硫化氫對創(chuàng)傷應(yīng)激引起大鼠急性肝損傷的作用

岑新海，張志湘，王　濤，王艷莎，季英磊，閆　駿，谷振勇（.南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，江蘇南通600；.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江蘇蘇州53）

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硫化氫對創(chuàng)傷應(yīng)激引起大鼠急性肝損傷的作用

岑新海1，2，張志湘2，王濤1，王艷莎1，季英磊1，2，閆駿1，2，谷振勇1，2
（1.南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，江蘇南通226001；2.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江蘇蘇州215123）

摘要：目的探討硫化氫（H2S）在擠壓大鼠后肢致急性肝損傷過程中的作用。方法將大鼠隨機(jī)分為對照組、擠壓組、H2S供體硫氫化鈉（NaHS）+擠壓組、H2S生成抑制劑炔丙基甘氨酸（propargylglycine，PAG）+擠壓組。用標(biāo)準(zhǔn)重物擠壓大鼠后肢建立急性肝損傷模型，分別于擠壓結(jié)束后30、120min處死大鼠。比色法檢測血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性，化學(xué)法檢測大鼠血漿H2S、肝組織丙二醛（malondialdehyde，MDA）、蛋白質(zhì)羰基、谷胱甘肽（glutathion，GSH）含量和H2S生成酶胱硫醚γ－裂解酶（cystathionineγ－lyase，CSE）活性，RT－PCR半定量檢測肝組織CSE mRNA的表達(dá)。結(jié)果擠壓大鼠后肢可引起血清AST、ALT活性增高，肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基含量增加及GSH含量降低，血漿H2S含量減少，肝組織CSE活性降低、CSE mRNA表達(dá)下降。預(yù)先給予NaHS可顯著減輕、而PAG明顯加劇擠壓后肢所致上述肝損傷改變。結(jié)論H2S生成減少參與介導(dǎo)創(chuàng)傷應(yīng)激引起的大鼠急性肝損傷。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)病理學(xué)；創(chuàng)傷和損傷；肝；應(yīng)激；硫化氫；大鼠

硫化氫（H2S）是一種有臭雞蛋氣味的有毒氣體。在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，以往多關(guān)注H2S的毒理學(xué)效應(yīng)。研究已確證在機(jī)體轉(zhuǎn)硫代謝過程中存在內(nèi)源性H2S生成［1］，肝是內(nèi)源性H2S生成和代謝的主要器官［2］，胱硫醚γ－裂解酶（cystathionineγ－lyase，CSE）是肝內(nèi)源性H2S生成的重要來源［3］。H2S參與內(nèi)毒素血癥大鼠肝損傷發(fā)生，減輕肝缺血再灌注損傷，對脂多糖引起的肝細(xì)胞損傷具有調(diào)節(jié)作用［4－7］。研究［8］發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)傷應(yīng)激能誘導(dǎo)急性肝損傷，氧化應(yīng)激可能是重要發(fā)病途徑。本實驗用大鼠軟組織擠壓導(dǎo)致急性肝損傷模型，通過人為控制H2S的含量觀察H2S在創(chuàng)傷誘導(dǎo)急性肝損傷中的作用，并著重探討其對氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

H2S供體硫氫化鈉（NaHS）、H2S生成抑制劑炔丙基甘氨酸（propargylglycine，PAG）、N，N－二甲基－對苯二胺硫酸鹽、L－半胱氨酸、5'－磷酸吡哆醛為美國Sigma公司產(chǎn)品，丙二醛（malondialdehyde，MDA）、蛋白質(zhì)羰基、谷胱甘肽（glutathione，GSH）和考馬斯亮藍(lán)檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，RNA提取試劑Trizol購自美國Invitrogen公司，AccessQuickTMRT－PCR試劑盒為美國Promega公司產(chǎn)品，醋酸鋅、三氯化鐵、三氯醋酸均為國產(chǎn)分析純。

1.2方法

1.2.1急性肝損傷大鼠模型的建立與分組

健康Sprague－Dawley（SD）大鼠84只，體質(zhì)量180～200 g，清潔級，雌雄不限，由蘇州大學(xué)實驗動物中心提供。將84只大鼠隨機(jī)分為6組，每組14只。

擠壓組：大鼠用4%水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉，俯臥位，雙后肢固定于自制帶槽木臺上，固定前經(jīng)腹腔注射0.5mL生理鹽水，于雙后肢肌肉豐富部位上壓12.5 kg標(biāo)準(zhǔn)重物、持續(xù)擠壓5h，于擠壓結(jié)束后30、120min各取7只放血處死。

NaHS+擠壓組：擠壓前10min經(jīng)腹腔注射NaHS （28μmol/kg，溶于0.5mL生理鹽水），擠壓方法同擠壓組。

PAG+擠壓組：擠壓前10min經(jīng)腹腔注射PAG （45μmol/kg，溶于0.5mL生理鹽水），擠壓方法同擠壓組。

NaHS組：雙后肢固定前10min經(jīng)腹腔注射NaHS （28μmol/kg，溶于0.5mL生理鹽水），不予擠壓后肢。

PAG組：雙后肢固定前10min經(jīng)腹腔注射PAG （45μmol/kg，溶于0.5mL生理鹽水），不予擠壓后肢。

對照組：僅于雙后肢固定前經(jīng)腹腔注射0.5mL生理鹽水。

NaHS、PAG和對照組大鼠除不給予標(biāo)準(zhǔn)重物擠壓外，麻醉、固定等同擠壓組處理，持續(xù)5 h，固定前10min分別注射等劑量NaHS、PAG或等容積生理鹽水，于固定結(jié)束后30、120min放血處死大鼠。留取血漿檢測H2S含量；血清檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）活性；留取左肝葉部分肝組織，制備勻漿，檢測肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基、GSH含量，CSE活性和CSE mRNA的表達(dá)。

1.2.2血清AST、ALT活性及肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基和GSH含量檢測

按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。用比色法檢測血清AST、ALT活性，單位均為U/L。制備肝組織勻漿與相應(yīng)的檢測試劑反應(yīng)、離心，用硫代巴比妥方法檢測肝組織MDA含量，在波長532nm處檢測光密度，計算MDA含量（nmol/mg），用比色法檢測肝組織蛋白質(zhì)羰基和GSH含量，分別在波長370nm、420nm處檢測光密度，計算蛋白質(zhì)羰基含量（nmol/mg）和GSH含量（nmol/g）。

1.2.3血漿H2S含量測定

采用去蛋白法［9］檢測H2S含量。反應(yīng)在5mL玻璃試管中進(jìn)行。在試管中先后加入1%醋酸鋅0.5mL、血漿0.1mL，振蕩混勻，使硫離子與醋酸鋅充分反應(yīng)形成硫化鋅沉淀；再依次加入20mmol/L N，N－二甲基－對苯二胺硫酸鹽0.5mL和30mmol/L三氯化鐵0.5mL，室溫孵育20min使之充分顯色。再加入50%三氯醋酸1mL使蛋白沉淀下來，加2.5mL蒸餾水補(bǔ)足體積至5mL。室溫下以3 000×g離心5min，吸取上清液，用ELX800酶標(biāo)儀（美國BioTek公司）在波長670nm處檢測上清液的光密度。用不同濃度的NaHS繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算上清液中H2S的含量（μmol/L）。

1.2.4肝組織CSE活性檢測

參照文獻(xiàn)［10－11］方法，并進(jìn)行適當(dāng)改良。取大鼠肝組織在冰冷的磷酸鉀緩沖液（50mmol/L，pH=6.8）中研磨成勻漿，4℃下4000×g離心10min，取上清液備用。反應(yīng)在25mL錐形瓶中進(jìn)行，反應(yīng)體積1mL，其中含磷酸鉀緩沖液（100mmol/L，pH=7.4）、L－半胱氨酸（10mmol/L）、5'－磷酸吡多醛（2mmol/L）共0.7mL和磷酸鉀緩沖液制備的10%肝組織勻漿0.3mL。在錐形瓶中央放置容積約為2mL塑料管作為反應(yīng)中央室，在中央室中加入1%醋酸鋅0.5mL，并剪2.0cm×2.5 cm濾紙折疊放于中央室中以增加氣－液接觸面積。用氮?dú)鈱㈠F形瓶充盈30 s后，雙層石蠟?zāi)し饪凇＾D(zhuǎn)移到37℃恒溫?fù)u床中開始反應(yīng)，90min后向反應(yīng)體系中注入50%三氯醋酸0.5mL終止反應(yīng)，繼續(xù)置于恒溫?fù)u床中。60min后將中央室內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含3.6mL蒸餾水的試管中，加入20mmol/L N，N－二甲基－對苯二胺硫酸鹽（溶于7.2mol/L鹽酸溶液）0.5mL和30mmol/L三氯化鐵（溶于1.2mol/L鹽酸溶液）0.4mL，混勻，室溫孵育20min后用酶標(biāo)儀在波長670nm處檢測溶液光密度。肝組織CSE活性以每毫克組織在單位時間內(nèi)生成H2S的量表示，單位為pmol/（min·mg）。

1.2.5RT－PCR半定量檢測肝組織CSE mRNA的表達(dá)

每組隨機(jī)取3只大鼠進(jìn)行CSE mRNA檢測。使用Trizol法提取肝總RNA，應(yīng)用1%瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA的完整性，用紫外分光光度儀行RNA濃度及純度測定，D260/D280均在1.8～2.0。大鼠CSE引物（擴(kuò)增片段為400 bp）的F：5′－AGAATTCTCTCGGGGCA GTT－3′，R：5′－ACTACGTTTGGCGAGCTCAT－3′；內(nèi)參GAPDH（擴(kuò)增片段為262 bp）的F：5′－ACCACAGT CCATGCCATCAC－3′，R：5′－TCCACCACCCTGTTGCT GTA－3′；引物均由上海生工生物工程有限公司合成。

應(yīng)用AccessQuickTMRT－PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件：94℃30 s，54℃30 s，72℃30 s，共30個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分析，采用凝膠成像分析系統(tǒng)計算各個條帶的光密度值，以CSE與GAPDH光密度的比值表示CSE mRNA的相對表達(dá)水平。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

2　結(jié)　果

2.1血清AST及ALT活性的變化

擠壓后30min和120min時，擠壓組血清AST和ALT活性高于對照組（P<0.05），NaHS+擠壓組相應(yīng)時間點的上述指標(biāo)低于擠壓組（P<0.05），PAG+擠壓組則高于相應(yīng)擠壓組（P<0.05），NaHS組和PAG組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

前幾天乘涼時，柳紅問起公公年輕時候的事，蘇長河什么也不肯說。柳紅對公公的過去一直充滿著好奇，因為她對公公蘇長河始終懷著某種特殊的情愫。鄉(xiāng)親們都說他年輕時英俊風(fēng)流，有過好幾個女人，而且還為一個女人戳瞎了自己的雙眼；那個女人和蘇長河生活了七年，在蘇秋琴五歲、蘇石一歲多的那年秋天，跟一個男人跑了，跑得無蹤無影。蘇長河沒有去找她，他知道當(dāng)一個女人的心不在自己身上時，就是找回來了還會再跑的。

表1　大鼠后肢擠壓后30、120min血清AST和ALT活性變化?。╪=7，±s，U/L）

表1　大鼠后肢擠壓后30、120min血清AST和ALT活性變化?。╪=7，±s，U/L）

注：1）與對照組比較，P<0.05；2）與擠壓組比較，P<0.05

組別　AST　ALT 30min　120min　30min　120min對照　27.71±4.50　26.29±4.23　28.57±4.96　27.43±4.16擠壓　84.57±12.801）　124.71±20.171）　54.43±8.161）　72.43±10.661）NaHS+擠壓　65.57±8.891）2）　100.57±16.151）2）　41.86±6.311）2）　52.14±8.301）2）PAG+擠壓　114.14±16.171）2）　150.14±21.611）2）　70.29±10.631）2）　130.86±23.441）2）NaHS　27.57±3.82　26.14±5.46　26.71±4.46　25.86±4.78 PAG　24.71±4.54　24.14±5.08　24.71±4.15　25.29±4.54

2.2肝組織MDA和蛋白質(zhì)羰基含量的變化

擠壓后30min和120min時，擠壓組肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基含量均高于對照組（P<0.05）；NaHS+擠壓組相應(yīng)時間點的肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基含量明顯低于擠壓組（P<0.05），PAG+擠壓組則均高于相應(yīng)擠壓組（P<0.05）；NaHS組和PAG組與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.3肝組織GSH含量的變化

擠壓后30min和120min時，與對照組相比，擠壓組肝組織GSH含量降低（P<0.05），NaHS+擠壓組相應(yīng)時間點GSH含量高于對照組（P<0.05），PAG+擠壓組則低于相應(yīng)對照組（P<0.05），NaHS組和PAG組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.4血漿H2S含量的變化

擠壓后30min和120min時，擠壓組血漿中H2S含量低于對照組（P<0.05）；與相應(yīng)時間點擠壓組血漿中H2S含量相比，NaHS+擠壓組升高（P<0.05），PAG+擠壓組降低（P<0.05）；與對照組相比，NaHS組血漿中H2S含量增高（P<0.05），PAG組H2S含量無明顯變化，見表3。

2.5肝組織CSE活性的變化

與對照組相比，擠壓組肝組織CSE活性降低（P< 0.05）；NaHS+擠壓組肝組織CSE活性升高并高于同時間點擠壓組（P<0.05），PAG+擠壓組30min時無明顯變化，120min時降低（P<0.05）；與對照組相比，NaHS組和PAG組CSE活性無明顯變化，見表3。

表2　大鼠后肢擠壓后30、120min肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基和GSH含量變化?。╪=7，±s）

表2　大鼠后肢擠壓后30、120min肝組織MDA、蛋白質(zhì)羰基和GSH含量變化?。╪=7，±s）

注：1）與對照組比較，P<0.05；2）與擠壓組比較，P<0.05

組別　MDA/（nmol/mg）　蛋白質(zhì)羰基/（nmol/mg）　GSH/（nmol/g）30min　120min　30min　120min　30min　120min對照　0.72±0.14　0.76±0.22　4.11±0.49　3.95±0.52　6.80±1.04　7.20±1.19擠壓　2.22±0.431）　3.07±0.471）　6.73±1.211）　8.41±1.451）　3.30±0.591）　2.34±0.691）NaHS+擠壓　1.35±0.271）2）　2.04±0.281）2）　5.21±1.032）　6.89±0.971）2）　5.18±1.001）2）　6.49±1.212）PAG+擠壓　3.52±0.611）2）　3.70±0.461）2）　9.66±1.741）2）　10.91±1.521）2）　2.46±0.531）　1.65±0.331）NaHS　0.74±0.14　0.87±0.16　4.31±0.80　4.59±0.78　6.28±1.11　6.78±1.26 PAG　0.80±0.23　0.81±0.15　3.95±0.92　4.11±0.58　6.68±1.08　7.18±1.99

表3　大鼠后肢擠壓后30、120min血漿H2S含量及肝組織CSE活性變化　（n=7，±s）

表3　大鼠后肢擠壓后30、120min血漿H2S含量及肝組織CSE活性變化?。╪=7，±s）

注：1）與對照組比較，P<0.05；2）與擠壓組比較，P<0.05

組別　H2S/（μmol/L）　CSE/（pmol/mg·min－1）30min　120min　30min　120min對照　174.14±14.12　181.57±12.25　353.14±55.36　353.43±31.73擠壓　127.00±11.341）　129.43±23.041）　282.72±48.341）　265.29±48.831）NaHS+擠壓　206.43±30.521）2）　216.86±37.601）2）　365.43±50.862）　383.14±58.432）PAG+擠壓　103.86±12.521）2）　99.71±15.781）2）　232.71±35.591）　213.71±37.681）2）NaHS　220.29±19.511）　229.71±13.071）　342.43±46.87　365.14±40.29 PAG　171.00±18.15　176.29±13.94　339.86±40.82　330.86±53.55

2.6肝組織CSE mRNA表達(dá)的變化

與對照組相比，擠壓組肝組織CSE mRNA表達(dá)于30min和120min時間點低于對照組（P<0.05）。NaHS+擠壓組CSE mRNA表達(dá)高于同時間點擠壓組（P<0.05），PAG+擠壓組則低于相應(yīng)時間點對照組（P<0.05）。與對照組相比，NaHS組和PAG組CSE mRNA表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表4。

表4　大鼠后肢擠壓后30min或120min肝組織CSE mRNA表達(dá)變化（n=3，±s，%）

表4　大鼠后肢擠壓后30min或120min肝組織CSE mRNA表達(dá)變化（n=3，±s，%）

注：1）與對照組比較，P<0.05；2）與擠壓組比較，P<0.05

組別　30min　120min對照　47.85±6.85　49.39±7.60擠壓　35.31±5.761）　38.42±7.581）NaHS+擠壓　67.19±7.021）2）　64.54±4.821）2）PAG+擠壓　30.48±3.081）　37.09±9.601）NaHS　52.33±7.62　54.14±5.52 PAG　48.69±7.74　60.18±6.94

3　討　論

創(chuàng)傷性多器官功能障礙綜合征（traumatic－multiple organ dysfunction syndrome，T－MODS）是機(jī)械性損傷常見的并發(fā)癥之一。以往研究［12］證實，大面積軟組織挫壓傷可以引起T－MODS。T－MODS死亡率高，外傷后可以合并感染并且常常經(jīng)過了臨床治療，遷延數(shù)日死亡，死亡發(fā)生涉及因素多而復(fù)雜，這導(dǎo)致判斷TMODS死亡性質(zhì)出現(xiàn)困難。研究T－MODS的發(fā)生機(jī)制有助于闡明外傷與死亡發(fā)生之間的因果關(guān)系，揭示TMODS的死亡性質(zhì)。本實驗結(jié)果首先顯示，大鼠雙后肢嚴(yán)重挫壓傷導(dǎo)致了急性肝損傷，這與以往報道［8，13］一致。原發(fā)性外傷局限于大鼠后肢，但能引起與外傷遠(yuǎn)隔器官肝發(fā)生急性損傷，這提示創(chuàng)傷應(yīng)激能造成包括肝在內(nèi)的生命重要器官功能障礙，其機(jī)制可能為：軟組織豐富的肢體受到了嚴(yán)重擠壓作用，釋放活性物質(zhì)和激活損傷模式分子，引起神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)異常，從而導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官損傷；肢體局部的缺血再灌注損傷能夠誘導(dǎo)遠(yuǎn)隔器官氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，引起肝細(xì)胞損傷。

以往H2S一直被認(rèn)為是一種有毒氣體，本實驗發(fā)現(xiàn)H2S參與了創(chuàng)傷應(yīng)激引起的急性肝損傷。研究［1，3］表明，機(jī)體內(nèi)源性H2S主要是機(jī)體含硫氨基酸轉(zhuǎn)硫代謝途徑生成的，5'－磷酸吡哆醛依賴性酶CSE是肝H2S的關(guān)鍵酶分子。業(yè)已公認(rèn)H2S是繼一氧化氮和一氧化碳之后被確認(rèn)的第三種氣體信使分子。H2S參與調(diào)節(jié)肺動脈高壓、高血壓、休克、心肌缺血等多種疾病的發(fā)病過程［14－16］。本實驗發(fā)現(xiàn)，擠壓大鼠后肢可導(dǎo)致肝功能明顯異常，同時血漿H2S含量減少和肝組織CSE活性降低；預(yù)先給予腹腔注射外源性H2S供體NaHS，血清AST、ALT活性明顯降低；預(yù)先給予H2S生成抑制劑PAG能進(jìn)一步減少內(nèi)源性H2S生成，同時擠壓大鼠后肢所致的急性肝損傷明顯加重，這表明內(nèi)源性H2S生成減少參與介導(dǎo)擠壓大鼠后肢所致急性肝損傷。本實驗進(jìn)一步探討了H2S的作用機(jī)制，結(jié)果顯示，擠壓組大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA和蛋白質(zhì)過氧化分子蛋白質(zhì)羰基含量增高、抗氧化劑GSH含量降低，說明肢體挫壓傷能引起肝組織抗氧化能力降低和氧化損傷，與以往報道［8］一致，說明氧化應(yīng)激是創(chuàng)傷應(yīng)激導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官損傷的重要發(fā)病途徑。實驗給予適量外源性H2S在一定程度上緩解了大鼠后肢擠壓引起的MDA、蛋白質(zhì)羰基生成增多和GSH減少，相反，人為抑制內(nèi)源性H2S生成加劇了大鼠后肢擠壓引起MDA、蛋白質(zhì)羰基生成增加，提示外源性H2S可能通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激而減輕創(chuàng)傷應(yīng)激引起的急性肝損傷，肢體挫壓傷很可能通過引起內(nèi)源性H2S生成減少、削弱了機(jī)體抗氧化效應(yīng)而導(dǎo)致急性肝損害。Kimura等［17］報道H2S能上調(diào)GSH代謝酶表達(dá)、增加GSH生成來保護(hù)神經(jīng)元免受氧化損傷。新近發(fā)現(xiàn)H2S預(yù)適應(yīng)或后適應(yīng)均能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子Nrf2核移位、上調(diào)血紅素加氧酶－1，從而減輕了脂多糖引起的大鼠肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及肝細(xì)胞凋亡［18］。本實驗結(jié)果顯示，大鼠后肢挫壓傷導(dǎo)致肝組織CSE mRNA表達(dá)下調(diào)，這可能是CSE活性降低、H2S生成減少的原因。然而，肢體挫壓傷引起CSE mRNA表達(dá)下調(diào)的原因和分子機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。值得提出的是，給予外源性H2S后能完全逆轉(zhuǎn)大鼠后肢擠壓引起的CSE mRNA表達(dá)下調(diào)，表明外源性H2S對肝內(nèi)源性H2S生成酶CSE具有正反饋誘導(dǎo)調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，本實驗主要新發(fā)現(xiàn)是內(nèi)源性H2S通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激參與了創(chuàng)傷應(yīng)激引起的急性肝損傷，為進(jìn)一步研究T-MODS急性肝損傷發(fā)生的分子機(jī)制提供啟示性線索，并揭示調(diào)控內(nèi)源性H2S生成可能成為防治急性肝損傷的途徑之一。

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（本文編輯：劉寧國）

The Role of Hydrogen Sulfide in Acute Liver Injury Induced by Traumatic Stress in Rats

CEN Xin－h(huán)ai1，2，ZHANG Zhi－xiang2，WANG Tao1，WANG Yan－sha1，JI Ying－lei1，2，YAN Jun1，2，GU Zhenyong1，2
（1.Department of Forensic Medicine，Medical College of Nantong University，Nantong 226001，China；2.Medical College of Soochow University，Suzhou 215123，China）

Abstract：Objective To explore the role of hydrogen sulfide（H2S）in acute liver injury induced by crushing hind limbs of rats.M ethods The rats were random ly divided into the follow ing groups:control，crushing，H2S donor sodium hydrosulfide（NaHS）+crushing，H2S inhibitor propargylglycine（PAG）+crushing group.The acute liver injury model was established by crushing the hind limbs of rats w ith standard weight.Rats were sacrificed at 30m in and 120m in after the crush.The activities of serum aspartate aminotransferase（AST）and alanine aminotransferase（ALT）were measured by colorimetric method，and the content of H2S in plasma and the contents of malondialdehyde（MDA），protein carbonyl，glutathione （GSH）in the liver and the activity of H2S generating enzyme（cystathionineγ－lyase，CSE）were determ ined by chemical method.The expression of CSE mRNA in liver was detected by RT－PCR.Results For crush injury group，the levels of AST and ALT in serum，MDA and protein carbonyl in liver increased.The levels of GSH，CSE，CSE mRNA in liver and H2S in serum decreased.The adm inistration of NaHS before limbs crush could attenuate the changes of liver injury，but the pre－treatment w ith PAG could exacerbate the changes.Conclusion The decrease of H2S production could involve in mediating the acute liver injury induced by traumatic stress in rats.

Key words：forensic pathology；wounds and injuries；liver；stress；hydrogen sulfide；rats

收稿日期：（2015-05-12）

通信作者：谷振勇，男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事T－MODS、血管生物學(xué)和呼吸病理生理分子機(jī)制的研究；E－mail：zygusz＠126.com

作者簡介：岑新海（1975—），男，博士研究生，主要從事TMODS機(jī)制研究

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目（81273341）；江蘇省高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程項目（PAPD）

文章編號：1004－5619（2016）02－0081－05

中圖分類號：DF795.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi：10.3969/j.issn.1004－5619.2016.02.001