黃芩苷對(duì)帕金森病小鼠模型的影響

吳紀(jì)凱，王 琳，張 軼，梁 睿

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州215000）

黃芩苷對(duì)帕金森病小鼠模型的影響

吳紀(jì)凱，王 琳*，張 軼，梁 睿

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州215000）

目的 研究黃芩苷對(duì)帕金森病小鼠模型的影響。方法 60只雄性C57BL小鼠隨機(jī)分為模型組、黃芩苷組、美多巴組、正常對(duì)照組。模型組小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP；黃芩苷組分別給予100 mg／kg黃芩苷灌胃和腹腔注射30 mg／kg MPTP；美多巴組給予31 mg／kg美多巴灌胃，1次／d；正常組給予等量生理鹽水，1次／d，15 d。對(duì)4組小鼠的運(yùn)動(dòng)功能、腦紋狀體DA、腦組織GSH、GSH－Px、MDA含量進(jìn)行測(cè)定和統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 模型組小鼠的懸掛實(shí)驗(yàn)、游泳實(shí)驗(yàn)分值均明顯比黃芩苷組、美多巴組和正常對(duì)照組高（P＜0.05）；黃芩苷組的腦紋狀體DA水平、GSH水平均明顯比美多巴組和模型組高（P＜0.05）；黃芩苷組小鼠的腦紋狀體GSH－Px、MDA水平均顯著低于美多巴組和模型組（P＜0.05）。結(jié)論 黃芩苷預(yù)防給藥能夠有效保護(hù)帕金森病小鼠的神經(jīng)功能，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)腦內(nèi)抗氧化物質(zhì)GSH水平的有效提升有相關(guān)聯(lián)系。

黃芩苷；帕金森病小鼠模型；運(yùn)動(dòng)功能

帕金森病屬于一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，老年人是多發(fā)人群，近年來(lái)其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。其臨床癥狀能夠在左旋多巴類藥物的作用下得到顯著改善，但是其遠(yuǎn)期療效對(duì)于大部分患者來(lái)說(shuō)并不理想，通常服藥3～5年后就會(huì)減退，并引發(fā)諸多不良反應(yīng)，如癥狀波動(dòng)、精神癥狀等，給臨床治療帶來(lái)極大的困難［1］。黃芩苷是黃酮類中藥的有效成分，是由黃芩中提取而來(lái)，具有明顯的抗氧化性，能夠有效清除羥自由基、過(guò)氧亞硝基等［2］。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究［3］表明，氧化引發(fā)的DNA單鏈損傷能夠影響到小鼠3T3及細(xì)胞上，而黃芩苷的作用可使其有效恢復(fù)。給予黃芩苷有助于增強(qiáng)機(jī)體抗氧化性，本研究對(duì)76只雄性C57BL小鼠的相關(guān)資料進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，觀察了黃芩苷對(duì)帕金森病小鼠模型的影響。報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 76只雄性C57BL小鼠（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：BIOON－13287），月齡為11個(gè)月，體質(zhì)量30～34 g。黃芩苷，購(gòu)自蘇州李良濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：030812，含生藥量99.7%，鹽酸多巴胺、1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氫吡啶（MPTP）（Sigma公司），谷胱苷肽（GSH）、丙二醛（MDA）、谷胱苷肽過(guò)氧化酶（GSH－Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。所有小鼠均分籠飼養(yǎng)，依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將其分為模型組（22只）、黃芩苷組（22只）、美多巴組（16只）、正常對(duì)照組（16只）4組。

1.2 方法 給予模型組小鼠腹腔注射MPTP，濃度為30 mg／kg，1次／d，連續(xù)注射3 d；給予黃芩苷組小鼠100 mg／kg黃芩苷灌胃，1次／d，連續(xù)使用15 d，灌胃后第8天給予小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP，1次／d，連續(xù)注射3 d；給予美多巴組小鼠美多巴灌胃治療，濃度為31 mg／kg，1次／d，給予正常組小鼠等量生理鹽水，持續(xù)灌注7 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 小鼠肢體運(yùn)動(dòng)功能檢測(cè) 懸掛實(shí)驗(yàn)：將小鼠懸掛在一水平電線上，1分＝小鼠兩前爪均無(wú)法將電線抓住，2分＝小鼠用一前爪將電線抓住，3分＝小鼠用兩前爪將電線抓住，4分＝小鼠軀體上舉；游泳實(shí)驗(yàn)：在水箱中放置小鼠，水箱規(guī)格和水溫分別為20 cm×30 cm×20 cm和22～25℃，10分＝小鼠偶爾用后肢游動(dòng)并在一邊漂浮，15分＝小鼠偶爾游泳，20分＝小鼠漂浮至少50%，25分＝小鼠大部分時(shí)間游泳偶爾漂浮，30分＝小鼠10 min內(nèi)連續(xù)不斷游泳。將4組小鼠的懸掛實(shí)驗(yàn)和游泳實(shí)驗(yàn)得分計(jì)算出來(lái)，然后將其詳細(xì)記錄［4］。

1.3.2 小鼠腦紋狀體多巴胺（DA）含量測(cè)定 運(yùn)用HPLC法對(duì)小鼠腦紋狀體多巴胺（DA）含量進(jìn)行測(cè)量。對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行有效檢測(cè)后將其處死，在冰上放置，稱重取出來(lái)的腦紋狀體，并將其和5倍量0.1 mol／L高氯酸混勻，在低溫離心機(jī)中放置并進(jìn)行離心運(yùn)動(dòng)，在4℃條件下，以10 000 r／min離心20 min，分析上清液色譜。色譜柱Luna C－18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相甲醇為0.05 mol／L，磷酸氫二鈉為0.02 mol／L，檸檬酸為5%∶72%∶23%，流速為1.0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為25℃［5］。

1.3.3 小鼠腦組織MDA、GSH、GSH－Px含量測(cè)定將小鼠腦組織紋狀體取出后嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)中的方法測(cè)定其余腦組織的MDA、GSH、GSH－Px含量［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對(duì)本研究中所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的過(guò)程中運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示計(jì)量資料，用t檢驗(yàn)組間比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組小鼠的運(yùn)動(dòng)功能測(cè)定結(jié)果比較 模型組小鼠的懸掛試驗(yàn)分值均明顯比黃芩苷、美多巴組和正常對(duì)照組高（P＜0.05），懸掛實(shí)驗(yàn)分值越高，小鼠抓住電線越牢固；說(shuō)明小鼠肢體運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)情況越好，反之，則說(shuō)明小鼠震顫、肌強(qiáng)直等情況嚴(yán)重；模型組小鼠的游泳實(shí)驗(yàn)分值明顯比美多巴組、正常對(duì)照組以及黃芩苷組低（P＜0.05），游泳分值越高小鼠游泳的時(shí)間越多；說(shuō)明小鼠肢體運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)情況越好，反之，則說(shuō)明小鼠震顫、肌強(qiáng)直等情況嚴(yán)重，見(jiàn)表1。

表1 4組小鼠的運(yùn)動(dòng)功能測(cè)定結(jié)果比較（ˉx±s）

2.2 4組小鼠的腦紋狀體DA、腦組織MDA、GSH、GSH－Px含量測(cè)定結(jié)果比較 黃芩苷組的腦紋狀體DA水平、GSH水平均明顯比美多巴組和模型組高（P＜0.05）；黃芩苷組小鼠的腦紋狀體GSH－Px、MDA水平均顯著低于美多巴組和模型組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 4組小鼠的腦紋狀體DA、腦組織GSH－Px、GSH、MDA含量測(cè)定結(jié)果比較（ˉx±s）

3 討論

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究［7－9］表明，帕金森的發(fā)病受到氧自由基的直接影響，帕金森患者處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，腦黑質(zhì)中和正常人相比具有明顯較多的固醇類過(guò)氧化物，增加了血清MDA，同時(shí)顯著增加8－羥基脫氧鳥(niǎo)苷（DNA氧化標(biāo)志物），降低黑質(zhì)紋狀體中GSH水平及腦中水解酶、GSH－Px的活性，同時(shí)血中自由基（由多形核白細(xì)胞產(chǎn)生）的數(shù)量也顯著增多。臨床普遍認(rèn)為，給予C57BL小鼠腹腔注射神經(jīng)毒素MPTP制備的帕金森模型較為理想［10］。本研究［11］結(jié)果表明，黃芩苷組小鼠的懸掛實(shí)驗(yàn)分值、游泳實(shí)驗(yàn)分值均明顯比模型組、美多巴組和正常對(duì)照組高（P＜0.05）和相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。治療后的結(jié)果提示說(shuō)明了模型動(dòng)物的神經(jīng)能夠在黃芩苷預(yù)防及治療給藥的作用下得到切實(shí)有效的保護(hù)，其作用機(jī)制與促進(jìn)腦內(nèi)抗氧化物質(zhì)GSH水平的有效提升有相關(guān)聯(lián)系。具體來(lái)說(shuō)是GSH屬于抗氧化保護(hù)性物質(zhì)，在體內(nèi)發(fā)揮著極為重要的作用。以往研究［12－13］表明，疾病和部位選擇性是帕金森患者黑質(zhì)GSH含量降低的主要性質(zhì)。但是促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的減少、促進(jìn)DA釋放等是否是其作用機(jī)制還需要相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究將初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)提供給臨床黃芩苷抗帕金森病的治療工作，更為深入的探討還需要進(jìn)一步的深入研究和分析。

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［2］吳正治，ANDREW C H，朱慶偉，等．安顫靈對(duì)泛素－蛋白酶體通路損傷細(xì)胞模型的保護(hù)作用［J］．中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（9）：877－880．

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Effects of Baicalin on mouse model with Parkinson's disease

WU Jikai，WANG Lin*，ZHANG Yi，LIANG Rui
（Suzhou Health College，Suzhou 215000，Jiangsu Province，China）

Objective To study the effects of baicalin on mouse model with Parkinson's disease．Methods The 60 male C57BL mice were were randomly divided into model group，baicalin group，the US－dopa group and normal control group，the model group were given intraperitoneal injection 30 mg／kgMPTP，the baicalin group were given 100 mg／kg baicalin gavage 30 mg／kgMPTP，the US－dopa group to 31 mg／kg lavage treatment，1 times a day，the normal group was given equal saline，1 times a day，15 d．Then the motor function，brain striatal DA，brain tissue GSH，GSH－Px，MDA content and nigra TH immunohistochemical staining of the three groups of mice were measured and statistically analyzed．Results Model mice suspension test，swimming test scores were significantly higher than the baicalin group，US－dopa group and normal control group（P＜0．05）；brain striatal DA levels baicalin group，GSH levels were significantly Bimei dopa and model groups of high（P＜0．05）；striatum baicalin group of mice GSH－Px，MDA levels were significantly lower than madopar group and model group（P＜0．05）．Conclusion Baicalin prophylaxis can effectively protect mice with Parkinson's disease．

Baicalin；mouse model of Parkinson's disease；exercise function

R285.5

A

2095－6258（2015）03－0454－03

2014－12－17）

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．03．006

蘇州市吳門醫(yī)學(xué)發(fā)展中心基金項(xiàng)目“吳門民間驗(yàn)方的現(xiàn)代制劑研究”（201412）。作者簡(jiǎn)介：吳紀(jì)凱（1970－），男，大學(xué)本科，講師，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

*通信作者：王 琳，碩士，講師，電子信箱－wujik70＠163．com