與年齡的相關性；B表示游離睪酮與年齡的相關性；C表示生物可利用睪酮與年齡的相關性。

圖1男性總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮與年齡的相關性

注：A表示總睪酮與年齡的相關性；B表示游離睪酮與年齡的相關性；C表示生物可利用睪酮與年齡的相關性。

圖2女性總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮與年齡的相關性

2.2不同性別總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮參考區(qū)間調(diào)查 本研究對分別采用參數(shù)統(tǒng)計和非參數(shù)統(tǒng)計的方法對總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮參考范圍進行統(tǒng)計，結(jié)果表明：在男性中，總睪酮、游離睪酮與生物可利用睪酮的兩種統(tǒng)計方法結(jié)果相對接近；在女性中，總睪酮、游離睪酮與生物可利用睪酮的兩種統(tǒng)計方法結(jié)果存在一定的差異。結(jié)果見表1。因參考試劑說明書年齡分組，本文計算不同年齡段的參考范圍，結(jié)果如表2。

表1 睪酮統(tǒng)計方法比較

表2 本研究與試劑說明書比較(P5～P95)

3 討 論

睪酮作為一種雄性激素在個體的生長、發(fā)育和維持內(nèi)分泌的穩(wěn)定中起著重要作用。評估男性的雄激素缺乏癥與女性雄激素過多癥必須基于臨床癥狀和血清睪酮水平，診斷該類疾病需依靠準確的檢測結(jié)果和參考范圍。美國內(nèi)分泌學會發(fā)表了關于性腺功能減退癥患者睪酮治療的臨床實踐指南，文章中提出用睪酮水平作為初始診斷雄性激素缺乏；當總睪酮接近正常下限或者懷疑SHBG結(jié)果異常時，通過測量游離或生物可利用的睪酮水平進行驗證[8]。國際男科學會和國際老年男性研究協(xié)會建議確定是否存在性腺功能減退癥狀，通過測量總睪酮和游離睪酮，或是測量總睪酮和SHBG，計算游離睪酮水平[9]。以上國際協(xié)會皆提出了測量游離睪酮的意義，但基于實際檢測技術(shù)問題，游離睪酮難于直接測量，因此，本研究通過計算成都市健康人群血清游離睪酮水平，為建立本地區(qū)實驗室參考范圍提供依據(jù)。

本研究調(diào)查了成都地區(qū)健康成人總睪酮、游離睪酮與生物可利用睪酮的水平，以性別、年齡分組進行了統(tǒng)計與相關性分析。結(jié)果顯示：總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮在男性與女性中均與年齡呈負相關(P<0.05)，但男性總睪酮的水平與年齡之間的相關性較弱(r=-0.171，P<0.05)，游離睪酮與生物可利用睪酮與年齡呈較好的相關性。而真正具有生物活性的游離睪酮與生物可利用睪酮在總睪酮未出現(xiàn)較為明顯的變化時，其已經(jīng)出現(xiàn)下降。因此，通過本研究調(diào)查結(jié)果表明，游離睪酮與生物可利用睪酮可能較總睪酮較早反映體內(nèi)雄性激素水平。在女性組中，總睪酮、游離睪酮、生物可利用睪酮均與年齡呈現(xiàn)較強的相關性，通過檢測同睪酮的水平，可以間接反映游離睪酮與生物可利用睪酮的水平。已有文獻報道，使用不同的測定方法檢測男性總睪酮，參考范圍在2.07～3.48 ng/mL[5]。當男性容易發(fā)生雄性激素缺乏癥狀時，總睪酮水平為3.00 ng/mL[8,10]。在本實驗中，男性總睪酮參考下限為2.50 ng/mL，低于該閾值，而略高于中國多中心研究結(jié)果(2.10 ng/mL)[11]。這種差異可能是由于檢測方法與健康人群年齡、地域構(gòu)成不一。目前，在女性總睪酮中缺乏普遍接受的閾值，但是當臨床懷疑有雄性激素分泌過多時，仍然會進行睪酮檢測[12]，體現(xiàn)出睪酮檢測具有重要意義。在本實驗中男性總睪酮參考上限是9.08 ng/mL，與NEALE等[13]使用質(zhì)譜儀建立英國地區(qū)健康人群參考上限(9.19 ng/mL)較為接近，而低于德國地區(qū)西門子全自動發(fā)光免疫分析建立健康人群參考上限(9.45 ng/mL)[5]。以上這些差異表明需要建立本地區(qū)的參考范圍，符合美國臨床實驗室標準化協(xié)會參考范圍建立推薦意見[7]。本研究未以體質(zhì)量指數(shù)進行分組研究，有報道指出，體質(zhì)量指數(shù)在一定程度上會影響游離睪酮與生物可利用睪酮水平[14]。

試劑說明書仍采用1987年國際臨床化學聯(lián)合會出版刊物中推薦建立90%的參考范圍[15]。應用以前的參考范圍，存在一定的缺陷，不利于為臨床提供參考，不能反映本地區(qū)健康成人游離睪酮與生物可利用睪酮水平。而目前普遍接受的標準以臨床實驗室標準化協(xié)會推薦指南建議以95%建立參考范圍，因此，需要調(diào)查本地區(qū)血清游離睪酮、生物可利用睪酮水平。本研究發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)參考值上限低于說明書參考范圍上限，由于納入人群為本院體檢人群，可能存在一定的選擇偏倚，為解決此問題，尚需進一步多中心的調(diào)查研究。為比較正偏態(tài)資料對結(jié)果的影響，本文比較了參數(shù)統(tǒng)計與非參數(shù)統(tǒng)計的結(jié)果，結(jié)果顯示，總睪酮、游離睪酮與生物可利用睪酮參考范圍，在兩種統(tǒng)計方法中，存在一定的誤差?？傮w而言，統(tǒng)計結(jié)果較為相符。

綜上所述，本研究以電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)，檢測其血清總睪酮和SHBG水平，計算血清游離睪酮、生物可利用睪酮水平，調(diào)查了成都地區(qū)血清游離睪酮、生物可利用睪酮水平。男性和女性游離睪酮和生物可利用睪酮均與年齡呈負相關性，臨床使用中應充分考慮年齡因素，男性游離睪酮和生物可利用睪酮較總睪酮更敏感。