三環(huán)唑誘導(dǎo)水稻抗性相關(guān)基因的表達(dá)分析

陳　炎， 趙俊龍， 毛根林， 汪聰穎， 林　菲， 徐漢虹， 朱小源

(1 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣東 廣州 510642；2 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所， 廣東 廣州 510640)

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三環(huán)唑誘導(dǎo)水稻抗性相關(guān)基因的表達(dá)分析

陳炎1， 趙俊龍1， 毛根林1， 汪聰穎2， 林菲1， 徐漢虹1， 朱小源2

(1 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣東 廣州 510642；2 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所， 廣東 廣州 510640)

摘要：【目的】探討三環(huán)唑處理下水稻抗性相關(guān)基因表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及與抗瘟性的相關(guān)性?！痉椒ā渴覂?nèi)抑菌活性測(cè)定三環(huán)唑?qū)Φ疚敛【z生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用；溫室不同時(shí)間點(diǎn)接種稻瘟病菌后施用三環(huán)唑，測(cè)定其防效；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)水稻受三環(huán)唑處理后不同時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)抗性相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)分析?！窘Y(jié)果】三環(huán)唑?qū)λ镜疚辆z生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)無(wú)顯著抑制作用；接種稻瘟病菌24 h后施用三環(huán)唑，仍然能夠獲得87.2%的防治效果。RT-qPCR結(jié)果表明，三環(huán)唑能夠誘導(dǎo)水稻防衛(wèi)反應(yīng)基因OsNH1-1、OsPR1a和OsPR10的表達(dá)，進(jìn)一步選取水楊酸和茉莉酸途徑的關(guān)鍵基因進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)茉莉酸途徑的關(guān)鍵基因OsLOX和OsAOS2的表達(dá)受到三環(huán)唑顯著誘導(dǎo)?！窘Y(jié)論】三環(huán)唑防治稻瘟病并非僅僅抑制了黑色素的合成，三環(huán)唑?qū)λ揪哂姓T導(dǎo)抗性作用，三環(huán)唑主要通過(guò)茉莉酸途徑起誘導(dǎo)抗性作用。

關(guān)鍵詞：三環(huán)唑； 抑菌活性； 稻瘟??； 抗性相關(guān)基因； 基因表達(dá)

由稻瘟病菌Magnaporthegrisea(Hebert)Barr引起的水稻稻瘟病嚴(yán)重威脅著世界水稻生產(chǎn)。三環(huán)唑是防治稻瘟病的主要藥劑之一，已有20多年的使用歷史，被認(rèn)為是低抗性風(fēng)險(xiǎn)類農(nóng)藥。目前，三環(huán)唑被認(rèn)為主要通過(guò)2種途徑起作用，一是抑制稻瘟病菌附著孢內(nèi)黑色素合成[1]，二是抑制病菌對(duì)植株再侵染[2]。然而，稻瘟病菌黑色素合成基因缺失突變體對(duì)水稻仍然具有致病性，暗示著三環(huán)唑?qū)Φ疚敛〉姆乐未嬖谥渌臋C(jī)制[3]。有研究表明，三環(huán)唑不僅可抑制病斑擴(kuò)展及產(chǎn)孢，還可誘導(dǎo)水稻體內(nèi)與抗病反應(yīng)有關(guān)的酶活性的提高[4]。

誘導(dǎo)抗性(Induced resistance)是指利用物理、化學(xué)或生物因子預(yù)先處理植物，激活植物對(duì)病蟲(chóng)害和逆境的反應(yīng)而產(chǎn)生的局部或系統(tǒng)抗性[5]。植物抗病信號(hào)傳導(dǎo)途徑目前已知的主要有3條：1)水楊酸(Salicylic acid，SA)信號(hào)傳導(dǎo)途徑;2)茉莉酸(Jasmonic acid，JA)信號(hào)傳導(dǎo)途徑；3)乙烯(Ethylene，ET)信號(hào)傳導(dǎo)途徑[6-7]。不同的信號(hào)分子調(diào)控不同類型病原物產(chǎn)生的抗性[8]。通常認(rèn)為對(duì)活體或者半活體營(yíng)養(yǎng)型病原物的抗性主要由R基因介導(dǎo)的抗病反應(yīng)或者由SA介導(dǎo)，而對(duì)壞死營(yíng)養(yǎng)型病原物的抗性主要來(lái)自JA和ET途徑[9-11]。

為了進(jìn)一步證實(shí)和評(píng)價(jià)三環(huán)唑防治稻瘟病的作用機(jī)理，確定三環(huán)唑誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生抗性的途徑，本研究評(píng)價(jià)了三環(huán)唑?qū)Φ疚辆木z生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用；以及在稻瘟菌接種水稻后的不同時(shí)間點(diǎn)，施用三環(huán)唑?qū)Φ疚敛〉姆乐涡Ч?。進(jìn)一步檢測(cè)了水稻誘導(dǎo)抗性相關(guān)基因的表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，探索三環(huán)唑與誘導(dǎo)抗性信號(hào)傳導(dǎo)途徑的關(guān)系。

1材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)于2012年12月在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所稻瘟病接種溫室進(jìn)行。供試水稻品種為日本晴OryzasativaL. ssp.japonicacv. Nipponbare，對(duì)廣東省田間稻瘟病分離菌株T13易感病。三環(huán)唑?yàn)橘|(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%可濕性粉劑，購(gòu)自杭州南郊化學(xué)有限公司。

1.2菌絲生長(zhǎng)抑制率測(cè)定

用無(wú)菌水將三環(huán)唑配制成20 μg·mL-1的溶液后, 用0.02 μmol·L-1的過(guò)濾除菌器過(guò)濾，均勻涂在馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)平板上，晾干。稻瘟病菌在PDA平板上于 25 ℃培養(yǎng)7 d后，用滅菌刀片在菌落近邊緣內(nèi)側(cè)切下邊長(zhǎng)為 5 mm的菌塊，放入上述晾干后的PDA平板的正中央，25 ℃培養(yǎng)10 d后測(cè)量菌落直徑，根據(jù)下列公式計(jì)算菌落生長(zhǎng)抑制率：抑制率=(1-試驗(yàn)組菌落直徑/對(duì)照組菌落直徑)×100%。用無(wú)菌水涂抹的PDA平板處理作為空白對(duì)照組。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3孢子萌發(fā)抑制率測(cè)定

稻瘟病菌在PDA平板25 ℃培養(yǎng)7 d后，加入10 mL左右的無(wú)菌水，用小藥勺輕輕刮洗2遍，刮傷菌落，放在室溫25 ℃，紫光燈下產(chǎn)孢2 d。用20 μg·mL-1三環(huán)唑配制成1×105mL-1的孢子懸浮液，取1滴加入凹形載玻片，放入保濕培養(yǎng)皿置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，24 h后用BX51顯微鏡(奧林巴斯)檢測(cè)，計(jì)算孢子萌發(fā)率和抑制率。用清水配制相同孢子數(shù)的孢子懸浮液為對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)/總孢子數(shù)×100%；

抑制率=(1-試驗(yàn)組萌發(fā)率/對(duì)照組萌發(fā)率)×100%。

1.4菌株培養(yǎng)及三環(huán)唑防效檢測(cè)

菌株培養(yǎng)、致病性測(cè)試及病級(jí)調(diào)查參照朱小源等[12]的方法。水稻秧苗單棵種植于一次性塑料飲水杯中。人工噴霧1×105mL-1的接種菌液于杯栽水稻3.5～4葉期秧苗上。分別于接種后0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、24 h噴霧施用20 μg·mL-1的三環(huán)唑，每杯5 mL，每個(gè)處理5棵秧苗，重復(fù)3次，施用清水的植株作為對(duì)照。7 d后調(diào)查水稻葉片病斑數(shù)，記錄病株數(shù)并計(jì)算防效。

1.5基因表達(dá)分析材料

水稻材料催芽后穴播于30 cm × 20 cm × 5 cm規(guī)格的搪瓷盤里，每盤播24穴，每穴播種量為8～10粒種子，稻苗采取旱育栽培，長(zhǎng)至“一葉一心”期，用硫酸銨進(jìn)行施肥，每盤施用0.5 g，共施3次。待稻苗長(zhǎng)至3.5～4葉齡，用20 μg·mL-1的三環(huán)唑噴霧施藥，施藥量為每盤20 mL。以清水噴施為對(duì)照，分別于施藥后0、6、12 h采集葉片，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集5片葉，用錫箔紙包好并做標(biāo)簽，立即投入液氮中，于-70 ℃冰箱保存，待提取RNA。設(shè)定3次獨(dú)立生物學(xué)重復(fù)。

1.6總RNA的提取和cDNA第一鏈的合成

采用Trizol法提取三環(huán)唑處理后不同時(shí)段樣品的總RNA，并用微量分光光度計(jì)(NanoDorp 2000C)檢測(cè)RNA的D260 nm和D280 nm、樣品的D260 nm/D280 nm以及D260 nm/D230 nm，確定RNA的濃度和純度，同時(shí)用含體積分?jǐn)?shù)為12.5%甲醛的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性。隨后RNA用RQ1 RNase-free DNase處理，并用反轉(zhuǎn)錄試劑盒M-MLV kit進(jìn)行cDNA的反轉(zhuǎn)錄，方法按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7實(shí)時(shí)熒光定量PCR

分別選取代表水稻不同誘導(dǎo)抗性通路的基因9個(gè)，分別為水稻SA-誘導(dǎo)抗性基因(OsEDS1、OsPAD4、OsPAL和OsICS1)、水稻誘導(dǎo)抗性基因(OsLOX和OsAOS2)和誘導(dǎo)抗性下游基因(OsNH1-1、OsPR1a和OsPR10)，參照Qiu等[13]的序列(表1)，委托華大科技(北京)有限公司進(jìn)行引物合成。以反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA稀釋2倍為模板，在ABI 7500熒光定量?jī)x上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。20 μL反應(yīng)體系包括SYBR Premix ExTaq(2×)10 μL，上、下游引物各0.4 μL，ROX Reference DyeⅡ0.4 μL，模板2 μL，加ddH2O至20 μL。Real-Time PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性60 s； 95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，72 ℃延伸45 s (收集熒光信號(hào))，40個(gè)循環(huán)；PCR反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行溶解曲線分析。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次。

表1　實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物表

1.8相對(duì)定量表達(dá)分析

按照Bustin等[14]建立的方法確定引物的擴(kuò)增特異性和效率。利用RefFinder軟件對(duì)常用的水稻內(nèi)參基因eEF1a、Actin和UBQ5-2進(jìn)行穩(wěn)定性分析，從而選出在此試驗(yàn)條件下穩(wěn)定性最好的基因作為內(nèi)參基因。目的基因表達(dá)量以選出的內(nèi)參基因作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相對(duì)定量，相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算采用2-⊿⊿Ct法：相對(duì)表達(dá)量 = 2-⊿⊿Ct= 2-[(CtE-CtF)-(CtA-CtB)]=2(CtF-CtB)-(CtE-CtA)。其中，CtA為處理前待測(cè)基因Ct值；CtB為處理前參照基因Ct值；CtE為處理后待測(cè)基因Ct值；CtF為處理后參照基因Ct值。

1.9統(tǒng)計(jì)分析

利用IBM SPSS staitistics 20軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，比較試驗(yàn)組與對(duì)照組平均數(shù)之間的差異，判斷差異顯著性。

2結(jié)果與分析

2.1三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛【z的生長(zhǎng)抑制率

三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛【渖L(zhǎng)抑制率試驗(yàn)結(jié)果表明，20 μg·mL-1的三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛【涞纳L(zhǎng)無(wú)明顯的抑制作用(圖1)。10 d后，測(cè)量三環(huán)唑試驗(yàn)組的菌落直徑平均為7.57 cm，用無(wú)菌水處理的對(duì)照組菌落直徑為7.60 cm。三環(huán)唑?qū)Φ疚敛【z生長(zhǎng)抑制率僅為0.39%，抑制作用不明顯(P>0.05，圖1)。

ns表示與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05，t檢驗(yàn))。

Fig.1Effect of tricyclazole on the hyphal growth of Magnaporthe grisea

2.2三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛【逆咦用劝l(fā)抑制率

用20 μg·mL-1的三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛℃咦討腋∫禾幚?4 h后進(jìn)行顯微觀察。鏡檢結(jié)果顯示，三環(huán)唑試驗(yàn)組的孢子平均萌發(fā)率為95%，對(duì)照組的萌發(fā)率平均為100%。三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛【逆咦用劝l(fā)無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)。

2.3三環(huán)唑?qū)λ镜疚敛〉姆乐涡Ч?/p>

抗性調(diào)查結(jié)果表明，水稻接種稻瘟病菌后0、1、2、4，6，8，10，12 h后，施用20 μg·mL-1三環(huán)唑，均能達(dá)到100%的防效。接種后14、16和24 h也仍分別有91.2%、90.3%和87.2%的防效。

稻瘟菌孢子的附著胞在24 h內(nèi)已全部黑色素化。如果三環(huán)唑僅為抑制黑色素合成的抗侵入劑，那么在黑色素已完全形成后用藥應(yīng)無(wú)明顯的防病效果。從本試驗(yàn)接種后24 h用藥的效果來(lái)看，三環(huán)唑防病并非僅僅抑制黑色素的合成。

2.4水稻內(nèi)參基因的穩(wěn)定性分析

為了確定三環(huán)唑處理?xiàng)l件對(duì)水稻內(nèi)參基因穩(wěn)定性的影響，為基因表達(dá)分析奠定基礎(chǔ)。選擇了已知常用的水稻內(nèi)參基因eEF1a、Actin和UBQ5-2進(jìn)行了基因穩(wěn)定性分析。RefFinder在線分析工具表明，三環(huán)唑和清水對(duì)照的處理下，3個(gè)內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性

由高到低依次為：eEF1a>Actin>UBQ5-2(圖2)。因此，選定eEF1a作為下一步誘導(dǎo)抗性相關(guān)基因表達(dá)分析的內(nèi)參基因。

圖2　3個(gè)水稻候選內(nèi)參基因穩(wěn)定性的比較分析

Fig.2Expression stability values of three rice candidate reference genes

2.5三環(huán)唑處理對(duì)水稻防衛(wèi)反應(yīng)下游基因表達(dá)的影響

選取水稻防衛(wèi)反應(yīng)3個(gè)下游基因OsNH1-1，Os-PR1a和OsPR10進(jìn)行表達(dá)分析，結(jié)果表明：三環(huán)唑處理水稻12 h后，OsNH1-1基因表達(dá)量顯著提高；三環(huán)唑處理水稻0和12 h后，OsPR1a基因表達(dá)量也顯著提高，隨后出現(xiàn)降低；OsPR10基因表達(dá)量在0 h出現(xiàn)顯著升高，而后在12 h降低，24 h與對(duì)照無(wú)顯著差別(圖3)。以上結(jié)果說(shuō)明，三環(huán)唑?qū)λ居酌缇哂姓T導(dǎo)抗病性的作用。

圖3　三環(huán)唑處理對(duì)水稻防衛(wèi)反應(yīng)下游基因表達(dá)的影響

2.6三環(huán)唑處理對(duì)水稻SA誘導(dǎo)抗性途徑基因表達(dá)的影響

為了確定三環(huán)唑?qū)λ菊T導(dǎo)抗性的途徑，選取了4個(gè)SA途徑相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)分析(圖4)。結(jié)果表明，除了OsPAD4基因在三環(huán)唑處理后12 h和OsICS1基因在三環(huán)唑處理后0 h表現(xiàn)微弱升高之外，其他基因和時(shí)間點(diǎn)均表現(xiàn)顯著下降或者表達(dá)差異不顯著，說(shuō)明三環(huán)唑?qū)λ镜恼T導(dǎo)抗性作用通過(guò)SA途徑起作用的可能性非常小。

2.7三環(huán)唑處理對(duì)水稻JA誘導(dǎo)抗性途徑基因表達(dá)的影響

選取了2個(gè)JA途徑相關(guān)基因進(jìn)行了表達(dá)分析(圖5)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，OsLOX基因在三環(huán)唑處理0和12 h后，出現(xiàn)了表達(dá)量極顯著提高(P<0.01)。OsAOS2基因在三環(huán)唑處理12 h后也出現(xiàn)顯著性提高(P<0.05)。說(shuō)明三環(huán)唑?qū)λ镜恼T導(dǎo)抗性作用主要通過(guò)JA途徑起作用。

圖4三環(huán)唑?qū)λ維A抗性途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響

Fig.4Effect of tricyclazole on the expression of rice SA signaling pathway gene

圖5　三環(huán)唑?qū)λ綣A誘導(dǎo)抗性途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響

3討論與結(jié)論

三環(huán)唑是防治水稻稻瘟病的特效藥。一直以來(lái)，對(duì)三環(huán)唑作用機(jī)理的研究主要集中于其對(duì)稻瘟病菌的抑制作用[2, 15-16]。本研究的試驗(yàn)結(jié)果證明，三環(huán)唑?qū)Φ疚辆z生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)均沒(méi)有抑制效果。水稻接種稻瘟菌24 h后施用三環(huán)唑，仍然能夠達(dá)到87.2%的防治效果，這與楊榮明等[17]的研究結(jié)果是一致的。而稻瘟病菌的附著胞在24 h內(nèi)已經(jīng)全部黑色素化，說(shuō)明三環(huán)唑防病并非僅僅是抑制黑色素的形成[2, 18]。本研究對(duì)三環(huán)唑是否同時(shí)激發(fā)了水稻的誘導(dǎo)抗性問(wèn)題進(jìn)行探討和證明。誘導(dǎo)抗性是一種普遍存在的現(xiàn)象, 其內(nèi)在的信號(hào)途徑以及在植物保護(hù)中的潛在應(yīng)用價(jià)值已經(jīng)得到深入的研究。

雖然大量試驗(yàn)證實(shí)誘導(dǎo)抗性是一種控制植物病害的有效方法,但投入到生產(chǎn)實(shí)際應(yīng)用得還較少,主要原因是對(duì)誘導(dǎo)抗性的認(rèn)識(shí)不夠全面,對(duì)引起誘導(dǎo)抗性的機(jī)理了解不深入。本文對(duì)水稻應(yīng)答三環(huán)唑處理后，誘導(dǎo)抗性相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)分析。OsNH1-1是水稻中與擬南芥NPR1同源的基因，被認(rèn)為是SA和JA途徑交叉的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，是植物系統(tǒng)性抗性的重要調(diào)節(jié)中心[19]。OsPR1a和OsPR10是抗性表達(dá)的標(biāo)志性基因，由于無(wú)論是PTI還是ETI抗性，均表現(xiàn)出這2個(gè)基因表達(dá)量的提高[20]，因此，OsPR1a和OsPR10被認(rèn)為是防衛(wèi)反映下游基因[21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三環(huán)唑誘導(dǎo)了水稻防衛(wèi)反應(yīng)下游基因OsNH1-1、OsPR1a和OsPR10的表達(dá)，說(shuō)明三環(huán)唑?qū)λ揪哂姓T導(dǎo)抗性作用。

SA可以經(jīng)由異分支酸合成酶途徑和苯丙途徑合成[22-23]。ICS1為在異分支酸途徑中SA合成的關(guān)鍵基因。所需抗病基因介導(dǎo)抗性的2個(gè)其他基因是OsPAD4和OsEDS1，以正反饋回路功能調(diào)節(jié)SA上游OsICS1基因的合成[24-25]。本研究選取了4個(gè)SA途徑相關(guān)基因(OsICS1,OsEDS1,OsPAD4和OsPAL)進(jìn)行表達(dá)分析，結(jié)果顯示，這4個(gè)基因的表達(dá)量變化不明顯，說(shuō)明三環(huán)唑不是通過(guò)SA途徑起誘導(dǎo)抗性的作用。

JA合成途徑開(kāi)始于α亞麻酸，LOX和AOS是該途徑的2個(gè)重要的基因[26]。本研究發(fā)現(xiàn)受三環(huán)唑處理后，OsLOX和OsAOS2基因的表達(dá)量顯著提高，三環(huán)唑主要通過(guò)JA途徑起作用。JA途徑是植物抗病信號(hào)傳導(dǎo)的主要途徑之一，主要介導(dǎo)壞死營(yíng)養(yǎng)型病原物產(chǎn)生的抗性[9-11]。稻瘟病菌是兼性營(yíng)養(yǎng)病原菌，侵入水稻細(xì)胞的初始階段，主要以活體營(yíng)養(yǎng)為主，隨后初次侵染細(xì)胞死亡，病原菌轉(zhuǎn)化為死體營(yíng)養(yǎng)方式，同時(shí)以活體營(yíng)養(yǎng)方式繼續(xù)侵染下一個(gè)臨近的細(xì)胞[8]。本研究的結(jié)果從另一個(gè)角度說(shuō)明，三環(huán)唑可能通過(guò)JA途徑介導(dǎo)的誘導(dǎo)抗性，阻止病原菌在植株體內(nèi)的再侵染，從而延長(zhǎng)了藥物的持效期?？赡苁侨h(huán)唑不易使稻瘟病產(chǎn)生抗性，屬于低抗藥性風(fēng)險(xiǎn)類農(nóng)藥的原因之一。深入研究水稻植株內(nèi)三環(huán)唑受體分子，對(duì)于開(kāi)發(fā)水稻稻瘟病菌誘抗劑具有重要的意義。

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【責(zé)任編輯柴焰】

Tricyclazole induced expression of genes associated with rice resistance

CHEN Yan1, ZHAO Junlong1, MAO Genlin1, WANG Congying2, LIN Fei1, XU Hanhong1, ZHU Xiaoyuan2

(1 College of Agriculture, South China Agricultural University/Key Laboratory of Natural Pesticide & Chemical

Biology, Ministry of Education， Guangzhou 510642,China; 2 Plant Protection Research Institute,

Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou 510640,China)

Abstract：【Objective】 This study aims at analyzing both the dynamics and the correlations with rice blast resistance of rice defense related gene expression under tricyclazole treatment.【Method】 Antifungal activity of tricyclazole was determined indoor under greenhouse conditions. Real-time PCR analysis was performed to monitor the expression levels of rice defense related genes after tricyclazole treatment.【Result】 Rice blast fungus mycelium growth and spore germination were not inhibited by tricyclazole. However, tricyclazole treatment 24 h after rice blast fungus inoculation could still help 87.2% of the rice strains to successfully defense the fungi. RT-qPCR results showed that rice defense related genesOsNH1-1,OsPR1aandOsPR10 were induced by tricyclazole. Moreover, by analyzing the expression of key genes in the salicylic acid and jasmonic acid pathways, the key genes ofOsLOXandOsAOS2 from the latter one were significantly induced by tricyclazole treatment.【Conclusion】 The prevention of rice blast by tricyclazole is not only by inhibiting the synthesis of melanin. RT-qPCR results show that tricyclazole can trigger rice resistance by inducing expression of key genes in the jasmonic acid pathway.

Key words：tricyclazole; antifungal activity; rice blast; resistance related genes; gene expression

中圖分類號(hào)：S511；S502

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-411X(2016)01-0035-06

基金項(xiàng)目：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(CARS-01-24)

作者簡(jiǎn)介：陳炎(1992—)，女, 碩士研究生，E-mail:1553637900@qq.com；通信作者：徐漢虹(1961—)，男，教授，博士，E-mail: hhxu@scau.edu.cn; 朱小源(1965—)，男，研究員，博士，E-mail: zhuxy@gdppri.com

收稿日期：2015-04-10優(yōu)先出版時(shí)間：2015-12-07

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20151207.1116.012.html

陳炎， 趙俊龍， 毛根林，等.三環(huán)唑誘導(dǎo)水稻抗性相關(guān)基因的表達(dá)分析[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016,37(1):35-40.