應(yīng)用遙測(cè)技術(shù)對(duì)SHR大鼠血壓、心率變異性月齡動(dòng)態(tài)變化和性別差異的研究

研究報(bào)告

應(yīng)用遙測(cè)技術(shù)對(duì)SHR大鼠血壓、心率變異性月齡動(dòng)態(tài)變化和性別差異的研究

張利棕1，潘水珍2，周衛(wèi)民1，潘永明1，徐孝平1，壽旗揚(yáng)1，陳民利1

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，杭州310053；2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院安全性評(píng)價(jià)研究中心，杭州310053)

【摘要】目的應(yīng)用植入式遙測(cè)技術(shù)觀察不同周齡和性別自發(fā)性高血壓大鼠的清醒無(wú)束縛狀態(tài)下血壓和心率變異性的變化。方法取16只雌雄各半SPF級(jí)3月齡SHR大鼠，進(jìn)行TL11M2-C50-PXT植入手術(shù)后恢復(fù)7 d開(kāi)始實(shí)驗(yàn)， 在SHR大鼠3、5、7月齡時(shí)分別進(jìn)行24 h連續(xù)清醒無(wú)束縛的血壓和心電監(jiān)測(cè)，計(jì)算24 h的收縮壓、平均壓、舒張壓、血壓變異性和心率變異性各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果SHR大鼠隨著月齡增加而24 h收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異性升高，雌性SHR大鼠血壓變異性明顯低于雄性。3、5、7月齡雄性SHR大鼠心率變異性相關(guān)指標(biāo)之間比較無(wú)明顯變化，但雌性SHR大鼠隨著月齡增加而RR間期、SDNN、TP、VLF和HF明顯升高，且雌性SHR大鼠TP、VLF和HF等心率變異性指標(biāo)均低于雄性。結(jié)論隨著SHR大鼠周齡增加而血壓、血壓變異性升高，且雌性SHR大鼠血壓變異性和心率變異性明顯低于雄性。

【關(guān)鍵詞】遙測(cè)技術(shù)；自發(fā)性高血壓大鼠；血壓變異性；心率變異性

[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)

[作者簡(jiǎn)介]張利棕(1981-)，男，助理研究員，研究方向：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和比較醫(yī)學(xué)，E-mail: 27595352@qq.com。

[通訊作者]壽旗揚(yáng)(1979-)，男，副研究員，研究方向：比較醫(yī)學(xué)，E-mail: sqy133@126.com。

【中圖分類號(hào)】R332【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.001.003

Study on dynamic changes and gender difference of heart rate

variability and blood pressure variability via implantable telemetry

technology in spontaneously hypertensive rats

ZHANG Li-zong1，PAN Shui-zhen2，ZHOU Wei-min1，PAN Yong-ming1，XU Xiao-ping1，SHOU Qi-yang1，CHEN Min-li1

(1.Zhejiang Chinese Medical University Laboratory Animal Research Center, Hangzhou 310053,China;

2.Drug Safety Evaluation Center, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310053,China)

Abstract【】ObjectiveTo observation dynamic changes and gender difference of heart rate variability and blood pressure variability in unbonded spontaneously hypertensive rats using Telemetry technology. Method Taking sixteen spontaneously hypertensive rats of 3-month-old in SPF grade, there were implanted TL11M2-C50-PXT device intraperitoneally. Seven days later, respectively monitoring chainless blood pressure and electrocardiogram for 24 h continuously time using telemetry system when 3, 5, 7 months of age in spontaneously hypertensive rats. Analysing 24 h systolic pressure, mean blood pressure, diastolic blood pressure, heart rate variability and blood pressure variability. ResultSystolic pressure, diastolic pressure and mean pressure, blood pressure variability increased with age of the moon increased in spontaneously hypertensive rats, moreover female SHR rats of blood pressure variability was significantly lower than that of the male rats. Correlated indexes of heart rate variability had no obvious change Between three to seven month-old in male spontaneously hypertensive rats. But RR interval, SDNN, TP, VLF and HF increased significantly with age of the moon increased in female spontaneously hypertensive rats, moreover the female SHR rats of TP, VLF and HF index of heart rate variability were lower than the male rats. Conclusion With the SHR rats age and blood pressure, blood pressure variability increased, and the female SHR rat variability in blood pressure and heart rate was significantly lower than that of the male.

【Key words】Telemetry；Spontaneously hypertensive rat；Heart rate variability；Blood pressure variability

高血壓病是嚴(yán)重危害人類健康的一種常見(jiàn)疾病，而植物神經(jīng)功能紊亂在高血壓病的發(fā)病機(jī)制及病情判斷中具有重要意義。而心率變異性((heart rate variability，HRV)是一項(xiàng)定量評(píng)價(jià)自主神經(jīng)系統(tǒng)功能的新方法，HRV分析研究的是心率快慢變化差異及變化規(guī)律，具體表現(xiàn)為逐次心動(dòng)周期之間的時(shí)間變異數(shù)，從而反映出植物神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)心血管活動(dòng)的影響?，F(xiàn)已證實(shí)刺激迷走神經(jīng)時(shí)，HRV 隨之增高；刺激交感神經(jīng)時(shí)，HRV 隨之下降[1]。

血壓并非是個(gè)穩(wěn)定的常數(shù)，而是隨時(shí)間變化而改變的變量。在心臟每搏間，血壓存在有微小差異，這種波動(dòng)即為血壓變異性(blood pressure variability, BPV)，是靶器官損害獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。BPV通常采用24 h的短時(shí)變異來(lái)表示，目前大鼠的24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)方法有無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈尾套法、PE導(dǎo)管動(dòng)脈插管法和植入子遙測(cè)法，但無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈尾套法存在著不能實(shí)時(shí)測(cè)定血壓，對(duì)于血壓的急劇變化容易造成遺漏，大鼠受加溫、束縛、尾部加壓等操作刺激的影響，處于一定的緊張狀態(tài)，所測(cè)血壓值要高于自由活動(dòng)狀態(tài)下的血壓值[3-4]；而PE導(dǎo)管動(dòng)脈插管法也存在缺點(diǎn)有：導(dǎo)管順應(yīng)性和導(dǎo)管過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致動(dòng)態(tài)響應(yīng)較差，會(huì)致使血壓結(jié)果不精確、不可靠；外置導(dǎo)管引起傷口外露和推注肝素化生理鹽水，都會(huì)引起動(dòng)物的感染；PE導(dǎo)管皮下隧道和馬甲限制了動(dòng)物自由活動(dòng)，而且導(dǎo)管會(huì)牽拉自身皮膚和肌肉產(chǎn)生疼痛。因此本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用植入式遙測(cè)技術(shù)對(duì)不同月齡和性別的SHR大鼠的血壓變異性和心率變異性的研究，為臨床前抗高血壓藥物篩選和評(píng)價(jià)提供SHR大鼠血壓、心率變異性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SHR大鼠，雌雄各半，16只；北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司【SCXK(京)2012-0001】。無(wú)菌手術(shù)在浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心SPF級(jí)屏障實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行【SYXK(浙)2008-0115】。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用3R原則給予人道的關(guān)懷。術(shù)后每只大鼠稱重、標(biāo)記編號(hào)并單籠飼養(yǎng)以防相互干擾遙測(cè)信號(hào)。

1.2儀器及試劑

DEM小動(dòng)物生理信號(hào)遙測(cè)系統(tǒng)、TL11M2-C50-PXT遙測(cè)植入子、纖維蛋白膜(美國(guó)DSI)；生理遙測(cè)系統(tǒng)-心電分析軟件(法國(guó)EMKA)；AWS臺(tái)式呼吸麻醉機(jī)、動(dòng)物恒溫水泵(美國(guó)Hallowell)；異氟烷(山東魯南貝特制藥)；生物膠(美國(guó)3M)；其它物品：戊二醛、碘伏消毒液、顯微鑷、導(dǎo)管鑷和常規(guī)手術(shù)器械等。

1.3方法

1.3.1TL11M2-C50-PXT植入子植入手術(shù)

1.3.1.1手術(shù)準(zhǔn)備、麻醉、固定：手術(shù)器械和物品滅菌消毒。大鼠置于誘導(dǎo)箱用3%異氟烷進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉后，1.5%異氟烷面罩維持麻醉并固定于保溫臺(tái)，保持溫度在37℃～38℃。腹部和胸部剃毛、用碘伏和75%酒精常規(guī)消毒。

1.3.1.2植入體主體的植入

沿腹中線作4～6 cm 的切口，用牽引器拉開(kāi)切口，用生理鹽水潤(rùn)濕的醫(yī)用紗棉將腹腔內(nèi)的腸道推至四周，用消毒棉簽分離腹主動(dòng)脈的周圍脂肪和連接組織。從腹主動(dòng)脈上清除殘留的組織。從無(wú)菌生理鹽水中取出TL11M2-C50-PXT植入體(預(yù)先浸泡15 min以上)。從腹主動(dòng)脈下方穿過(guò)2號(hào)縫合線，用縫合線打結(jié)后稍微拉起動(dòng)脈以暫時(shí)阻斷動(dòng)脈血流。用21號(hào)針已彎折的尖端部分穿破主動(dòng)脈。將導(dǎo)管輕輕插入血管1～2 cm。用生物膠和纖維膜粘合血管，15 s后輕輕松開(kāi)阻斷主動(dòng)脈血液的縫合線。用棉簽從腹腔外輕輕向內(nèi)推壓腹部，使腸道恢復(fù)原位，將植入體植入已打開(kāi)的腹腔內(nèi)，并使植入體上的縫線固定脊朝上放置。在電極的放置部位處開(kāi)一個(gè)小口。用硬質(zhì)通路管從皮下引出一條通路，通路管從腹腔切口處穿入，經(jīng)過(guò)皮下從距導(dǎo)聯(lián)放置點(diǎn)切口1 cm處穿出。用14號(hào)針將導(dǎo)聯(lián)電極從腹腔內(nèi)引出后，放置于正確的心電測(cè)定位置。用手術(shù)線將電極固定于肌肉組織。用3號(hào)手術(shù)線不連續(xù)性地縫合傷口。手術(shù)后3 d內(nèi)，每天腿部肌注青霉素(4萬(wàn)U/只)防止感染。手術(shù)7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

圖1　TL11M2-C50-PXT腹腔內(nèi)放置位點(diǎn) 和信號(hào)發(fā)射示意圖 Fig.1　TL11M2-C50-PXT intraperitoneal implant site and sketch map of transmitting signal

1.3.2數(shù)據(jù)采集分析和觀察指標(biāo)

所有信號(hào)將通過(guò)以無(wú)線的方式傳送給信號(hào)接收裝置，在SHR大鼠3、5、7月齡時(shí)用DSI遙測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行遙測(cè)監(jiān)測(cè)，檢測(cè)24 h的血壓。并用EMKA “ECG-Auto”V2.6.0.10分析軟件對(duì)心率變異性、動(dòng)態(tài)血壓均值、血壓變異系等指標(biāo)進(jìn)行分析。時(shí)域指標(biāo)：RR間期、RR 間期標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、相鄰RR間期差值平方和的均方根(RMSSD)；FFT功率譜分析，頻域指標(biāo)：極低頻功率(VLF)：0.04-0.2 Hz；低頻功率(LF)：0.2-0.75 Hz；高頻功率(HF)：0.75-3.0 Hz，總功率(TP)；心率、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)平均壓(MBP)等。

1.3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1 不同月齡、性別SHR大鼠血壓和變異系數(shù)(BPV)變化

由表1可知，SHR大鼠隨著月齡增加而收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異系數(shù)升高，7月齡、5月齡SHR大鼠收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異系數(shù)明顯高于3月齡SHR大鼠(P<0.01)，7月齡SHR大鼠收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異系數(shù)明顯高于5月齡SHR大鼠(P<0.01)。雌性、雄性SHR大鼠在同一時(shí)間段收縮壓、平均壓和舒張壓無(wú)明顯差異(P>0.05)而雌性SHR大鼠在三個(gè)月齡段血壓變異系數(shù)明顯低于雄性SHR大鼠(P<0.01)。

2.2不同月齡、性別SHR大鼠心率、RR間期、RR 間期標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、相鄰RR間期差值平方和的均方根(RMSSD)變化

由表2可知，雄性SHR大鼠隨著月齡增加而心率略微升高，7月齡SHR大鼠心率高于5月齡SHR大鼠(P<0.05)；但雌性SHR大鼠隨著月齡增加而心率降低，7月齡SHR大鼠心率低于5月齡SHR大鼠(P<0.01)；且在3月齡和5月齡段雌性SHR大鼠心率顯著高于雄性SHR大鼠(P<0.01)。雄性SHR大鼠隨著月齡增加而RR間期、SDNN和RMSSD無(wú)明顯變化；但雌性SHR大鼠隨著月齡增加而RR間期、SDNN和RMSSD明顯升高，在7月齡時(shí)雌性SHR大鼠RR間期、SDNN和RMSSD明顯高于3月齡和5月齡的雌性SHR大鼠(P<0.01)，且雌性SHR大鼠的RR間期、SDNN和RMSSD均顯著低于雄性SHR大鼠(P<0.01)。

表1　不同月齡、性別SHR大鼠血壓的變化

注：與3月齡比較，aP<0.05，aaP<0.01；與5月齡比較，bP<0.05，bbP<0.01；同一品系同一時(shí)間點(diǎn)比較，cP<0.05，ccP<0.01。

Note:compared with three months age,aP<0.05,aaP<0.01. Compared with five months age,bP<0.05,bbP<0.01. Compared with The same strain of the same point in time,cP<0.05,ccP<0.01.

表2　不同月齡、性別SHR大鼠心率、RR間期、SDNN、RMSSD的觀察

注：與3月齡比較，aP<0.05，aaP<0.01；與5月齡比較，bP<0.05，bbP<0.01；同一品系同一時(shí)間點(diǎn)比較，cP<0.05，ccP<0.01。

Note:compared with three months age,aP<0.05,aaP<0.01. Compared with five months age,bP<0.05,bbP<0.01. Compared with The same strain of the same point in time,cP<0.05,ccP<0.01.

表3　不同月齡、性別SHR大鼠TP、VLF、LF和HF的觀察

注：與3月齡比較，aP<0.05，aaP<0.01；與5月齡比較，bP<0.05，bbP<0.01；同一品系同一時(shí)間點(diǎn)比較，cP<0.05，ccP<0.01。

Note:compared with three months age,aP<0.05,aaP<0.01. Compared with five months age,bP<0.05,bbP<0.01. Compared with The same strain of the same point in time,cP<0.05,ccP<0.01.

2.3對(duì)不同月齡、性別SHR大鼠總功率(TP)、極低頻功率(VLF)、低頻功率(LF)、高頻功率(HF)的觀察

由表3可知，雄性SHR大鼠隨著月齡增加而TP、VLF、LF和HF無(wú)明顯變化；但雌性SHR大鼠隨著月齡增加而TP、VLF、LF和HF明顯升高，在7月齡時(shí)雌性SHR大鼠TP、VLF、LF和HF明顯高于3月齡和5月齡的雌性SHR大鼠(P<0.01)，且雌性SHR大鼠TP、VLF、LF和HF明顯低于雄性SHR大鼠(P<0.01)。

3討論

心血管疾病治療是目前研究的一大熱點(diǎn)，而精確的血壓和心電測(cè)定在心血管疾病研究中較為重要。常用的連續(xù)測(cè)血壓一般采用動(dòng)脈PE導(dǎo)管插管法，但缺點(diǎn)是導(dǎo)管過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血壓數(shù)據(jù)產(chǎn)生誤差，導(dǎo)管皮下隧道和固定裝置牽拉大鼠皮膚和肌肉導(dǎo)致疼痛，而處于一定的應(yīng)激狀態(tài)，因此所測(cè)血壓值往往高于自由活動(dòng)狀態(tài)下的血壓值，且該方法動(dòng)物會(huì)受到較大創(chuàng)傷，很難在術(shù)后幾個(gè)月進(jìn)行長(zhǎng)期血壓測(cè)定。遙測(cè)法是應(yīng)用無(wú)線遙測(cè)技術(shù)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清醒狀態(tài)下連續(xù)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)各項(xiàng)生理參數(shù)的一種方法，所獲得的數(shù)據(jù)更為真實(shí)，更符合動(dòng)物福利的法則[5]，動(dòng)物被麻醉后將信號(hào)發(fā)射器埋植于腹腔內(nèi)，導(dǎo)管插入腎動(dòng)脈下的腹主動(dòng)脈內(nèi)，壓力信號(hào)裝置固定于腹壁內(nèi)側(cè)，用磁性開(kāi)關(guān)啟動(dòng)或關(guān)閉此系統(tǒng)[6]，植入子手術(shù)后，即可將大鼠養(yǎng)于動(dòng)物盒中，待其恢復(fù)后測(cè)定動(dòng)物生理數(shù)據(jù)，可長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)和記錄自由活動(dòng)的大鼠收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓和心電等數(shù)據(jù)的波形。因此該系統(tǒng)能采集到極佳的數(shù)據(jù)，可避免許多藥物假陽(yáng)性、假陰性情況，同時(shí)通過(guò)自身對(duì)照和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的提高來(lái)降低動(dòng)物數(shù)量[7-9]，符合動(dòng)物福利“3R”原則。我國(guó)2013版《藥物安全藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》明確建議采用遙測(cè)技術(shù)測(cè)定清醒動(dòng)物進(jìn)行心血管系統(tǒng)指標(biāo)，使用清醒動(dòng)物的遙測(cè)技術(shù)進(jìn)行藥物臨床前評(píng)價(jià)將是必然所趨。

HRV反映自主神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)心臟和血管調(diào)節(jié)動(dòng)態(tài)平衡的一項(xiàng)客觀指標(biāo)，能較好的反映交感神經(jīng)與迷走神經(jīng)之間的協(xié)調(diào)性，并能定量分析交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的張力，刺激迷走神經(jīng)后HRV 升高，刺激交感神經(jīng)時(shí)HRV 降低[1]；一般采用頻域和時(shí)域分析方法，時(shí)域分析指標(biāo)SDNN能反映自主神經(jīng)總張力，可用于評(píng)價(jià)自主神經(jīng)系統(tǒng)恢復(fù)與受損程度，是常用的HRV 指標(biāo)之一[10]；RMSDD 反映心率變異性的快變化成分，即迷走神經(jīng)張力大小[11-12]。性別是影響生物節(jié)律的另一常見(jiàn)因素，不同性別的血壓晝夜節(jié)律變化和交感神經(jīng)功能各不相同[13]。

年齡是影響心血管系統(tǒng)生物節(jié)律和血壓變化的重要因素，這種影響可能與自主神經(jīng)系統(tǒng)(autonomic nervous system, ANS)有關(guān)，ANS由不成熟到成熟，隨老化呈逐漸衰減的變化過(guò)程。隨著年齡增長(zhǎng)，其晝夜節(jié)律性往往趨于減弱，并以節(jié)律振幅的減低為主要表現(xiàn)[14]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SHR大鼠隨著月齡增加而24 h收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異性升高，7月齡、5月齡SHR大鼠收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異性明顯高于3月齡SHR大鼠，7月齡SHR大鼠收縮壓、平均壓、舒張壓和血壓變異性明顯高于5月齡SHR大鼠，雌性、雄性SHR大鼠在同一時(shí)間段收縮壓無(wú)明顯差異。雄性SHR大鼠隨著月齡增加而RR間期、SDNN、RMSSD、總功率(TP)、極低頻功率(VLF)、低頻功率(LF)和高頻功率(HF)無(wú)明顯變化；但雌性SHR大鼠隨著月齡增加而RR間期、SDNN、RMSSD、總功率(TP)、極低頻功率(VLF)、低頻功率(LF)和高頻功率(HF)明顯升高，在7月齡時(shí)雌性SHR大鼠RR間期、SDNN、RMSSD、TP、VLF、LF和HF明顯高于3月齡和5月齡的雌性SHR大鼠，且雌性SHR大鼠與雄性SHR大鼠比較有顯著差異。

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〔修回日期〕2014-11-24