魚(yú)藤屬植物內(nèi)生青霉菌代謝產(chǎn)物的提取及殺蚜活性分析

孫　濤， 孫之潭， 胡美英， 鐘國(guó)華

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 昆蟲(chóng)毒理研究室，廣東 廣州 510642)

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魚(yú)藤屬植物內(nèi)生青霉菌代謝產(chǎn)物的提取及殺蚜活性分析

孫濤?， 孫之潭?， 胡美英， 鐘國(guó)華

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 昆蟲(chóng)毒理研究室，廣東 廣州 510642)

摘要：【目的】從魚(yú)藤屬Derris植物的內(nèi)生真菌中篩選代謝物具有殺蟲(chóng)活性的內(nèi)生真菌，并驗(yàn)證其代謝產(chǎn)物的殺蚜活性?！痉椒ā恳悦~(yú)藤D.elliptica、白花魚(yú)藤D.alborubra、蜜花魚(yú)藤D.thyrisiflora和肇慶魚(yú)藤D.hacei等魚(yú)藤屬植物的內(nèi)生真菌為研究對(duì)象，采用經(jīng)典形態(tài)學(xué)方法鑒定所分離內(nèi)生真菌，對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)，篩選出目的菌株。利用不同提取方法和提取溶劑優(yōu)化目的菌株代謝產(chǎn)物的提取，采用浸蟲(chóng)法研究其代謝產(chǎn)物的殺蚜活性?！窘Y(jié)果】從毛魚(yú)藤根部篩選到1株代謝產(chǎn)物具有殺蟲(chóng)活性的內(nèi)生青霉菌，其菌絲體的提取試驗(yàn)和發(fā)酵液的萃取試驗(yàn)表明，三氯甲烷是最好的提取溶劑和萃取溶劑，超聲波法能夠有效提取內(nèi)生青霉菌絲體中的殺蟲(chóng)活性物質(zhì)，提取率達(dá)4.156%。三氯甲烷提物對(duì)蘿卜蚜成蚜活性最高，24和48 h的LC50分別為1.570和0.953 mg·mL-1?！窘Y(jié)論】確定了魚(yú)藤屬植物內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的提取方法，并證實(shí)了代謝產(chǎn)物具有類(lèi)似魚(yú)藤酮的殺蟲(chóng)活性，其具體化學(xué)結(jié)構(gòu)仍待進(jìn)一步確證。

關(guān)鍵詞：魚(yú)藤； 內(nèi)生真菌； 代謝產(chǎn)物； 蘿卜蚜

為了適應(yīng)復(fù)雜的生態(tài)環(huán)境，自然界中絕大多數(shù)植物都與某類(lèi)微生物共生著， 形成多種形式的植物-微生物共生體系統(tǒng)[1]。隨著對(duì)植物-微生物共生體系統(tǒng)的深入研究， 內(nèi)生真菌作為一種新的微生物資源受到了廣泛的關(guān)注。 至于內(nèi)生真菌的定義，根據(jù)現(xiàn)在普遍接受的觀點(diǎn)， 是指那些在某一段時(shí)期生活在植物體內(nèi)， 但對(duì)寄主植物組織并不引起任何明顯病害癥狀的真菌[2]。 此定義實(shí)際上包括那些專(zhuān)性寄生真菌、營(yíng)表面腐生的腐生真菌、潛伏性病原真菌和菌根真菌。 內(nèi)生真菌在進(jìn)化過(guò)程中與植物寄主建立了和諧的共生關(guān)系, 其次生代謝產(chǎn)物十分豐富，具有多種生物活性如抗腫瘤、抗蟲(chóng)、抗病等，其中某些產(chǎn)物與宿主的次級(jí)代謝產(chǎn)物相同或相似[3]。自Strobel等[4]在1993年首次從短葉紅豆杉內(nèi)生真菌—安德氏紫杉霉Taxomycesandreanae的發(fā)酵產(chǎn)物中分離出抗癌活性物質(zhì)——紫杉醇以來(lái)， 從藥用植物內(nèi)部篩選與開(kāi)發(fā)具有藥用價(jià)值的真菌資源， 尋找新的抗菌活性物質(zhì)， 進(jìn)而為植物源藥物的生產(chǎn)開(kāi)辟新途徑， 已成為該領(lǐng)域的研究重點(diǎn)與熱點(diǎn)。

近年來(lái)， 植物內(nèi)生真菌及其次生代謝物在醫(yī)學(xué)方面的研究較多， 在農(nóng)業(yè)上應(yīng)用的研究也逐漸成為熱點(diǎn)。 目前農(nóng)用內(nèi)生真菌的研究主要集中在2個(gè)方面： 一是農(nóng)作物的內(nèi)生真菌對(duì)農(nóng)作物本身的影響； 二是對(duì)植物內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的研究， 重點(diǎn)是發(fā)現(xiàn)具有農(nóng)用生物活性的新化合物[5]。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道：從巴布達(dá)橄欖Bontiadaphnoides中可分離得到多節(jié)孢屬內(nèi)生真菌Nodulisporium sp．，該菌會(huì)產(chǎn)生一種具有殺滅大蒼蠅幼蟲(chóng)活性的吲哚二萜類(lèi)球孢子酸(Nodulisporic acids)[6]。從蓖麻Ricinuscommunis中可分離到1株鏈格孢屬霉Alternariasp.，其發(fā)酵產(chǎn)物中可分離得到具有抑制乙酰膽堿酯酶活性的物質(zhì)，低濃度即對(duì)斜紋夜蛾Spodopteralitura具有較高的致死率[7]。從天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新型先導(dǎo)化合物， 是新農(nóng)藥創(chuàng)制的重要途徑。 內(nèi)生真菌憑借其可增強(qiáng)作物抗逆性、促進(jìn)作物生長(zhǎng)和防治病蟲(chóng)害的特點(diǎn)，滿(mǎn)足防治效果好、環(huán)境影響低、成本較低和節(jié)省農(nóng)藥等植保方面的要求，將成為新農(nóng)藥研發(fā)的重點(diǎn)方向[8]。 目前魚(yú)藤酮主要從魚(yú)藤的根中提取，受到自然資源相對(duì)匱乏的限制， 而組織培養(yǎng)的費(fèi)用較高， 很難應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際。 本研究以傳統(tǒng)殺蟲(chóng)植物魚(yú)藤的內(nèi)生真菌為研究對(duì)象， 以期從中發(fā)現(xiàn)具有產(chǎn)生類(lèi)似魚(yú)藤酮的殺蟲(chóng)活性物質(zhì)的內(nèi)生真菌，以改善魚(yú)藤資源匱乏的局面。

1材料與方法

1.1供試菌株

魚(yú)藤內(nèi)生青霉菌Penicilliumsp.菌株及其他菌株均為筆者從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)毒理研究室殺蟲(chóng)植物標(biāo)本園內(nèi)的毛魚(yú)藤Derriselliptica、白花魚(yú)藤D.albo-rubra、蜜花魚(yú)藤D.thyrsiflora和肇慶魚(yú)藤D.hacei等魚(yú)藤屬殺蟲(chóng)植物中分離得到。

1.2培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)[9]。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。馬鈴薯去皮，切成塊煮沸2 min，打漿1～2 min，沖洗打漿機(jī)，再加葡萄糖和瓊脂，溶化后補(bǔ)足水至1 000 mL。

液體培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PD)。

1.3供試?yán)ハx(chóng)

蘿卜蚜Lipaphiserysimi:同翅目蚜科，采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)試驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)及昆蟲(chóng)毒理研究室試驗(yàn)菜地，蚜蟲(chóng)采回后，挑選生長(zhǎng)良好、大小一致的無(wú)翅成蚜進(jìn)行試驗(yàn)。

1.4內(nèi)生真菌的分離、純化和培養(yǎng)

采用內(nèi)生真菌常用的分離方法：采集新鮮供試植物的根和嫩枝，進(jìn)行表面消毒。首先分別以自來(lái)水和無(wú)菌水沖洗3～4次，然后用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇漂洗5～15 min， 并用無(wú)菌水沖洗3～4次，再置于次氯酸鈉溶液 (有效氯體積分?jǐn)?shù)為10%) 漂洗1 min，最后用無(wú)菌水沖洗 4次。 在超凈工作臺(tái)上將消毒過(guò)的植物組織切割成0.5 cm×0.5 cm小片， 移入PDA平板上，于25 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。 3～5 d待植物樣品邊緣長(zhǎng)出菌絲體后，根據(jù)菌絲體的形態(tài)特點(diǎn)(包括菌絲體的顏色、形狀和質(zhì)地等)，采用尖端菌絲體挑取法對(duì)不同菌株進(jìn)行分離純化。 采用組織印跡法檢驗(yàn)植物組織的滅菌效果：即將消毒而未切割的植物組織與固體平板接觸3～5 min，培養(yǎng)3～5 d，根據(jù)平板上菌落的有無(wú)判定分離結(jié)果的有效性[10]。

內(nèi)生真菌的液體培養(yǎng)采用搖瓶發(fā)酵法。將純化菌株在無(wú)菌條件下接入裝有150 mL PD培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中，將其置于搖床中(25～28 ℃，RH 75%～85%，光照∶黑暗=12 h∶12 h)培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速120 r·min-1，培養(yǎng)7～9 d。

1.5內(nèi)生真菌活性物質(zhì)的提取

用100目篩將菌絲體由發(fā)酵液濾出，置于45 ℃烘箱中鼓風(fēng)烘干，得干菌絲體。

方法1(冷浸法)：稱(chēng)取一定量的干菌絲體，加入10倍體積的甲醇。置于避光暗處，冷浸每次持續(xù)48 h以上，浸提3次，提取液合并，減壓濃縮得粗提物。

方法2(組織研磨法)：稱(chēng)取一定量的干菌絲體，移入研缽中，再加入適量甲醇，研磨至菌絲體完全粉碎，然后倒出，浸泡提取，提取液減壓濃縮得粗提物。

方法3(超聲波提取法)：稱(chēng)取一定量的干菌絲體，加入10倍體積的甲醇，置于超聲波儀上，在室溫下提取3～5 min，過(guò)濾。 反復(fù)提取3次，濾液合并，濃縮得到超聲波粗提物。

方法4(索氏抽提法)：稱(chēng)取一定量的干菌絲體，用濾紙包好放入索氏提取器中，加入20倍量的甲醇回流至溶劑為無(wú)色時(shí)停止。 將提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)減壓濃縮，得粗提物。

1.6發(fā)酵液中活性物質(zhì)的萃取

采用液-液分配萃取法：量取一定量的發(fā)酵液，用等體積的有機(jī)溶劑對(duì)發(fā)酵液萃取3次，然后將有機(jī)相45 ℃減壓濃縮得粗提物，放入冰箱中備用。

1.7內(nèi)生真菌活性物質(zhì)的分析

對(duì)菌絲體甲醇提取物進(jìn)行高效液相色譜分析(HPLC)，以篩選產(chǎn)魚(yú)藤酮或其類(lèi)似物的內(nèi)生真菌。 HPLC的檢測(cè)條件：HP-1000型高效液相色譜儀為美國(guó)惠普公司制造；HEWLWTT PACKARD色譜柱(ODS HYPERSIL，5 μm，125 mm×4 mm)；檢測(cè)波長(zhǎng)=295 nm；流動(dòng)相為V(甲醇)∶V(水)=75∶25；流速為1 mL·min-1；檢測(cè)靈敏度AUFS=0.001；柱溫為常溫；進(jìn)樣量為10 μL。 魚(yú)藤酮純品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97%，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.8對(duì)蘿卜蚜的毒殺活性測(cè)定

對(duì)蘿卜蚜的毒殺活性測(cè)定采用浸蟲(chóng)法。 挑取30～50頭成蚜放在新鮮的芥藍(lán)葉中，放置 1～2 h穩(wěn)定后，在供試樣品溶液中浸3 s后取出，用濾紙吸除多余溶液，待溶劑干后放入墊有保濕濾紙的9 cm培養(yǎng)皿。 稀釋溶劑為V(丙酮)∶V(水)=1∶1的溶液，按下列公式計(jì)算死亡率和校正死亡率：

2結(jié)果與分析

2.1毛魚(yú)藤等魚(yú)藤屬植物內(nèi)生真菌甲醇提取物的高效液相色譜分析

對(duì)毛魚(yú)藤、白花魚(yú)藤、蜜花魚(yú)藤和肇慶魚(yú)藤等魚(yú)藤屬植物的內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離，分離純化的菌株總數(shù)為81株。 將所分離純化的菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，所得菌絲體甲醇冷浸提取，提取物進(jìn)行高效液相色譜分析(HPLC)，以篩選產(chǎn)魚(yú)藤酮類(lèi)似活性化合物的內(nèi)生真菌。 從上面供試的81個(gè)菌株中，篩選到1株代謝產(chǎn)物具有魚(yú)藤酮類(lèi)似活性的內(nèi)生真菌，該菌代謝產(chǎn)物的HPLC圖譜中含有與魚(yú)藤酮標(biāo)樣保留時(shí)間相近的色譜吸收峰(圖1)，其是否為魚(yú)藤酮或其類(lèi)似物還有待進(jìn)一步鑒定。 該內(nèi)生真菌用經(jīng)典形態(tài)學(xué)方法鑒定為青霉屬真菌。 該內(nèi)生青霉菌株在PDA平板上的菌落呈墨綠色，色彩較暗，培養(yǎng)基背面鮮紅色，可見(jiàn)水珠狀無(wú)色滲出液。菌絲體墨綠色、淺黃色，表面光滑。 生長(zhǎng)的適溫范圍為21～28 ℃，喜低溫，其分類(lèi)鑒定地位有待進(jìn)一步的研究。

A：魚(yú)藤酮標(biāo)樣；B：內(nèi)生青霉菌代謝產(chǎn)物。

2.2內(nèi)生青霉菌不同提取方法甲醇提取物對(duì)蘿卜蚜的生物活性

用4種常規(guī)提取方法對(duì)內(nèi)生青霉菌絲體進(jìn)行提取，提取率見(jiàn)表1。

采用浸蟲(chóng)法，對(duì)內(nèi)生青霉菌絲體不同提取方法的甲醇提取物進(jìn)行了生物活性測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。 從表2中可以看出，4種不同提取方法的提取物對(duì)蘿卜蚜均有一定的毒殺活性。 其中， 以超聲波提取法提取物的毒殺效果最強(qiáng)， 處理蚜蟲(chóng)24和48 h的LC50分別為3.056和1.848 mg·mL-1， 殺蟲(chóng)活性隨處理時(shí)間的增加而增強(qiáng)。 結(jié)合前面提取率的研究可以看出， 超聲波提取法提取物的毒殺效果最強(qiáng)可能與其能夠提取內(nèi)生青霉菌絲體中大量的活性物質(zhì)有關(guān)。

表1　內(nèi)生青霉菌絲體不同提取方法的提取結(jié)果1)

1) 表中結(jié)果為3次重復(fù)的平均值，同列數(shù)據(jù)后凡是有一個(gè)相同小寫(xiě)字母者，表示在5%水平差異不顯著(DMRT法)； 提取溶劑為甲醇。

表2　內(nèi)生青霉菌絲體不同提取方法甲醇提取物對(duì)蘿卜蚜無(wú)翅成蚜的毒力

1)x為濃度的對(duì)數(shù)值，y為死亡幾率。

2.3內(nèi)生青霉菌絲體不同溶劑提取物對(duì)蘿卜蚜的生物活性

不同溶劑對(duì)內(nèi)生青霉菌絲體的提取效果如表3。

采用浸蟲(chóng)法，測(cè)定了內(nèi)生青霉菌絲體6種溶劑提取物對(duì)蘿卜蚜成蚜的毒力，其結(jié)果見(jiàn)表4。 由表4可以看到，內(nèi)生青霉菌絲體不同溶劑提取物的活性差異較大，活性最高的是三氯甲烷提取物，24和48 h的LC50分別為1.570、0.953 mg·mL-1。 活性順序依次是三氯甲烷>甲醇>正丁醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯提取物，活性最低的乙酸乙酯提取物24和48 h的LC50分別為4.784、3.631 mg·mL。

表3　內(nèi)生青霉菌絲體不同提取溶劑的提取結(jié)果1)

1) 表中結(jié)果為3次重復(fù)的平均值，同列數(shù)據(jù)后凡是有一個(gè)相同小寫(xiě)字母者，表示在5%水平差異不顯著(DMRT法)。

表4　內(nèi)生青霉菌絲體不同溶劑提取物對(duì)蘿卜蚜無(wú)翅成蚜的毒力

1)x為濃度的對(duì)數(shù)值，y為死亡幾率。

2.4內(nèi)生青霉發(fā)酵液不同溶劑萃取物對(duì)蘿卜蚜的生物活性

內(nèi)生青霉發(fā)酵液不同溶劑萃取物對(duì)蘿卜蚜無(wú)翅成蚜的毒力測(cè)定結(jié)果如表5。內(nèi)生青霉發(fā)酵液的不同溶劑萃取物中以三氯甲烷萃取物對(duì)蘿卜蚜成蚜的毒殺活性最強(qiáng),24和48 h的LC50分別為2.967、1.787 mg·mL-1。 其次為正丁醇萃取物，24和48 h的LC50分別為3.445、2.202 mg·mL-1。 結(jié)合前面的活性追蹤過(guò)程，三氯甲烷對(duì)內(nèi)生青霉菌的活性物質(zhì)具有較好的提取效果，提取和萃取試驗(yàn)的活性測(cè)定結(jié)果均證實(shí)了這一點(diǎn)。

表5　內(nèi)生青霉發(fā)酵液不同溶劑萃取物對(duì)蘿卜蚜無(wú)翅成蚜的毒力

1)x為濃度的對(duì)數(shù)值，y為死亡幾率。

3討論與結(jié)論

植物與內(nèi)生真菌的關(guān)系是互惠共生的，一方面植物為內(nèi)生真菌提供光合產(chǎn)物和礦物質(zhì)；另一方面內(nèi)生真菌的代謝物能刺激植物的生長(zhǎng)發(fā)育， 提高宿主植物對(duì)生物脅迫和非生物脅迫的抵抗能力[11]。 現(xiàn)代的內(nèi)共生理論認(rèn)為，植物與內(nèi)生真菌在長(zhǎng)期的協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中，生物化學(xué)途徑的連續(xù)演化會(huì)導(dǎo)致信息物質(zhì)在內(nèi)生真菌與宿主間的相互傳遞[12]。 這一理論或許能夠解釋某些植物內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主相同或相似的生理活性成分的原因[13]。 本研究便是以傳統(tǒng)殺蟲(chóng)植物毛魚(yú)藤、白花魚(yú)藤、蜜花魚(yú)藤和肇慶魚(yú)藤等魚(yú)藤屬植物的內(nèi)生真菌為研究對(duì)象，對(duì)魚(yú)藤內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物初步進(jìn)行HPLC檢測(cè)，從毛魚(yú)藤根部分離到1株代謝產(chǎn)物具有殺蟲(chóng)活性的內(nèi)生青霉菌，該菌代謝產(chǎn)物的HPLC圖譜中含有與魚(yú)藤酮標(biāo)樣保留時(shí)間相似的色譜吸收峰，其是否為魚(yú)藤酮或其類(lèi)似物還有待進(jìn)一步鑒定。 蚜蟲(chóng)為魚(yú)藤酮類(lèi)化合物的敏感試蟲(chóng)，用魚(yú)藤酮噴霧處理甘藍(lán)蚜的LC50為7.44 μg·頭-1[14]。 因此本研究采用蘿卜蚜進(jìn)行生物活性測(cè)定，以進(jìn)一步確定魚(yú)藤酮類(lèi)似活性化合物的產(chǎn)生菌。

內(nèi)生青霉菌絲體4種方法甲醇提取物的生物活性測(cè)定結(jié)果表明， 超聲波提取法能夠提取內(nèi)生青霉菌絲體中大量的活性物質(zhì)，提取率為4.156%。內(nèi)生青霉菌絲體6種溶劑提取物和內(nèi)生青霉發(fā)酵液4種溶劑萃取物的生物活性測(cè)定結(jié)果表明，三氯甲烷是最好的提取溶劑和萃取溶劑。三氯甲烷提取物對(duì)蘿卜蚜成蚜24和48 h的LC50分別為1.570、0.953 mg·mL-1；三氯甲烷萃取物對(duì)蘿卜蚜成蚜24和48 h的LC50分別為2.967、1.787 mg·mL-1。但本研究中內(nèi)生青霉菌的代謝產(chǎn)物數(shù)量較少， 菌絲體甲醇提取物的產(chǎn)量約為0.15 g·L-1。根據(jù)HPLC檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果來(lái)看，魚(yú)藤酮類(lèi)似活性化合物在內(nèi)生青霉甲醇粗提物中僅為1/1 000左右，不足以完成所有的結(jié)構(gòu)鑒定程序， 因此該內(nèi)生青霉菌產(chǎn)生的魚(yú)藤酮類(lèi)似活性化合物的具體化學(xué)結(jié)構(gòu)仍待進(jìn)一步確證。

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【責(zé)任編輯柴焰】

Extraction of secondary metabolites of Penicillium sp. in Derris

plants and bioactivity assay against Lipaphis erysimi

SUN Tao?, SUN Zhitan?, HU Meiying, ZHONG Guohua

(Laboratory of Insect Toxicology, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

Abstract：【Objective】 To screen out one strain of endophytic fungi which might produce insecticidal secondary metabolites and test its insecticidal activity againstLipaphiserysimi.【Method】Endophytic fungi in insecticidal plants, includingDerriselliptica,D.alborubra,D.thyrsifloraandD.hacei, were studied. Endophytic fungi isolated fromDerrisplants were identified by classical morphological method, and their secondary metabolites were identified using high-performance liquid chromatograph(HPLC) to obtain the objective strains. Various extraction methods and extraction solvents were used to optimize the extraction of secondary metabolites. Insecticidal activity againstL.erysimiwas studied by immersion of the insect bodies.【Result】One strain of endophytic fungi ofPenicilliumsp., which produced insecticidal metabolites, was screened out from the roots ofD.elliptica. Extracting tests on the mycelia and fermentation of endophyticPenicilliumsp. indicated that chloroform was the best extracting solvent, and bioactive compounds could be effectively extracted using supersonic method with an extracting rate of 4.156%. Chloroform extract had the highest efficiency against the adults ofL.erysimi, of which LC50was 1.570 mg·mL-1after 24 h and 0.953 mg·mL-1after 48 h. 【Conclusion】This study determines the extraction method of the secondary metabolites from endophytic fungi ofDerrisplants, and confirmes that these metabolites have insecticidal activity similar to rotenone. However, the specific chemical structures of the secondary metabolites remains to be further confirmed.

Key words：Derris; endophytic fungi; metabolites;Lipaphiserysimi

中圖分類(lèi)號(hào)：S481.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-411X(2016)01-0046-06

基金項(xiàng)目：廣東省自然科學(xué)基金(05006634)

作者簡(jiǎn)介：孫濤(1989—)，男，碩士研究生，E-mail：nkxsuntao@163．com；孫之潭(1979—)，男，碩士，E-mail：zhitansun2001@yahoo.com；?對(duì)本文貢獻(xiàn)相同；通信作者：鐘國(guó)華(1973—)，男，教授，博士，E-mail：guohuazhong@scau．edu．cn

收稿日期：2015-04-09優(yōu)先出版時(shí)間：2015-12-07

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20151207.1116.016.html

孫濤， 孫之潭， 胡美英，等.魚(yú)藤屬植物內(nèi)生青霉菌代謝產(chǎn)物的提取及殺蚜活性分析[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016,37(1):46-51.