黃芪總黃酮小鼠體內(nèi)抗炎作用研究

郭 澤，鄒 娟，張 賢，王 平，張 沖，王沙沙，張雪梅＊

（1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉133002；2.吉林省長春市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春130000）

黃芪（Astragalus）為豆科多年生草本植物黃芪（Astragalusmembranaceus）和內(nèi)蒙黃芪的根，主要分布于我國東北的大興安嶺、長白山、華北及西北山區(qū)［1］。黃芪始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味甘、性溫、歸肺、脾經(jīng)，具有益氣升陽、固表止汗、利水消腫和托毒生肌的功效［2］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪具有增強機體免疫功能、保肝利尿、抗衰老、抗氧化和抗炎等多種作用［3］。黃芪的成分眾多，主要包括黃芪多糖類、黃酮類、皂苷類、氨基酸、生物堿及多種微量元素［4-5］。其中，黃芪總黃酮（total flavonoids ofAstragalus，TFA）是它的主要成分，研究表明TFA具有增強機體免疫功能［6］、抗損傷、抗腫瘤和抑制動脈粥樣硬化等多種生物學(xué)效應(yīng)［7］。但國內(nèi)外尚無TFA抗炎作用的相關(guān)報道，本試驗采用幾種急、慢性動物炎癥模型，初步探討黃芪總黃酮的體內(nèi)抗炎作用，從而為黃芪的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 黃芪總黃酮純度≥90%，上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品；地塞米松，鄭州卓峰制藥有限公司產(chǎn)品，批號H41020055。

1.1.2 主要試劑 角叉菜膠為Sigma公司產(chǎn)品；乙醚、二甲苯、羧甲基纖維素鈉等天津科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重20g±2g，由延邊大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 黃芪總黃酮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 取小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只。TFA用10g／L羧甲基纖維素鈉溶液配制成5、25、50mg／kg濃度。試驗設(shè)空白組、陽性組（地塞米松5mg／kg）、TFA（5、25和50mg／kg）劑量組，灌胃給藥，1次／d，連續(xù)5d。末次給藥1h后，將0.02mL二甲苯均勻涂于小鼠右耳上下兩面，左耳做對照。30min后脫頸處死小鼠，剪下兩耳，用直徑為8mm打孔器分別在同一部位打下圓形耳片稱重，以左右耳片的重量之差作為腫脹度［8］。按照下列公式計算：腫脹度（mg）＝ 右耳重量（mg）-左耳重量（mg）；抑制率（%）＝（空白組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）／空白組平均腫脹度×100%

1.2.2 黃芪總黃酮對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響 TFA配制、實驗動物的分組及給藥方法同1.2.1。末次給藥30min后，于小鼠右后趾皮下注射1%的角叉菜膠溶液0.1mL，分別在注射角叉菜膠后0.5、1、2、3、4、6h定點測量各小鼠右后趾的厚度，計算小鼠致炎前后的腫脹度［9］。腫脹度（mm）＝致炎后小鼠右后趾厚度（mm）-致炎前小鼠右后趾厚度（mm）

1.2.3 黃芪總黃酮對小鼠棉球肉芽腫形成的影響取小鼠50只，雌雄各半，乙醚麻醉，背部切開0.5cm小口，無菌條件下從切口向兩側(cè)腋下各植入1個滅菌棉球，縫合皮膚。TFA配制、試驗分組及給藥方法同1.2.1，連續(xù)給藥7d。第8天脫頸處死小鼠，準確稱重，剝離棉球肉芽組織，置60℃恒溫烘干，稱其重量，按照下列公式計算［10］。肉芽腫系數(shù)（mg／g）＝ 棉球肉芽腫凈重（mg）／體重（g）；棉球肉芽抑制率（%）＝（空白組棉球肉芽平均凈重-給藥組棉球肉芽平均凈重）／空白組棉球肉芽平均凈重×100%

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 試驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差（±SD）表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，組間比較采用單因素 ANOVA（Dunnet＇s t-test）t檢驗方法，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃芪總黃酮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

由表1可見，TFA對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有不同程度的抑制作用，抑制率分別為17.62%、35.34%和52.91%。其中與空白組比較，TFA 25 mg／kg、50mg／kg劑量組有顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）；與陽性組比較，TFA 5mg／kg劑量組有 顯 著 差 異（P＜0.05），而 TFA 25mg／kg、50 mg／kg劑量組無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果顯示，黃芪總黃酮能夠抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹。

2.2 黃芪總黃酮對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

由表2可見，注射角叉菜膠后0.5h，與空白組比較，TFA 5、25、50mg／kg劑量組小鼠足趾腫脹度降低但無顯著差異（P＞0.05）；與陽性組比較，TFA 5mg／kg劑量組有顯著差異（P＜0.05）。注射角叉菜膠后1h～6h，與空白組比較，TFA 5、25、50 mg／kg劑量組有顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）；與陽性組比較，TFA 5mg／kg、25mg／kg劑量組有顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。注射角叉菜膠后，TFA劑量組兩兩比較，有顯著或極顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果顯示，黃芪總黃酮能夠顯著抑制由角叉菜膠所致的小鼠足趾腫脹，且黃芪總黃酮50mg／kg劑量組效果較好。

表1 黃芪總黃酮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響Table 1 Effects of TFA on ear edema induced by dimethylbenzene in mice

表2 黃芪總黃酮對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響Table 2 Effects of TFA on paw edema induced by carrageenan in mice mm

2.3 黃芪總黃酮對小鼠棉球肉芽腫形成的影響

由表3可見，TFA 5、25、50mg／kg劑量組對棉球肉芽腫系數(shù)有一定的抑制作用，棉球肉芽抑制率分別為5.30%、25.17%和32.12%。其中與空白組比較，TFA 25mg／kg、50mg／kg劑量組有顯著差異（P＜0.05）；與陽性組比較，TFA 5mg／kg劑量組有顯著差異（P＜0.05），而 TFA 25mg／kg、50mg／kg劑量組無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果顯示，黃芪總黃酮具有抑制小鼠棉球肉芽腫形成的作用。

3 討論

炎癥是機體組織對各種物理、化學(xué)、生物等損傷因子所發(fā)生的防御性反應(yīng)，其局部反應(yīng)主要包括紅、腫、熱、痛及功能障礙等［11］。炎癥一般經(jīng)歷早、中、晚3個時期：①早期是以炎性滲出、組織腫脹、毛細血管擴張及通透性增加為主要特征；②中期是以白細胞游走趨化為特征；③晚期是以結(jié)締組織增生、肉芽腫形成為主要特征［12］。

表3 黃芪總黃酮對小鼠棉球肉芽腫形成的影響Table 3 Effects of TFA on granuloma induced with cotton pellet

二甲苯和角叉菜膠作為致炎劑，誘發(fā)組胺、激肽、5-HT等炎癥介質(zhì)釋放，引起皮膚局部毛細血管通透性增高，炎癥細胞浸潤、組織腫脹，造成耳廓及足趾急性滲出性炎癥水腫［11］。本試驗通過建立二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致小鼠足趾腫脹急性炎癥模型，觀察TFA對耳廓腫脹和足趾腫脹的抑制作用，研究TFA對急性炎癥的抗炎作用。結(jié)果顯示，TFA 5、25、50mg／kg劑量組與空白組比較，顯著降低小鼠耳廓腫脹度及小鼠足趾腫脹度，且TFA 50mg／kg劑量組與陽性組比較無顯著差異（P＞0.05），與文獻報道一致［10］，由此可見，TFA 對小鼠急性炎癥有顯著的抑制作用。肉芽腫是在炎癥晚期和慢性炎癥期，由巨噬細胞和淋巴細胞局部浸潤及小血管和結(jié)締組織增生而形成的肉芽組織。本試驗通過建立棉球肉芽腫慢性炎癥模型，觀察TFA對棉球肉芽腫增生的抑制作用，研究TFA對慢性炎癥的抗炎作用。結(jié)果顯示 TFA 5、25、50mg／kg劑量組與空白組比較，顯著降低小鼠棉球肉芽腫系數(shù)，且TFA 25、50mg／kg劑量組與陽性組比較無顯著差異（P＞0.05），與文獻報道規(guī)律一致［11］。由此可見，TFA具有抑制小鼠棉球肉芽腫形成的作用，對慢性炎癥有顯著的抑制作用。

綜上所述，黃芪總黃酮能夠顯著抑制由二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致小鼠足趾腫脹及棉球致小鼠肉芽腫的形成，證明黃芪總黃酮具有顯著的體內(nèi)抗炎作用。

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