前列腺癌組織中p53、bcl-2和E-cadherin蛋白的表達(dá)水平及臨床意義

韓麗媛，王偉，王慧萍，陳東＊

（1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院，北京 100029；2.國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所，北京 100081）

前列腺癌是中老年男性泌尿生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)其發(fā)病率逐年上升。因此對(duì)前列腺癌發(fā)生發(fā)展以及治療和預(yù)后的研究具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)：p53 基因是腫瘤 抑制基因，突變后則失去原有功能反而促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和過(guò)度增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［1］。bcl-2是一種凋亡抑制基因，可抑制細(xì)胞凋亡延長(zhǎng)其生長(zhǎng)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［2］。E-cadherin是鈣黏蛋白家族中的主要成員之一，主要介導(dǎo)上皮細(xì)胞之間的粘附，與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3］。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)p53、bcl-2和E-cadherin在不同病理分級(jí)的前列腺癌組織及前列腺增生組織中的表達(dá)情況，探討其在前列腺癌病變中表達(dá)的意義以及與前列腺癌病理分級(jí)的相關(guān)性，為其鑒別診斷和判斷預(yù)后提供幫助。

材料和方法

一、標(biāo)本來(lái)源及分組

收集2012年6月至2013年12月北京安貞醫(yī)院活檢及手術(shù)切除的前列腺標(biāo)本71例，均經(jīng)病理診斷明確，其中前列腺增生組織25例，前列腺癌組織46例。前列腺癌組織按Gleason分級(jí)又分為3組，對(duì)同一腫瘤的主要結(jié)構(gòu)和次要結(jié)構(gòu)分別評(píng)分，兩項(xiàng)評(píng)分相加總積分為2～4 分者列為高分化組（11例），總積分為5～7分者列為中分化組（13例）、8～10分者列為低分化組（22例）。

二、試劑與方法

1.主要試劑：p53、bcl-2 和E-cadherin均為即用型兔抗人單克隆抗體，二抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG，3 種抗體和免疫組織化學(xué)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

2.免疫組織化學(xué)法：采用SP法，經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、過(guò)氧化物酶阻斷、孵育一抗、孵育二抗、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色、復(fù)染、脫水、透明、封片后顯微鏡下觀察。用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，PBS替代一抗作空白對(duì)照。

3.結(jié)果判斷：免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評(píng)價(jià)主要根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例。p53以細(xì)胞核著棕色顆粒為陽(yáng)性，bcl-2 以細(xì)胞漿著棕色顆粒為陽(yáng)性，E-cadherin以細(xì)胞膜顯棕色著色為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)采用高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例的平均數(shù)，以百分率表示。無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞率＜10%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞率≥10%為陽(yáng)性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 14.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，兩組間表達(dá)率采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、p53在前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達(dá)

在前列腺組織中，p53 主要表達(dá)于正常的腺上皮細(xì)胞以及癌變細(xì)胞的細(xì)胞核（圖1），其在25例前列腺增生組織中有3 例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為12.0%；46 例 前 列 腺 癌 組 織 中 有23 例 陽(yáng) 性 表達(dá)，陽(yáng)性率為50.0%；前列腺癌組織中p53 的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于前列腺增生組織的p53 的陽(yáng)性表達(dá)率（P＜0.05）（表1）。在前列腺癌高分化組、中分化組、低分化組中，p53 的陽(yáng)性表達(dá)率分別 為36.4%（4／11）、46.2%（6／13）和59.1%（13／22），表達(dá)雖然隨著癌細(xì)胞分化程度的降低而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 p53在前列腺組織中的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色SP法 ×400

表1 各組中p53、bcl-2、E-cadherin的陽(yáng)性表達(dá)率比較［n（%）］

二、bcl-2在前列腺增生和前列腺癌組織中的表達(dá)

bcl-2主要表達(dá)于正常前列腺的腺上皮細(xì)胞以及前列腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)（圖2），在25例前列腺增生組織中有2例bcl-2陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為8.0%。46例前列腺癌組織中有27例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為58.7%。兩組bcl-2 表達(dá)陽(yáng)性率相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。bcl-2在前列腺癌高分化組的陽(yáng)性表達(dá)率36.4%（4／11）顯著低于低分化組72.7%（16／22）（P＜0.05）。

三、E-cadherin在前列腺增生和前列腺癌組織中的表達(dá)

E-cadherin主要表達(dá)于前列腺上皮細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞的細(xì)胞膜（圖3），25 例前列腺增生組織全部表現(xiàn)為E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為100.0%。在46例前列腺癌組織中20例陽(yáng)性表達(dá)E-cadherin蛋白，陽(yáng)性表達(dá)率為43.5%。兩組E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在前列腺癌高、中、低分化3組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為90.9%（10／11）、46.2%（6／13）、18.2%（4／22），高分化組陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于低分化組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 p53在前列腺組織中的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色SP法 ×400

圖3 E-cadherin在前列腺組織中的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色SP法 ×400

討 論

p53基因最初是由Crawford等［4］從猿病毒40轉(zhuǎn)化細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物可分為野生型p53（Wild-type p53，wtp53）和突變型p53（mutant p53，mtp53）。wtp53 可以參與細(xì)胞周期的調(diào)控，通過(guò)阻斷有損傷的DNA 復(fù)制而保持細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)，抑制細(xì)胞惡性增殖［5］，因此其是重要的抑癌物質(zhì)。在外界因素的影響下，wtp53可轉(zhuǎn)變?yōu)閙tp53，mtp53不僅失去了正常的抑癌作用，而且可以抑制wtp53的活性，滅活其功能，從而促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［6］。wtp53在細(xì)胞中的半衰期極短，僅為20～60 min，因此一般用免疫組化的方法檢測(cè)到的p53 均為mtp53（半衰期2～12h）［7］。徐妙生等［8］關(guān)于p53的研究顯示，前列腺增生組織其陽(yáng)性率為15.0%，前列腺癌中陽(yáng)性率為33.3%，癌組織中的表達(dá)雖然有所升高，但是比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而本研究檢測(cè)到前列腺癌中p53陽(yáng)性細(xì)胞率為50.0%，顯著高于前列腺增生組織（12.0%）（P＜0.05），并且隨著癌細(xì)胞分化程度的降低，陽(yáng)性表達(dá)率呈現(xiàn)一定的升高趨勢(shì)（P＞0.05），此結(jié)果與蘇振波等［9］、于曉謨［10］的研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明在前列腺癌中mtp53的表達(dá)量明顯增加，它可能在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。有文獻(xiàn)報(bào)道［11］，低分化的前列腺癌以及雄激素非依賴性前列腺癌組織中p53蛋白表達(dá)增高，mtp53蛋白的表達(dá)與雄激素受體呈一定的負(fù)相關(guān)性，提示突變型p53蛋白的表達(dá)情況可能與前列腺癌預(yù)后發(fā)展以及對(duì)內(nèi)分泌治療的反應(yīng)性有關(guān)。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，bcl-2作為調(diào)控凋亡的重要基因產(chǎn)物廣泛受到關(guān)注，其可以抑制多種組織的細(xì)胞凋亡，是目前公認(rèn)的抗凋亡基因。bcl-2表達(dá)于細(xì)胞線粒體膜、核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，主要通過(guò)阻止細(xì)胞膜溶解、胞質(zhì)固縮及DNA 內(nèi)源性酶解等關(guān)鍵步驟來(lái)抑制細(xì)胞調(diào)亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命［12］。本研究中，前列腺癌組織中bcl-2表達(dá)陽(yáng)性率為58.7%，明顯高于前列腺增生組織中的陽(yáng)性表達(dá)（8.0%），與文獻(xiàn)［13-14］報(bào)道基本一致，提示bcl-2 可能參與了前列腺癌的發(fā)生。同時(shí)在前列腺癌不同組中，低分化組bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)72.7%，高分化組陽(yáng)性表達(dá)率為32.4%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明bcl-2蛋白表達(dá)量與前列腺癌細(xì)胞的分化程度有關(guān)，癌細(xì)胞分化差時(shí)，其表達(dá)增高?？梢?jiàn)檢測(cè)bcl-2 蛋白表達(dá)水平，對(duì)前列腺癌的鑒別診斷和分期預(yù)后評(píng)估具有一定參考價(jià)值。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)鈣黏蛋白家族成員E-cadherin 蛋白在腫瘤組織中表達(dá)普遍顯著減弱，有研究證實(shí)，其表達(dá)的降低與肺癌、肝癌、進(jìn)展期胃癌和子宮內(nèi)膜癌等腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［15-18］。E-cadherin蛋白主要介導(dǎo)同型細(xì)胞間的粘附，它通過(guò)連環(huán)素（catenin）與細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白絲連接形成E-cad復(fù)合物，參與上皮細(xì)胞間粘合及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。腫瘤細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)降低，導(dǎo)致細(xì)胞間連接松散，易于脫離原發(fā)瘤而進(jìn)入周圍組織及血管淋巴管，使腫瘤細(xì)胞獲得較強(qiáng)的侵襲能力，極易發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［19］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，前列腺癌組織中E-cad-herin表達(dá)明顯低于前列腺增生組織，并且隨著腫瘤分化程度的降低顯著改變：前列腺癌高分化組陽(yáng)性表達(dá)率90.9%，中分化組陽(yáng)性表達(dá)率48.2%，低分化組陽(yáng)性表達(dá)率18.2%，表明E-cadherin表達(dá)減弱與前列腺癌發(fā)生有關(guān)，并且其表達(dá)水平與腫瘤惡性程度的進(jìn)展密切相關(guān)。此外，溫爽等［20］還對(duì)前列腺高級(jí)別上皮內(nèi)腫瘤中的E-cadherin表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)量明顯低于前列腺增生組織，提示E-cadherin蛋白有可能在前列腺癌變?cè)缙诩撮_始發(fā)揮作用。Whiteland等［21］研究認(rèn)為：E-cadherind蛋白表達(dá)量的改變，不僅與前列腺癌Gleason評(píng)分等級(jí)有關(guān)，還與臨床分期及患者預(yù)后生存狀況顯著相關(guān)。E-cadherin表達(dá)降低或缺失的比率越高，腫瘤發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的幾率越大，預(yù)后越差，其有可能成為前列腺癌惡性轉(zhuǎn)變及向轉(zhuǎn)移癌發(fā)展的標(biāo)志。

到目前為止，前列腺癌的發(fā)生機(jī)制尚不是十分明確。本研究結(jié)果顯示：p53及bcl-2在前列腺癌組織中表達(dá)均較前列腺增生組織明顯增加，且隨腫瘤分化程度的降低呈升高趨勢(shì)，E-cadherin與二者表達(dá)相反，前列腺癌惡性程度越高，表達(dá)陽(yáng)性率越低，提示3種蛋白與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，檢查其表達(dá)水平對(duì)疾病鑒別診斷和治療預(yù)后有一定幫助。但p53、bcl-2和E-cadherin之間是否存在相關(guān)性，還需要擴(kuò)大樣本進(jìn)行更詳細(xì)的研究。

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