市售不同廠家格列齊特緩釋片的體外釋放度比較

任 靜，楊金榮，許煜靜

（天津醫(yī)科大學藥學院，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）

格列齊特（gliclazide）為第二代口服磺酰脲類降血糖藥，能降低血小板黏附力，降低血糖黏度，用于成年型糖尿病或伴有血管病變者。法國施維雅公司率先研制出了格列齊特緩釋制劑，規(guī)格為每片30 mg，2003年在中國上市，商品名為達美康。我國有多個廠家生產(chǎn)格列齊特緩釋片，其處方工藝差別大[1]。在多種pH溶出介質(zhì)中溶出曲線的測定是先進國家藥物審評機構評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段，該試驗可用于評估不同來源的同一制劑內(nèi)在質(zhì)量差異[2-3]。本試驗對6個市售廠家格列齊特緩釋片在3種不同釋放介質(zhì)中的體外釋放進行研究，并與達美康緩釋片進行比較，為評價國內(nèi)格列齊特緩釋片的質(zhì)量情況提供依據(jù)，從而為藥品的安全性、有效性和穩(wěn)定性提供保障。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 ZRS-8智能溶出儀（天津大學無線電廠），安捷倫1200系列高效液相色譜儀，BSA124S萬分之一電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.1.2 試劑 格列齊特對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100269-201004）；格列齊特緩釋片（以下簡稱達美康，批號2001769）；其余6個廠家的格列齊特緩釋片分別為A-1（北京某藥廠，批號21311020），A-2（北京某藥廠，批號 21312029），B-1（山東某藥廠，批號131102），B-2（山東某藥廠，批號140501），C（深圳某藥廠，批號 1402064），D（山東某藥廠，批號 140306），E（海南某藥廠，批號 20131002），F(xiàn)（天津某藥廠，批號20130603）。甲醇(色譜純，天津基準化學試劑有限公司)，乙腈（色譜純，J&KSCIENTIFIC TLD），三氟乙酸(色譜純，J&K SCIENTIFIC TLD)，三乙胺（色譜純，J&K SCIENTIFICTLD）。

1.2 試驗方法

1.2.1 外觀檢查 觀察各廠家藥片是否完整光潔，色澤均勻，有適宜的硬度。

1.2.2 色譜條件 色譜柱：AgilentC8色譜柱（5μm，150mm× 4.6mm）；流動相：乙腈-水-三乙胺-三氟乙酸（48∶52∶0.1∶0.1）；檢測波長：228 nm；進樣量：20 μL；柱溫：35 ℃；流速：1.0mL·min-1。

1.2.3 儲備液的配制 精密稱取格列齊特對照品約30mg，置100mL量瓶中，加甲醇5mL溶解，加pH 7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋至刻度(濃度為300 μg·mL-1)，搖勻，作為儲備液。

1.2.4 標準曲線的制備方法 精密量取上述儲備液 0.5、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、6.0mL，分別置 50 mL量瓶中，加入pH 7.4 PBS稀釋至刻度，制成系列對照品溶液。在上述色譜條件下，分別量取上述溶液20μL進樣，測定峰面積。

1.2.5 對照品溶液的配制 精密稱取格列齊特對照品約33mg，置100mL量瓶中，加甲醇5mL溶解，加 pH 7.4 PBS 稀釋至刻度(濃度為 330 μg·mL-1)，搖勻，精密量取上述儲備此液5.0mL置50mL量瓶中，加入pH 7.4 PBS稀釋至刻度，制成對照品溶液。在上述色譜條件下，分別量取上述溶液20μL進樣，測定峰面積。

1.2.6 釋放度測定方法[4]取樣品6片，采用ChP2010年版釋放度測定法第一法裝置，以脫氣處理的pH 7.4PBS900mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度(37±0.5)℃，依法操作。分別在 1、2、4、6、8、10、12、24 h取溶液5mL，濾過，并及時補充同溫度介質(zhì)5mL，取續(xù)濾液20μL進樣，記錄色譜圖。以外標法計算每片在不同時間的累積釋放百分率。

1.2.7 樣品在不同介質(zhì)中的釋放度測定 照1.2.6的方法，分別以pH 7.4 PBS、pH 4.5 PBS和蒸餾水作為釋放介質(zhì)，分別在 1、2、4、6、8、10、12 、24 h 取樣，考察樣品在不同介質(zhì)中的釋放情況。

1.2.8 結果判定方法

1.2.8.1 藥品標準[4]：格列齊特緩釋片在2、4、12 h的格列齊特釋放量應分別為標示量的17%～31%、35%～55%、75%以上。

1.2.8.2 相似因子[1，5]：將各廠家樣品釋放曲線分別與達美康釋放曲線進行比較，計算相似因子。相似因子計算公式為 f2=50×lg{100×[1+1/n×∑(Rt-Tt)2]-0.5}，Rt與Tt分別代表參比和受試制劑第t時間點的平均累積釋放百分率，n為測試點數(shù)，若受試與參比制劑的溶出曲線間的f2值不小于50，則認為兩者相似。

1.2.9 模型擬合 將釋藥曲線進行零級方程、一級方程和Higuchi方程的釋藥模型擬合[6-8，10]，比較擬合參數(shù)。

1.2.10 釋放機制[10]將釋藥曲線進行Ritger-Peppas方程釋藥模型擬合，提取參數(shù)k，確定釋藥機制。根據(jù)Ritger-Peppas方程式：Mt/M∞=ktn，對于圓柱型制劑，時間項t的指數(shù)的意義為：（1）當n≤0.49，藥物釋放機制為Fickian擴散；（2）0.49

1.3 參數(shù)提取與比較 將釋藥曲線以威布爾方程進行擬合，對所得的威布爾參數(shù)m，T50，Td分別與達美康進行比較（t檢驗），比較 A-1，A-2 的 T50，Td（t檢驗）[6]。

2 結果

2.1 外觀檢查 B-1廠家藥片中有邊緣不整，有明顯的吸潮膨脹現(xiàn)象，硬度小，外觀檢查不合格；其余廠家樣品外觀均合格。

2.2 格列齊特標準曲線的線性范圍 分別以峰面積作為縱坐標，以對照品溶液濃度作為橫坐標進行線性回歸，回歸方程y=53.203x+25.967，相關系數(shù)r=0.999 6，結果表明格列齊特在 2.95～35.41μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，線性關系良好。

2.3 釋放度結果 不同廠家格列齊特緩釋片在不同釋放介質(zhì)中平均累積釋放百分率數(shù)據(jù)見表1～3。

2.3 結果判定

2.3.1 藥品標準 從表1中看出各廠家樣品在pH 7.4PBS中2、4、12h的釋放度數(shù)據(jù)均符合要求。

2.3.2 相似因子 各廠家樣品釋放曲線與達美康溶出曲線的相似因子見表4。從表4中可以看出在pH 7.4 PBS中，只有E廠家樣品與達美康的相似因子小于50，與達美康不相似，其余廠家樣品均與達美康相似；在pH 4.5 PBS中，只有D和E廠家樣品與達美康的相似因子大于50，其余廠家樣品均不相似；在蒸餾水中只有A-1廠家樣品與達美康的相似因子小于50，不相似，其余均相似。綜上，只有D廠家樣品在pH 7.4 PBS、pH 4.5 PBS和蒸餾水中與達美康相似。

表1 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 7.4 PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6Tab1 Accumulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentmanufacturers in phosphate buffered saline(pH 7.4)(%)(n=6

表1 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 7.4 PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6Tab1 Accumulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentmanufacturers in phosphate buffered saline(pH 7.4)(%)(n=6

時間 達美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 8.75±0.44 9.83±0.13 9.95±0.25 16.81±2.28 12.02± 1.11 9.92±0.70 13.11±1.62 12.86±0.67 2 h 21.31±1.00 21.72±1.57 21.83±0.83 23.96±0.96 20.93± 2.38 19.43±0.92 21.29±2.12 23.91±1.09 4 h 48.62±2.20 43.60±0.41 43.68±1.84 48.85±2.58 40.80± 6.66 40.09±2.21 38.15±2.23 45.33±2.25 6 h 70.81±2.34 63.11±0.67 62.62±1.67 68.64±2.24 58.63±10.94 59.27±2.98 51.46±2.55 62.86±2.97 8 h 82.53±2.51 79.22±1.24 78.43±1.71 86.25±0.79 72.42±11.93 75.95±3.4 65.12±5.27 76.67±3.48 10 h 89.79±2.77 91.2±1.78 90.10±2.02 94.40±3.55 81.52± 9.45 89.28±1.79 76.23±4.86 84.77±3.13 12 h 95.46±3.79 96.54±1.29 95.05±1.38 93.85±4.39 85.98± 8.25 96.25±1.50 84.39±4.95 91.49±3.47 24 h 99.58±1.82 96.15±1.22 94.57±3.36 92.75±4.50 97.25± 4.60 100.77±2.64 99.58±2.21 99.46±3.74

表2 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 4.5PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6)Tab2 Accum ulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentm anufactures in phosphate bu ffered saline(pH 4.5)(%)(n=6

表2 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 4.5PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6)Tab2 Accum ulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentm anufactures in phosphate bu ffered saline(pH 4.5)(%)(n=6

時間 達美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 2.39±0.11 7.04±0.92 6.45±0.48 5.42±0.57 7.3±1.27 7.07± 0.39 4.50±1.29 4.67±0.44 2 h 6.79±0.39 16.10±2.45 14.40±1.27 14.03±1.26 17.16±2.42 12.55± 0.53 10.45±2.47 11.57±1.26 4 h 18.14±0.39 34.70±4.68 31.24±3.27 30.68±1.84 35.32±2.60 23.67±11.05 23.73±5.79 27.55±4.47 6 h 28.55±1.77 51.97±5.78 46.79±5.29 47.67±4.74 50.56±3.83 36.13± 1.63 36.34±7.94 37.56±4.95 8 h 36.46±1.85 62.55±5.71 59.43±5.53 54.97±3.27 63.76±4.97 47.70± 3.25 46.88±8.45 51.38±4.67 10 h 42.08±1.88 70.88±5.54 69.59±6.46 62.05±5.89 74.09±2.36 54.78± 3.28 54.63±8.33 60.13±4.79 12 h 46.15±1.99 75.72±5.90 75.39±6.99 64.86±7.32 78.83±1.51 59.94± 2.98 60.10±7.93 66.27±5.50 24 h 60.79±3.92 83.31±3.95 83.66±6.28 70.86±6.80 84.92±1.51 77.57± 4.25 73.61±5.54 77.16±4.55

表3 不同廠家格列齊特緩釋片在蒸餾水中的平均累積百分率(%)(n=6)Tab3 Accumu late dissolution percentageof dlam icronm r and gliclazid sustained-release tabletsof differentmanufactures in water(%)(n=6

表3 不同廠家格列齊特緩釋片在蒸餾水中的平均累積百分率(%)(n=6)Tab3 Accumu late dissolution percentageof dlam icronm r and gliclazid sustained-release tabletsof differentmanufactures in water(%)(n=6

時間 達美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 5.31±0.42 11.04±1.14 8.70±1.00 7.14±0.44 7.78±0.73 7.42±0.56 8.32±1.68 6.47± 0.37 2 h 14.35±1.62 24.79±2.42 20.35±2.25 18.20±1.15 18.09±1.53 16.75±1.05 18.31±3.67 15.89± 0.62 4 h 39.43±4.71 54.47±4.69 43.88±4.26 38.45±1.88 41.83±4.25 40.48±3.90 41.52±5.84 38.58±11.43 6 h 57.94±6.38 77.40±2,51 67.26±5.80 56.38±1.82 62.24±3.94 64.25±4.29 60.99±6.66 59.20± 1.99 8 h 72.26±7.92 90.61±3.11 83.71±5.72 67.09±1.58 75.64±3.65 77.64±3.92 71.97±6.56 73.70± 2.28 10 h 80.89±6.74 96.47±1.43 90.75±4.91 72.54±1.62 85.21±2.74 84.15±2.96 79.63±4.19 84.45± 2.49 12 h 87.99±3.40 97.49±1.00 92.52±4.37 74.90±2.31 88.99±2.14 86.76±1.63 82.52±3.01 90.32± 1.90 24 h 94.03±2.97 96.85±0.69 97.28±1.50 82.24±2.51 93.72±1.8 87.95±1.76 83.83±1.68 94.90± 1.05

表4 不同廠家格列齊特緩釋片與達美康釋放曲線的相似因子Tab4 f2 factor of gliclazid sustained-release tablets of 6 manufactures

A廠家兩批產(chǎn)品A-1與A-2在pH 7.4 PBS、pH4.5 PBS中，相似因子差異很小，但在蒸餾水釋放介質(zhì)中，相似因子差異大。

2.3.3 模型擬合 根據(jù)上述釋放度測定結果，對達美康及6個不同廠家產(chǎn)品進行釋藥模型擬合，在pH 7.4PBS中，達美康一級方程擬合度的相關系數(shù)較高，為0.995 5，其余廠家產(chǎn)品Higuchi方程擬合的相關系數(shù)較高，均大于等于0.984。在pH 4.5 PBS和蒸餾水中，所有廠家產(chǎn)品一級方程擬合度的相關系數(shù)較高。

2.3.4 釋藥機制比較 將不同釋放介質(zhì)中的平均累積釋放百分數(shù)帶入Ritger-Peppas方程Mt/M∞=ktn,提取參數(shù) n（表 5）。

從表5可以看出，達美康在3種介質(zhì)中均為骨架溶蝕機制。市售樣品在pH 7.4 PBS中，只有E廠產(chǎn)品的釋放機制為擴散與骨架溶蝕機制相結合(0.49

表5 不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的Ritger-Peppas方程參數(shù)nTab5 Param eters n in Ritger-Peppas equation for gliclazid sustained-release tablets of 6 m anu factures in different dissolutionmedium s

2.3.5 威布爾方程擬合參數(shù)比較 不同釋放介質(zhì)中的平均累積釋放百分數(shù)帶入威布爾（Weibull）概率分布函數(shù)表達式提取參數(shù)m（形態(tài)參數(shù)）、T50（釋放50%所需的時間）、Td（釋放 63.2%所需的時間），結果見表7。對所得參數(shù)T50、Td分別與達美康進行t檢驗。

從表7中可以看出，在pH 7.4 PBS中，B-2廠家產(chǎn)品與達美康T50、Td有顯著差異（P<0.01），其余無明顯差異（P>0.05）；在pH 4.5 PBS中，所有廠家產(chǎn)品與達美康T50、Td的P均小于0.05，有差異；在蒸餾水中，B-2、E和F廠家與達美康T50、Td無明顯差異（P>0.05），其余廠家有明顯差異（P<0.01）。綜上，D、E和F廠家產(chǎn)品與達美康T50，Td差異較小。

A廠家兩批產(chǎn)品A-1與A-2在pH 7.4 PBS和pH 4.5 PBS中，T50、Td與達美康無明顯差異（P>0.05），在蒸餾水中有顯著差異（P<0.01）。

表6 6個不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的溶出參數(shù)(%)(n=6，)Tab6 Dissolution degreesparametersofgliclazid sustained-release tabletsof6manufacturesin 3 differentdissolutionmedium s(%)(n=6)

表6 6個不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的溶出參數(shù)(%)(n=6，)Tab6 Dissolution degreesparametersofgliclazid sustained-release tabletsof6manufacturesin 3 differentdissolutionmedium s(%)(n=6)

與達美康比較**0.01

參數(shù) 達美康 A-1 A-2 B-2 C D E F PBSpH7.4 m 1.42±0.04 1.34±0.03 1.33±0.02 1.29±0.09 1.20±0.10 1.21±0.03 1.04±0.05 1.15±0.04 T50/h 4.17±0.18 4.32±0.10 4.32±0.19 3.87±0.16***4.87±0.98 4.68±0.26 4.98±1.06 4.32±0.27 Td/h 5.41±0.26 5.67±0.15 5.69±0.27 5.15±0.19***6.73±1.60 6.51±0.36 7.18±1.38 5.95±0.43 m 1.51±0.07 1.14±0.04 1.44±0.05 1.05±0.04 1.39±0.03 1.43±0.04 1.26±0.05 1.45±0.05蒸餾水 T50/h 5.36±0.62 3.56±0.30*** 4.31±0.46*** 6.38±0.21 4.79±0.35*** 4.90±0.38*** 5.17±0.67 5.09±0.18 Td/h 6.84±0.86 4.57±0.41*** 5.57±0.64*** 9.05±0.32 6.24±0.47** 6.37±0.53** 6.91±0.84 6.55±0.27 PBSpH4.5 m 1.32±0.04 1.22±0.05 1.25±0.05 1.21±0.10 1.23±0.09 1.05±0.07 1.24±0.02 1.26±0.05 T50/h 10.81±0.48 6.22±0.78*** 6.22±0.7*** 7.02±1.11***5.95±0.38*** 9.11±0.57*** 9.08±1.67** 7.94±0.89***Td/h 14.13±0.73 8.40±1.10*** 8.90±1.02*** 9.47±1.73***8.03±0.56*** 12.94±1.05*** 12.22±2.23*** 10.61±1.25***

3 討論

本研究的6個廠家產(chǎn)品雖均從市場流通環(huán)節(jié)獲得，但仍不能排除因生產(chǎn)規(guī)模和生產(chǎn)工藝而造成的固體制劑的內(nèi)在品質(zhì)存在的差異。研究結果顯示在pH 7.4 PBS和蒸餾水中，不同廠家的格列齊特緩釋片釋放曲線與達美康基本相似，而在pH 4.5 PBS中，各廠家樣品的釋放曲線與達美康體現(xiàn)出明顯的差異。

釋放曲線相似因子和釋藥機制的綜合比較顯示，在3種不同釋放介質(zhì)中，由于原研藥達美康的釋藥機制為骨架溶蝕且n值大于1，市售產(chǎn)品的n值較小，越接近或小于0.84時，就可能表現(xiàn)出擴散與骨架溶蝕機制相結合的釋藥機制，與達美康差異越大，相似因子就會偏低，甚至小于50。綜合比較，只有D廠家與原研藥達美康在3種不同釋放介質(zhì)中與達美康釋放機制相似且相似因子均大于50。6個廠家產(chǎn)品在pH 4.5 PBS差異體現(xiàn)最為明顯。釋放程度偏大是所有廠家產(chǎn)品共同的問題。威布爾函數(shù)參數(shù)的綜合比較顯示，D、E和F廠家與原研藥達美康在3種不同釋放介質(zhì)中溶出參數(shù)與達美康差異較小。

B-1廠家藥片外觀檢查不合格，判斷可能是由于包裝材料不合格造成的。A廠家兩批產(chǎn)品相似因子、溶出參數(shù)、釋藥機制參數(shù)的比較均顯示在pH7.4 PBS和pH4.5 PBS中無明顯差異，在蒸餾水中有顯著差異，說明A廠家產(chǎn)品批間存在差異。

溶出度是評價口服固體藥物制劑內(nèi)在品質(zhì)優(yōu)劣的核心技術所在，由于與生物利用度密切相關，故提高溶出度要求，可大大提高在各種人群體內(nèi)的生物利用度，從而促進制藥企業(yè)在科研、技術人員上的投入，使得安全、有效、技術含量高的產(chǎn)品充分占領市場。日本、美國已先后推出日本參比制劑目錄、固體制劑溶出曲線數(shù)據(jù)庫來提高仿制藥的內(nèi)在品質(zhì)，使仿制藥具有與原創(chuàng)藥相同的生物等效性。因此通過國家藥品審評部門加大對溶出度試驗的審評力度并逐步提高標準，與國際接軌，可促進我國藥品生產(chǎn)工藝的提高，推動藥品生產(chǎn)企業(yè)對制劑工藝的深入研究，帶動藥學高等教育的發(fā)展，同時拉動我國藥用輔料行業(yè)、制藥機械設備等行業(yè)的發(fā)展和進步，并對藥品研發(fā)公司的整合、企業(yè)兼并的市場行為也必將具有積極的促進作用。

[1]盧駿，吳濤，胡建平，等.格列齊特緩釋片的制備及體外釋放度[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2004,35(7):410

[2]謝沐風.如何科學、客觀地制訂溶出度試驗質(zhì)量標準[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012,43(3):A23

[3]張啟明,謝沐風,寧保明,等.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009,40(2):308

[4]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.YBH03642006格列齊特緩釋片[S]

[5]Shah V P,Tsong Y,Shathe P,etal.In vitro dissolution profile comparision-statisticsofthesimalarity factor,f2[J].PharmaceutRes,1998,15(6):8891

[6]王志強，吳繼禹，張秀華.用Excel軟件對溶出數(shù)據(jù)進行多種曲線擬合和處理[J].海峽藥學，2006,18(1):47

[7]張莉，夏運岳.用電子表格Excel計算藥物溶出度Weibull分布參數(shù)[J].藥學進展，2002,26(1):8

[8]劉瑞新，李學林，王青曉.威布爾溶出曲線的4種非線性擬合方法比較[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2009,29(15):1315

[9]方積乾.衛(wèi)生統(tǒng)計學[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008:105-105

[10]陳健，朱盛山，蔡延渠，等.口服緩控釋制劑數(shù)學模型研究概述[J].中草藥，2011,42(8):1625