野菊花中總黃酮的提取

鄧 賀 鐘 政

（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局一四六倉(cāng)庫(kù)，河北 石家莊 050071）

野菊花是菊科植物野菊的干燥頭狀花序，其主要成分為總黃酮，具有清熱解毒、降血壓、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能[1-2]，野菊花水劑可抑制金葡菌、大腸桿菌、痢疾桿菌等一般致病菌，且對(duì)異煙肼、鏈霉素和氨基水楊酸鈉耐藥或敏感的結(jié)核桿菌均有明顯的抑菌作用，為了有效地開(kāi)發(fā)和利用藥材資源，充分提取野菊花所含的總黃酮等成分，我們采用正交試驗(yàn)的方法進(jìn)行了制備工藝的研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：電子萬(wàn)用爐（天津泰斯特儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生儀器廠）；752N型紫外光譜儀（上海廣照光電科技有限公司）；電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；高速離心噴霧干燥機(jī)（常州市振興干燥設(shè)備廠）；蠕動(dòng)泵（常州科健蠕動(dòng)泵廠）；微型空氣壓縮機(jī)（上海力彪機(jī)械制造有限公司）；PHS-2酸度計(jì)（上海第二分析廠）；NDJ-1型黏度計(jì)（上海天平儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；Olympus-CH 型生物顯微鏡（日本進(jìn)口）；烘箱（LAB供應(yīng)集團(tuán)）；電冰箱（購(gòu)自青島海爾集團(tuán)）；棕色瓶、無(wú)色瓶（購(gòu)自安國(guó)義通中藥材有限公司）5000 mL圓底燒瓶，冷凝管。

1.2 試劑與樣品：蘆丁對(duì)照品。野菊花（為菊科植物野菊的干燥頭狀花序）；乙醇；亞硝酸鈉，硝酸鋁溶液，氫氧化鈉溶液，蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 總黃酮的提取

2.1.1 對(duì)照品及供試品溶液的制備：①對(duì)照品溶液的制備： 精密稱取經(jīng)120 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品25 mg，置50 mL容量瓶中，加30%乙醇適量，使充分溶解，放冷，用30%乙醇稀釋至刻度，搖勻備用[2]。②供試液的制備：精密稱取野菊花5 g，加到燒瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取濾液，藥渣加水80 mL，繼續(xù)水浴加熱回流30 min，濾過(guò)，合并濾液，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。

2.1.2 含量測(cè)定：①標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中分別記號(hào)1、2、3、4、5、6，各加水12 mL，加5%亞硝酸鈉溶液2mL，使混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加1%氫氧化鈉溶液20 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑溶液為空白。按分光光度法（中國(guó)藥典2000年版一部附錄VB），在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定3次吸收度，以吸收度的平均值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度和標(biāo)準(zhǔn)曲線如下，得回歸方程：y=20.754x-0.0039（R2=0.9967）。見(jiàn)表1。③供試液的測(cè)定：精密量取供試液10 mL，置50 mL容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行操作，顯色，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A1，另精密量取供試液10 mL，置50 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A2，取二次吸收度的差值，由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮的含量3.10%[3]。

表1 不同濃度的野菊花提取液的紫外吸光度

2.1.3 提取溶劑的選擇：①乙醇提?。壕芊Q取野菊花5 g，加到燒瓶中，加乙醇100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取乙醇液，藥渣加乙醇80 mL，繼續(xù)在水浴加熱回流30 min，合并乙醇液，濾過(guò)，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。②水提?。壕芊Q取野菊花5 g，加到燒瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取水，藥渣加水80 mL，繼續(xù)在水浴加熱回流30 min，合并提取液濾過(guò)，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。③結(jié)果比較：上述供試液通過(guò)紫外-分光光度法測(cè)定野菊花總黃酮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。 由表1和表2結(jié)果可知，乙醇提取略優(yōu)于水提取。但考慮到在實(shí)際生產(chǎn)中，野菊花在提取過(guò)程中會(huì)吸收2～3倍的溶劑，造成生產(chǎn)成本顯著增加，因此本試驗(yàn)選擇廉價(jià)的水作為試驗(yàn)提取溶劑。

表2 提取溶劑不同所得的野菊花總黃酮含量

2.1.4 水提取工藝的考察：①考察因素及水平：選擇提取次數(shù)、提取溫度、提取時(shí)間和用水量等4個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，編制因素水平表見(jiàn)表3。 ②試驗(yàn)與結(jié)果：準(zhǔn)確稱取野菊花5 g，按 表3正交表沒(méi)計(jì)方案進(jìn)行試驗(yàn)，取液稀釋至200 mL作供試液，進(jìn)行含量測(cè)定，以測(cè)得野菊花總黃酮含量為指標(biāo)進(jìn)行分析。結(jié)果見(jiàn)表4。由表3可知，A、B、C、D 4個(gè)因素對(duì)野菊花總黃酮提取的影響程度不同，各因素的影響程度依次為A＞B＞D＞C，其中A 因素為影響野菊花總黃酮提取的主要因素，B因素為影響野菊花總黃酮提取的次要因素。同時(shí)也從結(jié)果分析中發(fā)現(xiàn)，提取次數(shù)超過(guò)2次時(shí)，提取次數(shù)為野菊花總黃酮提取的非主要因素。充分考慮C、D因素為從野菊花中提取野菊花總黃酮的非主要因素，最終確定野菊花提取工藝A2B3C3D1，即野菊花用水提取2次，溶劑用量依次為8、6倍，提取溫度100 ℃，提取時(shí)間為40 min、40 min。

表3 野菊花總黃酮提取工藝因素水平表

表4 野菊花水提工藝正交設(shè)計(jì)表

3 討 論

3.1 野菊花分別用乙醇和水提取，測(cè)定野菊花總黃酮含量，前者比后者要高，說(shuō)明用乙醇提取比用水提取較完全，但考慮到生產(chǎn)實(shí)際中野菊花在提取過(guò)程中吸收2～3倍的溶劑，造成生產(chǎn)成本顯著提高，因而選用價(jià)廉的水作為提取溶劑[4]。

3.2 本次試驗(yàn)通過(guò)正交試驗(yàn)法對(duì)野菊花的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，并按最佳工藝進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果證明用該工藝提取野菊花總黃酮工藝簡(jiǎn)單、提取率高、操作控制容易、穩(wěn)定性好、適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

[1] 《全國(guó)中草藥匯編》編寫組.全國(guó)中草藥匯編(上冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1975:789-790.

[2] 北京市野菊花協(xié)作組.野菊花制劑臨床觀察一附454例療效分析[J].中藥通報(bào),1983,8(4):39-40.

[3] 李道中,程村貴.野菊花提取液的藥理及臨床應(yīng)用[J].藥學(xué)進(jìn)展,1999,23(6):344.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典,2005版,第二部,附錄[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.