淺談進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測在診斷宮頸病變中的效果

譚夏明 趙鳴春

（廣西桂林市人民醫(yī)院 廣西 桂林 541002）

宮頸病變是婦科臨床上的常見病。此病嚴重威脅女性的生命健康。此類疾病主要包括宮頸糜爛、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和宮頸癌（CC）。研究發(fā)現(xiàn)，宮頸病變的發(fā)生與HPV感染密切相關(guān)[1]。目前，臨床上對宮頸病變患者通常進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測，以明確其宮頸病變的類型及程度，進而對其進行有針對性的治療。為了進一步分析進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測在診斷宮頸病變中的效果，筆者進行了本次研究?，F(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院于2014年9月～2015年9月期間收治的76例宮頸病變患者，將其作為本次研究的對象。這些患者的平均年齡為（47.5±15.3）歲，其平均體重為（52.8±7.8）kg，其平均病程為（7.9±3.3）年。這些患者均自愿參加本次研究。本次研究排除服用激素進行治療、患有乳腺癌及尖銳濕疣的患者。對這76例患者均進行陰道鏡活檢。其中，有2例宮頸糜爛患者，有7例CINⅠ患者，有11例CINⅡ患者，有25例CINⅢ患者，有31例宮頸癌患者。

1.2 檢測方法 對這76例患者均進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測。具體的檢測方法如下：①使用第二代雜交捕獲實驗技術(shù) (HC2) 對這些患者宮頸的分泌物進行HPVDNA負荷量的檢測。當(dāng)標(biāo)本中HPV-DNA的含量＜1 pg/ml即RLUS/CO值 ＜1時，說明該檢測結(jié)果為陰性，反之為陽性。②用凱普生物化學(xué)科技公司生產(chǎn)的HPV核酸擴增分型檢測試劑對這些患者宮頸的分泌物進行HPV基因分型的檢測。用宮頸采樣器收集患者宮頸處的分泌物，通過離心、洗滌、沉淀、酶學(xué)處理、雜交等步驟，提取患者的DNA，將其作為PCR的模板。40個周期以后，提取PCR的產(chǎn)物，對其進行反向點雜交處理，加入底物顯色后進行分析。該方法可檢測出21種常見的HPV亞型，其中包括13種高危 型 HPV (HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)、5 種低危型 HPV (HPV 6、11、42、43、44)及3種常見的HPV亞型(HPV 53、66及CP8304)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對本研究中的數(shù)據(jù)進行分析，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對這76例患者進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測的結(jié)果顯示，在這些患者中，有4例宮頸糜爛患者，有9例CINⅠ患者，有11例CINⅡ患者，有15例CINⅢ患者，有37例宮頸癌患者。這76例患者均出現(xiàn)HPV感染，其感染的類型主要為單一感染，其感染HPV的基因型主要為HPV16?；颊逪PV-DNA 的負荷量越大，其病情越嚴重。詳細數(shù)據(jù)如表1、表2所示：

表1對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結(jié)果（±s）

表1對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結(jié)果（±s）

疾病類型 樣本數(shù) 陽性率( %)HPV基因型( 例)感染類型( 例/%)低危型 高危型 單一感染 多重感染宮頸糜爛 4 5.3% 1 3 3/75% 1/25%CINⅠ 9 11.8% 4 5 5/55.6% 4/44.4%CINⅡ 11 14.5% 4 7 7/63.6% 4/36.4%CINⅢ 15 19.7% 4 11 9/60% 6/40%宮頸癌 37 48.7% 6 31 25/67.6% 12/32.4%

表2 對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結(jié)果（±s）

表2 對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結(jié)果（±s）

1000以上（RLU/CO）宮頸糜爛 4 2/50% 1/25% 1/25% 0/0 CINⅠ 9 2/22.2% 4/44.4% 2/22.2% 1/11.1%CINⅡ 11 2/18.2% 2/18.2% 3/27.3% 4/36.4%CINⅢ 15 1/6.7% 3/20% 4/26.7% 7/46.7%宮頸癌 37 1/2.7% 5/13.5% 9/24.3% 22/59.5%HPV-DNA 的負荷量( 例/%)1 ～ 100（RLU/CO）樣本數(shù)疾病類型101～500（RLU/CO）501～1000（RLU/CO）

3 討論

HPV是一種球形DNA病毒。此病毒會引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮細胞出現(xiàn)增生。宿主一旦感染此病毒，會終身攜帶。HPV主要是通過性接觸進行傳播。相關(guān)調(diào)查的結(jié)果顯示，在所有頻繁進行性行為的成年人中，超過50%的人至少感染過一種HPV。其中，女性感染HPV的幾率明顯高于男性。當(dāng)機體免疫系統(tǒng)的能力不足，但可以抑制病毒的復(fù)制時，HPV病毒和機體的免疫系統(tǒng)相互制約，可以達到一種平衡的狀態(tài)[2]。此時，宿主體內(nèi)的HPV病毒不表達。在所有的HPV感染者中，約有10%的HPV感染者其發(fā)病原因為機體的免疫力低下。此類感染者的機體既不能有效地清除HPV，也無法抑制HPV的復(fù)制，這導(dǎo)致其HPV感染不斷加重。隨著患者病情的不斷發(fā)展，HPV持續(xù)侵犯其機體正常的組織和器官，當(dāng)?shù)竭_一定的程度時，患者會出現(xiàn)HPV感染的癥狀。

宮頸癌是臨床上一種常見的惡性腫瘤。此病的發(fā)病率位于女性生殖道惡性腫瘤的首位。近年來，此病的發(fā)病率逐漸升高，且患者的年齡呈年輕化表現(xiàn)。從宮頸癌前病變發(fā)展為宮頸癌是一個漫長的過程（時間多在10年以上），因此，對宮頸癌前病變患者進行早期篩查，為其采取有效的方法進行治療，可以避免其病情發(fā)展為宮頸癌[3]。研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染是誘發(fā)宮頸癌前病變及宮頸癌的重要原因。HPV感染的發(fā)生機制為：HPV侵犯機體后，其裸露的DNA利用機體的堿基等資源開始進行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及翻譯，從而產(chǎn)生蛋白質(zhì)E1、E2、E4、E5、E6、E7及其亞型，這些表達產(chǎn)物入駐患者宮頸的上皮細胞，進而生成癌基因，并產(chǎn)生癌蛋白。機體的原癌基因和抑癌基因開始表達，正常的細胞周期被破壞，細胞分裂開始不受機體的控制，并出現(xiàn)惡性增殖和基因突變的情況，其分化程度呈多樣性，其表達的產(chǎn)物隨之發(fā)生改變。因此疾病的發(fā)生和發(fā)展均與基因的表達密切相關(guān)，所以臨床上多通過檢測病毒的表達產(chǎn)物來對宮頸病變患者的病情進行診斷。

宮頸癌患者主要感染的是高危型HPV，即對此病患者宮頸的分泌物進行HPV-DNA檢測時，可以檢測到HPV 16、18、31等15種病毒亞型，其中以HPV 16最為常見。HPV 感染的類型主要包括單一感染和多重感染，臨床上以單一感染最為常見。微生物因素和微生態(tài)環(huán)境因素均是誘發(fā)HPV感染的重要原因。本次研究的結(jié)果顯示，CIN 及宮頸癌患者HPV 感染的類型主要為單一感染，但不排除多重感染的可能，初步判斷HPV 感染的發(fā)生與患者陰道內(nèi)的菌群失調(diào)有關(guān)。

總之，對宮頸病變患者進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測，可以明確地判斷出患者宮頸病變的類型及程度。此檢測方法具有較高的臨床應(yīng)用價值。

[1] 季冰,何浪馳,郭芝亮，等. HC2-HPV-DNA檢測在宮頸癌病變中的臨床分析[J].實用癌癥雜志,2015,30(6):843-845.

[2] 陳霞,楊靜秀,吳曉燕.HPV不同亞型在中重度宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌中的分布及臨床意義[J].中國婦幼保健,2014,29:3402-3403.

[3] 傅景萍. HPV感染結(jié)合負荷量檢測對宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變的診斷價值[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2015,27(2):205-208.