基于氣機(jī)升降理論觀察旋復(fù)代赭湯及其拆方對(duì)RE模型大鼠AMPK的影響

田晶晶，楊幼新，袁紅霞，馬艷，許云姣

1.天津市南開(kāi)醫(yī)院消化內(nèi)科，天津 300100；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193

基于氣機(jī)升降理論觀察旋復(fù)代赭湯及其拆方對(duì)RE模型大鼠AMPK的影響

田晶晶1，楊幼新2，袁紅霞2，馬艷2，許云姣2

1.天津市南開(kāi)醫(yī)院消化內(nèi)科，天津 300100；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193

目的：觀察旋復(fù)代赭湯及其拆方對(duì)反流性食管炎（RE）模型大鼠腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）含量的影響。方法：將84只雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分成7組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、旋復(fù)代赭湯全方組及拆方各組（包括苦降組、甘升組、升降相因組)、西藥組（蘭索拉唑+莫沙必利），每組12只大鼠。對(duì)造模組大鼠采用“4.2 mm幽門(mén)夾+胃底2/3結(jié)扎術(shù)”制備反流性食管炎動(dòng)物模型。從造模術(shù)后7天開(kāi)始，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予生理鹽水灌胃，旋復(fù)代赭湯全方組及拆方各組分別給予相應(yīng)藥液，西藥組給予（蘭索拉唑+莫沙必利）灌胃，干預(yù)14天后，處死全部大鼠后，其中每組分別送2份大鼠食管組織制作線粒體超微結(jié)構(gòu)切片，應(yīng)用電鏡觀察食管下段黏膜組織線粒體超微結(jié)構(gòu)變化，其余食管組織勻漿后應(yīng)用ELISA測(cè)定AMPK含量的表達(dá)情況。結(jié)果：食管組織線粒體超微結(jié)構(gòu)：模型對(duì)照組大鼠電鏡下食管黏膜線粒體稀少，形態(tài)、大小不一，內(nèi)膜、外膜及嵴斷續(xù)模糊，部分線粒體呈腫脹、空泡化，偶見(jiàn)巨線粒體；旋復(fù)代赭湯全方組、西藥組較模型對(duì)照組改善（P＜0.05），甘升組、升降相因組較模型對(duì)照組也明顯改善（P＜0.05）；各組AMPK含量：旋復(fù)代赭湯全方組、西藥組較模型對(duì)照組降低（P＜0.05）；甘升組、升降相因組較模型組也降低（P＜0.05）。結(jié)論：旋復(fù)代赭湯及其藥物通過(guò)調(diào)節(jié)脾胃氣機(jī)，降低食管組織AMPK含量，促進(jìn)線粒體能量三磷酸腺苷（ATP）的生成代謝，增加線粒體數(shù)量，減少線粒體結(jié)構(gòu)及食管黏膜損傷，調(diào)節(jié)線粒體能量代謝，治療RE。

反流性食管炎（RE）；旋復(fù)代赭湯；拆方；氣機(jī)升降；能量代謝；腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）

反流性食管炎(RE)是消化系統(tǒng)常見(jiàn)病、多發(fā)病，癥狀復(fù)雜，病程較長(zhǎng)，具有反復(fù)發(fā)作、遷延不愈的特點(diǎn)，有向Barrett食管及食管腺癌發(fā)展的趨勢(shì)，成為目前亟待解決的消化系統(tǒng)慢性疾病之一。RE的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)仍以對(duì)癥治療為主[1]，主要藥物包括質(zhì)子泵抑制劑(PPI)、胃黏膜保護(hù)劑等，可以暫時(shí)改善反流癥狀，但癥狀容易復(fù)發(fā)，且具有一定的副作用，不能從根本上改善患者的生活質(zhì)量。筆者以中醫(yī)氣機(jī)升降理論為基礎(chǔ)，探討旋復(fù)代赭湯對(duì)RE大鼠線粒體能量代謝的影響。并根據(jù)中藥“升降浮沉”理論結(jié)合藥物功效，將旋復(fù)代赭湯進(jìn)行拆方分組，通過(guò)將旋復(fù)代赭湯全方及各拆方組分別作用于RE模型大鼠，從線粒體能量代謝角度研究該方治療RE的作用機(jī)制，闡釋脾胃氣機(jī)升降與線粒體能量代謝之間的關(guān)系，從線粒體能量代謝角度揭示了旋復(fù)代赭湯治療RE的作用機(jī)制及途徑，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)12周齡雄性Wistar大鼠84只，體重(200±20)g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)：MA-2014-111。飼養(yǎng)于天津市中西醫(yī)結(jié)合南開(kāi)醫(yī)院急腹癥研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，本實(shí)驗(yàn)室已獲得天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)頒發(fā)的資格認(rèn)證，具有Ⅱ級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)條件的合格證。購(gòu)入大鼠后，分籠架式飼養(yǎng)于鋼絲網(wǎng)蓋塑料籠內(nèi)，每籠5只，飼養(yǎng)室給予紫外線照射消毒，飼養(yǎng)籠予過(guò)氧乙酸消毒，室內(nèi)保持恒溫(22±2)℃，濕度為50%～60%，每天自由飲水及進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物，黑暗光照交替12 h，環(huán)境控制在規(guī)定范圍內(nèi)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及其制備 實(shí)驗(yàn)所需中藥使用天津紅日康仁堂藥品銷(xiāo)售有限公司提供的中藥顆粒劑，中藥顆粒劑在中藥材的選取、顆粒劑的生產(chǎn)和檢驗(yàn)中均根據(jù)《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求采取了相關(guān)的質(zhì)控措施，以保證藥物的質(zhì)量穩(wěn)定性。①旋復(fù)代赭湯全方：根據(jù)旋復(fù)代赭湯原方在《傷寒論》中的劑量換算，全方藥物組成和劑量為旋復(fù)花、炙甘草、大棗各15 g，代赭石5g，人參、清半夏各10 g，生姜25 g。藥物選用中藥顆粒劑，將按照規(guī)定劑量的中藥顆粒劑倒入容器內(nèi)，加熱水(水溫為80～100℃)約300 mL，充分?jǐn)嚢?。根?jù)人與動(dòng)物體表面積換算濃縮為1 mL藥液/100 g體重的濃縮液后給予全方組動(dòng)物灌胃。②拆方各組：苦降組由旋復(fù)花15 g，代赭石5 g組成；甘升組由人參10 g，炙甘草、大棗各15 g組成；升降相因組由清半夏10 g，生姜25 g組成。制備及換算方法同上。③西藥組(蘭索拉唑+莫沙必利混懸液)制備?？炝Α蹤此崮潮乩?購(gòu)自魯南貝特制藥有限公司)，蘭悉多——蘭索拉唑腸溶片(汕頭市經(jīng)濟(jì)特區(qū)鮀濱制藥廠)，用研缽搗碎，后研為極細(xì)粉末后，配制成濃度為0.15 mg/mL的蘭索拉唑+莫沙必利混懸液后裝瓶，按照藥品說(shuō)明書(shū)用量，根據(jù)人與大鼠體表面積換算配成1 mL藥液/100 g體重的濃縮混懸液，置4℃冰箱備用。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑 500 mL注射用生理鹽水(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司)，95%酒精(北京化工廠)，0.5%碘伏(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司)，10%水合氯醛(天津市化工二廠)，注射用左氧氟沙星(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司)，10%甲醛溶液(天津市化工二廠)，蘇木精、伊紅染色液(天津市化工二廠)；考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)；腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)測(cè)定試劑盒(上海酶聯(lián)生物研究所)。

1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器 常規(guī)手術(shù)器械(大鼠手術(shù)板、刮毛刀片、剪皮手術(shù)剪、小號(hào)手術(shù)剪、中號(hào)牙鑷、平鑷、大鼠腹部特制手術(shù)巾、動(dòng)脈夾、6/0帶針縫合線、眼科持針器、3/0縫線、1 mL及5 mL注射器等)(以上所用手術(shù)醫(yī)療器械為上海醫(yī)療器械廠產(chǎn)品)、寬度為3.0 mm的雙扁鐵心包扎線(夾心金屬直徑0.3 mm)、直徑為4.2 mm圓柱形鋼條(上海利康高科技消毒有限公司)。NOVEL光學(xué)顯微鏡，型號(hào)：XS2-106B(N)。萊卡(LEICA)超薄切片機(jī)，型號(hào)：EMUC6。日立透射電子顯微鏡，型號(hào)：H7650，由中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所提供。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組 將84只健康雄性Wistar大鼠，在同樣環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料常規(guī)適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后隨機(jī)分為7組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、旋復(fù)代赭湯全方組及拆方各組(包括苦降組、甘升組、升降相因組)、西藥組(蘭索拉唑+莫沙必利)，每組12只大鼠。除正常對(duì)照組外，其余各組(統(tǒng)稱造模組)大鼠造模應(yīng)用鄒方明[2]“4.2 cm幽門(mén)夾+胃底2/3結(jié)扎術(shù)”的方法進(jìn)行造模。

2.2 藥物干預(yù) ①正常對(duì)照組：12只大鼠與造模組同時(shí)開(kāi)始用生理鹽水按照100 g體重1 mL的比例灌胃，每天2次，與治療組(旋復(fù)代赭湯全方組、苦降組、甘升組、升降相因組、西藥組)同日處死。②模型對(duì)照組：12只大鼠按上述造模方法造模，于造模術(shù)后7天開(kāi)始用生理鹽水按照100 g體重1 mL的比例灌胃，每天2次，與治療組同日處死。③治療組：每組12只大鼠。于造模術(shù)后7天開(kāi)始，用相應(yīng)藥液按照100 g體重1 mL的比例灌胃，每天2次，經(jīng)治14天后，造模后第22天處死各組動(dòng)物進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

2.3 處死及取材 以上各組動(dòng)物處死前，均禁食24 h，不禁水，之后用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉，常規(guī)開(kāi)腹后迅速取出食管組織，每組取2份食管組織放于3%的戊二醛固定液，存于4℃的冰箱中備用以制備線粒體超微結(jié)構(gòu)切片，其余食管組織稱重后用生理鹽水制備10%食管勻漿，4℃，3500r/min，離心15 min，取上清待測(cè)。

2.4 檢測(cè)方法 ①食管黏膜超微結(jié)構(gòu)的觀察：取食管下端約0.5 cm×2 cm組織，迅速放入3%的戊二醛固定液中，防止組織自溶；梯度酒精逐級(jí)脫水12 h，石蠟包埋，運(yùn)用萊卡(LEICA)超薄切片機(jī)超薄切片，切片厚度約為50～60 nm，日立(H-7650)透射電子顯微鏡下進(jìn)行觀察食管黏膜細(xì)胞間隙和細(xì)胞間橋粒、半橋粒等緊密連接及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)改變。②食管組織AMPK含量的檢測(cè)：應(yīng)用ELISA雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平，測(cè)定過(guò)程均嚴(yán)格要求按照提供試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS for Windows 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料者，以()表示，多組間比較采用單因素方差分析(One-way anova)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)數(shù)資料，采用行×列χ2檢驗(yàn)。

4 結(jié)果

4.1 各組大鼠死亡原因分析 見(jiàn)表1。正常對(duì)照組大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)死亡，造模組72只大鼠共死亡12只，死亡率約為16.67%。其中5只死于幽門(mén)梗阻，1只死于腸梗阻，4只死于腹腔感染，2只死于肺部感染。剩余大鼠各組為模型對(duì)照組9只、旋復(fù)代赭湯全方組11只，拆方各組(包括苦降組9只、甘升組10只、升降相因組10只)、西藥組11只。各組大鼠具體死亡情況，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示：模型對(duì)照組、苦降組大鼠死亡率最高，甘升組、升降相因組次之，西藥組、旋復(fù)代赭湯全方組最低；其中旋復(fù)代赭湯全方組、西藥組與模型對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；甘升組、升降相因組大鼠死亡率相同，與其他各組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；苦降組大鼠死亡率與模型對(duì)照組相同，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

4.2 旋復(fù)代赭湯及其拆方對(duì)RE模型大鼠食管黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響 透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，食管黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)病變最常見(jiàn)的是線粒體數(shù)量和結(jié)構(gòu)的改變。線粒體數(shù)量的改變包括線粒體的增多和減少；線粒體結(jié)構(gòu)的變化包括線粒體的外形和內(nèi)部結(jié)構(gòu)的改變，外形的改變有線粒體的腫脹變性、濃縮變性和巨線粒體形成，內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化包括嵴被破壞、線粒體崩解時(shí)產(chǎn)生的無(wú)定形電子致密物等等。①正常對(duì)照組在透射電子顯微鏡下顯示食管黏膜線粒體呈橢圓形或桿狀，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞線粒體豐富，形態(tài)大小正常，線粒體內(nèi)膜向內(nèi)折疊而成嵴，內(nèi)膜及外膜清晰、結(jié)構(gòu)良好，嵴排列整齊，線粒體基質(zhì)致密，未見(jiàn)腫脹、空泡、濃縮和巨線粒體。②模型對(duì)照組線粒體稀少，形態(tài)異常，大小不均勻，內(nèi)膜及外膜斷續(xù)模糊、增厚，嵴不規(guī)則，多數(shù)線粒體嵴排列紊亂，甚至部分線粒體膜和嵴完全崩解、斷裂、溶解，大部分線粒體基質(zhì)淺淡，多數(shù)線粒體腫脹、呈空泡化，偶爾可見(jiàn)巨線粒體。③旋復(fù)代赭湯全方組線粒體豐富，形態(tài)正常，大小均勻，膜和嵴比較清晰，嵴排列整齊，線粒體基質(zhì)致密，未見(jiàn)線粒體空泡、濃縮等明顯損傷。④西藥組線粒體較豐富，形態(tài)大小尚均勻，包膜和嵴仍清晰可見(jiàn)，線粒體基質(zhì)致密，未見(jiàn)腫脹、空泡化和巨線粒體。⑤甘升組線粒體數(shù)量相對(duì)較少，形態(tài)大小不太均勻，線粒體包膜尚清晰，部分嵴斷續(xù)模糊，線粒體基質(zhì)尚致密，未見(jiàn)腫脹、空泡化和巨線粒體。⑥升降相因組線粒體數(shù)量中等，形態(tài)大小尚均，部分線粒體包膜和嵴顯示不清晰，可見(jiàn)少許包膜和嵴斷裂，局部線粒體基質(zhì)密度降低，未見(jiàn)腫脹、空泡化和巨線粒體。⑦苦降組線粒體數(shù)量稀少，線粒體形狀、大小不一，大部分線粒體呈現(xiàn)不同程度的腫脹，大部分線粒體嵴斷裂、變短、稀疏甚至消失，大部分基質(zhì)密度降低，呈腫脹、空泡狀，未見(jiàn)巨線粒體。

表1 各組大鼠死亡原因分析 例

4.3 各組大鼠RE電鏡（×10萬(wàn)倍視野）下線粒體超微結(jié)構(gòu)受損情況 見(jiàn)表2。與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠食管黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)受損明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；旋復(fù)代赭湯全方組、西藥組食管黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)受損較模型對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，旋復(fù)代赭湯全方組較西藥組稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；甘升組、升降相因組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；苦降組食管黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)受損較模型對(duì)照組稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與旋復(fù)代赭湯全方組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 各組大鼠線粒體數(shù)目()

表2 各組大鼠線粒體數(shù)目()

與正常對(duì)照組比較，①P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，②P＜0.05；與旋復(fù)代赭湯全方組比較，③P＜0.05

實(shí)驗(yàn)分組正常對(duì)照組模型對(duì)照組西藥組旋復(fù)代赭湯全方組甘升組苦降組升降相因組視野數(shù)( n ) 8 8 8 8 8 8 8線粒體數(shù)目(個(gè)/高倍視野) 1 5 . 0 0 ± 1 . 1 5 2 . 0 0 ± 0 . 5 8①1 0 . 5 6 ± 1 . 0 1②1 0 . 5 6 ± 1 . 1 3②6 . 0 0 ± 0 . 7 6②2 . 4 3 ± 0 . 7 9③5 . 5 0 ± 0 . 9 2②

4.4 旋復(fù)代赭湯及其拆方對(duì)RE模型大鼠食管黏膜組織AMPK含量的影響 見(jiàn)表3，圖1。與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠食管組織AMPK的含量提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；旋復(fù)代赭湯全方組、西藥組大鼠食管組織AMPK的含量較模型對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，旋復(fù)代赭湯全方組較西藥組稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；甘升組、升降相因組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；苦降組大鼠食管組織AMPK的含量較模型對(duì)照組稍有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與旋復(fù)代赭湯全方組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 各治療組對(duì)RE大鼠食管組織AMPK含量影響()nmol/mg prot

表3 各治療組對(duì)RE大鼠食管組織AMPK含量影響()nmol/mg prot

與正常對(duì)照組比較，①P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，②P＜0.05；與旋復(fù)代赭湯全方組比較，③P＜0.05

實(shí)驗(yàn)分組正常組模型組西藥組旋復(fù)代赭湯全方組甘升組苦降組升降相因組n 1 0 7 9 9 8 7 8 A M P K 6 . 2 5 ± 3 . 4 2 4 1 . 8 2 ± 9 . 4 6①1 3 . 9 2 ± 3 . 6 7②1 3 . 4 2 ± 3 . 3 7②2 5 . 6 4 ± 6 . 8 4②4 1 . 3 6 ± 1 0 . 6 0③2 6 . 7 8 ± 4 . 5 4②

圖1 AMPK含量離散曲線

5 討論

RE可中醫(yī)學(xué)屬吐酸、吞酸、嘈雜、胃痞等范疇。脾胃是氣機(jī)升降的樞紐，“氣血生化之源”。線粒體是細(xì)胞的“動(dòng)力工廠”，是細(xì)胞的“氣血生化之源”，有研究[3]證明，脾虛證大鼠模型，細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)受損。益氣健脾中藥能修復(fù)線粒體損傷。

旋復(fù)代赭湯順應(yīng)了脾升胃降的生理特點(diǎn)，方中旋復(fù)花能下氣消痰、降逆除噫，代赭石善降逆，二者皆味苦性降，同俱降逆除噯之功，故將其分為苦降組；半夏、生姜配伍，為仲景之常用組合——小半夏湯，二者性味辛溫，皆俱升、降之性，可謂升降相因，故將其分為升降相因組；人參、炙甘草、大棗味甘補(bǔ)益脾氣，三者皆俱健脾益氣之功，故將其分為甘升組。三組相合使脾虛得補(bǔ)，脾氣健運(yùn)，從而使脾氣得升，脾之清氣得升則胃之痰濁得降，清升濁降則病除，可謂仲景運(yùn)用“脾胃氣機(jī)升降”理論組方配伍的典型代表。

能量代謝是指生物體內(nèi)物質(zhì)代謝過(guò)程中伴隨的能量變化規(guī)律，是機(jī)體一切生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。三磷酸腺苷(ATP)是體內(nèi)最主要的高能磷酸化合物，組織細(xì)胞所需要的能量由ATP直接提供的，例如肌肉的收縮和舒張、細(xì)胞的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，都需要ATP提供的自由能。腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)被稱為“細(xì)胞能量調(diào)節(jié)器”它能感知細(xì)胞能量代謝的改變，參與調(diào)節(jié)機(jī)體整體的能量消耗和攝入，維持細(xì)胞能量供求平衡，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)能量缺失時(shí)，AMPK被磷酸化激活，抑制消耗ATP的合成代謝過(guò)程，啟動(dòng)生成ATP的分解代謝過(guò)程[4]。肌肉的收縮主要是由ATP的水解直接供給能量，線粒體為肌肉的收縮提供了可靠的能量保證。如果肌肉組織中線粒體數(shù)目過(guò)少或形態(tài)功能異常，則無(wú)法產(chǎn)生足夠的ATP以維持肌肉收縮所需，從而導(dǎo)致肌肉收縮功能不能正常發(fā)揮。

實(shí)驗(yàn)證明RE模型大鼠食管黏膜組織中AMPK含量升高，使食管組織中線粒體數(shù)目減少及形態(tài)功能異常，線粒體的氧化磷酸化受阻，使ATP的生成代謝減少，以致生成的ATP不足以維持食管肌肉收縮所需，從而導(dǎo)致食管下括約肌的舒縮功能不能正常發(fā)揮，食管下括約肌壓力降低，食管下括約肌(LES)的抗反流的屏障作用減弱，從而導(dǎo)致RE。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，旋復(fù)代赭湯治療反流性食管炎的療效是確切的，并且各拆方組都有一定程度的治療作用，其作用機(jī)理可能為旋復(fù)代赭湯各組分通過(guò)不同的作用途徑，作用靶點(diǎn)調(diào)節(jié)食管組織線粒體能量代謝，甘升組補(bǔ)氣健脾，使清氣上升，以促進(jìn)線粒體能量代謝ATP的生成，凡是含有甘升組皆起正性作用；苦降組降氣止逆，暫時(shí)可抑制反流，但不能保護(hù)食管黏膜免受傷害；而升降相因組辛開(kāi)降逆，升降協(xié)調(diào)，使清者自升，濁者自降，辛溫之性可促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，即可抑制反流，也可逆轉(zhuǎn)黏膜線粒體超微結(jié)構(gòu)的破壞；而全方組辛開(kāi)、降逆、甘補(bǔ)并用，標(biāo)本兼顧，升降兼施，使脾氣升，胃氣降，順應(yīng)了脾胃氣機(jī)升降的生理特點(diǎn)，共奏“益氣健脾，降逆化痰”之功，且祛邪而不傷正，扶正不致壅滯，故對(duì)各指標(biāo)的正性影響均優(yōu)于其他組，提示各藥物組合用，各司其職，各盡其能，扶正祛邪，調(diào)節(jié)氣機(jī)，為相互加成效應(yīng)，且可彼此抑制不良反應(yīng)。

綜上所述，旋復(fù)代赭湯通過(guò)益氣健脾，調(diào)理脾胃氣機(jī)升降，降低食管組織AMPK含量，起到調(diào)節(jié)線粒體能量代謝的作用，從而改善食管下括約肌的舒縮功能，減少胃和十二指腸內(nèi)容物反流的發(fā)生，從而減少炎癥因子刺激，促進(jìn)食管黏膜損傷的恢復(fù)。從線粒體能量代謝的科學(xué)角度揭示了旋復(fù)代赭湯對(duì)RE的作用機(jī)制之一，為RE新的治療策略提供理論指導(dǎo)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)分會(huì)．RE診斷及治療指南(2003年)[J]．中華消內(nèi)鏡雜志，2004，21(4)：221-222．

[2]鄒方明．慢性反流性食管炎大鼠模型的建立及5-羥色胺4受體激動(dòng)劑的抗食管黏膜炎癥作用[D]．福建：福建醫(yī)科大學(xué)，2012．

[3]劉友章，王昌俊，周俊亮，等．長(zhǎng)期脾虛模型大鼠細(xì)胞線粒體的研究[J]．中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24(3)：391．

[4]Viollet B， Andreelli F， Jorgensen SB， et al．The AMP-activated protein kinase α2 catalytic subunit controls whole-body insulin sensitivity[J]．J ClinInvest，2003，111：91-98．

（責(zé)任編輯：劉淑婷）

Observation of Xuanfu Daizhe Tang and Its Separated Prescription on AMPK of RE Model Rat on the Basis of Qi Ascending and Descending Movement Theory

TIAN Jingjing，YANG Youxin，YUAN Hongxia，MA Yan，XU Yunjiao

Objective：To observe the effect of Xuanfu Daizhe tang and its separated prescription on amount of adenosine monophosphate activated protein kinase(AMPK)of reflux esophagitis(RE)model rat.Method：Eighty-four male Wistar rat were divided into 7 groups randomly，that were normal control group，model control group，Xuanfu Daizhe tang group and its separated prescription groups(including bitter descending group，sweet ascending group，interdependence group between ascending and descending)，western medicine group(lansoprazole+mosapride)，12 rats in each group.Prepared RE animal model by 4.2mm pylorus clamp+2/3 of fundus ligation for model group rats.Seven days after model building，the rats in the normal control group and the model control group were gavaged with normal saline，the rats in Xuanfu Daizhe tang group and its separated prescription groups were respectively given corresponding drug，the rats in western medicine group were gavaged with lansoprazole+mosapride.All rats were killed after 14 days of intervention，extracted 2 pieces of rats'esophageal tissue for making mitochondria ultrastructure sections from every group，and observed mitochondria ultrastructure changes of mucous tissue on lower esophagus by electron microscope，tested AMPK amount expression by ELISA after esophageal tissue homogenate.Result：The esophageal tissue mitochondria ultrastructure：the esophageal mucosa mitochondria of rats in model control group was rare and different in form and size，intima，adventitia and ridge were intermittent and vague，part of mitochondria swelled and vacuolation，giant mitochondria were observed occasionally.Compared with the model group，Xuanfu Daizhe tang group and western medicine group were improved(P＜0.05)，sweet ascending group and interdependencegroup between ascending and descending were also improved obviously(P＜0.05).The amount of AMPK in Xuanfu Daizhe tang group，western medicine group were decreased obviously(P＜0.05 compared with the model group)，sweet ascending group，interdependence group between ascending and descending were also decreased(P＜0.05).Conclusion：By adjusting Qi movement of spleen and stomach，Xuanfu Daizhe tang and its drugs can reduce the AMPK amount of esophageal tissue，promote metabolism of ATP of mitochondria energy，reduce damages of mitochondria structure and esophageal mucosa，adjust energy metabolism of mitochondria，and treat RE.

Reflux esophagitis；Xuanfu Daizhe tang；Qi ascending and descending movement；Energy metabolism；Adenosine monophosphate activated protein kinase(AMPK)

R574.4

A

0256-7415（2016）03-0230-05

10.13457/j.cnki.jncm.2016.03.090

2015-12-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81173243）

田晶晶（1981-），女，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療消化疾病。

楊幼新，E-mail：youxin_yang@hotmail.com。