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    NF-kB在B細胞淋巴瘤組織中的表達及臨床意義

    2015-07-05 11:42:44趙亞君趙騰蛟李明玉譚亞納李紅玲
    中國癌癥防治雜志 2015年6期
    關鍵詞:淋巴瘤免疫組化染色

    趙亞君趙騰蛟李明玉譚亞納李紅玲

    作者單位:730000 蘭州1甘肅中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院;2甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

    臨床經(jīng)驗

    NF-kB在B細胞淋巴瘤組織中的表達及臨床意義

    趙亞君1趙騰蛟1李明玉1譚亞納1李紅玲2

    作者單位:730000 蘭州1甘肅中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院;2甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

    目的探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)在B細胞淋巴瘤組織中的表達及其與臨床病理特征的關系。方法采用免疫組化法檢測42例B細胞淋巴瘤組織(B細胞淋巴瘤組)及20例淋巴結(jié)反應性增生組織(對照組)中NF-κB蛋白的表達。分析NF-κB表達與B細胞淋巴瘤臨床病理特征的關系。結(jié)果NF-κB在B細胞淋巴瘤組織和淋巴結(jié)反應性增生組織中的陽性表達率分別為78.57%(33/42)和20%(4/20),兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。NF-κB的表達與惡性程度、臨床分期有關(P<0.05);而與年齡、性別、乳酸脫氫酶(LDH)水平無關(P>0.05)。結(jié)論NF-κB在B細胞淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,有望成為判斷淋巴瘤患者預后的指標。

    淋巴瘤;核轉(zhuǎn)錄因子-κB;免疫組織化學;表達;臨床意義

    淋巴瘤是淋巴造血系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,是一種異質(zhì)性疾病,根據(jù)WHO(2008)造血和淋巴組織腫瘤分類將其分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤[1]。B細胞淋巴瘤是一組發(fā)病率和惡性程度高的非霍奇金淋巴瘤。隨著基因組學和分子生物學等研究的深入開展,部分淋巴瘤的發(fā)病機制已明確,靶向治療的研究和臨床新藥的應用使其具有部分治愈的可能,但仍有部分淋巴瘤易復發(fā),難以治愈。研究表明,核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信號通路在淋巴瘤的發(fā)生中扮演著重要的角色。NF-κB是一類廣泛存在于細胞中的多顯性核轉(zhuǎn)錄因子,屬于Rel基因家族。其激活參與炎癥、細胞增殖、細胞凋亡等基因的調(diào)節(jié)。在腫瘤細胞中具有調(diào)控腫瘤細胞凋亡和免疫活性的作用[2]。本研究利用免疫組化法檢測NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達情況,探討NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤臨床病理特征的關系。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    收集2012年8月至2015年5月甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科確診的B細胞淋巴瘤42例為B細胞淋巴瘤組,其中男性22例,女性20例;年齡16~78歲,中位年齡47歲。選取反應性增生淋巴組織20例為對照組,中位年齡50歲。淋巴瘤的診斷符合《淋巴瘤病理診斷》標準[3],全組病例資料完整。按照2008年WHO淋巴瘤相關病理分型、臨床分期及惡性程度進行分類,其中病理分型:彌漫性大B細胞淋巴瘤27例,邊緣區(qū)淋巴瘤7例,套細胞淋巴瘤1例,Burkitt淋巴瘤2例,濾泡性淋巴瘤5例;臨床分期:Ⅰ~Ⅱ期16例,Ⅲ~Ⅳ期26例;惡性程度:侵襲性淋巴瘤30例,惰性淋巴瘤12例。所有患者標本采集已征得醫(yī)院倫理委員會批準及患者知情同意,病理活檢前均未進行抗腫瘤治療。所有組織標本均經(jīng)過10%中性福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋切片,片厚4μm,行HE和免疫組化染色。

    1.2 主要試劑

    鼠抗人NF-κB單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司(北京中杉金橋生物技術(shù)公司進口分裝),Envision兩步法免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司,Envision兩步法免疫組化染色按試劑盒說明書操作,NF-κB工作濃度為1∶100,所有切片均采用微波修復抗原。以PBS替代一抗作陰性對照。

    1.3 免疫組化染色

    將片厚為4μm石蠟切片脫蠟至水,3%過氧化氫10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,胰酶修復20 min,10%山羊血清室溫封閉20 min,NF-κB抗體(1∶100)于濕盒中4℃冰箱過夜,滴加二抗、三抗室溫下濕盒內(nèi)孵育各20 min,DAB顯色,蘇木精復染,常規(guī)脫水,封片。

    1.4 結(jié)果判定

    采用雙盲法進行計數(shù)。結(jié)果判定由兩位資深病理學專家進行雙盲法評估。細胞計數(shù)在高倍鏡視野(×400)下,每張切片上隨機選擇5個視野,每個視野計數(shù)100個細胞數(shù),每個標本計數(shù)3張切片。NF-κB的表達以陽性細胞百分率及染色強度之積進行判定。NF-κB:細胞核和(或)細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為陽性細胞。陽性細胞百分率:≤5%計0分,6%~25%計1分,26%~50%計2分,≥51%計3分;無陽性細胞計0分。細胞染色強度:無染色計0分,弱染色(淺黃色)計1分,中等染色(金黃色)計2分,強染色(棕黃色)計3分。兩項得分相乘:0分為陰性(-),1~9分為陽性,其中1~3分為弱陽性(+),4~6分為中等陽性(++),7~9分為強陽性(+++)。

    1.5 統(tǒng)計學分析

    應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學處理。組間比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達

    在顯微鏡(×400)下觀察細胞形態(tài)及腫瘤細胞的病理變化。NF-κB陽性表達位于細胞核和細胞質(zhì),在細胞質(zhì)內(nèi)明顯表達,呈棕黃色或者棕褐色。B細胞淋巴瘤組NF-κB的陽性表達率為78.57%,對照組為20%,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見圖1、表1。

    圖1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達(Envision×400)

    表1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組和對照組中的表達[n(%)]

    2.2 NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤患者臨床病理特征的關系

    NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤患者臨床分期及惡性程度有關(P<0.05),而與性別、年齡、乳酸脫氫酶(LDH)水平無關(P>0.05)。見表2。

    3 討論

    腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移是癌基因與抑癌基因共同參與調(diào)節(jié)的一個復雜過程,通過腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移相關基因過度表達,以及一系列基因產(chǎn)物的參與,對腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移全過程進行調(diào)控[4]。NF-κB是一類普遍存在的、通常以同源或者異源二聚體的形式存在的核轉(zhuǎn)錄因子,其家族共有5個成員,包括p65(Rel A)、c-Rel、Rel B、p50/p105(NF-κB1)、p52/p100(NF-κB2),其中最常見的形式為p50/p65組成的二聚體[5],它可引起基因轉(zhuǎn)錄激活。細胞在非刺激狀態(tài)下,NF-κB與它的抑制物核轉(zhuǎn)錄因子抑制因子(IKB)結(jié)合,以一種未被激活的形式存在于細胞質(zhì),當細胞受到損傷等刺激后,IKB降解,活性NF-κB釋放并轉(zhuǎn)移至細胞核,調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,故細胞核的NF-κB蛋白的表達可認為是NF-κB激活的標志[6]。激活的NF-κB可促進凋亡基因的轉(zhuǎn)錄,從而導致腫瘤細胞的增生。多數(shù)研究認為,NF-κB調(diào)節(jié)凋亡可能通過以下途徑:⑴通過調(diào)節(jié)細胞S周期,間接影響細胞對凋亡信號的反應;⑵通過和一些蛋白相互作用影響凋亡;⑶直接調(diào)節(jié)凋亡基因[7]。

    臨床上對于NF-κB在其他腫瘤組織中的表達及臨床意義已有報道。秦陽等[8]檢測100例甲狀腺癌組織、30例甲狀腺腺瘤組織、30例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織和30名健康人甲狀腺組織中的NF-κB p50蛋白陽性表達情況,結(jié)果顯示NF-κB p50蛋白的陽性表達率分別為73%、30%、33.33%和6.67%,NF-κB p50蛋白在甲狀腺非癌組織中的表達率顯著低于癌組織。Sasaki等[9]和李亞平等[10]對胃癌組織進行研究,發(fā)現(xiàn)NF-κB陽性表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)侵犯、腫瘤侵犯深度及腹腔轉(zhuǎn)移有關。另有學者[11]研究發(fā)現(xiàn)NF-κB在乳腺癌細胞和癌組織中呈高表達,認為NF-κB在監(jiān)測乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展方面發(fā)揮重要作用。也有學者[12,13]研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌細胞及其組織NF-κB/p65陽性表達率明顯高于良性上皮細胞腫瘤和交界性腫瘤。董佑紅等[14]檢測62例彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中NF-κB的水平,結(jié)果陽性表達率為63%(39/62)。上述結(jié)果說明NF-κB陽性表達與腫瘤生長、侵犯及轉(zhuǎn)移相關。目前,在臨床研究中,有學者已將NF-κB作為婦科腫瘤治療的重要目標,如Mabuchi等[15]聯(lián)合應用順鉑和NF-κB的抑制劑(SN50)治療卵巢癌,結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過阻斷NF-κB激活,有利于細胞凋亡,從而增強順鉑化療作用,提高療效。

    本研究通過免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中呈高表達,陽性表達率為78.57%。進一步分析發(fā)現(xiàn),隨著B細胞淋巴瘤的臨床分期越晚及惡性程度越高,NF-κB的陽性表達率越高(P<0.05),而與性別、年齡、LDH水平無關(P>0.05),表明NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展有關。本文未對以上患者進行隨訪,中位生存期未知,但發(fā)現(xiàn)NF-κB與臨床分期、惡性程度有關,從而證實了NF-κB陽性表達可以作為B細胞淋巴瘤患者不良預后的指標,有助于指導個體化藥物治療。

    綜上所述,NF-κB與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關,NF-κB有望成為判斷淋巴瘤預后新的標志物。為進一步了解NF-κB家族蛋白在淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床應用打下了基礎。

    [1] 李向紅.淋巴瘤病理診斷的標準化[J].中華病理學雜志,2013,42(4):217-219.

    [2] Hayden MS,Ghosh S.Shared principles in NF-κB signaling[J].Cell,2008,132(12):344-362.

    [3]李小秋.淋巴瘤病理研究新進展[J].中國癌癥雜志,2014,24(10):721-726.

    [4] 王瑞海,崔大為,孫國貴.DMBT1在鼻咽癌中的表達及臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志,2014,19(9):838-841.

    [5] Gong H,Zuliani P,Komuravelli A,et al.Analysis and verification of the HMGBl signaling pathway[J].BMC Bioinformatics,2010,11(Suppl7):S10.

    [6] Yoshizaki A,Komura K,Iwata Y,et al.Clinical significance of serum HMGB-1 and sRAGE levels in systemic sclerosis:association with disease severity[J]J Clin Immunol,2009,29(2):180-189.

    [7] Hao Q,Zhang C,Gao Y,et al.FOXP3 inhibits NF-κB activity and hence COX2 expression in gastric cancer cells[J].Cell Signal,2014,26(3):564-569.

    [8] 秦陽,王玲,呂曉娟.NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌中的表達及意義[J].中國生化藥物雜志,2014,34(8):148-153.

    [9] Sasaki N,Morisaki T,Hashizume K,et al.Nuclear factor-kappa B P65(Rel A)transcription factor is constitutively activated in human gastric carcinoma tissue[J].Clin Cancer Res,2001,7(12):4136-4142.

    [10]李亞平,劉振勝,黃冠男,等.NF-κB、IκBα在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].中國癌癥防治雜志,2015,7(1):45-48.

    [11]楊明峰,李志國,孫紅崗,等.乳腺癌組織血清NF-κB p65表達分析及臨床意義[J].醫(yī)學研究雜志,2012,41(6):78-81.

    [12]宋思幽,吳英杰,李冬華.Raf激酶抑制蛋白、NF-κB p65及VEGF-C在卵巢上皮性腫瘤中的表達及相關性[J].中國臨床研究,2013,26(6):525-527.

    [13]郭冰沁,俞嵐,武世伍,等.HE4、NF-κBp65和MMP-9在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其臨床意義[J].中國組織化學與細胞化學雜志,2011,20(6):578-583.

    [14]董佑紅,伍鋼,王濤,等.NF-κB p50和VEGF在彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中的表達及其臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志,2007,14(6):436-439.

    [15]Mabuchi S,Ohmichi M,Nishio Y,et al.Inhibition of NF kappaB increase the efficacy of cisplatin in vitro ovarian cancer models[J].J Bioe Chem,2004,5(6):12-16.

    [2015-10-09收稿][2015-10-23修回][編輯 江德吉]

    Expression of NF-κB in B cell lymphoma carcinoma and its clinical significance

    Zhao Yajun1,Zhao Tengjiao1,Li Mingyu1,Tan Yana1,Li Hongling2(1Gansu University of Traditional Chinese Medical College;2Department ofMedical Oncology,Gansu Provincial People′s Hospital,Lanzhou 730000,P.R.China)

    Li Hongling.E-mail:15002681915@163.com

    ObjectiveTo investigate the expression of nuclear transcription factorκB(NF-κB)in B cell lymphoma,and analyze possible relationships between expression and clinicopathological characteristics.MethodsImmunohistochemistry was used to detect NF-κB protein expression in tissues from 42 patients with B cell lymphoma and 20 patients with reactive lymph node hyperplasia.Relationships between NF-κB expression and clinicopathological characteristics were analyzed.ResultsThe rate of NF-κB-positive tissue was significantly higher among patients with B cell lymphoma(78.57%,33/42)than among those with reactive lymph node hyperplasia(20%,4/20;P<0.001).Level of NF-κB protein expression correlated with Ann-Arbor clinical stage and histology grade(P<0.05),but not with sex,age or lactate dehydrogenase(LDH)level(P>0.05).ConclusionNF-κB plays an important role in the development of B cell lymphoma,and it may serve as a prognostic indicator.

    Lymphoma;Nuclear factor kappa B;immunohistochemistry;Expression;Clinical significance

    R733.4

    A

    1674-5671(2015)06-04

    10.3969/j.issn.1674-5671.2015.06.08

    國家自然科學基金資助項目(30960438,81260342,81560498);蘭州市科技計劃項目(2009-1-56)

    李紅玲。E-mail:15002681915@163.com

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