廣東省虎門(mén)地區(qū)兒童肺炎鏈球菌血清型分布及耐藥性監(jiān)測(cè)

李 明， 譚丁丁， 張曲濤， 周 湧， 李 薇， 郭文婷， 郭錦均

·論著·

廣東省虎門(mén)地區(qū)兒童肺炎鏈球菌血清型分布及耐藥性監(jiān)測(cè)

李 明， 譚丁丁*， 張曲濤， 周 湧， 李 薇*， 郭文婷， 郭錦均*

目的 了解東莞虎門(mén)地區(qū)兒童肺炎鏈球菌的血清型分布和對(duì)抗菌藥物的耐藥性，評(píng)估幾種疫苗，尤其是7價(jià)結(jié)合疫苗（PC V7）在本地區(qū)對(duì)肺炎鏈球菌的覆蓋情況，并為臨床合理使用抗菌藥物提供依據(jù)。方法 對(duì)2011年1月—2012年12月就診肺炎患兒呼吸道標(biāo)本中分離的肺炎鏈球菌，采用莢膜腫脹試驗(yàn)進(jìn)行血清分型，并采用法國(guó)生物梅里埃公司的A T B ST R E P 5肺炎鏈球菌板條進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。采用C LSI 2010年版標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果，數(shù)據(jù)分析采用 W H O N E T 5.5軟件。結(jié)果 共分離到229株肺炎鏈球菌，主要血清型為19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）和14型8株（3.5%）。7價(jià)疫苗（PC V7）的覆蓋率為95.2%，11價(jià)疫苗（PC V11）的覆蓋率為95.2%，13價(jià)疫苗（PC V13）的覆蓋率為97.4%。所分離的肺炎鏈球菌中青霉素敏感的肺炎鏈球菌（PSSP）占92.6%（212/229），青霉素中介的肺炎鏈球菌（PISP）占5.7%（13/229），青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PRSP）占1.7%（4/229）。肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、氯霉素、頭孢噻肟、阿莫西林的耐藥率依次為95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株對(duì)萬(wàn)古霉素和左氧氟沙星完全敏感。結(jié)論該地區(qū)兒童肺炎鏈球菌的血清型主要為19F、23F、6B和14型，PC V7的覆蓋率為95.2%，提示可用于本地區(qū)的預(yù)防接種。肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑耐藥嚴(yán)重，對(duì)萬(wàn)古霉素、左氧氟沙星、青霉素的敏感率較高。

肺炎鏈球菌； 血清型； 兒童； 耐藥性

肺炎鏈球菌是兒童社區(qū)獲得性感染的重要病原菌，可引起肺炎、腦膜炎、菌血癥、中耳炎等疾病。近20年來(lái)，該菌對(duì)多種抗菌藥物的耐藥性日益嚴(yán)重?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌有90個(gè)血清型，感染后免疫具有型特異性。根據(jù)本地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，選擇和應(yīng)用相應(yīng)疫苗不但可以預(yù)防肺炎鏈球菌感染，而且可防止耐藥菌株傳播。本研究分析了本院2011年1月—2012年12月臨床5歲以下兒童患者所分離的229株肺炎鏈球菌的血清型分布及其對(duì)抗菌藥物的耐藥狀況，為臨床經(jīng)驗(yàn)用藥、疫苗研制和免疫預(yù)防提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源 2011年1月—2012年12月我院兒科門(mén)診及住院5歲以下肺炎患兒痰標(biāo)本分離的肺炎鏈球 菌229株，經(jīng) 法國(guó)生 物 梅里埃VIT E K-2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀或常規(guī)方法鑒定到種。

1.1.2 抗菌藥物及培養(yǎng)基 O ptochin（奧普托欣）、苯唑西林紙片為O X OID公司產(chǎn)品，藥敏試驗(yàn)平皿采用O X OID公司生產(chǎn)的 M H 瓊脂加5%脫纖維羊血。生理鹽水、A T B S T R E P 5藥敏板條和E試驗(yàn)條為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.1.3 多價(jià)血清 多價(jià)血清購(gòu)自丹麥血清研究所（Statens Seru m Institut，Den mark）。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗(yàn) 肺炎鏈球菌的藥敏試驗(yàn)采用法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的A T B S T R E P 5藥敏板條，包括青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、氯霉素、左氧氟沙星、萬(wàn)古霉素和甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和判讀。并采用 E試驗(yàn)條確證青霉素的最低抑菌濃度（M IC），以便正確區(qū)分青霉素敏感、中介和耐藥肺炎鏈 球 菌 （PSSP、PISP 和P R SP）。結(jié) 果 判斷 以C LSI 2010版為 標(biāo) 準(zhǔn)［1］。質(zhì) 控菌株為肺 炎 鏈 球 菌A T C C49619。

1.2.2 血清分型 采用莢膜腫脹試驗(yàn)進(jìn)行血清分型，分型血清可判斷23價(jià)多糖疫苗（P C V23）所覆蓋的血清型（1、2、3、4、5、6B、7F、8、9 N、9 V、10 A、11 A、12F、14、15B、17F、18C、19 A、19F、20、22F、23F和33F）和6 A，此外的血清型歸為不能分型類(lèi)。根據(jù)血清分型結(jié)果，計(jì)算多價(jià)疫苗，7價(jià)疫苗（P C V7，可覆蓋4、6B、9 V、14、18C、19F和23F）、11價(jià)疫苗（P C V11，可覆蓋1、3、4、5、6B、7F、9 V、14、18C、19F和23F，即在PC V7基礎(chǔ)上增加1、3、5、7F）和13價(jià)疫苗（P C V13，可覆蓋1、3、4、5、6 A、6B、7F、9 V、14、18C、19 A、19F 和23F，即在 P C V11 基礎(chǔ)上增加6 A、19 A）的覆蓋率。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用 W H O N E T5.5軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 肺炎鏈球菌血清群/型分布

229株肺炎鏈球菌中，血清型依次為19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）、14型8株（3.5%）、19 A 4株（1.7%）、4型3株（1.3%）、15B 2株（0.9%）和6 A 1株（0.4%），4株菌株（1.7%）在本次研究中不能明確分型。229株肺炎鏈球菌中，P C V7所包含的9 V、18C，P C V11所包含的1、3、5、7F在本次研究中未分離到。PC V7和P C V11的覆蓋率均為95.2%，P C V13的覆蓋率為97.4%。兩者相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。血清型的分布情況見(jiàn)表1。

表1 肺炎鏈球菌的血清型分布Table 1 Distribution of serotypes ofS.pneu moniae

2.2 肺炎鏈球菌對(duì)常用抗菌藥物的敏感性

所分離的肺炎鏈球菌中PSSP占92.6%（212/ 229），PISP占5.7%（13/229），P R SP占1.7%（4/ 229）。其中PC V7所覆蓋的肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的敏感率93.6%（204/218），P C V13所覆蓋的肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的敏感率92.8%（207/223），兩者相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所分離的肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、氯霉素、頭孢噻肟、阿莫西林的耐藥率依次為95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株對(duì)萬(wàn)古霉素和左氧氟沙星完全敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 不同血清型對(duì)抗菌藥物的耐藥性

本次所分離的肺炎鏈球菌主要血清型為19F、23F和6B型，其中對(duì)青霉素耐藥的4株肺炎鏈球菌均集中在19F。各主要血清型對(duì)本次試驗(yàn)相應(yīng)抗菌藥物的耐藥性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 229株肺炎鏈球菌對(duì)抗菌藥物的敏感率和耐藥率Table 2 Susceptibility of 229 strains ofStreptococcus pneu moniaeto antimicrobial agents（%）

表3 主要血清型肺炎鏈球菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率Table 3 Resistance ofStreptococcus pneu moniaestrains to antimicrobial agents by serotype［n （%）］

3 討論

肺炎鏈球菌是兒童社區(qū)獲得性肺炎的主要病原菌。據(jù)估計(jì)，發(fā)展中國(guó)家每年約有814 000例5歲以下的兒童死于肺炎鏈球菌感染［2］。為保障人類(lèi)健康，W H O主張采用接種肺炎鏈球菌疫苗來(lái)預(yù)防肺炎鏈球菌感染，而選擇疫苗應(yīng)以本地區(qū)人群中肺炎鏈球菌血清型分布為依據(jù)方能達(dá)到最佳效果。

流行病學(xué)調(diào)查顯示，P C V7在美國(guó)、歐洲、非洲和亞洲部分國(guó)家的覆蓋率分別可達(dá)86%、74%、67%和 43%［3］。 國(guó)內(nèi) H o 等［4］研 究顯 示香港地區(qū)P C V7的覆蓋率為66.5%；姚開(kāi)虎等［5］的研究顯示北京、上海、廣州、深圳兒童人群中P C V7的覆蓋率分別為46.0%、80.0%、98.4%、94.4%。本研究中，PC V7在本地區(qū)兒童人群中的覆蓋率為95.2%，與廣州（98.4%）、深圳（94.4%）接近，但與北京（46.0%）、上海（80.0%）、香港（66.5%）存在較大差異。張泓等［6］在2007年10 月—2008年5月對(duì)上海某兒童醫(yī)院分離的肺炎鏈球菌的研究顯示，P C V7的覆蓋率為58.9%；姚開(kāi)虎等［5］在2006年2月—2007年2月對(duì)上海另一所兒科醫(yī)院分離的肺炎鏈球的研究顯示PC V7的覆蓋率為80.0%，兩者差異較大。提示血清型的分布除了存在地域上的差異外，即使在同一地區(qū)的不同醫(yī)院，不同時(shí)期，肺炎鏈球菌的血清型分布也有可能有所變化。使用疫苗應(yīng)注意地區(qū)差異，同時(shí)也需進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)。

歐美的監(jiān)測(cè)研究表明，在廣泛使用P C V 7疫苗后，非疫苗覆蓋的血清型引起的侵襲性肺炎鏈球菌病 持 續(xù)上 升，尤其 是 19 A。M essina 等［7］報(bào)道2002—2005年5歲以下兒童侵襲性肺炎鏈球菌菌株中，19 A 所占比率逐年升高，分別為11.5%、16.0%、36.0%和44.0%。由于PC V7價(jià)格較高，在中國(guó)尚未納入計(jì)劃免疫之列，加之本地區(qū)以流動(dòng)人口居多，PC V7接種率極低，19 A 所占比率僅為1.7% （4/229），在廣泛接種P C V7后，是否如國(guó)外的監(jiān)測(cè)19 A的比率大幅上升，值得進(jìn)一步關(guān)注。

本次研究中，肺炎鏈球菌對(duì)萬(wàn)古霉素、左氧氟沙星100%敏感，對(duì)青霉素的體外敏感率為92.6%，各主要血清型對(duì)本次試驗(yàn)相應(yīng)抗菌藥物的耐藥性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所分離的肺炎鏈球菌仍對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑的耐藥率較高，與以往的監(jiān)測(cè)基本相同［8］。

P C V7疫苗能有效覆蓋本地區(qū)肺炎患兒分離的肺炎鏈球菌，可用于本地區(qū)的預(yù)防接種。所分離菌株對(duì)萬(wàn)古霉素、左氧氟沙星、青霉素敏感率較高，但對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物耐藥率仍維持較高水平。

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Serotype distribution and antimicrobial resistance ofStreptococcus pneumoniaein children in Hu men area

LI Ming，TA N Dingding，Z H A N G Qutao，Z H O U Yong，LI Wei，G U O Wenting，G U O Jinjun. （Department of Laboratory Medicine，Taiping People′s H ospital，Dongguan Guangdong 523907，China）

Objective To investigate the serotype distribution and antimicrobial resistance of theS.pneu moniaestrains isolated fro m children in H u men，and evaluate coverage of the serotypes by several vaccines，especially PC V7.M ethods A total of 229 S.pneu moniaestrains were isolated fro m the children treated in our hospital during January 2011 and Decem ber 2012. Capsular typing was performed by Q uellung reaction.A ntimicrobial susceptibility was determined by A T B ST R E P 5.The data were analyzed by W H O N E T 5.5 software according to C LSI 2010 breakpoints.Results The main serotypes identified fro m the 229S.pneu moniaestrains were 19F（146，63.8%），23F（49，21.4%），6B（12，5.2%）and 14（8，3.5%）.The coverage of these serotypes was 95.2%by PC V7，95.2%by PC V11，and 97.4%by PC V13.Of all theS.pneu moniaestrains，penicillin susceptibleS.pneu moniae（PSSP）accounted for 92.6% （212/229），penicillin intermediateS.pneu moniae（PISP）accounted for 5.7% （13/229）and penicillin resistantS.pneu moniae（P RSP）accounted for 1.7% （4/229）.A bout 95.6%，93.0%，88.2%，86.5%，7.0%，2.2% and 0.9% of the isolates were resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycl ine，trimethoprim-sulfamethoxazole，chloramphenicol，cefotaxime and am oxicillin，respectively.No strain was found resistant to vanco m ycin or levofloxacin.Conclusions The serotypes 19F，23F，6B and 14 are the main prevalent serotypes ofS. pneu moniaein children inH u men.PC V7 could cover 95.2% of theseS.pneu moniae，indicating its appropriateness for vaccination in H u men area.TheseS.pneu moniaestrains were highly sensitive to vanco m ycin，levofloxacin and penicillin，but relatively m ore resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycline and trimethoprim-sulfamethoxazole.

Streptococcus pneu moniae；serotype；children；antimicrobial resistance

R378.14

A

1009-7708（2015）01-0043-04

2014-02-17

2014-08-21

廣東省東莞市科技局項(xiàng)目（201110515025046）。

廣東省東莞市太平人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞 523907；*兒科。

李明（1974—），男，學(xué)士，副主任技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)及細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)。

李明，E-mail：liming8813@126.co m。