氣相色譜法測定比卡魯胺中殘留溶劑二甲基甲酰胺

阮昊 陳悅

（浙江省食品藥品檢驗研究院，浙江 杭州310004）

比卡魯胺（Bicalutamide）是英國阿斯利康公司研制的一種新型口服非甾體類雄性激素受體阻斷劑，主要用于治療晚期前列腺癌[1]。 比卡魯胺國內(nèi)現(xiàn)有生產(chǎn)企業(yè)3 家，本次研究收集了國內(nèi)3 個生產(chǎn)廠家的合成工藝，共涉及8 種溶劑。 其中，第2類溶劑4 種：二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）；第3 類溶劑4 種：乙醇、乙醚、丙酮和乙酸乙酯[2]。 為確保臨床用藥安全，應(yīng)對上述殘留溶劑進(jìn)行控制。 因各廠家生產(chǎn)工藝不完全相同，因此所需控制的殘留溶劑也有所不同，因DMF 沸點較其余7 種溶劑高，需用直接進(jìn)樣法測定，因此為提高測定方法的適用性，本研究建立了可測定DMF 殘留溶劑的直接進(jìn)樣氣相色譜分析方法。 現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

配備氫火焰離子化檢測器（FID）的Agilent 7890A 氣相色譜儀；Mettler AE163 型電子分析天平。

DMF，N-甲基吡咯烷酮均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：INNOWAX 型（涂布聚乙二醇固定液）彈性石英毛細(xì)管柱（30.0 m × 0.25 mm，0.25 μm），柱溫：程序升溫模式，初始60 ℃，以10 ℃/min 的速率升溫至200 ℃，保持3 min；FID檢測器，檢測器溫度為250 ℃；分流進(jìn)樣，分流比為20∶1，進(jìn)樣口溫度為200 ℃；載氣為氮?dú)?，流速?.0 mL/min；直接進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1.0 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 稱取DMF 226.40 mg，置25 mL 量瓶中，用N-甲基吡咯烷酮溶解并定容，作為對照品儲備液。精密量取濃儲備液1 mL，置100 mL 量瓶中，加N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，即成每1 mL 中含DMF 約88 μg 的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品約0.5 g，精密稱定，置5 mL 量瓶中，加N-甲基吡咯烷酮溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2.3 空白溶液 取空白溶劑N-甲基吡咯烷酮作為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

因DMF 在生產(chǎn)過程中會伴隨N，N-二甲基乙酰胺（DMA）帶入，故考察DMF 和DMA 的分離度作為系統(tǒng)適用性試驗。 稱取23.10 mg DMF 和26.13 mg DMA 置25 mL 量瓶中，用N-甲基吡咯烷酮溶解并定容，精密量取該溶液2 mL，置20 mL量瓶中，加N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，即成每1 mL 中含DMF 88 μg 和DMA 約88 μg 的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液，直接進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果色譜圖中DMF 和DMA 的分離度為8.56；其理論塔板數(shù)分別為72 419 和57 319。 空白溶液在與DMF 相同保留時間的位置無色譜峰出現(xiàn)，溶劑對本品殘留溶劑的測定無干擾。 見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項下對照品儲備液適量，加N-甲基吡咯烷酮分別稀釋1 系列6 個濃度的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣測定。 以對照品濃度為橫坐標(biāo)X，被測溶劑峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程為：

DMF 在22.64 ～226.40 μg/mL 范 圍 內(nèi) 峰 面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，r= 0.999 8。

2.5 色譜系統(tǒng)的精密度

取“2.2.1”項下混合對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣測定6 次，量取各色譜圖中DMF的峰面積，對色譜系統(tǒng)的精密度進(jìn)行考察。結(jié)果測得DMF 的RSD 為0.8%（n= 6），表明系統(tǒng)的精密度明顯優(yōu)于《中國藥典》對氣相色譜頂空進(jìn)樣法系統(tǒng)適用性的最低要求。

2.6 重復(fù)性試驗

取廠家1 提供的A140301 批次樣品（DMF 本底為0），精密稱取6 份，用“2.2.1”項下對照品溶液溶解并定量稀釋制成每1 mL 中約含比卡魯胺0.1 g 的溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行測定，其結(jié)果分別為0.082 8%，0.081 9%，0.075 1%，0.077 9%，0.081 2%及0.083 4%，RSD 為3.9%（n＝6）。

2.7 回收率試驗

取廠家1 的A140301 批次樣品（DMF 本底為0）進(jìn)行試驗。 取“2.2.1”項下制備的對照品溶液作為相當(dāng)于限度100%的加樣溶液Sm，精密量取該對照品溶液10 mL，用N-甲基吡咯烷酮稀釋定容至20 mL，配制成相當(dāng)于限度50%的加樣溶液Sl；精密量取“2.2.1”項下制備的對照品儲備液3 mL，用N-甲基吡咯烷酮稀釋定容至200 mL，配制成相當(dāng)于限度150%的加樣溶液Sh。 精密稱取廠家1 提供的A140301 批次樣品9 份，各約0.50 g，置量瓶中，每個濃度各3 份，分別用上述3 個濃度的加樣溶液溶解并定容，即得平行制備的一組共9份回收率試驗用加樣測定溶液。取上述9 份試樣，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣測定，量取各色譜圖中DMF 的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算。 分別扣除供試品原液中DMF 的本底殘留后，計算出DMF 的回收率。 結(jié)果測得DMF 的平均回收率為91.9%，RSD 為2.7%，平均回收率均在80% ～120%之內(nèi)，符合殘留溶劑測定準(zhǔn)確度的要求。試驗結(jié)果表明，本法用于DMF 的殘留量測定具有較好的準(zhǔn)確性。

2.8 靈敏度試驗

精密量取對照品儲備液適量，用N-甲基吡咯烷酮逐步稀釋并按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果測得DMF 的檢測限（S/N = 3）為5.9 μg/mL，定量限（S/N = 10）為22.6 μg/mL。

2.9 樣品測定

取3 個廠家共8 批產(chǎn)品，按“2.2”項下的方法制備混合對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣分析，隔數(shù)日后再次同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算DMF 的殘留量。測定結(jié)果見表1。 各批供試品的測定結(jié)果均低于《中國藥典》2010 年版二部附錄ⅧP 規(guī)定的限度[3]，即DMF應(yīng)≤0.088%。

表1 比卡魯胺樣品中殘留溶劑DMF 測定結(jié)果 （%）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

試驗了6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）柱，結(jié)果峰形很差；用聚乙二醇固定液柱，DMF 峰形較好，保留時間合適，可與DMA完全分離。 因此色譜柱選擇聚乙二醇固定液（INNOWAX）柱。

3.2 柱溫的選擇

①柱溫為120 ℃時，DMF 峰與其他峰共出，無法分離；②故降低柱溫，60 ℃保持6 min 后，以15 ℃/min 升溫至200 ℃，DMF 保留時間為14 min，出峰較遲，基線噪音較大；③因條件②出峰較晚，故除去保持時間，直接以60 ℃起始，以15 ℃/min升溫至200 ℃，DMF 5 min 出峰，保留時間合適，但基線噪音仍較大；④因基線噪音大，故降低升溫速率，以60 ℃起始，以10 ℃/min 升溫至200 ℃，DMF 6 min 出峰，保留時間合適，基線噪音較小。故選擇條件④作為程序升溫條件，DMF 可與相鄰峰完全分離，與類似物DMA 也可良好分離。

3.3 溶解介質(zhì)的選擇

比卡魯胺與DMF 水溶性均差，不能直接用水作溶劑，且DMF 在水中峰形較差，而在含N 溶劑，如N-甲基吡咯烷酮中，則峰形較好。 經(jīng)試驗，用N-甲基吡咯烷酮為溶劑，可將比卡魯胺和被測溶劑完全溶解，峰形較好，基質(zhì)效應(yīng)小，回收率好，因此選擇N-甲基吡咯烷酮作為溶劑。

[1] Tucker H，Crook JW，Chesterson GJ. Nonsteroidal antiandrogens. Synthesis and structure-activity relationships of 3-substituted derivatives of 2-hydroxypropionanilides[J]. J med Chem，1988，31（5）：954-959.

[2] ICH 指導(dǎo)委員會. 藥品注冊的國際技術(shù)要求[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：134-136.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61-65.