不同標(biāo)志物在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達(dá)及其意義的實(shí)驗(yàn)研究

沙春艷(白城醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 吉林 白城 137000)

不同標(biāo)志物在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達(dá)及其意義的實(shí)驗(yàn)研究

沙春艷
(白城醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 吉林 白城 137000)

甲狀腺濾泡癌惡性度較甲狀腺乳頭狀癌高，早期易發(fā)生血道轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，發(fā)病隱蔽，常誤診為其他良性病變?yōu)樘岣呒谞钕贋V泡癌診斷準(zhǔn)確率，應(yīng)探求應(yīng)用免疫組化染色技術(shù)等輔助檢測手段做出病理診斷。

甲狀腺；濾泡癌；乳頭狀癌；病理診斷

1.引言

甲狀腺濾泡癌惡性度較甲狀腺乳頭狀癌高，早期易發(fā)生血道轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，發(fā)病隱蔽，常誤診為其他良性病變。為提高甲狀腺濾泡癌診斷準(zhǔn)確率，應(yīng)探求應(yīng)用免疫組化染色技術(shù)等輔助檢測手段做出病理診斷。為此本實(shí)驗(yàn)研究CK19、PCNA、VEGF和TTF-1在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達(dá)情況，探討其在甲狀腺濾泡癌與甲狀腺瘤鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值和意義。

2.資料和方法

2.1 研究對象

收集吉林大學(xué)病理生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室1998年—2007年首次手術(shù)治療67例甲狀腺腫瘤標(biāo)本，標(biāo)本均經(jīng)病理復(fù)查核診。其中甲狀腺濾泡癌26例，甲狀腺濾泡型腺瘤41例；男性22例，女性45例；年齡21～66歲，高峰年齡42.8歲?；颊咝g(shù)前均未接受放化療，臨床資料完整。

2.2 主要試劑

CK19鼠抗人單克隆抗體，PCNA鼠抗人單克隆抗體，VEGF鼠抗人單克隆抗體，TTF-1鼠抗人單克隆抗體，U1traSensitiveTM S-P（即用型），多聚賴氨酸，檸檬酸鹽緩沖液（0.01M，pH6.0），均由福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用S-P法及其試劑盒說明書進(jìn)行CK19、PCNA、VEGF 和TTF-1免疫組化染色。

2.4 染色結(jié)果判定

采用雙盲法觀察免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。

CK19表達(dá)情況的判斷：無陽性細(xì)胞，即為陰性記為0；1%～10%陽性細(xì)胞為弱陽性（+）；11%～50%為中等陽性（++）；>50%為強(qiáng)陽性（+++）。

PCNA表達(dá)情況的判斷：觀察高倍鏡下每張切片計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞PCNA陽性細(xì)胞數(shù)，以百分率表達(dá)，<20%為陰性。

VEGF表達(dá)情況的判斷：整個(gè)切片未見陽性著色為陰性（-），陽性細(xì)胞<25%為輕度陽性（+），25%～50%為中度陽性（++），50%以上為強(qiáng)陽性（+++）。前兩者為低表達(dá)，后兩者為高表達(dá)。

TTF-1定量分析：在40倍物鏡下，每個(gè)樣本隨機(jī)選20個(gè)視野，每個(gè)視野隨機(jī)測試10個(gè)陽性瘤細(xì)胞，用交互式方法測量每個(gè)陽性細(xì)胞核灰度值，在200個(gè)視野中測試背景灰度并取平均值，計(jì)算每個(gè)目標(biāo)細(xì)胞核陽性單位（PU）值。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包處理。

3.結(jié)果

3.1 一般形態(tài)學(xué)觀察

甲狀腺濾泡癌：腫瘤由大小不等濾泡、梁狀或?qū)嵭猿矤顬V泡上皮細(xì)胞組成，竇樣血管豐富。腫瘤細(xì)胞有不同程度異型性，核分裂相常見，常有包膜和血管浸潤。

甲狀腺腺瘤：25例單純型腺瘤腫瘤組織由大小一致、排列擁擠、內(nèi)含膠質(zhì)、與成人正常甲狀腺相似的濾泡構(gòu)成；12例膠樣型腺瘤腫瘤組織由大濾泡或大小不一濾泡組成，濾泡內(nèi)充滿膠質(zhì)并互相融合成囊，瘤間質(zhì)少；3例胎兒型腺瘤腫瘤組織主要由小而一致、僅含少量或無膠質(zhì)的小濾泡構(gòu)成，上皮細(xì)胞為立方形，似胎兒甲狀腺組織，間質(zhì)呈水腫粘液樣，易發(fā)生出血、囊性變。1例胚胎型腺瘤瘤細(xì)胞小大小一致，分化好，呈片狀或條索狀，偶見不完整小濾泡，無膠質(zhì)，間質(zhì)疏松呈水腫狀。

3.2 CK19在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達(dá)

表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，其中見棕黃色顆粒為陽性，兩者之間的差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

表1 CK19在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達(dá)

3.3 PCNA在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達(dá)

陽性細(xì)胞可顯示顆粒狀和彌漫性兩種類型核著色，腫瘤細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒為陽性，兩者之間的差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 PCNA在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達(dá)（%）

3.4 VEGF在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達(dá)

陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，陽性著色為棕黃色，呈顆粒狀，甲狀腺濾泡癌陽性表達(dá)率明顯高于甲狀腺腺瘤（P＜0.01）。見表3。

表3 VEGF在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達(dá)

3.5 TTF-1在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達(dá)

細(xì)胞核為其在甲狀腺表達(dá)部位，主要見于甲狀腺濾泡細(xì)胞，陽性胞核淡黃色，邊界清楚，散在分布；兩者結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表4。

表4 TTF-1在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織細(xì)胞中的表達(dá)

4.討論

4.1 CK19在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達(dá)意義

本實(shí)驗(yàn)表明，3例甲狀腺腺瘤患者弱陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為7.69%；甲狀腺濾泡癌中陽性表達(dá)強(qiáng)度（包膜浸潤處明顯）及表達(dá)率（92.31%）均明顯增強(qiáng)，說明CK19有助于區(qū)別甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤。在良性甲狀腺濾泡性病變組織中出現(xiàn)少量CK19明顯中強(qiáng)陽性，一定要仔細(xì)尋找原發(fā)灶，以免漏診[1]。

4.2 PCNA在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達(dá)意義

本實(shí)驗(yàn)表明，PCNA在甲狀腺濾泡癌與甲狀腺腺瘤中的陽性表達(dá)范圍未重疊，增殖指數(shù)分別為67.01%和8.26%，表明PCNA在甲狀腺濾泡癌中表達(dá)率較高，在甲狀腺腺瘤表達(dá)率較低，提示在鑒別診斷中敏感性較高。

甲狀腺濾泡癌PCNA陽性表達(dá)率高證明癌細(xì)胞增殖活性較高，甲狀腺腺瘤中陽性表達(dá)率低說明細(xì)胞增殖活性較低。其與腫瘤細(xì)胞分化有關(guān)，反映了細(xì)胞增殖活性與甲狀腺濾泡性腫瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系[2]。其增殖指數(shù)可作為判斷甲狀腺濾泡性腫瘤良惡性的參考指標(biāo)，可提供重要預(yù)后信息。

4.3 VEGF在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達(dá)意義

VEGF在甲狀腺癌生長和轉(zhuǎn)移中地位重要[3]，高水平表達(dá)并以旁分泌方式刺激甲狀腺癌血管生成，促進(jìn)甲狀腺癌發(fā)展。

本實(shí)驗(yàn)顯示，VEGF在甲狀腺濾泡癌和甲狀腺腺瘤的陽性表達(dá)率分別為65.38%和21.95%。VEGF高表達(dá)是疾病活躍標(biāo)志，在甲狀腺濾泡性腫瘤惡變中可起重要作用，有助鑒別診斷良惡性濾泡性腫瘤。

4.4 TTF-1在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達(dá)意義

TTF-1可特異性地在甲狀腺上皮或?yàn)V泡旁上皮細(xì)胞表達(dá)，且位于細(xì)胞核內(nèi)，是一種良好標(biāo)記物。

本實(shí)驗(yàn)表明，甲狀腺濾泡癌和甲狀腺腺瘤患者的PU值分別為（14.9±2.4）和（16.1±1.3），均能很好表達(dá)呈由高到低的趨勢，但兩組表達(dá)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與既往研究一致[4]?？梢娫摌?biāo)志物尚不能作為甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤的鑒別指標(biāo)。

綜上所述，聯(lián)合檢測CK19、PCNA和VEGF有助于提高甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤的診斷正確率，TTF-1在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中都能很好表達(dá)但對鑒別診斷幫助不大。當(dāng)懷疑惡性腫瘤來自甲狀腺時(shí)可檢測TTF-1表達(dá)情況，為腫瘤來源正確判斷提供參考。

[1]騰曉東，王麗君，姚洪田，等.細(xì)胞角蛋白19、gelectin- 3、HBME-1在甲狀腺病變上的表達(dá)及鑒別診斷意義[J].中華病理學(xué)雜志，2004，33（3）:212-216.

[2]孫青，鹿偉，張傳森，等.甲狀腺腫瘤增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的免疫組化研究[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21（1）:17-18.

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[4]魏正俐，姚紅，趙麗芹，等.甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1在甲狀腺良、惡性病變中表達(dá)的定量研究[J].中國藥物與臨床，2006，6（11）：809-812.

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1009-5624（2016）06-0178-03