糧油產(chǎn)品中黃曲霉毒素檢測(cè)方法分析

□ 付勇浩 湯志宏 王 巖 蘇 昀 駐馬店市糧油質(zhì)量檢測(cè)中心

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糧油產(chǎn)品中黃曲霉毒素檢測(cè)方法分析

□ 付勇浩 湯志宏 王 巖 蘇 昀 駐馬店市糧油質(zhì)量檢測(cè)中心

黃曲霉毒素可以引發(fā)肝癌，其嚴(yán)重性不可小視。為了更好地測(cè)定糧油中黃曲霉毒素的含量，研究人員做了不懈努力，研究出了幾種檢測(cè)方法，以便最大限度地降低對(duì)人類的危害和環(huán)境的污染。以下作出了相應(yīng)闡述。

黃曲霉毒素簡(jiǎn)介

黃曲霉毒素簡(jiǎn)稱AFT，是一種由寄生曲霉和黃曲霉產(chǎn)生的劇毒物質(zhì)，常見于食用油、玉米、花生等農(nóng)產(chǎn)品中。在目前已知的100多種毒素中，黃曲霉毒素的毒性和穩(wěn)定性是比較強(qiáng)的，可以致癌。在污染嚴(yán)重的地區(qū)，黃曲霉毒素在糧油中的含量嚴(yán)重超標(biāo)，肝癌患者的人數(shù)也急劇增加，嚴(yán)重影響了人們的身體健康。黃曲霉毒素的分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分為B1、B2、C1和C2四種類型。因此，對(duì)黃曲霉毒素的研究也會(huì)有一定難度。

檢測(cè)方法分析

高效液相色譜法（HPLO）

高效液相色譜法檢測(cè)精確，適合定量檢測(cè)，在重現(xiàn)性和靈敏度方面均占優(yōu)勢(shì)且易于操作，適用于多種黃曲霉毒素的分離，檢測(cè)效率高，具有一定的權(quán)威性。由于該種方法的檢測(cè)結(jié)果比較精確，可以分辨黃曲霉毒素的類型，所以成為我國(guó)使用范圍最廣的檢測(cè)黃曲霉毒素的方法。但HPLO存在一定的局限性，如檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，技術(shù)要求高，試劑類型多，操作程序和樣品的前處理都比較復(fù)雜。這就決定了該方法在現(xiàn)場(chǎng)化和操作方面相對(duì)遜色。

薄層色譜法（TLC）

作為我國(guó)測(cè)定食品及飼料中黃曲霉毒素含量的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，TLC是一種利用分離分析技術(shù)且應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)檢測(cè)方法。薄層掃描層析儀的應(yīng)用替代了以往的目測(cè)方法，使檢測(cè)結(jié)果更精確。TLC利用相應(yīng)的提取劑提取不同樣品中的黃曲霉毒素，萃取純化后，將黃曲霉毒素層析于薄層板。

薄層分析法分為單項(xiàng)展開法和雙向展開法。雙向展開法雖然操作步驟多，時(shí)間長(zhǎng)，但是可以更好地去除雜質(zhì)，排除雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)的影響，靈敏度較高。

免疫分析法

免疫分析法通過觀察抗原抗體的化學(xué)反應(yīng)來(lái)檢測(cè)抗原抗體的含量。免疫化學(xué)分析法的操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，且便于掌握和學(xué)習(xí)。此外，這種方法的重現(xiàn)性好，較薄層色譜法其靈敏性和特異性較高。免疫分析法有多種類型，包括酶聯(lián)免疫（ELISA）、免疫親和柱（RIA）-熒光光度法、免疫親和柱（HPLC）法。

1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

（1）中藥標(biāo)本應(yīng)具有代表性。由于受采收、加工和貯藏等多種因素影響，并不是每個(gè)中藥個(gè)體均能體現(xiàn)所有的性狀特征，因此，在選擇中藥標(biāo)本時(shí)應(yīng)挑選具有代表性的樣品。

由于酶具有催化作用，抗原抗體的反應(yīng)具有特異性，待化學(xué)反應(yīng)顯色后，依據(jù)顯示的顏色，再結(jié)合酶標(biāo)儀的使用，即可測(cè)定糧油中黃曲霉毒素的含量。這就是ELISA的應(yīng)用原理，在國(guó)內(nèi)外非常普遍的酶聯(lián)免疫吸附法包括競(jìng)爭(zhēng)法、雙抗夾心法、生物酶標(biāo)親和素、間接法。在比較成熟的商品化試劑盒中，競(jìng)爭(zhēng)法是檢測(cè)黃曲霉毒素含量的常用方法之一，糧油中的黃曲霉抗體和單克隆抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)，會(huì)使微孔條預(yù)包顯色，吸光值越多，黃曲霉毒素的含量越少，反之則越多。ELISA具有高效性，可快速檢測(cè)大量糧油中黃曲霉毒素的含量，此外在飼料的測(cè)定中也被國(guó)標(biāo)推薦。

2 免疫親和柱（IAC）-熒光光度法

免疫親和柱通過單克隆免疫親和柱進(jìn)行分離，載體蛋白與單克隆抗體聯(lián)合后會(huì)將柱形填滿，由此生成IAC，IAC會(huì)與黃曲霉毒素的抗原產(chǎn)生相應(yīng)的特異性吸附。反應(yīng)中抗原抗體的吸附關(guān)系越來(lái)越強(qiáng)烈，只有黃曲霉毒素被吸附，其余雜質(zhì)均可通過柱子，再由極性有機(jī)溶劑洗脫吸附，借助紫外燈、熒光計(jì)檢測(cè)黃曲霉毒素的含量。這種方法處理一個(gè)樣品的平均時(shí)間大約是10到15分鐘，縮減了檢測(cè)時(shí)間，而且無(wú)需使用有異味和毒性的溶劑。在保證人員安全的前提下，也減少了對(duì)環(huán)境的污染。

3 免疫親和柱（HPLC）法

近些年，免疫親和柱和高效液相色譜法結(jié)合成為檢測(cè)黃曲霉毒素的常用方法之一。相比HPLC，該種方法的精確性、靈敏性及可靠性都有很大提升，同時(shí)也變得更加安全。除此之外，免疫親和柱與高效液相色譜法的結(jié)合提高了回收率和分離率，可以分離黃曲霉毒素與真菌毒素。

生物傳感器法

金標(biāo)試紙法

金標(biāo)試紙法是一種借助單克隆抗體設(shè)計(jì)的固相免疫法，黃曲霉毒素可以被一步式檢測(cè)出來(lái)。金標(biāo)試紙法的靈敏度比較高，操作迅速簡(jiǎn)捷，對(duì)黃曲霉毒素的測(cè)定只需5到10分鐘，檢測(cè)精確度不小于85%。其次靈敏度也比較高，達(dá)到4 ng/mL，糧油中20 ng/ g的黃曲霉毒素可被檢測(cè)出來(lái)。因?yàn)榻饦?biāo)試紙法不需借助一些設(shè)備儀器，所以對(duì)檢測(cè)場(chǎng)所沒有特殊要求，農(nóng)田、倉(cāng)庫(kù)、實(shí)驗(yàn)室均可作為檢測(cè)場(chǎng)地。

去除方法

吸附法

吸附法需要使用吸附劑，常見的吸附劑有活性炭和活性白土，因活性炭的成本較高，所以活性白土的使用更為廣泛。因其存在網(wǎng)孔和內(nèi)表面，所以吸附能力很強(qiáng)，可以有效吸附黃曲霉毒素，分離油脂，凈化糧油。

食鹽去毒法

這種方法常用于花生油中黃曲霉毒素的處理，方法極為簡(jiǎn)便。當(dāng)油被加熱至冒煙時(shí)加入適量食鹽，出現(xiàn)爆鍋，此時(shí)繼續(xù)升溫30秒，即可達(dá)到解毒目的。實(shí)驗(yàn)表明，相對(duì)精鹽，粗鹽的去毒能力更為強(qiáng)大。

結(jié)語(yǔ)

黃曲霉毒素危害著人類的健康，人們也逐漸意識(shí)到這一點(diǎn)，因此，相關(guān)部門加強(qiáng)了對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)。從某種意義上，促進(jìn)了檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，在不斷嘗試中，檢測(cè)技術(shù)取得了一定成就，檢測(cè)更為智能化，但是探索的腳步還在繼續(xù)。