利用動物模型研究常見合成毒品免疫脫毒的構(gòu)想

孔慶波，劉劍郁

（1.重慶警察學(xué)院，重慶401331；2.公安部警犬技術(shù)學(xué)校，遼寧沈陽110034）

自21世紀(jì)以來，世界毒品生產(chǎn)和消費格局已發(fā)生顯著變化，濫用合成毒品正在成為一個增長迅速并日益嚴(yán)重的社會問題。合成毒品主要是指人工化學(xué)合成的致幻劑、興奮劑類毒品，由國際禁毒公約和我國法律法規(guī)所規(guī)定管制的、直接作用于人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使人興奮或抑制，連續(xù)使用能使人產(chǎn)生依賴性的精神藥品（毒品），也被稱為“新型毒品”［1］。主要包括冰毒（甲基苯丙胺，MDA）、搖頭丸（亞甲二氧基甲苯丙胺，MDMA）和K粉（氯胺酮，katamine）等［2］。據(jù)近年執(zhí)法部門緝獲非法甲基苯丙胺制販案件呈迅猛增長的情況看，我國面臨著繼海洛因等阿片類毒品之后“合成毒品”流行性濫用的威脅。吸食合成毒品的群體由過去以社會無業(yè)青年為主，逐步向公司職員、演員、大學(xué)生和國家公務(wù)員等其他社會階層擴散［3］。同海洛因、鴉片等阿片類毒品相比，合成毒品具有成癮性強但身體依賴性相對較弱的特點，表現(xiàn)在濫用后容易上癮，從嘗試性使用很快發(fā)展到強迫性濫用階段，雖然在突然停止使用后不出現(xiàn)顯著的軀體戒斷癥狀，但對毒品仍有強烈渴求，這些癥狀和反應(yīng)可持續(xù)數(shù)周或數(shù)月之久［4-5］。特別值得關(guān)注的是，合成毒品與傳統(tǒng)毒品不同，它會激發(fā)人的性欲并促使危險性行為的發(fā)生，從而增加艾滋病與性病通過性接觸傳播的風(fēng)險［6］。目前，國外其研究熱點是免疫戒毒的開發(fā)與利用，但主要是針對傳統(tǒng)毒品戒毒疫苗的研究，如可卡因疫苗已進入二期臨床試驗，海洛因疫苗也已進入動物試驗階段，而關(guān)于苯丙胺類、氯胺酮等合成毒品免疫脫毒的研究仍處于探索階段，研究前景廣闊。

1 研究的必要性

1.1 我國吸毒人員近年來持續(xù)增加

毒品問題、環(huán)境污染與青少年犯罪并稱為當(dāng)今世界“三大公害”。毒品濫用已經(jīng)成為當(dāng)今世界普遍關(guān)注的嚴(yán)重社會問題。在我國，吸毒人員總數(shù)增加迅速，吸毒人數(shù)的增長呈“蛙躍式”攀升。公安部禁毒局局長劉躍進指出，2011年底，全國累計登記吸毒人員179.4萬名［7］。2013年3月底，全國累計登記吸毒人員213.48萬人［8］；2014年4月底，全國登記在冊吸毒人員258萬人［9］。另據(jù)《新京報》記者2014年11月18日從公安部獲悉，目前發(fā)現(xiàn)的吸毒人員有270萬左右，按照國際通用比例，實際吸毒人員數(shù)量是已發(fā)現(xiàn)吸毒人員數(shù)量的5倍。也就是說，我國實際吸毒人員已可能超過1 300萬［10］。

1.2 我國新型合成毒品濫用呈增長態(tài)勢

近幾年流行于我國的毒品種類也發(fā)生了變化，除鴉片、海洛因等傳統(tǒng)毒品外，冰毒、搖頭丸和K粉等合成毒品開始在我國流行，并且呈快速上升的趨勢。合成毒品因其興奮、致幻等特殊功效越來越受到吸毒者的青睞和追捧，濫用人數(shù)年均增長36%［9］。數(shù)據(jù)顯示，從2007年至2011年公安機關(guān)登記入庫的濫用合成毒品人數(shù)占吸毒人員總數(shù)比例逐年上升，2007年僅為16.1%，2011年已經(jīng)躥升至32.7%［11］。中新網(wǎng)2012年8月1日報道，國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《國家藥物濫用監(jiān)測年度報告（2011年）》，報告顯示2011年藥物濫用呈現(xiàn)新特點，以海洛因為代表的傳統(tǒng)毒品濫用趨勢相對減弱，以“冰毒”為代表的新型合成毒品濫用呈增長態(tài)勢；監(jiān)測人群中，四成左右為新發(fā)生、新發(fā)現(xiàn)的藥物濫用者，其中傳統(tǒng)毒品與新型合成毒品濫用人數(shù)的比例為1∶2.2［12］。另據(jù)北京市禁毒委員會辦公室相關(guān)負責(zé)人鐘平2014年10月介紹，以北京市為例，吸毒人群呈現(xiàn)出年輕化的態(tài)勢，毒品類型也從海洛因轉(zhuǎn)向新型合成毒品：“近年來吸毒人員增速保持在每年兩位數(shù)的增長，吸食的種類從單一的海洛因向多元化趨勢發(fā)展，特別是合成毒品已經(jīng)成為吸毒人員的首選毒品。今年北京市查獲的吸毒人員中，吸合成毒品的比例是84%，這個比例是相當(dāng)高的，遠高于全國平均水平，全國大概是30%多”［13］。

目前，日趨嚴(yán)重的毒品問題已成為全球性的災(zāi)難。毒品的泛濫直接危害人民的身心健康，并給經(jīng)濟發(fā)展和社會進步帶來巨大威脅，而國內(nèi)外關(guān)于合成毒品免疫脫毒研究的有效手段實屬少見，因此，開展此方面的研究勢在必行。

2 研究的可行性和意義

2.1 研究的理論依據(jù)

毒品大多是有機小分子，分子結(jié)構(gòu)特殊，其本身只是個半抗原，僅具有與相應(yīng)抗原的免疫反應(yīng)性而無免疫原性［14］?？梢酝ㄟ^對毒品分子進行偶聯(lián)處理，利用毒品分子上的固有基團（如羥基、氨基基團），通過雙功能偶聯(lián)劑接上一個有機大分子；或直接利用毒品分子上固有的基團和有機大分子上特有的基團把有機大分子和毒品分子偶聯(lián)在一起，使毒品分子具有免疫原性，并以此免疫動物，誘導(dǎo)產(chǎn)生針對半抗原的特異性抗體。特異性抗體在血液中與半抗原結(jié)合，阻止半抗原通過血腦屏障到達中樞神經(jīng)系統(tǒng)。如果間隔一定時間加強免疫，即可保證體液中保持高滴度的抗體，從而可能達到防復(fù)吸的目的。毒品中的嗎啡、海洛因、可卡因均可采用這種方法制備半抗原-載體疫苗。選用不同的蛋白載體、佐劑，其免疫的對象和免疫效果也有所不同。因此，可以首先對苯丙胺類、氯胺酮等合成毒品進行免疫脫毒研究。

2.2 常見合成毒品及理化性質(zhì)

2.2.1 苯丙胺類 苯丙胺化學(xué)名稱2-胺基-1-苯基丙胺，俗名安非他明，英文名稱amphetamine（AM、AMP、AP）；分子式為C9H13N；分子質(zhì)量為135.21 u，其化學(xué)式見圖1。游離態(tài)苯丙胺為無色或淡黃色揮發(fā)性油狀物，味酸苦帶有輕微胺臭，能溶于乙醚、氯仿、乙醇，難溶于水。沸點200℃～203℃。苯丙胺通常制成硫酸鹽或者是磷酸鹽。硫酸苯丙胺（amphetamine sulfate）為無色、無臭粉末，有苦味，熔點320℃～322℃，其水溶液的pH為5～6，微溶于乙醇，不溶于乙醚及氯仿。

2.2.2 氯胺酮 氯胺酮化學(xué)名稱消旋-2-（2-氯苯基）-2-甲氨基環(huán)己酮，俗名 K粉，英文名稱 Ketamine；分子式為C13H16ClNO；分子質(zhì)量237.7u，其化學(xué)式見圖2。氯胺酮通常制成鹽酸鹽。鹽酸氯胺酮為白色結(jié)晶粉末，無臭，在水中易溶。熔點259℃～263℃，遇光和熱易分解，可制成無色透明溶液，溶液呈酸性。100g／L水溶液pH3.5～4.1，加堿后鹽酸氯胺酮會變?yōu)橛坞x堿氯胺酮。

圖1 苯丙胺分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structure of amphetamine

圖2 氯胺酮分子結(jié)構(gòu)Fig.2 Molecular structure of ketamine

2.3 研究的意義

利用苯丙胺和氯胺酮的分子結(jié)構(gòu)中均具有氨基基團，根據(jù)上述半抗原偶聯(lián)機制，經(jīng)過化學(xué)合成，可以得到具有免疫原性的人工抗原，為制備抗血清、拮抗劑、免疫疫苗奠定基礎(chǔ)。一旦研制成功，并推廣應(yīng)用，可以為制定科學(xué)的戒毒管理方式、治療方案、矯治手段、康復(fù)模式等提供關(guān)鍵技術(shù)支撐和物質(zhì)支持；其技術(shù)路線、工藝流程均可填補我國毒品研究的動物模型和合成毒品免疫脫毒藥物、手段研究空白。還可以為快速篩查、判定、鑒別、診斷、收戒成癮人員，制定科學(xué)的戒毒管理方式、治療方案、矯治原則、康復(fù)模式等提供關(guān)鍵技術(shù)支撐和裝備支持，從而為遏制毒品的蔓延做出貢獻。

3 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及趨勢

國際上將戒毒過程分為脫毒、康復(fù)和回歸三個階段［15］。短期內(nèi)脫毒在國內(nèi)外均可順利完成，而如何防止戒毒后復(fù)吸是科學(xué)界尚未解決的難題。目前，國內(nèi)外普遍使用的美沙酮等替代療法，療效較好，但需長期服藥，容易形成對美沙酮的依賴［16-17］；納曲酮等受體拮抗劑可消除吸毒后的欣快感和身體依賴，有助于達到防復(fù)吸的目的，但是這取決于吸毒者有無斷癮愿望和家屬能否監(jiān)督使用，實際上很少有人自愿接受［17-18］。另外，丁丙諾啡、可樂定、路脫菲及氯丙嗓精神藥物等脫毒法都各有優(yōu)點，但都是對海洛因、鴉片等傳統(tǒng)毒品脫毒使用。因此，采用免疫療法進行合成毒品戒毒不失為一種有價值的探索。

在國外，其研究熱點是免疫戒毒的開發(fā)與利用，即主要是針對傳統(tǒng)毒品戒毒疫苗的研究［18-19］。如可卡因疫苗已由美國耶魯大學(xué)研制成功，被命名為TA-CD疫苗，在國外已用于臨床；海洛因疫苗現(xiàn)在雖仍停留在動物試驗階段，但是已顯現(xiàn)出良好的前景。另外，對合成毒品使用抗體免疫戒毒研究成果鮮有報道。21世紀(jì)初，美國阿肯色大學(xué)醫(yī)學(xué)院Mc-Millan教授的研究團隊制備出了甲基苯丙胺（MA）抗體，并通過辨別試驗及自身給藥試驗初步驗證了MA抗體能對抗MA所產(chǎn)生的行為效應(yīng)，且具有很強的特異性，顯示了用抗體方法治療藥物濫用的良好前景［20］。本領(lǐng)域的研究難點在于毒品基本上都是小分子化合物，沒有免疫原性，需要經(jīng)過交聯(lián)或其他途徑制備全抗原，從而制備試驗疫苗并生產(chǎn)抗體。而小分子化合物與大分子載體的交聯(lián)反應(yīng)相對比較困難，只有發(fā)現(xiàn)高效交聯(lián)劑后才能進行深入研究。

在國內(nèi)，雖然自20世紀(jì)90年代以來對毒品濫用的研究已經(jīng)取得很多成果，但這些研究主要以海洛因依賴者為主要對象。直到最近幾年，針對我國合成毒品需求急速增長、濫用合成毒品嚴(yán)峻的現(xiàn)象，各級政府部門以及衛(wèi)生領(lǐng)域?qū)Υ祟惗酒返奈：π杂辛俗銐虻恼J識，不斷加大科技資金投入［3，21-22］。一些研究者開始把研究目光轉(zhuǎn)向合成毒品濫用的危害及相關(guān)問題上，其研究熱點是在針灸戒毒、中藥戒毒等方法和藥物的研究，雖然也取得了一定進展，但仍缺乏被普遍接受的、適合我國國情的有效療法［23-24］。而對合成毒品免疫脫毒藥物、手段的研究甚少，與國外存在一定的差距。因此，面對合成毒品的泛濫，采取有效行動和措施，加強對合成毒品的基礎(chǔ)研究和脫毒藥物、手段的開發(fā)與利用研究，具有深遠的社會公共安全意義和巨大的經(jīng)濟效益。

4 研究的主要內(nèi)容

研究主要以常見合成毒品如苯丙胺類、氯胺酮等精神活性物質(zhì)為研究對象，利用動物模型（大鼠、犬、猴等）研究苯丙胺、氯胺酮的脫毒藥物和方法，制備成癮拮抗劑、脫癮劑、毒品抗體和免疫疫苗等。

5 研究需要解決的問題及思路

5.1 研究需要解決的問題

研究常見合成毒品免疫脫毒的有效方式方法需解決以下主要問題：①動物模型的確定：選擇大鼠、犬、猴等做為研究常見合成毒品免疫脫毒的動物模型。其中犬是目前與人類接觸最為密切的動物之一，由于其長期與人類接觸，許多生活習(xí)性和生理特點與人類已經(jīng)相當(dāng)接近或相似，而且容易獲取，研究費用低。同時，犬本身就是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最常用的實驗動物之一。②人工抗原的合成：選擇合適的蛋白載體是人工抗原合成的關(guān)鍵。③人工合成抗原的鑒定：由于人工抗原的制備是建立小分子化合物免疫分析的首要步驟，對其產(chǎn)物的鑒定就顯得相當(dāng)重要。通常同時采用多種方法進行鑒定以保證結(jié)果的可靠性。④人工抗原多克隆抗體的制備及檢測方法：用人工抗原免疫動物，動物免疫系統(tǒng)除了產(chǎn)生針對半抗原決定簇的抗體外，還產(chǎn)生針對載體的抗體。供檢測用抗原中的載體絕對不能與免疫抗原中的載體有共同的抗原性，當(dāng)然更不能用免疫用的人工抗原來檢測抗半抗原的抗體是否產(chǎn)生及抗體效價的高低。⑤合成毒品疫苗的研制：對自制的人工抗原進行處理，制備合成毒品疫苗，并進行動物試驗研究，評定其免疫效果。

5.2 解決問題的思路

針對上述需解決的主要問題，基本研究思路如下：①最佳載體蛋白的篩選：針對苯丙胺、氯胺酮篩選合適的蛋白載體，最常用載體為牛血清白蛋白。②載體蛋白與苯丙胺、氯胺酮的化學(xué)合成：利用化學(xué)方法，人工合成苯丙胺-載體、氯胺酮-載體復(fù)合物，做為大分子人工抗原進行鑒定，擬采用的方法為紫外吸收光譜鑒定、SDS-PAGE電泳鑒定，確定苯丙胺、氯胺酮與蛋白載體的結(jié)合比率，用于試驗研究。③高效價多克隆抗體的制備：利用自行制備的人工抗原免疫動物制備合成毒品多克隆抗體，確定其免疫途徑及劑量；對多克隆抗體進行鑒定，建立ELISA檢測方法，為合成毒品脫毒的動物模型研究提供治療手段。④合成毒品疫苗的制備與免疫效果評定：制備合成毒品疫苗，評定對動物機體體液免疫和細胞免疫的影響，評定疫苗的免疫效果，為毒品的脫毒等研究提供依據(jù)。

由于生物工程技術(shù)突飛猛進的發(fā)展，新型戒毒藥物將不斷問世，主要包括合成毒品拮抗劑、脫癮劑、戒毒疫苗、抗體等生物制品，吸毒人員在使用這種新型疫苗后即使吸食毒品后亦不能產(chǎn)生欣快感，強制戒毒過程中對于濫用成癮吸食者利用脫癮劑亦不會產(chǎn)生難以忍受的“戒斷綜合癥”等。同時，對目前常見合成毒品免疫脫毒的研究，也為層出不窮的合成毒品的相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。這類產(chǎn)品一旦投放市場，將為我國乃至國際戒毒提供新的思路與手段，無疑將創(chuàng)造良好的社會效益與經(jīng)濟效益。

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