• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    N-甲基吡咯烷酮降解菌株的篩選鑒定及應(yīng)用

    2023-11-02 14:01:46司更花楊傳倫孫建忠馮文娟韓立霞
    工業(yè)微生物 2023年5期
    關(guān)鍵詞:吡咯烷酮無機(jī)鹽菌劑

    司更花,楊傳倫,孫建忠,馮文娟,楊 麗,韓立霞

    黃河三角洲京博化工研究院有限公司,山東 濱州 256500

    N-甲基吡咯烷酮(N-methyl pyrrolidinone,簡(jiǎn)稱NMP),由于其具有低揮發(fā)性、高極性、無腐蝕性及良好的水溶性等特點(diǎn)[1-3],經(jīng)常作為一種典型的選擇性強(qiáng)和穩(wěn)定性好的有機(jī)物極性溶劑,是一種重要的化工原料[2-5]。N-甲基吡咯烷酮被廣泛應(yīng)用于鋰電池、染料、醫(yī)藥、洗滌劑和黏合劑等多種制造行業(yè)中[6-7]。因其良好的水混溶性特點(diǎn),極易隨著廢水排放到環(huán)境中。但N-甲基吡咯烷酮本身結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、較差的可生化性及較強(qiáng)的生物毒性等特點(diǎn)[8],使未達(dá)排放指標(biāo)的N-甲基吡咯烷酮被釋放到環(huán)境中,會(huì)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和水域環(huán)境造成不可彌補(bǔ)的傷害。因此如何快速、高效地消除N-甲基吡咯烷酮造成的環(huán)境污染,成為亟待解決的環(huán)境問題。

    目前,含N-甲基吡咯烷酮廢水的處理方法主要為物理化學(xué)法,該方法不但成本較高,且極易造成環(huán)境二次污染;除此之外生物處理技術(shù)具有高效、經(jīng)濟(jì)且無二次污染等特點(diǎn),能實(shí)現(xiàn)無毒無害的環(huán)境治理,是目前應(yīng)用較為廣泛的環(huán)境處理技術(shù)[9]。因此,在環(huán)境中篩選能夠消除N-甲基吡咯烷酮的有效菌株,是解決N-甲基吡咯烷酮環(huán)境污染問題最直接有效的方法。然而,目前對(duì)N-甲基吡咯烷酮的高效降解菌株鮮有研究,本文在某廢水處理的活性污泥中,通過馴化后,篩選出可降解N-甲基吡咯烷酮的有效菌株,經(jīng)鑒定地衣芽孢桿菌可對(duì)N-甲基吡咯烷酮進(jìn)行高效降解。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 菌源

    活性污泥來自于山東某新材料股份有限公司廠區(qū)廢水生化處理裝置中的好氧曝氣池。

    1.1.2 儀器和試劑

    儀器:HZQ-X100 型振蕩培養(yǎng)箱,哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司;MQD-B3R 組合式全溫震蕩培養(yǎng)箱,上海旻泉儀器有限公司;PHS-3C 型精密pH 計(jì),上海雷磁儀器廠;YXQ-50SI Ⅰ型高野滅菌鍋,上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司;SW-CJ-1D 型超凈工作臺(tái),蘇州蘇凈凈化科技有限公司;PCR 儀,立康生物科技有限公司;Waters Arc 型高效液相色譜儀,上海沃特世科技有限公司。

    LB 培養(yǎng)基:胰蛋白胨10.0 g/L,酵母粉5.0 g/L,氯化鈉10.0 g/L,pH 7.2;LB 固體培養(yǎng)基在上述LB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加1.5%的瓊脂,經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃,20min)后制得。

    無機(jī)鹽培養(yǎng)基:K2HPO40.6 g/L,KH2PO40.5 g/L,NaCl 0.1 g/L,MgSO40.06 g/L,CaCl20.08 g/L,F(xiàn)eSO40.008 g/L,MnSO40.008 g/L,pH 7.2,經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121 ℃,20 min)后制得。

    上述二者,若需要加入N-甲基吡咯烷酮,可根據(jù)具體需求進(jìn)行添加,本文中其含量在200 mg/L~1 000 mg/L?;瘜W(xué)藥品均為分析純。

    1.1.3 N-甲基吡咯烷酮的測(cè)定方法

    采用Waters Arc 型高效液相色譜儀對(duì)N-甲基吡咯烷酮進(jìn)行定性、定量測(cè)定[10-11]。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 降解菌株的馴化與分離

    從山東某新材料公司的好氧曝氣池中采集活性污泥,建立實(shí)驗(yàn)室好氧體系,添加N-甲基吡咯烷酮進(jìn)行污泥馴化,每24 h 添加1 次N-甲基吡咯烷酮,馴化30 d。

    稱取馴化污泥1 g,加入經(jīng)過121 ℃高溫滅菌20 min 的100 mL0.9%氯化鈉溶液中,進(jìn)行搖床180 r/min 混勻30 min 后靜止2 h,吸取上清液用無菌水梯度稀釋103~1 010 倍,在加入N-甲基吡咯烷酮的LB 固體培養(yǎng)基中進(jìn)行涂布,置于生化培養(yǎng)箱中進(jìn)行35 ℃培養(yǎng)24 h。

    挑選培養(yǎng)皿上具有明顯差異的單菌落,采用平板劃線分離的方法進(jìn)行純化培養(yǎng),連續(xù)純化3~5次,經(jīng)過反復(fù)劃線分離純化得到的純菌株,經(jīng)試管斜面富集培養(yǎng)后,保存于4 ℃冰箱中備用。

    1.2.2 降解菌株的篩選

    將分離的菌株接種至新鮮的LB 培養(yǎng)基中,富集培養(yǎng)24 h,取1 mL 菌液用0.9%氯化鈉溶液重懸菌體3~5 次,接入100 mL 含200 mg/L N-甲基吡咯烷酮的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中,以不接菌株的無機(jī)鹽培養(yǎng)基作對(duì)照,所有處理及對(duì)照組均設(shè)3 次重復(fù),降解24 h 后進(jìn)行測(cè)定N-甲基吡咯烷酮的含量,將具有良好降解能力的菌株進(jìn)行保存,選取降解能力穩(wěn)定、降解效率最高的菌株進(jìn)行后續(xù)研究及應(yīng)用。

    1.2.3 降解菌的鑒定

    降解菌株經(jīng)LB 培養(yǎng)基平板劃線培養(yǎng)24 h 后,觀察其菌落形態(tài)。

    降解菌基因組DNA 采用試劑盒提取菌株的總DNA,用16S rDNA 通用引物(27F:AGAGTTTGATC CTGGCTCAG;1492R:GGTTACCTTGTTACGACTT)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增[12-15]。PCR 反應(yīng)體系:5.0 uL 10X Taq緩沖液、1.0 uL 引物、1.0 uL 模板DNA、1.0 uL dNTP、1.0 uL DNA 聚合酶,用40 uL 的無菌水補(bǔ)足至50 uL 體系。擴(kuò)增程序:95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃引物延伸90 s、循環(huán)32次,72 ℃延伸10 min。最后將PCR 純化產(chǎn)物委托上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行測(cè)序,將測(cè)序產(chǎn)物經(jīng)由NCBI 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行序列比對(duì)。

    1.2.4 降解菌的驗(yàn)證及應(yīng)用

    采用無機(jī)鹽培養(yǎng)基,添加N-甲基吡咯烷酮作為唯一C 源和能源,N-甲基吡咯烷酮的質(zhì)量濃度為200~1 000 mg/L,菌劑添加量為1%,每2 h 取樣進(jìn)行N-甲基吡咯烷酮含量測(cè)定。

    將篩選的高效降解菌添加至某芳綸紙生產(chǎn)廢水生化裝置,其受到N-甲基吡咯烷酮的沖擊,菌株發(fā)酵后的菌液添加量為0.1%。溫度為35 ℃,溶解氧為4 mg/L,pH 為7.2~7.8,水力停留時(shí)間為12 h。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 降解菌株的篩選

    降解菌株經(jīng)過初篩純化后,得到6 株菌。采用無機(jī)鹽培養(yǎng)基,以N-甲基吡咯烷酮為唯一C 源和能源,在200 mg/L 的質(zhì)量濃度下,8 h 后不同菌株對(duì)N-甲基吡咯烷酮去除率見表1。其中N-3 對(duì)N-甲基吡咯烷酮的降解效果最好,對(duì)200 mg/L N-甲基吡咯烷酮的降解率為100%。

    表1 不同菌株對(duì)N-甲基吡咯烷酮的降解效果

    2.2 降解菌株的鑒定

    降解菌株N-3 在LB 培養(yǎng)基上表現(xiàn)為菌落較小、呈松散狀態(tài)、表面光滑、有光澤(圖1)。

    圖1 降解菌N-3 在LB 固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)

    對(duì)N-3 降解菌進(jìn)行16S rDNA 基因測(cè)序,將所獲得序列與GenBank 中已知序列進(jìn)行對(duì)比,其16S rDNA 的核苷酸序列與芽孢桿菌屬(Bacillus)不同菌株的核苷酸序列有大于99%的同源性,與其中明確標(biāo)記為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)的菌株有100%的同源性。結(jié)合該菌株的主要形態(tài)特征,確定其為地衣芽孢桿菌。

    2.3 降解菌對(duì)N-甲基吡咯烷酮的降解性能

    將降解菌N-3 經(jīng)過LB 液體培養(yǎng)及培養(yǎng)24 h后,接種至含200 mg/L N-甲基吡咯烷酮的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中,每2 h 進(jìn)行取樣測(cè)定,12 h 內(nèi)可得200 mg/L 的N-甲基吡咯烷酮完全降解,空白樣品中的N-甲基吡咯烷酮含量基本未發(fā)生變化(圖2)。

    圖2 N-3 在12 h 內(nèi)對(duì)200 mg/LN-甲基吡咯烷酮的降解效果

    將降解菌N-3 經(jīng)過LB 液體培養(yǎng)24 h 后,接種至含1 000 mg/L N-甲基吡咯烷酮的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中,每2 h 進(jìn)行取樣測(cè)定,20 h 內(nèi)可對(duì)1 000 mg/L的N-甲基吡咯烷酮降解率達(dá)99.99%,而空白樣品中的N-甲基吡咯烷酮含量基本未發(fā)生變化(圖3)。

    圖3 N-3 對(duì)1 000 mg/LN-甲基吡咯烷酮的降解效果

    2.4 降解菌N-3 在工業(yè)廢水處理中的應(yīng)用

    某芳綸紙生產(chǎn)廢水處理裝置受到N-甲基吡咯烷酮的沖擊,出水氨氮達(dá)到205.63 mg/L,COD 為1 053.69 mg/L,出水指標(biāo)不合格,經(jīng)測(cè)定,處理廢水中含有N-甲基吡咯烷酮256.92 mg/L。將N-3 菌株發(fā)酵后添加至此廢水裝置的好氧池中,菌劑添加量為0.1%,好氧池池溫為35 ℃,溶解氧為4 mg/L,pH 為7.0~7.8,水力停留時(shí)間為12 h,菌劑添加3 h,出水氨氮降至50.27 mg/L,COD 為598.23 mg/L,經(jīng)測(cè)定,菌劑添加5 h 后,出水氨氮為0 mg/L,COD 為105.23 mg/L,出水指標(biāo)合格,出水中N-甲基吡咯烷酮的含量為0 mg/L。

    3 結(jié)論

    本文從活性污泥中獲得一株可高效降解N-甲基吡咯烷酮的菌株,該菌株為好氧菌,可以N-甲基吡咯烷酮為唯一C 源和能源穩(wěn)定生長(zhǎng),經(jīng)16S rDNA 測(cè)序比對(duì)鑒定出此菌株為地衣芽孢桿菌。

    在12 h 內(nèi),該菌株可對(duì)200 mg/L 的N-甲基吡咯烷酮完全降解;在20 h 內(nèi),該菌株對(duì)1 000 ppm的N-甲基吡咯烷酮的降解率達(dá)99.99%。本試驗(yàn)所獲得的N-甲基吡咯烷酮高效降解菌株,彌補(bǔ)了N-甲基吡咯烷酮生物處理有效菌劑的空白,為工業(yè)廢水中N-甲基吡咯烷酮生物處理提供了可能,為進(jìn)一步研究N-甲基吡咯烷酮生物處理途徑奠定了基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    吡咯烷酮無機(jī)鹽菌劑
    聚乙烯吡咯烷酮分子三級(jí)中紅外光譜研究
    2021年《無機(jī)鹽工業(yè)》總索引
    一種聚乙烯吡咯烷酮/氧化石墨烯/聚偏氟乙烯介電復(fù)合材料及其制備方法
    復(fù)合微生物菌劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用
    外生菌根真菌菌劑的制備及保存研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:26
    歐盟重新評(píng)估聚乙烯吡咯烷酮(E1201)和聚乙烯聚吡咯烷酮(E1202)作為食品添加劑的安全性
    新型液體菌劑研制成功
    “播可潤(rùn)”微生物菌劑在甜瓜上的應(yīng)用效果研究
    無機(jī)鹽對(duì)氣藏砂巖表面動(dòng)態(tài)潤(rùn)濕性的影響研究
    聚乙烯吡咯烷酮對(duì)Pt/Ru雙金屬納米簇的結(jié)構(gòu)和催化性能影響
    国产成人a∨麻豆精品| 满18在线观看网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产精品一区二区在线不卡| 成年人黄色毛片网站| 色94色欧美一区二区| 国产淫语在线视频| 18禁观看日本| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 性色av一级| 久久ye,这里只有精品| 七月丁香在线播放| 观看av在线不卡| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲成人免费电影在线观看 | 欧美黑人精品巨大| 飞空精品影院首页| 国产精品久久久久成人av| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久中文字幕一级| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲av成人精品一二三区| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品九九99| 午夜免费观看性视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 又黄又粗又硬又大视频| 黄色a级毛片大全视频| 多毛熟女@视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 在线看a的网站| 90打野战视频偷拍视频| 国产av一区二区精品久久| 韩国精品一区二区三区| 欧美日韩黄片免| 黄色 视频免费看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久鲁丝午夜福利片| 精品一品国产午夜福利视频| 乱人伦中国视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美人与性动交α欧美软件| av国产精品久久久久影院| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲国产精品国产精品| 久热爱精品视频在线9| 91精品国产国语对白视频| 七月丁香在线播放| 91国产中文字幕| 中国美女看黄片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 在线观看人妻少妇| 丰满饥渴人妻一区二区三| 青青草视频在线视频观看| 国产精品久久久久成人av| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 成人影院久久| 首页视频小说图片口味搜索 | 一本综合久久免费| 看免费av毛片| 国产片内射在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 91国产中文字幕| 青草久久国产| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品自拍成人| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 男女床上黄色一级片免费看| 青草久久国产| 大香蕉久久网| 日韩欧美一区视频在线观看| 黄色 视频免费看| 午夜激情av网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女福利国产在线| 多毛熟女@视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 香蕉国产在线看| 亚洲av国产av综合av卡| 又大又爽又粗| 欧美激情高清一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 免费在线观看完整版高清| 欧美97在线视频| 97在线人人人人妻| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 午夜两性在线视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 99九九在线精品视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 91麻豆av在线| 各种免费的搞黄视频| 最新在线观看一区二区三区 | 一区二区三区四区激情视频| 色视频在线一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久久久久免费视频了| 国产成人av激情在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| av电影中文网址| 无限看片的www在线观看| 最近手机中文字幕大全| 五月天丁香电影| 午夜激情av网站| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久精品久久久久久久性| 亚洲av综合色区一区| 老汉色∧v一级毛片| 国产高清视频在线播放一区 | 999久久久国产精品视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本91视频免费播放| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品国产av在线观看| 亚洲成色77777| 国产精品一区二区在线观看99| 美女高潮到喷水免费观看| 天堂中文最新版在线下载| 日本a在线网址| 一区二区三区精品91| bbb黄色大片| 国产成人欧美在线观看 | 日韩av免费高清视频| 高清av免费在线| 久久影院123| 9色porny在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产91精品成人一区二区三区 | 首页视频小说图片口味搜索 | 国产男女内射视频| 我的亚洲天堂| 午夜福利在线免费观看网站| 五月开心婷婷网| 少妇精品久久久久久久| 国产视频一区二区在线看| 国产成人精品久久二区二区免费| 色视频在线一区二区三区| 国产成人91sexporn| 美女大奶头黄色视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 久久中文字幕一级| 99re6热这里在线精品视频| 欧美在线黄色| 欧美+亚洲+日韩+国产| 午夜两性在线视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美另类一区| 免费在线观看日本一区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲 欧美一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 熟女av电影| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本五十路高清| 老汉色∧v一级毛片| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久久久久久精品精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品免费视频内射| 天堂俺去俺来也www色官网| 老司机靠b影院| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久人人97超碰香蕉20202| 乱人伦中国视频| 男人舔女人的私密视频| 成年av动漫网址| 日本五十路高清| 欧美在线黄色| 国产91精品成人一区二区三区 | 视频区图区小说| 日韩制服骚丝袜av| √禁漫天堂资源中文www| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一区二区三区四区激情视频| 欧美性长视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩欧美一区视频在线观看| 91精品三级在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 1024视频免费在线观看| 精品国产一区二区久久| 婷婷丁香在线五月| 午夜免费鲁丝| 一本久久精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本av免费视频播放| 交换朋友夫妻互换小说| 99精品久久久久人妻精品| 国产激情久久老熟女| 黄色怎么调成土黄色| 日韩免费高清中文字幕av| 一级黄片播放器| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产主播在线观看一区二区 | 2018国产大陆天天弄谢| 搡老乐熟女国产| 久久国产亚洲av麻豆专区| 老司机在亚洲福利影院| 另类精品久久| 成年动漫av网址| 大香蕉久久网| 一级片免费观看大全| 国产成人91sexporn| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 最近手机中文字幕大全| 丝袜脚勾引网站| 秋霞在线观看毛片| 自线自在国产av| 午夜免费观看性视频| 在线天堂中文资源库| 大话2 男鬼变身卡| 国产精品偷伦视频观看了| 99热网站在线观看| 多毛熟女@视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 精品国产一区二区久久| 伦理电影免费视频| 不卡av一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲av电影在线进入| 亚洲人成电影观看| 91麻豆av在线| 丝袜美足系列| 亚洲中文字幕日韩| 国产野战对白在线观看| 久久久精品免费免费高清| 久久中文字幕一级| 成年人黄色毛片网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产免费视频播放在线视频| av不卡在线播放| 飞空精品影院首页| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 90打野战视频偷拍视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日日夜夜操网爽| 免费看av在线观看网站| 美女中出高潮动态图| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 满18在线观看网站| 日本av免费视频播放| 91麻豆av在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲国产欧美在线一区| 美女福利国产在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产一区二区 视频在线| 欧美国产精品va在线观看不卡| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 午夜福利一区二区在线看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品久久蜜臀av无| 黄片播放在线免费| 秋霞在线观看毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品.久久久| 国产精品成人在线| 搡老乐熟女国产| 美女国产高潮福利片在线看| 国产免费又黄又爽又色| 满18在线观看网站| 亚洲综合色网址| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 91字幕亚洲| 成人免费观看视频高清| 精品国产乱码久久久久久小说| 午夜福利视频精品| av天堂在线播放| 国产高清不卡午夜福利| 国产一区二区在线观看av| 9191精品国产免费久久| 久久久久久久国产电影| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 丁香六月欧美| 亚洲av在线观看美女高潮| 波野结衣二区三区在线| 日韩制服骚丝袜av| 美国免费a级毛片| 国产成人系列免费观看| 高清黄色对白视频在线免费看| www.精华液| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久欧美国产精品| 香蕉国产在线看| 脱女人内裤的视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产三级黄色录像| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产成人影院久久av| 精品久久蜜臀av无| 老司机深夜福利视频在线观看 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 一二三四社区在线视频社区8| 观看av在线不卡| 9191精品国产免费久久| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲七黄色美女视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 女人久久www免费人成看片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 丝袜美足系列| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99国产综合亚洲精品| 首页视频小说图片口味搜索 | 中文字幕人妻丝袜制服| 2018国产大陆天天弄谢| 一区二区三区激情视频| 黄色视频不卡| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲精品一区蜜桃| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品久久久久成人av| 久久毛片免费看一区二区三区| 91国产中文字幕| 啦啦啦视频在线资源免费观看| videos熟女内射| 久久免费观看电影| 黄色怎么调成土黄色| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品第二区| 亚洲国产日韩一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本91视频免费播放| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产不卡av网站在线观看| 69精品国产乱码久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人影院久久av| 国产1区2区3区精品| 搡老岳熟女国产| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲综合色网址| 一级黄色大片毛片| 成人免费观看视频高清| 777米奇影视久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产三级黄色录像| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 大香蕉久久网| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲图色成人| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日本av手机在线免费观看| av在线老鸭窝| 国产精品一国产av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久久精品免费免费高清| 午夜老司机福利片| 黄色视频在线播放观看不卡| av有码第一页| 一边亲一边摸免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产av精品麻豆| av天堂久久9| 亚洲图色成人| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久精品国产综合久久久| av视频免费观看在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 成年人午夜在线观看视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 成人国产一区最新在线观看 | 一本综合久久免费| 国产欧美日韩一区二区三 | 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品人妻1区二区| 亚洲人成电影观看| 午夜福利影视在线免费观看| 宅男免费午夜| 一级毛片 在线播放| 一级黄片播放器| 大话2 男鬼变身卡| av国产精品久久久久影院| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产色视频综合| 99九九在线精品视频| 午夜福利一区二区在线看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产亚洲av高清不卡| 色网站视频免费| 久久国产精品人妻蜜桃| 无遮挡黄片免费观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品福利观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 9色porny在线观看| 丝袜喷水一区| 大香蕉久久成人网| 亚洲国产欧美网| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精品在线美女| 男女下面插进去视频免费观看| 丁香六月欧美| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲国产av影院在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久视频综合| 老汉色∧v一级毛片| 一级片免费观看大全| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本黄色日本黄色录像| √禁漫天堂资源中文www| 丝袜在线中文字幕| 1024视频免费在线观看| 国产精品久久久久成人av| 人妻一区二区av| 2018国产大陆天天弄谢| 丝袜喷水一区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 咕卡用的链子| 99re6热这里在线精品视频| 高清av免费在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品成人在线| www日本在线高清视频| 欧美日韩综合久久久久久| 国精品久久久久久国模美| 国产又色又爽无遮挡免| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av线在线观看网站| 麻豆国产av国片精品| 亚洲精品第二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 下体分泌物呈黄色| 国产xxxxx性猛交| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 婷婷丁香在线五月| 日本av手机在线免费观看| 人人澡人人妻人| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美人与善性xxx| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | av电影中文网址| 亚洲av电影在线进入| 日日夜夜操网爽| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 免费av中文字幕在线| 欧美97在线视频| 七月丁香在线播放| 亚洲av在线观看美女高潮| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩大码丰满熟妇| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人精品无人区| 欧美久久黑人一区二区| 久热这里只有精品99| 亚洲综合色网址| 亚洲 国产 在线| 99香蕉大伊视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美在线一区亚洲| av不卡在线播放| 成人亚洲欧美一区二区av| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲精品一二三| svipshipincom国产片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲免费av在线视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产国语露脸激情在线看| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国产国语对白av| 国产成人精品在线电影| 中文字幕高清在线视频| 啦啦啦 在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 一边亲一边摸免费视频| 日本欧美视频一区| e午夜精品久久久久久久| 嫩草影视91久久| 日韩伦理黄色片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久精品成人免费网站| 9热在线视频观看99| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产亚洲精品久久久久5区| 一本综合久久免费| 成在线人永久免费视频| 精品久久久精品久久久| 女人久久www免费人成看片| 精品高清国产在线一区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产xxxxx性猛交| 色综合欧美亚洲国产小说| 青春草视频在线免费观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产成人91sexporn| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日本vs欧美在线观看视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产在线一区二区三区精| 操出白浆在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 男人舔女人的私密视频| 亚洲国产av新网站| av天堂在线播放| 一本色道久久久久久精品综合| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成人国产av品久久久| 交换朋友夫妻互换小说| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 婷婷色综合www| 国产成人精品久久久久久| 亚洲一区中文字幕在线| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91国产中文字幕| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本wwww免费看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品人妻在线不人妻| 精品第一国产精品| 看免费成人av毛片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 99国产精品99久久久久| 黑丝袜美女国产一区| 一区二区三区乱码不卡18| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 无限看片的www在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 18在线观看网站| 999精品在线视频| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 操出白浆在线播放| 自线自在国产av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日韩视频在线欧美| 国产高清videossex| 十八禁网站网址无遮挡| 丝袜美足系列| 日本a在线网址| 午夜两性在线视频| 波多野结衣一区麻豆| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 十分钟在线观看高清视频www| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品三级大全| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 丝袜美腿诱惑在线| 五月天丁香电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 少妇粗大呻吟视频|