HPLC 測(cè)定六合定中滴丸中厚樸酚、和厚樸酚的研究

張麗軍，郭晨，秦永剛，原燕

(1.陜西中藥研究所 咸陽(yáng)市滴丸制劑工程技術(shù)研究中心，陜西 咸陽(yáng) 712000;2.陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075)

六合定中滴丸是用于胃腸性感冒的藥物，具有祛暑除濕，消食導(dǎo)滯的功效，用于夏傷暑濕，宿食停滯，寒熱頭痛，胸悶惡心，吐瀉腹痛［1］，是由廣藿香、香薷、厚樸、紫蘇葉、檀香、白扁豆、麥芽、稻芽、神曲、木香、陳皮、枳殼、山楂、茯苓、甘草等17 味中藥組成的復(fù)方制劑。厚樸具有行氣消積、燥濕除螨作用，厚樸中有效成分為厚樸酚、和厚樸酚等，二者均具有抗菌、鎮(zhèn)痛、抗痙攣、止嘔等藥理作用。故本制劑選擇厚樸中厚樸酚、和厚樸酚的含量作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定的指標(biāo)，本文研究建立了制劑中厚樸酚、和厚樸酚的HPLC 測(cè)定方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 原料與儀器

甲醇，色譜純;重蒸餾水;甲醇，分析純;厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品(批號(hào):111640-201005)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所;實(shí)驗(yàn)用藥材購(gòu)于西安市萬(wàn)壽路藥材市場(chǎng)。

Waters 液相515 泵2487 檢測(cè)器;KQ-300VDE超聲波;Ag135 電子天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法［2-4］

1.2.1 色譜條件 色譜柱Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm )，流動(dòng)相甲醇-水(78∶22)，波長(zhǎng)294 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL。

1.2.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品0.52，0.51 mg，置對(duì)應(yīng)10 mL 量瓶中加甲醇適量溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1 mL，置對(duì)應(yīng)10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(1 mL 兩種對(duì)照品溶液分別含厚樸酚、和厚樸酚0.005 2，0.005 1 mg)。

1.2.3 供試品溶液制備 取滴丸研細(xì)，精密稱取3 g，置100 mL 三角瓶中，精密加入甲醇25 mL 溶解，稱重。超聲30 min，冷卻后稱重，加甲醇補(bǔ)充減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜分析

厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液和供試品溶液HPLC 色譜圖，見圖1。

圖1 六和定中滴丸和厚樸酚、厚樸酚HPLCFig.1 Honokiol，Magnolol in Liuhedingzhong dropping pills by HPLC

2.2 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)

按處方量與工藝制備不含厚樸藥材的陰性供試樣品，按含量測(cè)定方法配制陰性供試品溶液，取20 μL進(jìn)樣記錄色譜圖，陰性樣品無(wú)干擾。

2.3 線性關(guān)系的考察［5］

分別精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品0.52，0.51 mg，置10 mL 量瓶中加甲醇適量溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。依次吸取0.2，0.5，1，2，3 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，按上述條件進(jìn)行高效液相測(cè)定。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得回歸方程分別為:厚樸酚Y = 2.030 ×107X－49 483，r =0.999 9(n =5)，厚樸酚在0.010 4 ～0.156 mg/mL 之間呈線性關(guān)系。和厚樸酚Y = 2.881 ×107X－80 182，r = 0.999 9(n = 5)，和厚樸酚在0.010 2～0.153 mg/mL 之間呈線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液(0.005 2，0.005 1 mg/mL)各20 μL，按擬訂的方法對(duì)同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5 次，記錄峰面積，結(jié)果厚樸酚RSD 為0. 94%(n =5)，和厚樸酚RSD 為1.33%(n=5)。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)樣品，按照供試品溶液制備方法同法操作，取20 μL 溶液注入液相色譜儀，按擬訂的方法分別在0，1，2，3，6，12 h 進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明厚樸酚RSD 為1.22%(n =5)，和厚樸酚RSD 為1.16%(n=5)。供試品溶液在12 h 內(nèi)測(cè)定厚樸酚、和厚樸酚穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

稱取同一批號(hào)的樣品5 份，按照供試品溶液制備方法同法操作，取20 μL 溶液注入液相色譜儀，平行測(cè)定5 次，記錄峰面積，計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚的含量。厚樸酚含量為0.041 4%，其RSD 為1.26%(n=5)，和厚樸酚為0.038 0%，其RSD 為1.19%(n=5)。

2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)［6］

取已知含量(厚樸酚0. 041 4%、和厚樸酚0.038 0%)的樣品約3 g，用甲醇溶解并定容至25 mL，分別用5 mL 移液管移取5 份于5 個(gè)10 mL 量瓶中，分別精密加入厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液，按擬訂的方法進(jìn)行5 次回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1、表2。

表1 厚樸酚加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Recovery test results of Magnolol

表2 和厚樸酚加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Recovery test results of Honokiol

由表1、表2 可知，厚樸酚平均回收率為99.98%，RSD 為1.91%(n=5)、和厚樸酚平均回收率為99.79%，RSD 為1.43%(n =5)。以上結(jié)果表明加樣回收率良好。

2.8 樣品的含量測(cè)定

取10 批樣品各2 份，分別按照上述方法進(jìn)行測(cè)定，證明該方法可行，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)。結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Determination results of the samples

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法對(duì)六合定中滴丸中厚樸酚、和厚樸酚進(jìn)行含量測(cè)定，該方法簡(jiǎn)單，陰性無(wú)干擾，分離良好，通過(guò)方法學(xué)考察表明，制定的測(cè)定方法重現(xiàn)性、精密度、穩(wěn)定性均良好，加樣回收率符合要求，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程可操作性強(qiáng)，能夠客觀地控制本品的質(zhì)量，為制劑中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定提供了理論依據(jù)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010 年版(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:595.

［2］ 王寶琴.中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994.

［3］ 闞紅玉，趙衛(wèi)春，孫玉俠，等. 藿香正氣滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究［J］. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(1):72-76.

［4］ 馬大龍，萬(wàn)鵬，代龍，等.HPLC 同時(shí)測(cè)定四正顆粒中厚樸酚、和厚樸酚含量［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，16(2):54-56.

［5］ 呂崢崢，王會(huì)如.HPLC 法測(cè)定香砂平胃顆粒中厚樸酚及和厚樸酚的含量［J］.首都醫(yī)藥，2013，20(4):53-54.

［6］ 王漢平，楊志靈，魏桂芳.HPLC 法測(cè)定舒膽片中厚樸酚及和厚樸酚的含量［J］. 陜西中醫(yī)，2013，34(10):1415-1416.