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    靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠心臟組織分布

    2015-06-02 07:38:00郝成欣
    關(guān)鍵詞:高效液相色譜

    郝成欣

    摘 要:該文采用靜脈注射給藥途徑,研究人參皂苷Rb1在小鼠心臟組織的分布。用等體積的水飽與正丁醇萃取小鼠心臟組織勻漿液,在經(jīng)過(guò)減壓干燥之后使用甲醇進(jìn)行溶解,采用高效液相色譜法,測(cè)得預(yù)處理的心臟樣品中的人參皂苷Rb1在心臟組織分布廣泛,滯留時(shí)間長(zhǎng),5 min達(dá)吸收高峰。720 min后逐漸自體內(nèi)消除,對(duì)其發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷,減弱血管內(nèi)膜增生程度等藥效提供參考理論依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:靜脈注射 人參皂苷Rb1 心臟組織分布 高效液相色譜

    中圖分類號(hào):R7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-098X(2015)02(c)-0252-02

    人參皂苷Rb1是二醇系皂苷,其含量較為豐富,多年來(lái)學(xué)者們致力于研究其藥理作用,作用顯著且廣泛。此外,人參皂苷Rb1具有抗心肌缺血再灌注損傷,減弱血管內(nèi)膜增生程度,促智,腦缺血損傷保護(hù),神經(jīng)損傷保護(hù),抗肝臟熱缺血再灌注損傷,抗腫瘤,性功能促進(jìn)等多種藥理活性[1-7]。

    近年來(lái),對(duì)靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究文獻(xiàn)較少[8]。楊柳等[9]進(jìn)行人參皂苷Rb1在大鼠尿中排泄的研究采用的是高效液相色譜-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜。而Tsutomu Odani,Hisayuki Tanizawa,and Yoshio Takino(均為日該研究者)通過(guò)采用薄層色譜法監(jiān)測(cè)了人參皂苷Rb1經(jīng)靜脈注射以及口服兩種途徑在大鼠體內(nèi)的分布,發(fā)現(xiàn)其胃腸道吸收率低。

    該文將預(yù)處理后的小鼠心臟采用HPLC法測(cè)定其分布[10],具有分離效能好,分析速度快,靈敏度及特異性高的優(yōu)點(diǎn),對(duì)人參皂苷Rb1發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷等藥理作用提供參考依據(jù),具有廣闊的前景。

    1 資料與設(shè)備

    1.1 試劑與藥品

    甲醇,乙腈是由TEDIA COMPANY.INC公司生產(chǎn)的色譜純?cè)噭?;甲醇(分析純)為重慶沃裕科技有限公司提供;人參皂苷Rb1對(duì)照品(純度:98%)由上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司提供。

    1.2 儀器

    SHZ-D(Ш)循環(huán)水式真空泵,Hettich Vniversal 16R低溫冷凍離心機(jī),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,Agilent 1100型分析-半制備液相,F(xiàn)A1204B電子分析天平。

    1.3 動(dòng)物

    健康小鼠,體重35~40 g,吉林省白城市省所提供。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 色譜條件

    CenturySILBDSC18柱,50 mm×2.1 mmI.D.,5 ?m粒徑;流動(dòng)相:乙腈:水(28:72);流速:1.00 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm;柱溫:室溫。

    2.2 給藥方案與樣品采集

    選取健康小鼠18只,小鼠體重為35~40g,在做實(shí)驗(yàn)之前并未使用任何藥物。選用普通的飼料進(jìn)行喂養(yǎng),同時(shí),飲食和飲水自由。在吉林省白城市白城醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校藥理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動(dòng)物臨床實(shí)驗(yàn)。注射用濃度為6 mg/mL的人參皂苷Rbl溶液,給藥以8 mg/kg的劑量靜脈注射,與給藥前﹙0 min﹚與給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min,每次3只,處死動(dòng)物,解剖心臟,組織浮血使用0.9%生理鹽水沖去,并用濾紙將吸其干,最后保存在–40 ℃冰箱。

    2.3 樣品預(yù)處理

    心臟組織勻漿和其處理方法如下。

    先對(duì)心臟組織稱重,然后剪碎、研磨,按1 mL/200 mg組織重量用Gilson移液器加入生理鹽水勻漿。用等體積的水飽和正丁醇取勻漿液,萃取3次(水飽和正丁醇配置方法為正丁醇∶水=5:1混合),萃取液經(jīng)85 ℃減壓干燥之后使用1 mL甲醇進(jìn)行溶解,稀釋2~5倍后通過(guò)0.22 ?m微孔濾膜后進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    3.1 色譜條件確定

    首先對(duì)于人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品,精密稱取1.00 mg,使用甲醇定容1 μL,此時(shí)濃度為100?g,然后經(jīng)甲醇稀釋,使其濃度變?yōu)?0?g,取該標(biāo)準(zhǔn)溶液20 mL通過(guò)0.22?m微孔濾膜,通過(guò)改變HPLC中流動(dòng)相乙腈:水的比率對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品適宜的出峰時(shí)間進(jìn)行控制,從而最終確定色譜條件。該研究是采用HPLC的流動(dòng)相∶乙腈∶水(28∶72);流速∶1.00 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)∶205 nm。這里,人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間是18.59 min,高度為2.1 mAU。(見(jiàn)表1)

    3.2 對(duì)小鼠空白(0 min)心臟行HPLC檢測(cè)

    研究發(fā)現(xiàn),心臟組織中的成分分離都是在4.9 min以內(nèi),人參皂苷Rb1受到的干擾較小。(見(jiàn)表2)

    3.3 將小鼠給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min的心臟組織樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)

    每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取小鼠3只,靜脈注射人參皂苷Rb1后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min按2.2的方法對(duì)小鼠的心臟組織做處理,各取樣20 ?mL過(guò)0.22 ?m微孔濾膜后進(jìn)行HPLC檢測(cè)。將小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測(cè)曲線繪制成對(duì)比圖。最高為5 min心臟組織,此時(shí)吸收高度是6.1 mAU,曲線隨時(shí)間推移,驟然下降,30 min吸收高度為3.2 mAU。60 min、120 min、240min吸收高度分別為3.1 mAU、2.8 mAU、2.7 mAU。720 min后,曲線明顯下降,吸收高度為1.1 mAU(見(jiàn)圖1)。

    3.4 討論

    該研究對(duì)小鼠靜脈注射人參皂苷Rb1,由實(shí)驗(yàn)得心臟組織樣品檢測(cè)曲線圖易知,在靜脈注射后的6個(gè)時(shí)間點(diǎn),人參皂苷Rb1都有分離,5 min即達(dá)到高峰,之后明顯下降,30 min、60 min、120 min、240 min曲線基本保持水平狀態(tài),720 min后已明顯下降,逐漸從體內(nèi)消除。其心臟組織藥物濃度特點(diǎn)如下。

    5 min心臟組織中Rb1濃度>30 min心臟組織中Rb1濃度>60 min心臟組織中Rb1濃度>120 min心臟組織中Rb1濃度〉240 min心臟組織中Rb1濃度>720 min心臟組織中Rb1濃度。

    人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線是根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定的色譜條件制定的,其出峰時(shí)間約18.50 min左右,對(duì)小鼠靜脈注射人參皂苷Rb15 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min后處理的心臟組織樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè),其在18 min左右也得到分離,對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線,表明該藥物在心臟組織中分布廣泛。

    根據(jù)小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測(cè)曲線,小鼠靜脈注射后,藥物在心臟組織中分布迅速,濃度高,滯留時(shí)間比較長(zhǎng),對(duì)人參皂苷Rb1抗心肌缺血再灌注損傷、心肌細(xì)胞損傷保護(hù)、減弱血管內(nèi)膜增生程度等藥效學(xué)研究提供參考理論依據(jù),具有重要的意義。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 文飛,張帆,冷沁,等.人參皂苷Rb1對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[J].湖北中醫(yī)雜志,2010,32(7):5-7.

    [2] 陳紅霞.人參皂苷Rb1對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào),2012,26(6):465-467.

    [3] 劉秋婭,李曉宇,劉皋林,等.人參皂苷Rb1的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2013,48(15):1233-1237.

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    [8] 楊秋婭,康雷,顧圣瑩,等.人參皂苷Rb1在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2014,49(3):221-226.

    [9] 楊柳,許舜星.人參皂苷Rb1在大鼠體內(nèi)的藥物代謝研究[J].高等學(xué)?;瘜W(xué)學(xué)報(bào),2006,27(6):1042-1044.

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