GC—ECD測定當歸等10種藥食兩用中藥材中有機氯殘留量

何清彥++皮勝玲++謝嘉馳++夏伯候++李亞梅++林麗美

[摘要] 目的 考察當歸等10種藥食兩用中藥材中有機氯六六六、滴滴涕和五氯硝基苯的殘留量，為該類藥食兩用藥材的安全性評價提供實驗數(shù)據(jù)，為其標準的進一步完善提供參考。 方法 從市場收集該類藥材30批次，采用GC-ECD檢測方法對其進行9種有機氯農(nóng)藥殘留檢測。 結果 所建立的含測方法平均回收率為90.97%～103.56%，RSD值0.4%～2.7%。所測定的當歸、黨參等藥材中均含有不同程度的有機氯農(nóng)藥殘留。 結論 藥食兩用藥材的農(nóng)藥殘留限量需嚴格控制。

[關鍵詞] 藥食兩用中藥材；有機氯殘留；氣相色譜-電子捕獲檢測器

[中圖分類號] R282.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）04（a）-0004-05

隨著中藥產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，野生藥材資源不斷減少，現(xiàn)不少藥材已到瀕危絕境，因此人工栽培成為解決中藥資源短缺的主要方式[1-2]。然而，由于生態(tài)環(huán)境的惡化，病蟲的危害，化肥、農(nóng)藥的不合理使用，硫磺熏蒸等不規(guī)范生產(chǎn)、加工方式，中藥材品質低劣，農(nóng)藥殘留、重金屬、二氧化硫、硝酸鹽等有毒有害物質超標，嚴重危害患者用藥安全，中藥材的安全性和質量成為全社會關注焦點和中藥材生產(chǎn)加工亟待解決的問題[3-6]。

我國在20世紀70年代末已宣布禁止使用滴滴涕（DDT）、六六六（BHC）等有機氯農(nóng)藥[7-8]，因此類農(nóng)藥化學性質穩(wěn)定，脂溶性大，殘留期長，易在脂肪組織中蓄積，造成慢性中毒，危及人體健康。然而，目前有機氯農(nóng)藥殘留污染仍是造成中藥材質量下降的主要原因之一，且已成為制約我國中藥材走向國際市場的重要障礙[9-16]。鑒于藥食兩用藥材是一類使用頻率最高、用量大、理論上安全保障最好的中藥材，更是人們日常生活食療保健的原料，筆者收集了市場上10種藥食兩用藥材，包括當歸、黨參、天麻、黃芪、甘草、玉竹、百合、金銀花、山銀花、菊花，共30批次，采用GC-ECD法測定其中9種有機氯農(nóng)藥殘留的含量，考察其中有機氯BHC、DDT和五氯硝基苯（PCNB）的殘留量，為該類藥食兩用藥材的安全性評價提供實驗數(shù)據(jù)，且為其標準的進一步完善提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC-2010 Plus氣相色譜儀，包括63Ni電子捕獲檢測器，自動進樣器，LCsolution工作站（日本島津）；KQ3200B型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；800B臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；氮吹儀；刻度濃縮瓶。

1.2 試藥

BHC（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、DDT（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）、PCNB農(nóng)藥標準品均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所（濃度均為100 μg/ml，純度>97.7%），當歸、黨參、天麻、黃芪、甘草、玉竹、百合、金銀花、山銀花、菊花各3批次藥材均采集于亳州、廉橋等藥材市場，分別經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室劉塔斯教授鑒定為正品。試劑：丙酮、石油醚、二氯甲烷為農(nóng)殘級，氯化鈉、無水硫酸鈉等試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

DB-1色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；進樣口：230℃；檢測器：300℃；采用程序升溫：初溫100℃，以10℃/min升至220℃，再以8℃/min升至250℃保持10 min；分流進樣，分流比：50∶1；進樣量1 μl。載氣：高純氮（純度>99.999%），混合對照品出峰順序為α-BHC、PCNB、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC、p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT，所得空白溶劑和混合對照品色譜圖見圖1、圖2。

時間（min）

圖1 空白溶劑色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別取上述各對照品液（100 μg/ml）各0.5 ml至10 ml量瓶中，加入石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，即得濃度為5 μg/ml的混合對照品儲備液。取混合對照品儲備液0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 ml至5 ml量瓶中，分別加石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，即得0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 μg/ml的溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 取供試品于60℃干燥4 h，粉碎成細粉，過二號篩，取約2 g，置100 ml錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，加丙酮40 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉6 g，加二氯甲烷30 ml，稱定重量，超聲處理15 min，放冷，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置使分層。將有機相迅速移入裝有無水硫酸鈉的100 ml錐形瓶中，放置4 h。取35 ml，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90℃）溶解并轉移至10 ml具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90℃）稀釋至5 ml，小心加入硫酸1 ml，振搖1 min，3000 r/min離心10 min，取上清液2 ml，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉蒸發(fā)器，40℃將溶液濃縮至適量，稀釋至1 ml，即得。

2.3 線性關系考察

精密量取上述0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 μg/ml各農(nóng)藥混合對照品溶液，依“2.1”色譜條件分析，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得到相應回歸方程（表1）。

2.4 檢出限

配制一系列低濃度溶液進樣，以信噪比（S/N=3）測得BHC（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、DDT（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）、PCNB檢出限分別為0.2、0.2、0.2、0.4、0.2、0.2、0.6、0.6、0.4 ng/g。

2.5 重復性試驗

取當歸（甘肅1）樣品5份，按“2.2.2”項下操作制備待測液，按“2.1”色譜條件測定，得到BHC（α-BHC、δ-BHC）、DDT（p，p′-DDD、o，p′-DDT）峰面積值的RSD分別為1.7%、1.0%、2.0%、1.5%，表明方法重復性良好。

2.6 精密度試驗

精密吸取1.0 μg/ml混合對照液1 μl，連續(xù)進樣5次，按“2.1”色譜條件測定，得到BHC（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、DDT（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）、PCNB峰面積值的RSD分別為1.9%、0.7%、0.4%、1.2%、0.3%、0.4%、0.6%、1.0%、0.8%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取1.0 μg/ml混合對照液1 μl，連續(xù)在1、8、16、32、48 h進樣，按“2.1”色譜條件測定，得到BHC（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、DDT（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）、PCNB峰面積值的RSD分別為1.2%、1.0%、0.5%、1.0%、1.1%、1.5%、1.9%、1.0%、0.6%，表明樣品溶液在48 h內穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

取當歸樣品9份，每份約2.0 g，精密稱定，分3個水平添加混和對照品溶液，每水平重復3次，混勻，自然晾干，按“2.1”項下操作測定，所得結果扣除樣品中各農(nóng)藥殘留量，計算加樣回收率，結果見表2。

2.9 樣品測定

準確稱取各藥材樣品，按“2.2.2”項下操作制備待測液，按“2.1”色譜條件測定，結果見表3。

3 討論

3.1 色譜及實驗條件優(yōu)化

本實驗分別選用SE-54、HP-1、Rtx-1701、DB-1等色譜柱進行比較，最后選用Rtx-1701對各BHC、DDT異構體分離度適中，峰型較好，且最低檢出限值相對最低，滿足本次有機氯殘留量痕量檢測要求。本實驗有機試劑丙酮、石油醚、二氯甲烷均選用農(nóng)殘級，如用分析純易對測定產(chǎn)生干擾，尤其是丙酮、石油醚。有機相減壓濃縮時，水浴溫度不能高于40℃，且減壓濃縮務必至近干，避免待測成分損失。

3.2 檢測結果

實驗結果顯示，30批藥食兩用藥材均不同程度地被檢出有機氯殘留量，尤以當歸、黨參等根及根莖類藥材總含量相對較高，花類藥材相對偏低，在2015年版《中國藥典》四部中，規(guī)定了藥材、飲片及制劑中有機氯、有機磷以及擬除蟲菊酯類共3類37種農(nóng)藥殘留的檢測方法，但《中國藥典》2015年版一部正文中僅對甘草、黃芪、人參、西洋參、人參莖葉總皂苷、人參總皂苷中有機氯殘留量做了限量規(guī)定。參考黃芪、甘草藥典有機氯殘留限量標準[17-19]，總BHC：0.2 mg/kg；總DDT：0.2 mg/kg；PCNB：0.1 mg/kg，本次實驗結果均沒有超出限度范圍，對于當歸、黨參、金銀花等藥食兩用藥材，因其使用的直接性、廣泛性和多樣化，期望能嚴格控制其農(nóng)藥殘留，盡快建立農(nóng)藥殘留限度標準。

3.3小結及建議

隨著我國健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展的迫切需求，中藥材尤其是藥食兩用藥材必將成為人們日常疾病預防及保健養(yǎng)生的重要原材料，其質量安全性直接關乎人們生活質量和生命健康，隨著世界經(jīng)濟一體化發(fā)展進程的加快，中藥必然走向國際市場參與競爭，其安全性問題成為關注焦點，同時亦是中醫(yī)中藥全球化發(fā)展瓶頸，其農(nóng)藥殘留問題必須得到有效控制才足以提高中藥材的國際信譽和檔次，才能使中醫(yī)藥事業(yè)更加健康地向前發(fā)展。

針對藥食兩用藥材的農(nóng)藥殘留問題，藥材生產(chǎn)實施規(guī)范化質量管理（GAP）必須嚴格建立配套的標準、法規(guī)，加大監(jiān)督、處罰力度，對藥材生產(chǎn)基地的選擇標準、使用農(nóng)藥的種類及使用農(nóng)藥的人員和設備情況、中藥加工和倉儲的條件、中藥中農(nóng)藥殘留量的檢測方法和限量規(guī)定以及監(jiān)督措施等建立詳盡的法規(guī)性文件，并采取處罰措施等各種手段保證GAP得以貫徹實施，保證“綠色藥材”的生產(chǎn)。對于已污染的土壤如何采用合適的方法降低其農(nóng)藥殘留量[20-22]，如以微生物技術投菌法生物修復降解有機氯農(nóng)藥等，從土壤源頭來降低和消除種植中藥材的農(nóng)藥殘留污染問題，改善種植生態(tài)環(huán)境。

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（收稿日期：2016-01-10 本文編輯：王紅雙）