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    培養(yǎng)液中不同蛋白添加物對IVF/ICSI-ET 植入前胚胎發(fā)育及臨床妊娠結(jié)局的影響

    2015-08-10 09:38:42唐寧孔令北劉海萍王建業(yè)
    生殖醫(yī)學雜志 2015年10期
    關(guān)鍵詞:添加物卵裂原核

    唐寧,孔令北,劉海萍,王建業(yè)*

    (1.濟南軍區(qū)總醫(yī)院生殖醫(yī)學中心,濟南 250031;2.山東濟寧兗州區(qū)第一中學生物組,濟寧 272100)

    在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)中,獲得高質(zhì)量、發(fā)育潛能良好的胚胎是得到好的臨床妊娠結(jié)局的關(guān)鍵。一直以來,認為培養(yǎng)液的質(zhì)量是體外胚胎培養(yǎng)的關(guān)鍵,這包括培養(yǎng)液的溫度、滲透壓、pH 值以及培養(yǎng)液的組成成分等[1-8]。而在培養(yǎng)液的組成成分中,蛋白添加物必不可少。血清替代補充成分(SSS)和人血清白蛋白(HSA)是兩種非常常用的蛋白添加物,有必要對其在體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)中的作用作進一步地探討。

    一、材料與方法

    1.研究對象:回顧性分析2013年5月1日至2013年9 月30 日 及2014 年5 月1 日 至2014 年9月30 日在本中心行IVF/ICSI-ET 的患者。所有納入患者均使用短方案超排卵,女方不孕因素為輸卵管因素,移植日為取卵后第3天。所有患者均施行新鮮胚胎移植。

    2.分組:本中心所有胚胎培養(yǎng)均使用瑞典Vitrolife序貫培養(yǎng)液。根據(jù)培養(yǎng)液蛋白添加物的不同,將患者分為HSA 組(以10%HSA 作為胚胎培養(yǎng)液添加物)和SSS組(以20%SSS作為胚胎培養(yǎng)液添加物),其中2013年的患者為HSA 組,而2014年的患者為SSS組。

    3.診療方法回顧:使用本中心已建立的方法[9]。具體為:經(jīng)本中心常規(guī)方法超排卵后,當主導卵泡直徑達18 mm 時,肌肉注射HCG 5 000~10 000U;HCG 注射后36~40h,于超聲引導下經(jīng)陰道取卵;取卵后3~5h行IVF 或4~6h行ICSI授精,授精后18~20h觀察受精情況;授精后68~70h觀察胚胎卵裂球的數(shù)目和碎片多少,并以此為根據(jù)判定胚胎的級別,分為Ⅰ級胚胎(卵裂球大小均勻,胞漿碎片<10%)、Ⅱ級胚胎(卵裂球大小略不均勻,胞漿碎片<15%)、Ⅲ級胚胎(胞漿碎片<50%,卵裂球的情況類似于Ⅱ級胚胎)和Ⅳ級胚胎(胞漿碎片>50%)。胚胎達6 細胞以上,Ⅰ級和Ⅱ級胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎。

    取卵后第3 天進行ET,移植時優(yōu)先選用優(yōu)質(zhì)胚胎。移植胚胎的數(shù)目嚴格按照國家標準,即:患者年齡<35歲,移植2個胚胎;患者年齡≥35 歲或患者處于2個以上(包括2個)移植周期,移植3個胚胎。移植后給予黃體酮支持黃體功能,2周后測尿HCG,陽性者為生化妊娠,5周后B超檢查胚囊數(shù),見孕囊及胚芽即診斷為臨床妊娠。

    4.觀察指標:將行IVF和ICSI的患者分別進行患者基本情況、胚胎發(fā)育和妊娠情況的比較,統(tǒng)計學分析其差異?;颊叩幕厩闆r包括年齡、不孕年限、平均促性腺激素(Gn)量、Gn使用天數(shù)、獲卵數(shù);胚胎發(fā)育情況包括受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)率、移植胚胎數(shù)和胚胎冷凍率;妊娠情況包括妊娠率和著床率。

    IVF的受精率=(雙原核胚胎數(shù)+單原核胚胎數(shù)+多原核胚胎數(shù))/總?cè)÷褦?shù)×100%;ICSI的受精率=(雙原核胚胎數(shù)+單原核胚胎數(shù)+多原核胚胎數(shù))/MⅡ期卵母細胞數(shù)×100%;卵裂率=卵裂胚胎數(shù)/(雙原核胚胎數(shù)+單原核胚胎數(shù)+多原核胚胎數(shù))×100%;優(yōu)胚率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/卵裂胚胎數(shù)×100%;妊娠率=臨床妊娠數(shù)/患者總?cè)藬?shù)×100%;著床率=孕囊或胚芽數(shù)/移植胚胎總數(shù)×100%;胚胎冷凍率=移植后有冷凍胚胎的病例數(shù)/總例數(shù)×100%。

    5.統(tǒng)計方法:使用SPSS 10.0進行分析。定量資料結(jié)果以平均值±標準誤表示;定量資料使用成組設(shè)計的t檢驗,定性資料使用χ2檢驗;P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    二、結(jié)果

    1.行IVF-ET 的患者:SSS 組與HSA 組的患者年齡、不孕年限、平均Gn量、使用天數(shù)和獲卵數(shù)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)(表1);兩組患者的受精率、卵裂率、移植胚胎數(shù)、妊娠率和著床率均無統(tǒng)計學差異(P>0.05),而SSS組的胚胎冷凍率、優(yōu)胚率均顯著高于HSA 組(P<0.05)(表2)。SSS可促進植入前胚胎的發(fā)育但不能改善IVF-ET 臨床妊娠結(jié)局。

    2.行ICSI-ET的患者:SSS組與HSA 組在不孕年限、平均Gn量和使用天數(shù)上無統(tǒng)計學差異(P>0.05),但SSS組患者年齡顯著高于HSA 組(P<0.05),且SSS組的獲卵數(shù)顯著低于HSA 組(P<0.05)(表3);兩組患者受精率、卵裂率和妊娠率均無統(tǒng)計學差異(P>0.05),但SSS組的冷凍率和優(yōu)胚率均顯著高于HSA 組(P<0.05),而SSS組著床率顯著低于HSA 組(P<0.05)(表4)。SSS能促進ICSI后胚胎早期發(fā)育,提高卵母細胞的利用率。

    3.年齡對行ICSI-ET 的患者妊娠情況的影響:由于SSS組患者的年齡高于HSA 組、著床率低于HSA 組,為進一步探討年齡對妊娠結(jié)局的影響,接受ICSI的患者按年齡分成<35 歲組和≥35歲組,對不同年齡組中SSS和HSA 對妊娠結(jié)局的影響分別進行分析。結(jié)果顯示,無論在<35歲 組 中,還 是 在≥35 歲 組 中,SSS 和HSA 對妊娠率和著床率的影響均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)(表5)。

    表1 IVF患者基本情況(±s)

    表1 IVF患者基本情況(±s)

    組 別 例數(shù) 年齡(歲) 不孕年限(年) 平均Gn量(支) 使用天數(shù)(d) 獲卵數(shù)(個)12 9.89±0.27 SSS組 622 31.65±0.21 4.06±0.11 27.91±0.42 9.83±0.HSA 組 467 31.83±0.24 4.15±0.14 27.34±0.53 9.66±0.11 9.62±0.24

    表2 IVF患者胚胎發(fā)育及妊娠情況[(±s),%])

    表2 IVF患者胚胎發(fā)育及妊娠情況[(±s),%])

    注:與HSA 組比較,*P<0.05

    組別 例數(shù) 胚胎總數(shù)(個)受精率 卵裂率 優(yōu)胚率 移植胚胎數(shù)(個)著床率 妊娠率 胚胎冷凍率.66 68.74 SSS組 622 5 983 79.13 94.38 63.20* 1.98±0.036 34.34 53.72 76.58 HSA 組 467 4 618 79.78 94.13 50.39 2.01±0.034 33.16 49*

    表3 ICSI患者基本情況(±s)

    表3 ICSI患者基本情況(±s)

    注:與HSA 組比較,*P<0.05

    組別 例數(shù) 年齡(歲) 不孕年限(年) 平均Gn量(支) 使用天數(shù)(d) 獲卵數(shù)(個)14 9.35±0.31 SSS組 457 32.76±0.28* 4.46±0.17 27.20±0.51 9.26±0.13 8.28±0.26 HSA 組 286 30.03±0.31 4.51±0.20 28.01±0.58 9.53±0.*

    表4 ICSI患者胚胎發(fā)育及妊娠情況[(±s),%])

    表4 ICSI患者胚胎發(fā)育及妊娠情況[(±s),%])

    注:與HSA 組比較,*P<0.05

    組別 例數(shù) 胚胎總數(shù)(個)受精率 卵裂率 優(yōu)胚率 移植胚胎數(shù)(個)著床率 妊娠率 胚胎冷凍率18 60.09 SSS組 457 3 784 86.05 95.92 61.80* 2.00±0.04*24.29* 41.95 68.29 HSA 組 286 2 674 84.79 95.07 51.12 2.19±0.04 29.23 46.*

    表5 兩種蛋白添加物對不同年齡組ISCI患者妊娠情況的影響(%)

    三、討論

    胚胎的生長環(huán)境,尤其是培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)液一直是IVF-ET 的關(guān)鍵。一旦出現(xiàn)不理想的臨床妊娠結(jié)局,輔助生殖工作者首先考慮的就是胚胎培養(yǎng)液是否出了問題或者培養(yǎng)環(huán)境是否有變化。一直以來,研究者都在不停地研究如何改進現(xiàn)有的培養(yǎng)液,以期獲得更好的、有發(fā)育潛能的胚胎,進而改善臨床妊娠結(jié)局。胚胎培養(yǎng)液中蛋白添加物的加入有助于獲得更好的優(yōu)質(zhì)胚胎。培養(yǎng)液中最早使用的蛋白添加物是母源性的血清蛋白,而后發(fā)展為人血清白蛋白(HSA 和Buminate),再后人們開始使用蛋白替代物(包 括SSS、SPS、LGPS 等)?,F(xiàn) 在,HSA 和SSS是各生殖中心胚胎培養(yǎng)最常用的蛋白添加物。

    1995年有研究顯示,和HSA 相比,添加了SSS的胚胎培養(yǎng)液在提高受精率和胚胎形態(tài)學質(zhì)量方面并沒有優(yōu)勢[10],但第2年對小鼠的研究則證實,SSS能促進小鼠胚胎生長,具有和血清同樣的效果[11],而同年的臨床回顧性分析研究則表明:相對于母源血清和人血漿蛋白粉(Plasmanate),SSS 能提高胚胎的種植率,從而獲得更好的臨床妊娠結(jié)局[12]。2009年,有研究者證明,與單純添加HSA 相比,SSS和HSA 的共同添加能提高胚胎的植入率并能提高最終的活產(chǎn)率[13]。與前述研究相一致的是,我們的研究表明:與HSA 相比,SSS能促進IVF/ISCI后植入前胚胎的發(fā)育,增加優(yōu)質(zhì)胚胎和可用胚胎的數(shù)量,提高所獲取的卵母細胞的利用率。冷凍胚胎的增多意味著患者若在本治療周期未獲得妊娠,可以使用自然周期或者人工周期準備內(nèi)膜,而后進行胚胎復蘇移植,大大節(jié)省治療的時間和患者的花費。

    但我們的研究同樣也表明,在IVF-ET 中,SSS的加入并沒有提高胚胎的植入率,也未改善臨床妊娠結(jié)局,這可能與移植時都是盡量選用優(yōu)質(zhì)胚胎有關(guān)。在ICSI-ET 患者中,SSS組的植入率甚至要低于HSA 組,這可能是因為SSS組患者的年齡顯著地高于HSA 組。而后分年齡階段的統(tǒng)計分析顯示,在不同年齡組(<35 組和≥35 歲組),SSS 和HSA 對臨床妊娠率和胚胎著床率的影響沒有統(tǒng)計學差異,進一步證實ICSI組臨床妊娠結(jié)局的主要是受患者年齡的影響。而造成年齡差異的根本原因可能是自2013年底,山東省通過了單獨二孩的計劃生育政策,這使得大量年齡偏大的育齡婦女求助于輔助生殖技術(shù)來實現(xiàn)自己的二胎夢,年齡的偏大造成了卵巢功能的低下,超排卵后獲得的卵母細胞數(shù)目也明顯減少,以至于在移植時可用胚胎的數(shù)目也明顯降低。

    對SSS作用機理的研究顯示,培養(yǎng)液中SSS的加入可以提高囊胚的孵出率,降低活性氧自由基的水平,減少胚胎卵裂球的凋亡[14],此外SSS對植入前胚胎發(fā)育的促進作用也可能與SSS 中氨基酸含量較高有關(guān)[15]。

    總之,SSS能促進IVF/ICSI-ET 中植入前胚胎的發(fā)育,提高卵母細胞的利用率,可以作為優(yōu)化胚胎培養(yǎng)方案的蛋白添加物。

    [1] Hong KH,Lee H,F(xiàn)orman EJ,et al.Examining the temperature of embryo culture in in vitro fertilization:a randomized controlled trial comparing traditional core temperature(37 ℃)to a more physiologic,cooler temperature(36 ℃)[J].Fertil Steril,2014,102:767-773.

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