醫(yī)院制劑傷科靈膏含量測定

陳曾紅， 何秀容， 李 江*

(1.貴陽中醫(yī)學院，貴州貴陽 550002；2.貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院,貴州貴陽 550000)

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醫(yī)院制劑傷科靈膏含量測定

陳曾紅1， 何秀容2， 李 江1*

(1.貴陽中醫(yī)學院，貴州貴陽 550002；2.貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院,貴州貴陽 550000)

摘要[目的]建立傷科靈膏的高效液相色譜法含量測定方法。[方法]采用BP-NH2色譜柱測定傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量；流動相為乙腈：異丙醇：3%磷酸溶液(72.0∶4.5∶23.5)，檢測波長210 nm，流速0.8 mL/min。[結(jié)果]該含量測定法分離度較好；苦參堿在0.248～1.160 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.64%(RSD=1.25%)；氧化苦參堿在0.904～4.068 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.21%(RSD=1.84%)。[結(jié)論]建立的方法簡便、可行、靈敏、準確，可以用于傷科靈膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞傷科靈膏；高效液相色譜；含量測定

Content Determination of Hospital Medicament Shangkeling Ointment

CHEN Zeng-hong1, HE Xiu-rong2, LI Jiang1*(1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang, Guizhou 550002; 2. Guizhou Yimin Chinese Orthopedics Specialist Burns Hospital, Guiyang, Guizhou 550000)

Abstract [Objective] To establish HPLC content determination method for Shangkeling ointment. [Method] BP-NH2chromatographic column was adopted to determine matrine and oxymatrine content in Shangkeling ointment; the mobile phase was acetonitrile: isopropyl alcohol: 3% phosphoric acid solution(72.0∶4.5∶23.5), detection wavelength was 210 nm, flow rate was 0.8 mL/min. [Result] The content determination method had a good separation degree; the linear relationship of matrine was good in the range of 0.248 to 1.160 g, and the average recovery was 97.64% (RSD=1.25%); the linear relationship of oxymatrine was good in the range of 0.904-4.068 μg, the average recovery was 97.21% (RSD=1.84%). [Conclusion] The established method is simple, feasible, sensitive and accurate, which can be used in quality control of Shangkeling ointment.

Key wordsShangkeling ointment; High performance liquid chromatography(HPLC); Content determination

傷科靈的處方是貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院何老中醫(yī)在長期的臨床實踐積累所獲得的經(jīng)驗方，傷科靈處方為復方制劑，原方療法為藥材粉碎后加入白酒制成的藥膏調(diào)敷，是貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷專科醫(yī)院院內(nèi)制劑，由見血飛、山豆根、仙鶴草、三棱、莪術(shù)、肉桂等八味藥組成，有消腫化瘀、療傷止痛的功效，可用于治療急、慢性軟組織損傷。軟組織損傷分為急性軟組織損傷和慢性軟組織損傷，現(xiàn)代醫(yī)學對軟組織損傷主要采取包扎、局部封閉、理療、服用抗炎鎮(zhèn)痛藥物(如消炎痛、布洛芬、芬必得、雙氯酚酸等)等治療方法，但目前這些方法尚存在療效欠佳、康復時間較長、毒副作用較大[1]等問題。軟組織損傷在中醫(yī)屬于“筋傷”范疇，中醫(yī)臨床常用的治療方法有推拿療法、針灸療法、中藥內(nèi)服、中藥外敷、熏洗療法、騰藥療法，中藥外涂或外敷便是其中具有特色的療法之一。而傷科靈膏的處方在貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷?？漆t(yī)院骨傷科臨床上以白酒調(diào)敷使用多年，臨床使用量大、療效好，但不易攜帶和貯存，因此為了滿足患者的需要，該醫(yī)院將傷科靈酒劑改為凝膠膏劑，凝膠膏劑不僅具有保濕性強的特性，且與皮膚的相容性較好，透氣性也較好，患者的依從性較強，耐老化，可以反復揭帖，刺激性、過敏性小，用藥安全，治療方便，無有機溶媒污染，符合環(huán)保要求[2-4]。貴州宜民中醫(yī)骨傷燒傷專科醫(yī)院將對傷科靈膏的處方、制劑工藝、質(zhì)量標準、穩(wěn)定性等進行研究，含量測定研究是質(zhì)量標準中重要的一部分，在此筆者主要研究了傷科靈膏的含量測定，為傷科靈醫(yī)院制劑的申報奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1主要儀器日立(HITACHI)高效液相色譜儀(Hitachi High-Technologies Corporation)，電子天平(Sartorius德國賽多利斯)，恒溫水浴鍋(江蘇國勝實驗儀器廠)，科導SK8210HP型臺式超聲波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司)。

1.2主要試藥傷科靈膏及陰性樣品由貴州黔南州中醫(yī)醫(yī)院制劑科提供，批號20140916、20140917、20140918?？鄥A對照品(110805-200508)，氧化苦參堿對照品(100780-201007)，購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈、異丙醇為色譜純，水為純凈水；其他試劑均為分析純。

1.3試驗方法

1.3.1對照品溶液的制備。分別稱取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相分別制成每l mL含苦參堿62 μg、氧化苦參堿226 μg的混合溶液，即得。

1.3.2供試品溶液的制備。取本品5片，除去蓋襯，平展貼于醫(yī)用紗布上，剪成約1 cm×1 cm小片，精密稱定，取1/5，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入三氯甲烷-甲醇-濃氨(40∶10∶1)混合溶液100 mL，密塞，稱定重量，放置30 min，超聲處理30 min，再稱定重量，用三氯甲烷-甲醇-濃氨(40∶10∶1)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，揮干，殘渣加甲醇10 mL使溶解，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.3陰性對照品溶液的制備。取傷科靈膏陰性樣品，按“1.3.2”供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液[5]。

1.3.4色譜分析條件。色譜柱為BP-NH2(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈∶異丙醇∶3%磷酸溶液(72.0∶4.5∶23.5)，檢測波長210 nm，柱溫25 ℃，流速0.8 mL/min。

1.3.5方法學考察。

1.3.5.1系統(tǒng)適應性試驗。分別吸取對照品溶液及供試品溶液各5 μL，在“1.3.4”色譜條件下，注入液相色譜儀進行測定，記錄色譜圖，考察系統(tǒng)適應性。

1.3.5.2線性關(guān)系的考察。取“1.3.1”項下混合對照品溶液，分別精密吸取2、4、5、6、8、9 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL測定，注入液相色譜儀，按“1.3.4”色譜條件測定，記錄色譜圖，以進樣量X(μg)為橫坐標、峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，計算線性回歸方程。

1.3.5.3穩(wěn)定性試驗。精密吸取同一份供試品溶液(批號20140917)5 μL，室溫放置，按“1.3.4”色譜條件分別于0、4、8、12、24 h分別進樣，測定苦參堿和氧化苦參堿的峰面積和RSD。

1.3.5.4精密度試驗。精密吸取苦參堿、氧化苦參堿混合對照品溶液5 μL，按“1.3.4”色譜條件重復進樣6次，計算苦參堿和氧化苦參堿峰面積的RSD值。

1.3.5.5重復性試驗。取同一供試品(批號20140917)按“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，按“1.3.4”色譜分析條件，分別進樣5 μL，計算苦參堿和氧化苦參堿的RSD。

1.3.5.6加樣回收試驗。取已知含量的樣品(批號20140917)3.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份樣品分別加入苦參堿、氧化苦參堿對照品9.72 mg，按“1.3.2”方法制備供試品溶液，再按“1.3.4”色譜條件測定，進樣量為5 μL，測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，計算平均回收率和RSD。

1.3.6樣品的含量測定。取3個批號傷科靈膏，每批平行測定2份，每份取樣一片約7.7 g，精密稱定，按 “1.3.2”方法制備供試品溶液，再按“1.3.4”色譜條件測定，計算苦參堿和氧化苦參堿的含量。

2結(jié)果與分析

2.1方法學考察

注：1為苦參堿；2為氧化苦參堿。Note: 1. Matrine; 2. Oxymatrine. 圖1　對照品(a)、傷科靈樣品(b)和傷科靈陰性供試品(c)的HPLC圖譜Fig.1 HPLC map of CK(a), Shangkeling sample(b) and Shangkeling negative test sample

2.1.1系統(tǒng)適應性試驗。圖1表明，在“1.3.5.1”條件下，苦參堿、氧化苦參堿含量測定不受干擾，所測定的2個峰與其他的峰均完全分離(分離度>1.5)，且陰性對照均無干擾。2.1.2線性關(guān)系的考察。按“1.3.5.2”方法操作，以進樣量X(μg)為橫坐標、峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，得出苦參堿和氧化苦參堿的回歸方程分別為：Y=1.6×106X-2 782.4(r=0.999 9)、Y=1.8×106X+4 140.1(r=0.999 9)，表明苦參堿和氧化苦參堿分別在0.248～1.160、0.904～4.068 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3穩(wěn)定性試驗。按“1.3.5.3”方法操作，結(jié)果得出苦參堿和氧化苦參堿的RSD分別為2.38%、2.00%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4精密度試驗。按“1.3.5.4”方法操作，得苦參堿和氧化苦參堿峰面積的RSD分別為1.81%、1.69%，表明儀器精密度良好。

2.1.5重復性試驗。按“1.3.5.5”方法操作，計算出苦參堿、氧化苦參堿的RSD分別為1.88%、1.83%，表明方法重復性良好。

2.1.6加樣回收率。由表1可見，苦參堿、氧化苦參堿的平均加樣回收率分為97.64%、97.21%，RSD分別為1.25%、1.84%，表明該方法準確、可靠，可用于傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量測定。

2.2樣品的含量測定從表2可看出，3批樣品中苦參堿、氧化苦參堿的平均總含量為5.24 mg/g，計算得3批苦參堿和氧化苦參堿總含量為40.32 mg/片。

3討論與結(jié)論

傷科靈膏處方為治療急、慢性軟組織的復方制劑，見血飛雖為方中的君藥，但有效成分研究還甚少，所以人們常以其中的白屈菜紅堿為檢測成分，通過試驗對見血飛藥材和制劑中白屈菜紅堿的含量進行測定，結(jié)果顯示藥材中的含量較低；制劑中受到其他成分和基質(zhì)的干擾，白屈菜紅堿的含量測定受到較大的干擾且含量甚微，缺乏定量依據(jù)。試驗過程中發(fā)現(xiàn)，傷科靈凝膠膏劑基質(zhì)為水溶性基質(zhì)，若用各濃度的乙醇作為提取溶劑時，基質(zhì)溶解后會導致過濾難的問題，而許多學者研究發(fā)現(xiàn)見血飛含量測定時多用80%乙醇作為提取溶劑[6-10]。所以最后選擇測定處方中山豆根的苦參堿和氧化苦參堿的含量，通過試驗研究找到了適用于檢測傷科靈膏中苦參堿和氧化苦參堿的含量測定方法。

該試驗研究了傷科靈膏的HPLC含量測定方法，結(jié)果表明，苦參堿和氧化苦參堿在規(guī)定含量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且樣品穩(wěn)定；儀器精密度和樣品的加樣回收率均達到了相關(guān)要求，且方法重復性較好，說明該方法靈敏、可靠、準確，可以用于傷科靈膏的質(zhì)量控制。

表1　加樣回收率試驗

表2　樣品含量測定結(jié)果

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收稿日期2015-12-30

作者簡介陳曾紅(1990- )，女，布依族，貴州龍里人，碩士研究生，研究方向：藥物制劑新技術(shù)與新劑型。*通訊作者，教授，博士，碩士生導師，從事藥物制劑新技術(shù)與新劑型研究。

中圖分類號S 567

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)03-146-03