Mini VIDAS與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)金黃色葡萄球菌的比較及其在食物中毒中的應(yīng)用

□ 梁蘭英 許 娟 陳仕超 佛山市三水區(qū)疾病預(yù)防控制中心

?

Mini VIDAS與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)金黃色葡萄球菌的比較及其在食物中毒中的應(yīng)用

□ 梁蘭英 許 娟 陳仕超 佛山市三水區(qū)疾病預(yù)防控制中心

摘 要：筆者使用Mini VIDAS方法和GB4789.10-2010第一法檢測(cè)金黃色葡萄球菌，并對(duì)二者進(jìn)行比較。GB4789.10-2010第一法（國(guó)標(biāo)法），只檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌，對(duì)可疑食物中毒樣品或產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株的鑒定，應(yīng)檢驗(yàn)其腸毒素。利用Mini VIDAS檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素與檢測(cè)金黃色葡萄球菌致病菌相比較，從檢測(cè)時(shí)間、檢出率、中毒判斷等方面來(lái)說(shuō)明檢測(cè)腸毒素的重要性。Mini VIDAS檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)時(shí)間一般為25.5小時(shí)，最快只需要90分鐘，而GB4789.10-2010第一法檢測(cè)金黃色葡萄球菌平均檢測(cè)時(shí)間為78小時(shí)，而且檢出率較前者低?？梢?jiàn)，Mini VIDAS能在較短時(shí)間內(nèi)直接檢出金黃色葡萄球菌腸毒素，并克服了食物中毒時(shí)致病菌已死，無(wú)法檢出，造成判斷失誤的弊端。

關(guān)鍵詞：Mini VIDAS；金黃色葡萄球菌；腸毒素

金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界中，人和動(dòng)物都有較高的帶菌率。金黃色葡萄球菌食物中毒致病因素主要是腸毒素，腸毒素可耐受100℃煮沸30 m in而不被破壞，并能抵抗胃腸道中蛋白酶的水解作用，易造成食物中毒。據(jù)美國(guó)CDC網(wǎng)站報(bào)告，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%。近年來(lái)，我國(guó)也發(fā)生了多起金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事故，給廣大人民群眾的身體健康帶來(lái)危害。現(xiàn)行檢測(cè)金黃色葡萄球菌方法，從選擇性增菌到分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)分析、血漿凝固酶等生化試驗(yàn)整個(gè)鑒定過(guò)程一般需要78小時(shí)，而Mini VIDAS直接檢測(cè)金黃色葡萄球產(chǎn)生的腸毒素，檢品只需要簡(jiǎn)單處理或增菌后即可直接上機(jī)測(cè)定，整個(gè)過(guò)程一般只需25.5小時(shí)，最快90分鐘可得出結(jié)果，而且避免了由金黃色葡萄球引起的食物中毒。由于金黃色葡萄球在食物加工或加熱過(guò)程中被消滅，因而無(wú)法檢出，但在被滅前已產(chǎn)生腸毒素，導(dǎo)致食物中毒檢測(cè)時(shí)錯(cuò)判漏判。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢材來(lái)源

食物中毒采樣檢材100份，其中剩余食物46份，嘔吐物30份，肛拭24份。另外，市售食品477份。

1.1.2 儀器設(shè)備和培養(yǎng)基

Mini VIDAS及配套試劑是由法國(guó)生物梅里埃公司出品。其他試劑及培養(yǎng)基是由北京陸橋試劑公司生產(chǎn)，均在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法

①M(fèi)ini VIDAS方法。

②GB4789.10-2010第一法。

2 結(jié)果

用GB4789.10-2010第一法檢測(cè)金黃色葡萄菌，總檢材577份，檢出金黃色葡萄球菌77份，檢出率為13%。用Mini VIDAS檢測(cè)金黃色葡萄球腸毒素Cutoff值是0.13，陽(yáng)性檢材結(jié)果為3.17～4.11，總檢材577份，金黃色葡萄球腸毒素陽(yáng)性103份，檢出率為18%。結(jié)果見(jiàn)表1、2、3和4。

3 討論

如表1所示，現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法GB4789.10-20 10第一法檢驗(yàn)程序是樣品處理→選擇性增菌→分離培養(yǎng)→形態(tài)學(xué)分析→肉湯增菌→血漿凝固酶試驗(yàn)，整個(gè)鑒定過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)且繁瑣，而用Mini VIDAS直接檢測(cè)樣品中金黃色葡萄球腸毒素，樣品只需簡(jiǎn)單處理或增菌后就可直接上機(jī)測(cè)定，整個(gè)過(guò)程一般只需25.5 h，最快90 min即可獲得結(jié)果，在日常檢驗(yàn)工作中，很大程度上代替了煩瑣的手工操作。在食物中毒中，金黃色葡萄球引起的食物中毒最早和最主要的癥狀是嘔吐，利用Mini VIDAS對(duì)嘔吐物進(jìn)行檢測(cè)，它能有效縮短對(duì)食物中毒的診斷時(shí)間，為防止事態(tài)擴(kuò)大和救治病人提供有效方法，為監(jiān)督執(zhí)法提供有力依據(jù)。

如表2所示，在食物中毒的檢材中Mini VIDAS檢出率明顯高于國(guó)標(biāo)法，因?yàn)樵诮瘘S色葡萄球菌引起的食物中毒中，其致病因素是腸毒素，Mini VIDAS法檢測(cè)的正是腸毒素。在食物中毒檢材中，活菌的檢出受諸多條件的影響，如檢材的采集量，受污染程度，送檢時(shí)間等，均可能出現(xiàn)假陰性，而腸毒素比較穩(wěn)定，Mini VIDAS檢出靈敏度高，所以Mini VIDAS法在食物中毒檢測(cè)中具有優(yōu)勢(shì)。在市售食物中，速凍米面制品、肉及肉制品、面包糕點(diǎn)檢出率較高，因?yàn)槟c毒素主要存在于含蛋白質(zhì)豐富、水份多，同時(shí)含有一定淀粉的食物中。所以，在食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)過(guò)程中，有必要進(jìn)行針對(duì)性采樣，從而加強(qiáng)對(duì)疾病的預(yù)防和控制，以達(dá)到保障人民群眾身體健康的目的。

表1 兩法檢測(cè)時(shí)間比較

表2 兩法檢出率比較

表3 加標(biāo)加熱試驗(yàn)

表4 金黃色葡萄球菌落特征及生化反應(yīng)結(jié)果

腸毒素耐熱性強(qiáng)，必須加熱到100℃維持2小時(shí)才能夠破壞其毒素。表3試驗(yàn)表明金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素比金黃色葡萄球菌耐熱。在食物中毒的實(shí)例中，曾有過(guò)中毒特征、臨床癥狀及流行病學(xué)等方面都與金黃色葡萄球菌引起的食物中毒非常相似，但在可疑食物中未檢出金黃色葡萄球菌，而用Mini VIDAS檢測(cè)同一份樣品卻檢測(cè)出金黃色葡萄球菌腸毒素。所以，利用Mini VIDAS能更大可能地檢出致病因子。這可能是由于食物在生產(chǎn)過(guò)程中已被金黃色葡萄球菌污染，并在適宜的條件下產(chǎn)生腸毒素，人們?cè)谑秤眠@些食物前雖然都加熱煮熟，但金黃色葡萄球菌被消滅，而腸毒素還在，所以仍會(huì)引起食物中毒。

用GB4789.10- 201 0第一法檢測(cè)金黃色葡萄球菌，其結(jié)果鑒定依據(jù)是金黃色葡萄球菌在各種選擇性培養(yǎng)基的菌落特征及生化反應(yīng)，但菌落特征及生化反應(yīng)常常受諸多客觀因素影響，如血平板不新鮮，則溶血現(xiàn)象消失或不明顯；Bair- Paiker平板如果不新鮮或配制不當(dāng)，則透明環(huán)不出現(xiàn)或延遲出現(xiàn)；血漿凝固酶試驗(yàn)所用菌液必須是新鮮的，否則會(huì)出現(xiàn)假陰性。而用Mini VIDAS直接檢測(cè)金黃色葡萄球腸毒素，則不受上述條件限制，只要樣品中存在金黃色葡萄球菌腸毒素，其濃度大于Cutoff值，就能得出陽(yáng)性結(jié)果。

4 結(jié)語(yǔ)

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏不斷加快。成品或半成品的食物越來(lái)越普及，食品安全越來(lái)越受到人們的重視，而由于金黃色葡萄球菌在自然界的廣泛存在，由它引起的食物中毒也是國(guó)內(nèi)外常見(jiàn)的細(xì)菌性食物中毒之一，所以，要普及使用Mini VIDAS法檢測(cè)金黃色葡萄球菌的腸毒素，特別在食物中毒事件中更顯其優(yōu)勢(shì)和重要性。

參考文獻(xiàn)

［1］孟昭赫.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法注解微生物學(xué)部分［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.

［2］王秀茹.預(yù)防醫(yī)學(xué)微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

基金編號(hào)：佛山市醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：2014AB001275）。