HPLC法測(cè)定丹芪血寧膠囊中丹參素的含量

肖建華

（河南省羅山縣食品藥品檢驗(yàn)所，羅山464200）

HPLC法測(cè)定丹芪血寧膠囊中丹參素的含量

肖建華

（河南省羅山縣食品藥品檢驗(yàn)所，羅山464200）

目的建立HPLC法測(cè)定丹芪血寧膠囊中丹參素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，使用WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）為流動(dòng)相，流速1.0 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)281 nm。結(jié)果丹參素在10.0～200.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性方程為y=14197x-2566（r=0.9999）。丹參素的平均回收率為99.08%，RSD＝0.16%（n＝6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

丹芪血寧膠囊；丹參素；HPLC；含量測(cè)定

丹芪血寧膠囊是河南省信陽(yáng)市中醫(yī)院配制的口服醫(yī)院制劑，由丹參、黃芪、三七、川芎、生地黃等十九味中藥組成。具有益氣養(yǎng)血，活血止痛之功效，臨床用于血瘀阻滯所致頭痛、頭暈、耳鳴、胸悶、心悸氣短、失眠多夢(mèng)、健忘怔忡、面黃乏力及腦梗塞、心肌梗塞、腦動(dòng)脈硬化、冠心病、中風(fēng)后遺癥。該制劑原定標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測(cè)定項(xiàng)，本文以丹參素為指標(biāo)，參考有關(guān)文獻(xiàn)［1-5］，建立了HPLC法測(cè)定丹芪血寧膠囊中丹參素含量的方法。該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，處方中其他成分對(duì)測(cè)定沒有干擾，分離效果較好，能有效地考察控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器日本島津LC-2010C高效液相色譜儀；sartorius CPA224S電子天平；日本島津UV-2550紫外分光光度計(jì)；KQ-300型超聲波清洗器；TG16-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)；1850D型超純水機(jī)。

1.2 材料丹參素鈉對(duì)照品（批號(hào)：110855-201311，中國(guó)食品藥品檢定研究院），丹芪血寧膠囊（河南省信陽(yáng)市中醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20140408，20140802，20141020），SIGMA-ALDRICH色譜純甲醇（批號(hào)：TDCH0008），冰醋酸為分析純，水為自制純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件采用高效液相色譜法，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）為流動(dòng)相，WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，流速1.0 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm，柱溫25℃，進(jìn)樣體積10μl，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)應(yīng)不低于4000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12h的丹參素鈉對(duì)照品，精密稱取11.11 mg置25 ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液；量取貯備液5 ml置50 ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成約相當(dāng)于含丹參素40 μg·ml-1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 樣品溶液取本品20粒，將其內(nèi)容物混勻、研細(xì)，稱取適量（約1.2 g）置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入25 ml 50%甲醇，密塞，稱定重量；超聲處理30 min（功率300 W，頻率50 kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液用相同工藝及處方比例制備空白制劑樣品（不含丹參），按2.2.2項(xiàng)下同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)按2.1項(xiàng)下色譜條件，取對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性對(duì)照溶液進(jìn)行試驗(yàn)。記錄的色譜圖顯示，樣品溶液與對(duì)照品溶液在約17 min處有丹參素峰出現(xiàn)，陰性對(duì)照溶液在此位置處未見吸收峰出現(xiàn)，說(shuō)明該方法測(cè)定丹參素不產(chǎn)生假陽(yáng)性干擾。色譜圖見圖1。

圖1 丹芪血寧膠囊HPLC色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品貯備液，用50%甲醇分別制成10.0、20.0、40.0、80.0、200.0μg·ml-1濃度的系列溶液（取對(duì)照品貯備液5 ml，分別置200、100、50、25、10ml量瓶中），按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣濃度（μg·ml-1）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸，方程為：y=14197x-2566（r=0.9999）。表明在10.0～200.0μg·ml-1的濃度范圍內(nèi)丹參素線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得丹參素峰面積的平均值為567832，RSD= 0.47%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批樣品溶液（批號(hào)20140802），分別在0、2、4、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得峰面積的RSD=0.87%（n=5），表明樣品溶液在12 h內(nèi)丹參素含量穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)20140802），按2.2.2項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，依2.1項(xiàng)下色譜條件分別試驗(yàn)，測(cè)得該批樣品中丹參素含量的平均值為0.7815 mg·g-1，RSD=1.41%（n=6），表明所用方法重復(fù)性好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)取已知準(zhǔn)確含量的樣品（批號(hào)20140802），精密稱取其研細(xì)內(nèi)容物約0.6 g，置100 ml具塞錐形瓶中，同時(shí)精密加入對(duì)照品貯備液1 ml（相當(dāng)?shù)⑺?.4000 mg），按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試液，依2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率（%），結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

結(jié)果表明，所采用的丹參素含量測(cè)定法準(zhǔn)確度高。

2.4 樣品含量測(cè)定取丹芪血寧膠囊3批，按2.2.2項(xiàng)下方法分別制備樣品溶液，每批平行做3份，依2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算出每粒膠囊中丹參素的平均含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定以50%甲醇為空白，取丹參素對(duì)照品溶液，在波長(zhǎng)200 nm～350 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果在波長(zhǎng)281 nm處有最大吸收，故選用該波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 樣品溶液的制備采用超聲提取再離心分離的方法制備測(cè)定用供試品溶液。超聲提取技術(shù)利用高頻電磁波穿透提取介質(zhì)，到達(dá)物料內(nèi)部維管束和細(xì)胞，產(chǎn)生的電磁場(chǎng)可加速被提取成分向提取溶劑界面擴(kuò)散，最大限度保證提取的質(zhì)量［6］；離心處理可去除不溶于50%甲醇的物質(zhì)和機(jī)械雜質(zhì)，使供試液澄清，便于濾過。參考有關(guān)文獻(xiàn)［7］，溶劑選用50%甲醇，超聲提取時(shí)間為30 min，即可有效提取所含丹參素；該方法提高了工作效率，避免采用回流提取、柱洗脫分離或乙酸乙酯萃取分離的繁雜流程，節(jié)省了人力物力。

3.3 流動(dòng)相的選擇比較使用甲醇-0.05%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-0.1%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）、乙腈-冰醋酸-水（5∶1∶94）等流動(dòng)相條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示選用甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）保留時(shí)間適當(dāng)，峰形對(duì)稱，重復(fù)性好，丹參素峰和雜質(zhì)峰能有效分離。

3.4 含量限度的確定該制劑組方中君藥為丹參，丹參素為丹參中主要有效成分，所以選用丹參素作為質(zhì)控指標(biāo)是可行的；根據(jù)處方中丹參用量和實(shí)驗(yàn)測(cè)得數(shù)據(jù)，將1 g內(nèi)容物中丹參素含有量換算成平均每粒含有量，最終擬定本品每粒含丹參以丹參素（C9H10O5）計(jì)，不得少于0.18 mg。

［1］李靜.HPLC法測(cè)定養(yǎng)心通脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.中國(guó)藥師，2011，14（10）：1550-1551.

［2］張大軍，王兆華.高效液相色譜法測(cè)定腎康寧膠囊中丹參素的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（10）：49-50.

［3］費(fèi)超，孟蕾，劉子沐，等.HPLC法測(cè)定丹夏乳癖片中丹參素的含量［J］.中國(guó)藥房，2011，22（23）：2132-2163

［4］江慶洋，周修森.RP-HPLC法測(cè)定麥味地黃膠囊中馬錢苷的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2015，13（1）：140-141.

［5］周修森，方永凱.HPLC法測(cè)定柴丹疏利膠囊中丹參素的含量［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（10）：25-27.

［6］李莉，譚蔚，馬雪松.微波輔助提取黃芪甲苷的研究［J］.中藥材，2007，30（2）：234-236.

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥出版社，2010：549.

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2015年2月10日

Content Determination of Danshensu in Danqi Xuening Capsule by HPLC

XIAOJianhua
（Luoshan Institute for Food and Drug Control，Henanprovince，Luoshan464200，China）

Objective To establish the method for the content determination of Danshensu in Danqi Xuening capsule.Methods HPLC method was adopted.WondaSil C18-WR Analytical column（5 μm，4.6 mm×250 mm）was used with mobile phase consisted of methanol-glacial acetic acid-water（5∶1∶94）at flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wave length was set at 281 nm.Results There was a good linear relationship in the concent ration range of 10.0～200.0 μg·ml-1，the linear equation was y=14197x-2556（r= 0.9999）.The average recovery was 99.08%，with RSD=0.16%（n=6）.Conclusion The method was simple，reliable and accurate，and can be applied to the quality control of the preparation.

Danqi Xuening capsule；Danshensu；HPLC；content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.072

1672-2779（2015）-10-0140-03

：楊杰本文校對(duì)：周修森

2015-04-27）