蒙醫(yī)灸療對失眠模型小鼠腦組織一氧化氮和一氧化氮合酶的影響

乎寶力格

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古通遼028007）

蒙醫(yī)灸療對失眠模型小鼠腦組織一氧化氮和一氧化氮合酶的影響

乎寶力格

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古通遼028007）

目的 探討施灸“赫依穴”“頂會穴”對睡眠紊亂模型小鼠腦組織中一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的影響。方法 將36只小白鼠隨機分為空白對照組、模型組、治療組3組，每組12只，模型組與對照組反復(fù)定時腹腔內(nèi)注射咖啡因致小鼠睡眠節(jié)律紊亂，治療組施灸“赫依穴”與“頂會穴”。觀察各組小鼠自發(fā)活動次數(shù)與站立數(shù)，檢測小鼠腦組織中NO含量與NOS活性。結(jié)果 各組小鼠站立次數(shù)與自主活動次數(shù)比較：治療組與空白對照組之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較空白組和治療組均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各組小鼠腦組織中NO含量和NOS活性比較：治療組與空白對照組之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，空白對照組和治療組均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 蒙醫(yī)灸療對睡眠紊亂模型小鼠具有鎮(zhèn)靜催眠作用，其機制可能是通過阻抑NOS誘導(dǎo)產(chǎn)生過量的NO起到神經(jīng)保護(hù)作用。

蒙醫(yī)灸療；鎮(zhèn)靜催眠；穴，赫依；穴，頂會

睡眠是生命所必須的過程，是人類健康不可缺少的部分。睡眠除了可以消除疲勞，使人體產(chǎn)生新的活力外，還與提高免疫力，抵抗疾病的能力有密切聯(lián)系，睡眠質(zhì)量直接影響著人類生活質(zhì)量的高低［1］。失眠癥是睡眠的始發(fā)與睡眠的維持發(fā)生了障礙，導(dǎo)致睡眠質(zhì)量不能滿足個體生理需要而影響患者白天活動（比如注意力下降、疲勞、反應(yīng)遲鈍等）的一種睡眠障礙綜合征。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快和社會競爭壓力的加劇。失眠癥的發(fā)生率逐年增高，據(jù)報道［2－3］，2002年全球失眠調(diào)查顯示，我國失眠癥患者占普通人群的45.4%。因此失眠癥的防治與每個人的生活息息相關(guān)。

蒙醫(yī)灸療是通過在特定穴位上用艾條、艾柱、艾粒等灸具行熱刺激，達(dá)到預(yù)防、治療、保健康復(fù)作用的硬療法。灸療有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血、調(diào)理體質(zhì)、增強抵抗力以防治疾病的作用。具有安全、經(jīng)濟、療效肯定和無毒副作用等優(yōu)點。對失眠癥、胃火衰敗、消化不良、浮腫、痞證、胃脘疼痛、慢性結(jié)腸炎、風(fēng)濕類疾病、癤癰、炭疽、虛熱病、癔病、癲狂、健忘癥、抗防衰老等多種疾病療效顯著［4］。本實驗擬用蒙醫(yī)灸療法取有效腧穴“赫依穴”（位于第7頸椎棘突與第1胸椎棘突間隙窩中，即中醫(yī)大椎穴）、“頂會穴”（位于從兩眉正中往上劃一線，再從兩耳葉上緣正中往上劃一線，此二線在頭頂之交叉處便是，即中醫(yī)百會穴）作用于睡眠紊亂模型小鼠，并對其治療作用加以驗證，為進(jìn)一步研究失眠的治療機制奠定基礎(chǔ)，為失眠病證的辨證施治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 動物：SPF級昆明種小白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK（吉）2011－0004。藥物：咖啡因，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)化學(xué)學(xué)院化學(xué)實驗室提供。主要儀器設(shè)備：AUW120D型島津電子天平（日本）；TTL－2C型超純水制備儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；ZZ－6小鼠自主活動測定儀（成都泰盟科技有限公司）。紫外可見分光光度計（755B、上海清華），自粘式艾灸柱（商品名：神灸，蘇州東方艾絨廠出品）直徑4 mm，長1 cm，灸墊厚度2 mm。

1.2 方法 購買小鼠后在飼料充足、無干擾的睡眠條件下飼養(yǎng)7 d。稱重后隨機分為空白組、模型組、治療組共3組，每組12只。治療組與模型組：腹腔注射小劑量咖啡因（2.0 mg／kg），連續(xù)注射7 d；空白對照組：經(jīng)腹腔注射生理鹽水（10.0 mL／kg），連續(xù)注射7 d；動物出現(xiàn)毛皮枯槁，舉肢、理毛、走動等次數(shù)明顯，不能安臥等外部特征，與文獻(xiàn)［5］報道一致，即造模成功。治療組：第8天起開始施灸，參照文獻(xiàn)［6－7］記載，剪去小鼠頂會穴、赫依穴周圍鼠毛，第1天頂會穴，第2天赫依穴依次進(jìn)行施灸，時間5 min，每次行3艾柱，共施灸14 d。模型組和空白組第8天起按程序只抓取不施灸，連續(xù)14 d。

1.3 指標(biāo)檢測 各組動物實驗第15天用自主活動測定儀測試10 min內(nèi)動物的活動次數(shù)和站立次數(shù)。之后各組小鼠脫臼處死，即刻剝離出腦（除掉小腦）組織備用。腦組織中NOS活性與NO含量測定分別依據(jù)NOS、NO測定試劑盒使用說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)數(shù)（ˉx±s）表示，2組間資料比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠自主活動的影響 治療結(jié)束后用自主活動測定儀測10 min內(nèi)動物的自發(fā)活動次數(shù)與站立次數(shù)。結(jié)果示：模型組與其他2組比較自發(fā)活動次數(shù)與站立次數(shù)明顯增多（P＜0.05）。治療組與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 治療后小鼠自發(fā)活動次數(shù)與站立次數(shù)的比較（ˉx±s，n＝12）次

2.2 對小鼠腦組織中NO含量與NOS活性的影響治療組與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，空白對照組和治療組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 治療后小鼠腦組織中NO含量與NOS活性的比較（ˉx±s，n＝12）

3 討論

蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人體之所以能夠維持正常的生理活動是因為體內(nèi)具有3種能量和基本物質(zhì)，即：赫依、協(xié)日、巴達(dá)干。這3種物質(zhì)是人體生命的本源、根本，故稱之為三根。其中，赫依是人體維持健康和延年益壽的引導(dǎo)者，也是保持協(xié)日與巴達(dá)干兩根相對平衡的調(diào)節(jié)者。赫依具有輕、動、澀、涼、細(xì)、堅等6種特性，稱其為赫依的秉性。如果與赫依之6種特性相類似，誘發(fā)疾病的4個條件（氣候變化、飲食、起居、突發(fā)因素）過分時，致使赫依之特性偏盛而失去相對平衡狀態(tài)。因此，赫依具有思維并保持神志安定的功能。若赫依的功能正常，則人的神志、思辨能力、精神等就正常［8］。

蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為赫依與血相搏是導(dǎo)致失眠的主要原因，心與白脈是主要病位。凡是悲傷過度、勞累、過于激動、出血過多等因素使赫依偏勝，客于心臟，或精神受到強烈刺激、暴怒等因素使赫依與血相搏，客于白脈，引起氣血運行失常而導(dǎo)致失眠。而施灸“赫依穴”與“頂會穴”具有抑制赫依，疏通赫依與血之運行之路、促進(jìn)白脈傳導(dǎo)、寧心安神等功效。在臨床實踐中也證明了針灸“赫依穴”與“頂會穴”對赫依偏盛引起的疾病有較好的療效［8］。

現(xiàn)代研究［9－14］證實，一氧化氮（NO）含量與人的精神系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等各系統(tǒng)有密切聯(lián)系。NO一方面是一種反應(yīng)性極強的自由基，另一方面又兼有第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的作用，調(diào)節(jié)多種病理生理過程。而NO含量的變化主要取決于一氧化氮合酶（NOS）活力。NOS分為神經(jīng)元型一氧化氮合酶（nNOS）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等3個亞型。而nNOS主要存在于神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，因此，探討大鼠腦組織中NO、NOS與失眠的關(guān)系具有一定的臨床意義。

本課題通過施灸睡眠紊亂模型小鼠“赫依穴”與“頂會穴”，觀察小鼠一般生存狀態(tài)、自發(fā)活動、站立次數(shù)，檢測腦組織中NO含量和NOS活性指數(shù)，初步探討了蒙醫(yī)灸療鎮(zhèn)靜作用及其機理。結(jié)果顯示，施灸“赫依穴”與“頂會穴”可改善睡眠紊亂小鼠一般生活狀態(tài)［15］；經(jīng)統(tǒng)計：模型組與其他2組比較自發(fā)活動次數(shù)和站立次數(shù)明顯增多（P＜0.05），NO含量和NOS活性增高（P＜0.05）；空白組與治療組比較自發(fā)活動次數(shù)和站立次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），NO含量和NOS活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。證實了頂會穴與赫依穴主治夜不安眠、白晝嗜眠的記載［2］，驗證了蒙醫(yī)灸療的鎮(zhèn)靜催眠作用及其機理。其作用機理可能是通過阻抑腦組織中NOS誘導(dǎo)產(chǎn)生過量的NO，起到神經(jīng)保護(hù)作用。

［1］許曉伍．基于線粒體途徑探討安寐湯抑制失眠大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元興奮機制［D］．廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2013．

［2］張鵬，鼓建偉．失眠癥的研究進(jìn)展［J］．腦與神經(jīng)疾病雜志，2001，9（2）：128－130．

［3］陳曉霞．失眠的體質(zhì)與證型的相關(guān)性研究［D］．福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2012．

［4］蒙醫(yī)學(xué)編輯委員會．中國醫(yī)學(xué)百科全書（蒙醫(yī)學(xué)）［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1993：31．

［5］李海靜，高月，劉萍，等．失眠動物模型研究進(jìn)展［J］．中國藥理學(xué)通報，2007，23（4）：437－440．

［6］陳英松．蒙醫(yī)實驗療術(shù)學(xué)［M］．呼和浩特：內(nèi)蒙古大學(xué)出版社，2008．

［7］斯欽圖，阿古拉，于天源，等．蒙醫(yī)灸療法抗衰老二三穴組穴配伍規(guī)律實驗研究［J］．世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，12（6）：976－980．

［8］策·蘇榮扎布，蒙醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］．呼和浩特：內(nèi)蒙古民族出版社，1986：490－491．

［9］牛建平．慢性腦缺血對大鼠腦組織NO及NOS含量的影響［D］．長春：吉林大學(xué)，2013．

［10］李猛猛．兔癲癇模型腦組織中NOS的變化以及拉莫三嗪和NOS抑制劑L－NNA對腦部神經(jīng)元變化的研究［D］．泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014：6－8．

［11］陳春霞．URWell和玉郎傘多糖抗嗎啡依賴作用及其機制研究［D］．南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2013：30－31．

［12］張翊玲，張旭華．被動吸煙對大鼠肺組織、肺泡灌洗液、血清中NO及NOS的影響［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（3）：296－298．

［13］戴太鋮，代雪茹，汪艦笛．有氧運動對衰老大鼠血清NO與NOS的影響［J］．包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，27（4）：15－17．

［14］陽晶晶，嚴(yán)潔，王超，等．針灸內(nèi)關(guān)預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷兔血清NO、NOS及腺苷含量的影響［J］．中國中醫(yī)急癥，2014，23（7）：1209－1211．

［15］乎寶力格，高玉峰，鄧國艷．蒙醫(yī)灸療鎮(zhèn)靜作用實驗研究［J］．中國民族醫(yī)藥雜志，2012，18（3）：36－37．

Effect of moxibustion of Mongolian medicine on nitricoxide and nitric oxide synthase in brain tissue of mice model of insomnia

HU BAO Li Ge
（Affiliated Hospital of Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028007，Neimenggu Province，China）

Objective To investigate the Moxibustion“point，Heyi”“point，Dinghui”on sleep disorder mice brain tissues of NO and NOS effect．Methods The 36 mice were randomly divided into blank control group，model group，treatment group three groups，12 rats in each group，model group and control group repeated intraperitoneal injection of caffeine in mice induced by the timing of sleep rhythm disorder，the treatment group Moxibustion“Heyi point”and“Dinghui point”．The mice were observed the times of spontaneous activities and stand number，NO content and NOS activity in brain tissue of mice were detected in．Results compared mice the number of standing and independent activity times：there is no significant difference between treatment group and blank control group（P＞0．05），compared with the model group，the blank group and the treatment groups were significantly different（P＜0．05）；the comparison of NO content and NOS activity in brain tissue of mice in each group：there was no significant difference in between treatment group and blank control group（P＞0．05），compared with the model group，blank control group and the treatment groups were significantly different（P＜0．05）．Conclusion Moxibustion of Mongolian medicine has sedative and hypnotic effects on sleep disturbance model mice，may be induced to produce excessive NO by inhibiting NOS，play a neuroprotective effect．

moxibustion of Mongolian medicine；sedative and hypnotic；point，Heyi；point，Dinghui

R285.5

A

2095－6258（2015）03－0457－03

2014－12－06）

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．03．007

內(nèi)蒙古民族大學(xué)青年基金（MDX2009069）。

乎寶力格（1978－），女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事蒙醫(yī)傳統(tǒng)療術(shù)學(xué)研究。